KR100253492B1

KR100253492B1 - 트리사이클로화합물함유 리포솜제제(liposome preparation containing tricyclic compound)

Info

Publication number: KR100253492B1
Application number: KR1019940701328A
Authority: KR
Inventors: 아키라 카가야마; 유지 토쿠나가; 아츠노리 가이바라; 사치요 다니모토; 타케히사 하타
Original assignee: 후지야마 아키라; 후지사와 야꾸힝 고교 가부시키가이샤
Priority date: 1991-10-31
Filing date: 1992-10-26
Publication date: 2000-05-01
Also published as: EP0658344A4; CA2122344C; DE69230541T2; DK0658344T3; EP0658344B1; ATE188378T1; EP0658344A1; DE69230541D1; ES2140419T3; WO1993008802A1; GR3032319T3; CA2122344A1

Abstract

면역억제작용을 갖는 트리사이클로화합물 또는 의약으로서 허용되는 그의 염을 리포솜중에 함유시킨 트리사이클로화합물함유리포솜제제이다. 트리사이클로화합물이 리포솜중에 안정하고 정량적으로 취입되어 있으므로 광범위한 약제형태를 취할 수가 있고, 약효의 지속성에 탁월한 제제를 제공할 수가 있다.

Description

[발명의 명칭]

트리사이클로화합물함유 리포솜제제(LIPOSOME PREPARATION CONTAINING TRICYCLIC COMPOUND)

[도면의 간단한 설명]

리포솜중에 취입된 FK 506의 농도를 나타내는 그래프이다.

[발명의 상세한 설명]

[기술분야]

본 발명은 뛰어난 면역억제작용을 갖는 것으로 주목받고 있는 후술하는 일반식(Ⅰ)로 표시되는 트리사이클로화합물 또는 의약으로서 허용되는 그의 염을 유효성분으로서 함유하는 리포솜제제에 관한 것이며, 상세하게는 상기 유효성분을 리포솜중으로 안정하게 취입함에 따라, 생리식염액, 포도당주사액, 물, 쥬스등의 촉매중에서도 안정한 용액상태를 유지하고, 따라서 주사, 예를들면 정맥주사, 근육주사, 관절내 등의 국소주사, 더우기는 피부에의 도포, 점안, 점비, 흡입등의 국소투여, 더우기 경구투여, 직장주입을 비롯한 각종 투여형태에 적합할 수 있는 리포솜제제에 관한 것이다.

[배경기술]

일반식(Ⅰ)

(식중, R¹및 R², R³및 R⁴, R⁵및 R⁶의 인접하는 각각의 쌍은 각각 독립적으로

a)2개의 인접하는 수소원자를 나타내거나 혹은

b)결합되어 있는 탄소원자와의 사이에서 또 하나의 결합을 형성하여도 좋고,

그외에 R²은 알킬기이어도 좋고,

R⁷은 수소원자, 하이드록시기, 보호된 하이드록시기, 혹은 알킬옥시기를 나타내거나, 또는 R¹과 함께 옥소기를 나타내어도 좋고, R⁸및 R⁹은 독립적으로 수소원자, 하이드록시기를 나타내고, R¹⁰은 수소원자, 알킬기, 1이상의 하이드록시기에 의해 치환된 알킬기, 알케닐기, 1 이상의 하이드록시기에 의해 치환된 알케닐기, 또는 옥소기에 의해 치환된 알킬기를 나타내고,

X는 옥소기, (수소원자, 하이드록시기), (수소원자, 수소원자), 또는 -CH₂O-로 나타내는 기를 나타내고, Y는 옥소기, (수소원자, 하이드록시기); (수소원자, 수소원자), 또는 식=N-N¹¹R¹²혹은=N-OR¹³으로 나타내는 기를 나타내고, R¹¹, R¹²은 독립적으로 수소원자, 알킬기, 아릴기 또는 토실기를 나타내고, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, R²²및 R²³은 독립적으로 수소원자 또는 알킬기를 나타내고, R²⁰및 R²¹은 독립적으로 옥소기, 또는 각각 독립적으로(R²⁰a, 수소원자)및 (R²¹a, 수소원자)이어도 좋고, R²⁰a 및 R²¹a는 독립적으로 하이드록시기, 알킬옥시기, 혹은 식-OCH₂OCH₂CH₂OCH₃로 나타내는 기, 또는 R²¹a는 보호된 하이드록시기를 나타내고, 더우기 R²⁰a 및 R²¹a는 함께 에폭사이드환중에 산소원자를 나타내어도 좋고, n은 1, 2 또는 3을 나타낸다.

상기 의미에 덧붙여, 또한 Y, R¹⁰및 R²³은 그것들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 포화 혹은 불포화의 5원 혹은 6원환으로 이루어진 질소원자, 유황원자 및/ 혹은 산소원자를 함유하는 복소환기를 나타내어도 좋으나, 그의 복소환기는 알킬기, 하이드록시기, 1 이상의 하이드록시기에 의해 치환된 알킬기, 알킬옥시기, 벤질기 및 식-CH₂Se (C₆H₅)으로 나타내는 기중에서 선택된 1 이상의 기에 의해 치환되어 있어도 좋다)으로 나타내는 화합물 또는 의약으로서 허용되는 그의 염은 면역억제작용을 갖는 물질로서 알려져 있고(일본국 특개소 61-148181호 공보, 유럽특허공개 제0323042호 참조), 심장, 간장, 신장, 골수, 피부, 각막, 폐장, 췌장, 소장, 신경, 사지등의 장기이식을 비롯한 각 의료분야에 있어서의 이용이 기대되고 있다.

