KR0126471B1 - 이병 치료용 국소 제제 - Google Patents

Abstract

없음

Description

이병 치료용 국소 제제

본 발명은 활성성분으로서 오플록사신 또는 이의 염을 함유하는 이병(otopathy)치료용 국소 제제에 관한 것이다.

통상적으로 사용되는 이병치료용 국소 제제에는 항생제(예 : 프라디오마이신, 카나마이신, 클로람페니콜 및 세프메녹심)를 함유하는 용액이 포함된다.

그러나, 이러한 제제는 부작용으로서 이독성(ototoxicity)을 나타내거나, 내성이 있는 미생물의 발생으로 인하여 치료효과가 감소되는 경향이 있다는 점이 지적되어 왔다.

전술된 문제점들을 극복하기 위해, 본 발명의 발명가들은 광범위한 연구를 수행해왔고, 그 결과로서, 본 발명에 도달하게 되었다.

본 발명은 활성성분으로서 오플록사신 또는 이의 염을 함유하는 이병치료용 국소 제제에 관한 것이다.

오플록사신의 염에는 유기 또는 무기산(예 : 염산)을 사용하여 형성된 산부가염, 및 카복실그룹 및 알칼리금속(예 : 나트륨 및 칼륨)으로부터 형성된 염이 포함된다.

본 발명의 제제가 유효한 이 병에는 염증성 이병(예 : 중이염 및 외이염, 및 특히 화농성 중이염, 국한성 외이염 및 미만성 외이염)이 포함된다.

본 발명의 국소 제제의 투여형태에는 분무제, 이성용제(예 : 고실내 주입 및 점이제), 연고 등이 포함된다.

오플록사신을 물, 생리적 식염수 또는 적합한 완충제에 용해시키고, 경우에 따라, 방부제 (예 : 메틸-p-하이드록시벤즈에이트 및 벤즈알코늄 클로라이드)를 오플록사신 수용액에 가한 후, 용액의 pH를 중성으로 조절함으로써 용제를 제조할 수 있다. 수용액중 오플록사신 농도는 통상적으로 약 0.05 내지 약 2% w/v, 바람직하게는 0.1 내지 1% w/v범위이다. 연고는 통상적인 방법으로 제조될 수 있다.

오플록사신 용액의 투여시, 1일에 0.5ml씩 용량을 수회에 걸쳐 외이도를 통해 확산, 분무 또는 점적주입시킴으로써 적용하거나, 고막의 천자를 통해 고실내로 주입시킨다. 오플록사신 연고는 적합한 용량으로 외이도에 적용할 수 있다.

오플록사신은 안정성이 크다. 오플록사신의 급성 중독(LC₅₀)은 마우스에 대해 5450mg/kg(경구), 개에 대해 200mg/kg이상(경구), 및 원숭이에 대해 500내지 1,000mg/kg(경구)인 것으로 밝혀졌다.

본 발명에 따른 제제는 이병, 특히 중이염 및 외이염에 대해 이독성 뿐만 아니라 조직분포 및 우수한 치료효과의 면에서 통상적인 약제보다 뚜렷한 향상을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 제제는 이병 치료용 국소 제제로서 유용하다.

본 발명을 하기 실시예 및 시험 실시예를 참조로 하여 보다 상세히 기술할 것이나, 본 발명을 이로 제한 하려는 것은 아니다.

[실시예 1]

오플록사신을 주사용 증류수에 용해시키고, 용액이 pH를 6.0내지 7.0으로 조절한 후, 살균여과시켜 0.5% 오플록사신 수용액을 제조한다.

[실시예 2]

오플록사신을 생리적 식염수에 용해시키고, 용액을 실시예 1에서와 동일한 방법으로 처리하여 오플록사신을 제조한다.

[실시예 3]

오플록사신을 생리적 식염수에 용해시키고, 용액을 실시예 1에서와 동일한 방법으로 처리하여 0.3% 오플록사신 수용액을 제조한다.

시험 실시예 1

1)시험방법

15마리의 백색 기니아 피그를 하기의 두개 그룹으로 분류한다 : 0.3% 오플록사신 용액을 국소 투여한 오플록사신 그룹10마리(이후에는 0.3% OFLX그룹으로 명명한다)와 생리적 식염수를 투여한 대조그룹 5마리.

시험전, 각각의 동물 청각의 뇌관 반응(이후에는 ABR 로 명명한다)을 측정하여 반응 역치를 수득한다. 주파수가 10,000인 로곤(Logon)음파를 자극음으로 사용한다.

좌측 고막을 전신 마취하에서 천자시키고, 실시예 3의 오플록사신 용액 0.2ml 또는 대조용액(생리적 식염수)0.2ml를 고실내로 1일 1회씩 7일동안 계속해서 주입시킨다.