상기 화합물(Ⅰ)과 그의 의약적으로 허용되는 염은 상기 2개의 특허공보에 개시된 것과 동일한 방법으로 얻어진다. 특히, 스트렙토미세스. 쓰쿠바엔시스 No. 9993(미공연기제 927호)또는 스트렙토미세스. 하이그로스코피카스, 서브스페이스, 야쿠시마엔시스 No. 7238(미공연기제 928호)의 배양에 의해 제조된 마크로라이드류는, FR-900506, FR-900520, FR-900523, FR-900525로 번호가 붙여져 있다.

화합물(Ⅰ)또는 의약으로서 허용되는 그의 염 [이하「화합물(Ⅰ)」의 표현으로 대표한다]는 난수용성이고, 따라서 이것을 액상의약으로서 이용함에 있어서는 흔히 사용되고 있는 수용성의 가용화제(에탄올, 폴리에틸렌글리콜, 계면활성제등)을 이용하여 가용화시킨다고 생각된다.

그러나 상기 수단으로 조제된 액제는 투여부위에 있어서 체액으로 희석되었을 때에 결정의 석출을 일으키는 경우가 있고, 이 경우에는 바이오어베일러비러티가 저하된다고 하는 문제가 있다. 기타 문제로서는 생체내에 투여된 후의 거동상태, 예를들면 특히 고농도로 이행하고자 하는 조직에 대한 집중적인 조직이행성의 여부, 이행하는 것을 원하지 않는 부위에 필요이상의 약물이 이행함에 따른 부작용의 문제, 더우기는 약효의 지속성문제, 국소투여에 있어서의 유효성분의 조직이행성등, 미해결의 문제가 많이 남아 있다.

[발명의 개시]

본 발명은 체액에 접하여도 결정의 석출을 일으키지 않는 안정된 액제로서, 또한 상기와 같은 각종 과제에 대해서 치료상의 뛰어난 효과를 발휘하는 것이 기대되는 액제로서, 상기 트리사이클로화합물(Ⅰ)로 이루어진 활성성분이 각종 형태로 이루어진 리포솜중에 취입된 트리사이클로화합물(Ⅰ)함유 리포솜제제에 관하여 개시하는 것이다.

[발명을 실시하기 위한 최선태양]

우선 일반식(Ⅰ)에서 사용되고 있는 각 정의 및 그의 구체예, 및 그의 바람직한 실시태양을 이하에서 상세하게 설명한다.

「저급」이란 특별한 지시가 없으면, 탄소원자 1-6개를 갖는 기를 의미한다.

「알킬기」의 바람직한 예로서는 직쇄 혹은 분기쇄지방족탄화수소잔기를 들 수 있고, 예를 들면 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 펜틸, 네오펜틸, 헥실등의 저급알킬기를 들 수 있다.

「알케닐기」의 바람직한 예로서는 1개의 이중결합을 함유하는 직쇄 혹은 분기쇄지방족탄화수소잔기를 들 수 있고, 예를 들면 비닐, 프로페닐, 부테닐, 메틸프로페닐, 펜테닐, 헥세닐등의 저급알케닐기를 들 수 있다.

「아릴기」의 바람직한 예로서는 페닐, 토릴, 크실릴, 큐멘닐, 메시틸, 나프틸 등을 들 수 있다.

「보호된 하이드록시기」에 있어서의 적합한 보호기로서는, 예를 들면 메틸티오메틸, 에틸티오메틸, 프로필티오메틸, 이소프로필티오메틸, 부틸티오메틸, 이소부틸티오메틸, 헥실티오메틸 등의 저급알킬티오메틸기와 같은 1-(저급알킬티오)(저급)알킬기, 더욱 바람직하게는 C₁-C₄알킬티오메틸기, 가장 바람직하게는 메틸티오메틸기;

예를 들면 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리부틸실릴, 제3급부틸-디메틸실릴, 트리제3급부틸실릴등의 트리(저급)알킬실릴, 예를 들면 메틸-디페닐실릴, 에틸-디페닐실릴, 프로필-디페닐실릴, 제3급부틸-디페닐실릴 등의 저급알킬-디아릴실릴 등과 같은 트리치환실릴기, 더욱 바람직하게는 트리(C₁-C₄)알킬실릴기 및 C₁-C₄알킬디페닐실릴기, 가장 바람직하게는 제3급부틸-디메틸실릴기 및 제3급부틸-디페닐실릴기;

카르본산, 술폰산 및 카바민산으로부터 유도되는 지방족아실기, 방향족아실기 및 방향족기로 치환된 지방족아실기와 같은 아실기 등을 들 수 있다.

지방족아실기로서는, 예를 들면 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 부틸일, 이소부틸일, 바레릴, 이소바레릴, 피발로일, 헥사노일, 카르복시아세틸, 카르복시프로피오닐, 카르복시부티릴, 카르복시헥사노일등의, 카르복시와 같은 적당한 치환기를 1개 이상 가져도 좋은 저급 알카노일기, 예를 들면 사이클로프로필옥시아세틸, 사이클로부틸옥시프로피오닐, 사이클로헵틸옥시부티릴, 멘틸옥시아세틸, 멘틸옥시프로피오닐, 멘틸옥시부티닐, 멘틸옥시펜타노일, 멘틸옥시헥사노일등의 저급알킬과 같은 적당한 치환기를 1개이상 갖고 있어도 좋은 사이클로(저급)알콕시(저급)알카노일기, 캄파설포닐기, 예를 들면 카르복시메틸카르바모일, 카르복시에틸카르바모일, 카르복시프로필카르바모일, 카르복시부틸카르바모일, 카르복시펜틸카르바모일, 카르복시헥실카르바모일등의 카르복시(저급)알킬카르바모일기, 또는 예를 들면 트리메틸실릴메톡시카르보닐 에틸카르바모일, 트리메틸실릴에톡시카르보닐프로필카르바모일, 트리에틸실릴에톡시카르보닐프로필카르바모일, 제3급부틸디메틸실릴에톡시카르보닐프로필카르바모일, 트리메틸실릴프로폭시카르보닐부틸카르바모일기등의 트리(저급)알킬실릴(저급)알콕시카르보닐(저급)알킬카르바모일기등의 보호된 카르복시(저급)알킬카르바모일기등과 같은 카르복시 혹은 보호된 카르복시와 같은 적당한 치환기를 1개 이상 갖는 저급알킬 카르바모일기등을 들 수 있다.

방향족아실기로서는, 예를 들면 벤조일, 톨루오일, 크실로일, 나프토일, 니트롤벤조일, 디니트로벤조일, 니트로나프토일등의, 니트로와 같은 적당한 치환기를 1개이상 가져도 좋은 아로일기, 예를 들면 벤젠설포닐, 톨루엔설포닐, 크실렌설포닐, 나프탈렌설포닐, 플로오로벤젠설포닐, 클로로벤젠설포닐, 브로모벤젠설포닐, 요드벤젠설포닐등의, 할로겐과 같은 적당한 치환기를 1개 이상 가져도 좋은 아레인설포닐기등을 들 수 있다.

방향족기로 치환된 지방족아실기로서는 예를 들면, 페닐아세틸, 페닐프로피오닐, 페닐부티릴, 2-트리플루오로메틸-2-메톡시-2-페닐-아세틸, 2-에틸-2-트리플루오로메틸-2-페닐아세틸, 2-트리플루오로메틸-2-프로폭시-2-페닐아세틸등의, 저급알콕시 및 트리할로(저급)알킬과 같은 적당한 치환기를 1개이상 가져도 좋은 아르(저급)알카노일기등을 들 수 있다.

상기한 아실기중, 더욱 바람직한 아실기로서는 카르복시를 갖어 좋은 C₁-C₄알카노일기, 사이클로알킬부분에 (C₁-C₄)알킬을 2개이상 갖는 사이클로 (C₅-C₆)알킬옥시 (C₁-C₄)알카노일기, 캄파설포닐기, 카르복시(C₁-C₄)알킬카르바모일기, 트리(C₁-C₄)알킬실릴(C₁-C₄)알콕시카르보닐(C₁-C₄)알킬카르바모일기, 니트로기를 1개 또는 2개 갖고 있어도 좋은 벤조일기, 할로겐을 갖는 벤젠설포닐기, C₁-C₄알콕시와 트리할로 (C₁-C₄)알킬을 갖는 페닐(C₁-C₄)알카노일기를 들 수 있고, 이것들 중 가장 바람직한 것으로서는 아세틸, 카르복시프로피오닐, 멘틸옥시아세틸, 캄파설포닐, 벤조일, 니트로벤조일, 디니트로벤조일, 요드벤젠설포닐 및 2-트리플루오로메틸-2-메톡시-2-페닐아세틸을 들 수 있다.

「5원 혹은 6원환으로 이루어진 질소원자, 유황원자 및/혹은 산소원자를 함유하는 복소환기」의 바람직한 예로서는 피롤일기, 테트라하이드로푸릴기등을 들 수 있다.

화합물(Ⅰ)의 의약으로서 허용되는 염으로서는, 무독성 의약으로서 허용되는 관용의 염이고, 예를 들면 나트륨염, 칼륨염등의 알칼리금속염, 예를 들면 칼슘염, 마그네슘염등의 알카리토금속염, 암모늄염, 예를 들면 트리에틸아민염, N-벤질-N-메틸아민염등의 아민염과 같은 무기 또는 유기염기의 염을 들 수 있다.

화합물(Ⅰ)에 있어서, 콘포머 혹은 부제탄소원자 및 이중결합으로 인한 광학 이성체 및 기하이성체와 같은 1쌍이상의 입체이성체가 존재할 수 있고, 그와 같은 콘포머 혹은 이성체도 본 발명의 범위에 포함된다.

이어서 이 발명에서 제공되는 리포솜제제에 관하여 설명한다.