최종 주입일로부터 10일 후 ABR을 측정한다.

2)결과

투여전 ABR역치와 투여후 ABR역치 사이의 변화를 하기 표 1에 나타내었다:

[표 1]

ABR역치의 변화

역치(dB, 평균 ± S.E.)

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 0.3% OFLX 그룹과 대조그룹에 있어서의 ABR역치의 변화는 미약(각각 4.5dB 및 5.0dB)한데, 오플록사신의 투여로 인한 청력의 감소는 거의 없다.

시험실시예 2

1)시험 동물 및 투여경로

정상 프라이어(preyer)반사를 나타내는 29마리의 기니아피그(체중: 250 내지 350g)를 하기의 세 그룹으로 분류한다 : 0.5% 오플록사신 용액을 국소 투여한 그룹 12마리(이후에는 0.5% OFLX 그룹으로 명명한다); 겐타마이신을 국소투여한 그룹 13마리(이후에는 GM그룹으로 명명한다); 생리적 식염수를 국소투여한 대조그룹 4마리.

케탈라르(ketalar) 및 근육이완제(크실라진)를 근육 내로 투여한 후, 기니아 피그의 후이 내지 중이를 직경 2mm로 절단하고, 동일한 직경의 튜브를 열린 구멍을 통해 고실에 삽입시킨 후 , 밀봉시키고 접착제로 고착시킨다. 절단 창상을 일시적으로 봉합하고 밀폐시킨다. 수술한 직후, ABR을 기록한다. 동일날로부터, 4% 겐타마이신 용액 0.2ml, 실시예 2의 오플록사신 용액 0.2ml, 또는 대조용액(생리적 식염수)0.2ml를 튜브를 통해 고실로 주입시킨다. 주입은 1일 1회씩 10일 동안 계속해서 수행한다.

제10일에, ABR을 다시 기록하고, 등몰을 치사시킨다.

2)관찰방법

1)ABR의 측정

고막리드(lead)를 ABR의 측정에 사용한다. 기니아 피그의 주입된 귀와 동일한 쪽의 앞다리에 접지전극을 연결시킨다. 튜브로부터 광석 수신기를 통해 외이도로 제동음이 주어진다. 귀의 반응(ear response)을 반응 파동으로서 수득하고, 컴퓨터에 의해 수득된 200회 측정치의 평균을 XY기록치로 기록한다. 각각의 동물의 ABR역치를 생성된 전기와우관도표(electrocochleogram)로부터 수득한다.

11)형태학적 관찰방법

a. 현미경 관찰

샘플 조직(중이 점막)을, 청포(auditory bulla)를 사용하여 통상적인 방법으로 포르말린속에 고착시킨다. 탈회(decalcification)시킨후, 샘플을 파라핀속에서 봉매하고 절단시킨다. 파라핀 본획을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하고 현미경으로 관찰한다.

b. 주사전자현미경(SEM)관찰

샘플 조직(와우관)을 생리적 식염수 제트류속에서 철저히 세척하고, 2.5% 글루타르알데하이드 용액속에서 통상적인 방법을 사용하여 12시간 동안 고착시킨다. 그후, 조직을 인산염 완충액(pH 7.4)으로 진탕시켜 재세척하고, 1% 오스뮴산 용액 속에서 1시간 동안 고착시킨 후, 탄닌산 오스뮴을 사용하여 전기적으로 염색시킨다. 조직을 알콜로 통상적인 방법을 사용하여 탈수 시키고, 임계점에서 건조시킨 후, 백금이온으로 스퍼터링(sputtering)시킨다. 이렇게 제조된 샘플을 주사전자현미경(Hitachi S-570모텔)으로 관찰한다.

iii)오플록사신의 분포 측정

혈청, 뇌조직, 중이 점막, 및 와우관 외임파에 대한 약제의 분포를 대조그룹 및 0.5% OFLX그룹에 대해 시험한다. 혈액샘플을 경동맥으로부터 모으고, 참수직후 뇌조직을 절제한다. 중이 고실을 생리적 식염수로 철저히 세척한 후 중이 점막을 벗긴다. 그 후, 와우관 외임파를 유리 모세관으로 모은다.

조직내 약제의 농도를 시험 미생물로서 비. 섭틸리스(B. subtilis) ATCC 6051 및 이. 콜라이(E.coil)Kp를 사용하는 종이 디스크 방법에 따라 생물학적으로 검정한다.

혈청은 시험지 처리하지 않은 채로 사용한다. 뇌 조직을 유리-제품 균질기내에서 동중량의 0.1M 인산염 완충액(pH 7.0)과 함께 균질화시켜, 50% 균질용액을 제조한다.