본 발명에 따른 리포솜제제는 상기한 트리사이클로화합물(Ⅰ)을 함유하는 것이 필수조건이고, 리포솜자체의 구조, 구성성분, 조제방법, 크기, 병용화합물등에 대해서는 트리사이클로화합물(Ⅰ)을 안정적으로 함유한 이상, 장해가 되지 않는 한 일체 제한을 받지 않는다. 따라서 예를 들면 리포솜의 구조체에 관해서는, 큰 한장막리포솜(LUV), 다중층리포솜(MLV), 작은 한장막 리포솜(SUV)중 어느 것이도 좋다. 따라서 그의 크기도 LUV에서는 200-1000nm, MLV에서는 400-3500nm, SUV에서는 20-50nm정도의 입자경을 얻을 수 있으나, 이들 중에서도 트리사이클로화합물(Ⅰ)을 안정적으로 함유한 이상 가장 바람직한 것은 입자경 200-1000nm의 MLV이다.

이어서 리포솜구조를 형성하기 위한 지질에 대해서는, 인지질이나 질소지질이 이용되지만, 일반적으로는 인지질이 가장 적합하고, 예를 들면 난황레시틴(포스파티딜콜린), 대두레시틴, 리조레시틴, 스핑고미에린, 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜글리세롤, 디포스파티딜글리세롤, 카르디올리핀, 프라즈마로겐등의 천연인지질, 혹은 이들을 통상의 방법에 의해 수소첨가한 것외에, 디세틸포스페이트, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디팔미트일포스파티딜콜린, 디팔미트일포스파티딜에탄올아민, 디팔미트일포스파티딜세린, 에레오스테아로일포스파티딜콜린, 에레오스테아로일포스파티딜에탄올아민, 에레오스테아로일포스파티딜세린등의 합성인지질을 들 수 있다.

이들 인지질을 함유하는 지질류는 단독으로 사용할 수도 있으나, 2종이상을 함께 사용하는 것도 가능하다. 이 경우 레시틴류, 스핑고미에린, 포스파티딜에탄올아민, 디스테아로일포스파티딜콜린 등과 같이, 포스파티딜기부분의 음성기와, 이것과 결합하는 원자단(에탄올아민이나 콜린등)에 있어서의 양성기가 분자내에서 전기적으로 중화하고, 전체로서 중성전하를 갖는 것은 단독으로 사용하는 경우가 많다. 이것에 대하여 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨등과 같은 포스파티딜기부분(음성기)과 결합하는 원자단이 세린, 글리세롤, 이노시톨등과 같이 중성이기 때문에 전체로서 부전하를 나타내는 것, 혹은 기타 포스파티딘산이나 디세틸포스페이트등과 같은 부전하를 나타내는 것 등은 지질로서 단독으로 사용하는 경우도 가능하나, 어느 쪽이냐 하면 상기한 바와 같은 중성전하를 나타내는 것과 함께 사용하는 것이 추천되고 있다. 또한 이들 중 포스파티딘산이나 디세틸포스페이트등은 리포솜형성시의 주요 인지질로서 작용하는 것이 아니라, 일반적으로 리포솜형성용 첨가제로서 알려져 있고 또한 본 발명에서도 사용할 수 있는 콜레스테롤류, 스테아릴아민, α-토코페롤 등과 동일한 첨가제로 위치를 부여할 수도 있다. 또 상기 이외의 사용가능한 첨가제로서는 폴리옥시에티렌에테르부가형 비이온계면활성제, 간그리오사이드, 산성당지질인 설파타이드나, 황산기를 갖는 당지질, 특히 설파타이드로 대표되는 부전하를 갖는 막구성성분이 사용되는 경우도 있다. 이들 첨가제는 리포솜함유제제의 형성을 용이하게 할 것, 리포솜함유제제를 형성했을 때 그 제제중에 있어서의 리포솜의 안정성을 향상시킬 것, 리포솜함유제제를 형성했을 때 그 제제중에 있어서의 리포솜의 안정성을 향상시킬 것, 장기이행에 관한 선택성을 부여할 것, 주요약인 트리사이클로화합물(Ⅰ)의 리포솜으로부터의 방출성을 억제할 것등, 각각의 목적을 고려하여 선택하여야 한다.

리포솜의 조제법에 대하여도 특별한 제한을 받는 것은 아니나, 상기한 리포솜구조마다의 추장방법을 게기(揭記)하면 하기와 같다.

(가)큰 한장막 리포솜(LUV):

에테르주입법[Deamer, D. W. : Ann. N. Y. Acad. Sci., 308 250(1978)]

계면활성제법[Brunner, J., et al: Biochim. Biophys.

Acta, 455 322(1976)]

상동[Kagawa, Y., et al: J. Biol. Chem., 246 5477(1971)]

Ca²⁺융합법[Papahadjopoulos, D., et al : Biochim. Biophys. Acta, 394 483(1975)]

동결-용해법[Pick, U. : Arch. Biochim. Biophys., 212 186(1981)]

역상증발법[Szoka, F., et al : Biochim. Biophys. Acta, 601 559 (1980)]

거대 한장막 리포솜의 형성[Oku, N., et al : Biochim. Biophys. Acta, 692 384 (1982)]

(나)다중층 리포솜(MLV)

Bangham법[Bangham, A. D., et al : J. Mol, Biol., 13 238(1965)]

(다)작은 한장막 리포솜(SUV)

초음파처리법[Huang, C. : Biochemistry, 8 344(1969)]

에탄올주입법[Kremer, J. M. H., et al : Biochemistry, 16 3932(1977)]

프렌치프레스법[Barenholz, Y., et al : FEBS Lett., 99 210(1979)]

상기 언급한 방법은 모두 리포솜피막형성을 위한 기본적수단을 나타내는 것이고, 이들 방법을 임의로 조합시키거나, 혹은 각각 개량, 발전을 가한 방법을 채용할 수 있음은 말할 나위도 없다. 예를 들면 리포솜을 형성한 후, 자외선 혹은 방사선등의 활성전자파에 의한 처리를 행하고, 중합에 의한 막강화를 도모하는 방법을 채용할 수도 있다.

본 발명에서 채용되는 대표적인 리포솜형성법을 예시적으로 설명하면 예를 들면 상기한 바와 같은 리포솜형성물질을 주요약이나 콜레스테롤등과 함께 클로로포름이나 에탄올등의 유기용매에 용해시키고, 이것을 적당한 용기에 넣어 감압하에 용매를 류거(留去)하여 용기내면에 리포솜형성물질의 막을 형성한다. 이것에 완충액을 가하여 교반하고, 얻어진 현탁액에서 여과 혹은 원심분리와 같은 상용 수단에 의해 리로솜을 단리(單離)한다. 이와 같이하여 얻어진 리포솜은 적당한 용매중에 현탁시키거나, 혹은 일단 동결건조한 것은 적당한 용매중에 재분산시켜 치료에 사용된다.

이와 같이하여 얻어진 트리사이클로화합물(Ⅰ)함유 리포솜제제에 있어서의 트리사이클로화합물(Ⅰ)의 함유량은 적용부위에 따라서 각기 설정하는 것이 바람직하고, 정맥주사용으로서는 0.05-50mg/ml, 근육주사용으로서는 1-50mg/ml, 점안제로서는 0.1-50mg/ml, 경구용으로서는 0.1-50mg/ml으로하는 것이 좋다. 또한 이들은 투여부위에 따라 물, 생리식염수, 포도당주사액, 쥬스, 우유드의 수성매체로 희석하는 것도 가능하고, 이렇게 함으로써 상기한 농도이하가 되는 것은 물론이다.

본 발명의 트리사이클로화합물함유 리포솜제제는, 이하에서 개시된 화합물을 유효성분으로서 함유시킬 때도 유효하게 이용할 수가 있다. 예를 들면 EP-A-353678호, 일본 특개평 2-74330호, PCT/GB90/01262호, EP-A-413532호, PCT/JP91/00314호, 영국특허제 9012963.6호, 동제 9014136.7호, 동제 9014681.2호, 동제 9014880. 0호, 동제 9014881.8호, 동제 9015098.8호, 동제 9016115.9호, 동제 9016693.5호, EP-A-323865호, 동 349061호, 동 358508호, 동 364031호, 동 364032호, 동 378317호, 동 378320호, 동 378321호, 동 388153호, 동 396399호, 동 396400호, 동 399579호, 동 403242호, 동 428365호, 동 356399호, GB 2225576. A호, EP-A-402931 호, 동 427680호.

본 발명에 의해 제공되는 트리사이클로화합물(Ⅰ)함유의 리포솜제제는 제1도에 나타나 있는 시험결과에서도 밝혀졌듯이 트리사이클로화합물(Ⅰ)이 리포솜중에 거의 정량적으로 수확된다. 제1도에 나타난 시험에서는 트리사이클로화합물(Ⅰ)로서 후술하는 FK506을 이용하였다. 즉, 제1도는 상기한 클로로포름이나 에탄올들의 용매중에 형성한 인지질농도(횡축)과 얻어진 리포솜중에 수확된 FK506의 농도(종축)의 관계를 나타내는 것이고, FK506의 농도가 항상 일정하기 때문에, 제제화에 있어서의 함유량제어가 대단히 정밀도가 좋게 이루어질 수 있음을 이해할 수 있다. 또 제1도의 데이타에서는 인지질과 FK506의 몰비율이 약 1000 : 15이고, 이 값을 목표로 하여 리포솜제조의 수행이 권장된다.

[실시예 1]

화합물(Ⅰ)로소

R¹, R², R⁸, R²³=수소

R₇, R⁹=하이드록시기 R¹⁰=아릴기

R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, R²²=메틸기

R²⁰=(R²⁰a, H)(R²⁰a=메톡시기)

R²⁰=(R²⁰a, H)(R²¹a=하이드록시기)

X, Y=옥소기 n=2

R³, R⁴=결합되어 있는 탄소원자와의 사이의 또 하나의 결합

R⁵, R⁶= 결합되어 있는 탄소원자와의 사이의 또 하나의 결합

으로서 나타내어지는 유리상태의 화합물을 선택하였다. 이 화합물은 특히 탁월한 면역억제작용을 갖고, 이하 FK506이라 칭한다.

난황포스파티딜콜린(3.05g), 콜레스테롤(1.16g), 포스파티딜세린(0.762g), FK 506(82.2mg)을 적당량의 클로로포름/메탄올혼합액(용량비=4/1)에 용해하고, 감압 건고하여 용기의 내벽면에 박막을 형성한다. 이것에 인산완충생리식염수 50ml을 가하고, 볼텍스믹서(이나이세이에이도샤제)에 의한 교반을 가하였다. 얻어진 현탁액을 10ml와 40ml로 2등분 하였다.