외임파 및 중이 점막을 동일한 시간영역내에서 샘플링하고 샘플을 냉침시킨다. 외임파의 용적을 측정한 후, 샘플을 인산염 완충액을 사용하여 10배로 희석시키고, 시험한다. 한편으로는, 중량을 측정하고 균질화시킨후, 점막 샘플을 시험한다.

3)결과

i)청력의 변화도

ABR역치의 변화도를 하기 표 2에 나타내었다:

[표 2]

ABR역치 변화

(주) **GM그룹에 대해 p는 0.01보다 작다.

*대조그룹에 대해 p는 0.05보다 작다.

표 2에 나타낸 바와 같이, 평균적으로 15dB의 청력감소가 대조그룹에서 나타났으며, GM그룹은 ABR역치에 있어서, 38.5dB로 증가, 즉, 청력이 상당히 감소하는 것으로 나타났다. 이와 반대로, 0.5% OFLX그룹은 ABR역치가 미소적으로 증가, 즉, 평균 7.9dB의 청력 감소가 나타났다. 따라서, 오플록사신은 이독성을 거의 나타내지 않은 것으로 확인되었다.

ii)와우관 헤어 셀에서의 SEM관찰

대조그룹 또는 0.5% OFLX그룹에서의 와우관의 SEM사진은 외부 및 내부 헤어 셀의 헤어가 기저 선회 및 제2 또는 제 3선회에서 장해를 일으키지 않는다는 것을 나타낸다.

이와 반대로, GM그룹의 와우관의 SEM사진은 외부 및 내부 헤어셀이 기저선회로부터 제3선회를 통해 헤어셀이 눕거나 소멸하는 장해를 형성한다는 것을 나타낸다. 내부 헤어 셀이 상부 선회에 대해 심한 장해를 나타내는 경향을 관찰할 수 있다. 이와 반대로, 외부 헤어 셀은 이러한 경향은 나타내지 않지만 제3선회에서 외부 헤어 셀의 더 강한 장해가 관찰된다. 또한, SEM이 GM그룹의 동물의 반대면에 있는 6개의 귀에 대해 수행될 경우, GM이 이러한 귀에 직접 투여됨에도 불구하고 모든 경우에서 외부헤어 셀의 약간의 장해가 관찰된다.

iii)중이 점막의 관찰

대조그룹에서 상당한 염증(점막내의 상당한 세포 침윤 또는 점액성 골막의 비대)이 관측된다. 반대로, 이러한 염증은, 0.5% OFLX그룹 및 GM그룹의 중이 점막에서는 관찰되지 않는다.

iv)오플록사신의 분포

결과를 표 3에 나타내었다 :

[표 3]

OFLX투여후, 여러 조직에서의 OFLX농도

표 3에서 나타낸 바와같이, 대부분의 OFLX그룹의 경우에서 혈청내의 오플록사신 농도는 0.19㎍/ml미만이다. 따라서, 오플록사신은 중이 이외의 다른 조직에 분포되지는 않았다. 특히, 뇌중의 오플록사신 농도는 모든 경우에 있어서, 0.20㎍/g 미만이라는 사실에서 대조 그룹과 동일한 수준이다. 따라서, 귀에 오플록사신을 투여하는 모든 경우에 있어서 신규한 퀴톨린 유형의 항균제를 사용함으로써 유도되기 쉬운 중추신경계에 대한 부작용은 발생하지 않는 것으로 생각된다. 반대로, 효과면에서 가장 중요한, 중이 점막에 대한 오플록사신의 분포는 40㎍/g을 초과한다.

전술된 바와같이, 오플록사신이 귀에 국소투여될 경우, 거의 이독성이 없으며, 특히 뇌 및 희망하는 조직외의 조직에 거의 분포하지 않는 것을 나타내지 않으면서, 희망하는 중이 점막에 대해 우수한 분포를 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 이병 치료용 오플록사신 국소 제제는 임상적 용도가 매우 우수한 것으로 생각되어진다.

시험 실시예 3

중이염 및 외이염이 세균감염에 의해 유도된다는 것은 공지되어 있다. 따라서, 회농성 중이염 장해 환자의 병변으로부터 분리된 모든 세균에 대한 오플록사신의 항균활성을 이병치료용 다른 약제와 비교하여 분석한다. 이렇게 수득된 결과를 하기 표 4에 나타내었다 :

[표 4]

미생물의 시험에 대한 MIC₈₀

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 오플록사신은 화농성 중이염을 일으키는 세균에 대해, 다른 통상적인 약제보다 우수한 항균활성을 나타낸다.

본 발명을 이의 특정양태를 참조로 하여 상세히 기술하였으나, 선행기술분야의 전문가에 의해 본 발명의 정신 및 범위에서 벗어나지 않는 다양한 변화 및 변형이 이루어질 수 있다.

Claims (1)

1. 활성성분으로서 오플록사신 또는 이의 염을 함유하는 이병(otopathy)치료용 국소 제제.