① 10ml 채취한 현탁액을 공경(孔徑)3㎛, 이어서 1㎛의 폴리카보네이트막으로 순차적으로 여과를 행하여 리포솜제제를 얻었다. 이 리포솜제제중의 FK 506 함량을 0.5mg/ml 농도가 되도록 인산완충생리식염수로 조제하였다. 리포솜의 평균입경은 432nm이었다.

② 40ml 채취한 현탁액을 나노마이저(코스모게이소오샤제)에 의해 4℃, 7기압하에서 10분간 처리후, 4℃×15000rpm×60분의 조건에서 원심분리하였다. 얻어진 상등(上澄)중인 FK 506 함량을 0.5mg/ml농도가 되도록 인산완충생리식염수로 조제하였다. 리포솜의 평균입자경은 30nm이하였다.

[실시예 2]

난황포스파티딜콜린(7.62g), 콜레스테롤(2.32g), FK 506(164.4mg)을 적당량의 클로로포름/메탄올혼합액(용량비=4/1)에 용해하고, 감압 건고하여 용기 내벽면에 박막을 형성한다. 이것에 인산완충생리식염수 100ml을 가하고, 볼텍스믹서(이나이세이에이도오샤제)에 의한 교반을 가해 현탁액을 얻었다.

① 그의 현탁액 10ml 을 공경(孔徑)3㎛, 이어서 1㎛의 폴리카보네이트막으로 순차적으로 여과를 행하여 리포솜제제를 얻었다. 이 리포솜제제중의 FK 506 함량을 0.5mg/ml 농도가 되도록 인산완충생리식염수로 조제하였다. 리포솜의 평균 입경은 587nm이었다.

② 상기의 현탁액 40ml을 나노마이저(코스모게이소오샤제)에 의해 4℃, 7기압하에서 30분간 처리후, 4℃×15000rpm×60분의 조건에서 원심분리하였다. 얻어진 상등중인 FK 506 함량을 0.5mg/ml농도가 되도록 인산완충생리식염수로 조제하였다. 리포솜의 평균입자경은 30nm이하였다.

[실시예 3]

난황포스파티딜콜린(3.81g)및 콜레스테롤(1.16g)을 적당량의 클로로포름/메탄올혼합액(용량비=4/1)에 용해하고, 감압 건고하여 용기 내벽면에 박막을 형성한다. 이것에 인산완충생리식염수 50ml을 가하고, 볼텍스믹서(이나이세이에이도오샤제)에 의한 교반을 가하였다.

얻어진 현탁액 50ml을 나노마이저(코스모게이소오샤제)에 의해 4℃, 7기압하에서 15분간 처리한 후, 4℃×15000rpm×60분의 조건에서 원심분리하였다. 얻어진 상등액을 Millex GV(0.22㎛, 밀리포아샤제)로 여과하고 리포솜현탁액을 얻었다. 이 현탁액을 인산완충생리식염수에 의해 희석하고 여러 인지질농도를 갖는 리포솜현탁액을 얻었다. 이어서 리포솜현탁액 10ml에 FK 506의 원말 약 20mg을 첨가하고, 교반하면서 실온에 방치하였다. 원말첨가후 경시적으로 시험액을 샘플링하고 10000r×1분원심분리후, 상등을 Millex GV로 여과하였다. 여액(濾液)중의 FK 506 농도를 고속액체 크로마토그래피를 이용하여 정량함으로써, 리포솜에 취입된 FK 506량을 산출하였다. 결과를 도표 1에 나타내었다.

본 발명의 리포솜제제는 상기한 바와 같이 구성되어 있으므로, 물에 대하여 난용성인 트리사이클로화합물(Ⅰ)을 안정한 용액제제로 할 수 있고, 체액과 접해도 활성성분의 결정석출을 일으키는 일이 없으므로, 탁월한 바이오어베일러비러티를 나타내고, 더욱 안정한 제제임이 확인되었다. 따라서, 약제로서도 주사제, 점안제, 점비제, 흡입제, 경피흡수제, 국소주사제등으로 대표되는 광범위한 형태를 얻을 수 있다.

또한, 트리사이클로화합물(Ⅰ)을 이행시키는 것이 특히 요망되는 부위에의 집중적인 이행성을 높이고, 역으로 이행시키는 것이 반드시 원치 않는 부위에의 이행을 억제하는 것도 가능하다. 그 결과, 약효의 증강, 부작용의 경감, 약효의 지속성등의 실용상 탁월한 효과를 얻을 수 있다.

본 발명의 제제는, 트리사이클로화합물(Ⅰ)이 탁월한 면역억제작용 및 항균작용등의 약리작용을 갖고, 따라서, 심장, 신장, 간장, 골수, 피부, 각막, 폐, 췌장, 소장, 수족, 근육, 신경, 추간판, 기관등의 장기 또는 조직의 이식시의 거절반응 : 골수이식에 의한 이식편대숙주반응 : 만성관절류머티즘, 전신성홍반성낭창, 하시모토갑상선염, 다발성경화중, 중증근무력증, 1형당뇨병등의 자기면역질환; 및 병원성미생물에 의한 감염증의 치료 및 예방에 유용하다.

더우기 트리사이클로화합물(Ⅰ)의 제제는 다음 질환의 치료 및 예방에도 유용하다. 염증성 및 증식항진성피부병 및 면역학적 증개피부질환(예를 들면, 건선, 아토피성피부염, 접촉성피부염, 습진상피부염, 지루성피부염, 편평태선, 천포창, 수포창류 천포창, 표피수포증, 심마진, 혈관성수종, 맥관염, 홍반, 피부호산구증가증, 홍반성낭창, 좌창 및 원형탈모증):

자기면역질환의 안질환(예를 들면, 각결막염, 춘계결막염, 베이체트병관련의 포도막염, 각막염, 헬프스성각막염, 원추형각막염, 각막상피이영양증, 각막백반, 안천포창, 모아궤양, 강막염, 글레이브스안장해, 포오크토-코야나기-히라다증후군, 류내종증등):

가역적폐색성기도질환, [천식(예를 들면, 기관지천식, 알레르기성천식, 내인성천식, 외인성천식 및 진애성천식), 특히 만성 또는 난치성천식(예를 들면, 지발형천식 및 기도반응성항진)및 기관지염등]:

점막 및 혈관의 염증(예를 들면 위궤양, 허혈증 및 혈전증에 의한 혈관손상, 허혈성장질환, 장염, 괴사성전장염, 화상에 의한 장손상, 류코트리엔 B₄-중개질환:

장의 염증/알레르기(예를 들면, 소아지방변증, 직장염, 호산성위궤양, 비만세포증, 크론병 및 궤양성대장염):

위장관에서 원격 부위에 증후성증상발현을 하는 식물관련 알레르기질환(예를 들면 편두통, 비염 및 습진):

신증(예를 들면, 간질성신염, 굿퍼스쳐증후군, 용혈성요독증증후군 및 당뇨병성신증):

신경성질환(예를 들면 다발성근염, 기란바레이증후군, 메니엘병 및 신경근장해):

내분비질환(예를 들면, 갑상선기능항진증 및 바세도우씨병):

혈액질환(예를 들면, 순적아구병, 재생불량성빈혈, 형성불량성빈혈, 특발성 혈소판감소성자반증, 자기면역성용혈성빈혈, 무과립구증, 악성빈혈, 거적아구성빈혈 및 적혈구형성부전증):

골질환(예를 들면, 골조송증):

호흡기계통질환(예를 들면, 사르코이드시스(류육종증), 폐섬유증 특발성 간질성폐염): 피부질환(예를 들면, 피부근염, 심상성백반증, 심상성어린선, 광선과민증 및 피부T세로림파종): 순환기계통질환(예를 들면, 동맥경화중, 아테롬경화중, 대동맥염증후군, 결절성다발성동맥염 및 심근중): 교원병(예를 들면, 강피중, 웨게너육아종 및 쉐이그렌증후군):

지방과다중:

호산구성근막염:

치주병[예를 들면, 치육, 치주, 치조골, (치의)세멘트질의 손상]:

네프로제증후군(예를들면 사구체신염):

남성형탈모증 또는 노인성탈모증:

근디스트로피:

농피증 및 세저리증후군:

아디슨병:

활성산소중개질환[예를 들면, 장기손상(보존, 이식 또는 허혈성질환(혈전증, 심근경색)시에 일어나는(심장, 간장, 신장, 소화관등의)장기의 허혈성혈류손상): 장질환(예를 들면 엔드톡신쇼크, 위막성대장염, 약제 또는 방사선에 의한 대장염): 신성질환(예를 들면 허혈성급성신부전, 만성신부전): 폐질환(예를 들면 폐중산소 또는 약제(예를 들면 파라코트, 브레오마이신)에 의한 중독, 폐암, 폐기종): 눈병(예를 들면 백내장, 철침착층(안구철장증), 망막염, 색소침착증, 노인성반점변질, 유리체반흔, 알카리화상각막): 피부염(예를 들면, 다형성홍반, 면상면역글로부린A피부염, 세멘트피부염): 및 기타 질환(예를 들면, 치육염, 치주염, 패혈중, 췌염, 또는 환경오염(예, 대기오염), 노화, 발암물질, 암전이, 고산병에 의한 질환)]:

히스타민 또는 류코트리엔 C₄유리(遊離)에 의한 질환등.

더욱, 트리사이클로화합물(Ⅰ)의 제제는 간장재생작용 및 /또는 간세포의 비대 및 과형성의 자극작용을 갖는다.

따라서, 그들 화합물은 간질환[예, 면역원성질환(자기면역성간장병, 원발성담즙성간경변 또는 경화성담관염과 같은 만성자기면역성간장병), 부분적 간장절제, 급성간장괴사(예를 들면, 독물, 바이러스성간염, 쇼크 또는 무산소증에 의한 괴사), B형간염, 비A비B형간염, 간경변 및 간기능부전(예, 극증간염, 지발성간염 및 급성에서 만성으로 이행된 간기능부전)]의 치료 및 예방에 유용하다.

또 트리사이클로화합물(Ⅰ)의 제제는, 화학요법작용의 증강작용, 사이트메가로바이러스감염의 예방 및 치료작용, 항염증작용등과 같은 약리작용에 의해 각종 질환에 유용하다.

Claims

포스파티딜콜린을 함유하는 리포솜중에 안정하게 포획(entrapped)되어 있는 하기 일반식(Ⅰ)로 표시되는 트리사이클릭화합물 또는 약제학적으로 허용되는 그의 염을 함유함을 특징응로 하는 제제.

상기식에서, R¹및 R², R³및 R⁴, R⁵및 R⁶의 인접하는 각각의 쌍은 각각 독립적으로

a)2개의 인접하는 수소원자를 나타내거나, 혹은

b)그들이 결합되어 있는 인접한 탄소원자와의 사이에서 또 하나의 결합을 형성하여도 좋고, 그것에 덧붙여, R²은 알킬기이어도 좋고, R⁷은 수소원자, 하이드록시기, 보호된 하이드록시기, 혹은 알킬옥시기를 나타내거나, 또는 R¹과 함께 옥소기를 나타내어도 좋고, R⁸및 R⁹은 독립적으로 수소원자, 하이드록시기를 나타내고, R¹⁰은 수소원자, 알킬기, 1이상의 하이드록시기에 의해 치환된 알킬기, 알케닐기, 1 이상의 하이드록시기에 의해 치환된 알케닐기, 또는 옥소기에 의해 치환된 알킬기를 나타내고, X는 옥소기, (수소원자, 하이드록시기), (수소원자, 수소원자), 또는 -CH₂O-로 나타내는 기를 나타내고, Y는 옥소기, (수소원자, 하이드록시기); (수소원자, 수소원자), 또는 식-CH₂O-로 나타내어지는 기를 나타내고, Y는 옥소기, (수소원자, 하이드록시기), (수소원자, 수소원자), 식=N-NR¹¹R¹²혹은=N-OR¹³으로 나타내어지는 기를 나타내고, R¹¹, R¹²은 독립적으로 수소원자, 알킬기, 아릴기 또는 토실기를 나타내고, R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹, R²²및 R²³은 독립적으로 수소원자 또는 알킬기를 나타내고, R²⁰및 R²¹은 독립적으로 옥소기, 또는 각각 독립적으로(R²⁰a, 수소원자)및 (R²¹a, 수소원자)이어도 좋고, R²⁰a 및 R²¹a는 독립적으로 하이드록시기, 알킬옥시기, 혹은 식-OCH₂OCH₂CH₂OCH₃로 나타내는 기, 또는 R²¹a는 보호된 하이드록시기를 나타내고, 더우기 R²⁰a 및 R²¹a는 함께 에폭사이드환중에 산소원자를 나타내고 있어도 좋고, n은 1 또는 2를 나타내며, 상기 의미에 덧붙여, 또한 Y, R¹⁰및 R²³은 그들이 결합되어 있는 탄소원자와 함께 알킬기, 하이드록시기, 1이상의 하이드록시기에 의해 치환된 알킬기, 알킬옥시기, 벤질기 및 식 -CH₂Se(C₆H₅)로 나타내어지는 기 중에서 선택된 1 이상의 기에 의해 치환될 수 있고, 포화 혹은 불포화의 5원 혹은 6원환으로 이루어진 질소원자, 유황원자 및/ 혹은 산소원자를 함유하는 복소환기를 나타낼 수 있다.
제1항에 있어서, 트리사이클로화합물(Ⅰ)이 R³및 R⁴, R⁵및 R⁶의 인접하는 각각의 쌍이, 그들이 결합되어 있는 탄소원자 사이에 형성된 또 하나의 결합을 형성하여도 좋고, R⁸과 R²³은 독립하여 수소원자를 나타내며, R⁹은 하이드록시기를 나타내고, R¹⁰은 메틸, 에틸, 프로필 또는 알릴기를 나타내며, X는 (수소원자, 수소원자)또는 옥소기를 나타내고, Y는 옥소리를 나타내며, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R¹⁹및 R²²은 각각 메틸기를 나타내고, R²⁰과 R²¹은 독립적으로 (R²⁰a, 수소원자)또는 (R²¹a, 수소원자), (여기에서, R²⁰a 와 R²¹a은 각각 하이드록시기 또는 알콜시기를 나타내거나, R²¹a는 보호된 하이드록시기를 나타낸다)를 나타내며, n은 1 또는 2인 제제.
제2항에 있어서, 트리사이클로화합물(Ⅰ)에서 R⁷이 수소원자, 하이드록시기 또는 보호된 하이드록시기이고, X가 옥소기이며, R²⁰a가 메톡시기이고, R²¹a가 하이드록시기 또는 보호된 하이드록시기인 제제.
제3항에 있어서, 트리사이클로화합물(Ⅰ)이 17-알릴-1, 14-디하이드록시-12-[2-(4-하이드록시-3-메톡시사이클로헥실)-1-메틸비닐]-23, 25-디메톡시-13, 19, 21, 27-테트라메틸-11, 28-디옥사-4-아자트리사이클로[22.3.1.0^4,9)옥타코스-18-엔-2, 3, 10, 16-테트라온인 제제.
제1항에 있어서, 콜레스테롤이 리포솜-형성 첨가제로서 추가로 사용된 제제.
제1항 또는 제5항에 있어서, 리포솜이 포스파티딜세린을 추가로 함유하는 제제.
제1항에 있어서, 포스파티딜콜린 대 트리사이클로화합물(Ⅰ)의 몰비가 약 1000:15인 제제.