JPWO2021247672A5

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Publication number: JPWO2021247672A5
Application number: JP2022574569A
Authority: JP
Publication date: 2024-06-06

Claims

５’側から３’側の順に作動可能に関連している下記の因子を有している、目的タンパク質の発現のための核酸コンストラクトであって：
任意構成である、第１プロモーター配列；
選択マーカー配列；
第２プロモーター配列；
第２プロモーター配列と作動可能に連結されており第１目的タンパク質をコードする核酸配列；および
ポリＡシグナル配列；
上記核酸コンストラクトは、上記任意構成である第１プロモーターまたは選択マーカー配列よりも５’側、上記ポリＡシグナル配列よりも３’側、上記任意構成である第１プロモーターと上記ポリＡシグナル配列との間、上記選択マーカーと上記第２プロモーター配列との間、ならびに、上記任意構成である第１プロモーター配列または選択マーカー配列よりも５’側および上記ポリＡシグナル配列よりも３’側の両方からなる群より選択される１つ以上に位置している、１つ以上の挿入因子をさらに有する、
核酸コンストラクト。
上記核酸コンストラクトが、上記選択マーカーと上記第２プロモーターとの間にポリＡシグナル配列を有していない、請求項１に記載の核酸コンストラクト。
上記選択マーカーが、上記第２プロモーターに隣接している、請求項１または２に記載の核酸コンストラクト。
上記第２プロモーターが、上記第１目的タンパク質をコードする核酸配列に隣接している、請求項１～３のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記核酸コンストラクトが、上記第１プロモーターと上記選択マーカーとの間に、拡張パッケージング領域（ＥＰＲ）を有しており、
好ましくは、上記ＥＰＲが、複数の潜在的なコザック配列および／またはＡＴＧ翻訳開始部位を有している、
請求項１～４のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記第１プロモーター配列が、弱いプロモーター配列であり、
好ましくは、上記第１プロモーター配列が、ＳＩＮ－ＬＴＲプロモーター配列、ＳＶ４０プロモーター配列、Ｅ．ｃｏｌｉｌａｃプロモーター配列、Ｅ．ｃｏｌｉｔｒｐプロモーター配列、ファージλ ＰＬプロモーター配列、ファージλ ＰＲプロモーター配列、Ｔ３プロモーター配列、Ｔ７プロモーター配列、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター配列、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼプロモーター配列、α－ラクトアルブミンプロモーター配列、ヒト伸長因子１α（ｈＥＦ１α）プロモーター配列、およびマウスメタロチオネイン－Ｉプロモーター配列からなる群より選択される、
請求項１～５のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記選択マーカー配列が、グルタミンシンターゼ（ＧＳ）配列およびジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）配列からなる群より選択される増殖可能な選択マーカー配列であり、
好ましくは、上記選択マーカー配列が、ネオマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏ）配列、ハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺伝子配列およびプロマイシンＮ－アセチルトランスフェラーゼ遺伝子配列からなる群より選択される抗生物質耐性のマーカー配列である、
請求項１～６のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記第２プロモーター配列が、ＳＶ４０プロモーター配列、Ｅ．ｃｏｌｉｌａｃプロモーター配列、Ｅ．ｃｏｌｉｔｒｐプロモーター配列、ファージλ ＰＬプロモーター配列、ファージλ ＰＲプロモーター配列、Ｔ３プロモーター配列、Ｔ７プロモーター配列、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター配列、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼプロモーター配列、α－ラクトアルブミンプロモーター配列、ヒト伸長因子１α（ｈＥＦ１α）プロモーター配列、およびマウスメタロチオネイン－Ｉプロモーター配列からなる群より選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記目的タンパク質をコードする核酸配列が、重鎖免疫グロブリン配列および軽鎖免疫グロブリン配列からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項１～８のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記挿入因子が、トランスポゾン挿入因子、リコンビナーゼ挿入因子、およびＨＤＲ挿入因子からなる群より選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の核酸コンストラクト。
上記トランスポゾン挿入因子が、逆方向末端反復であり、
好ましくは、上記コンストラクトが、上記第１プロモーターよりも５’側、および上記ポリＡシグナル配列よりも３’側に位置する２つの逆方向末端反復を含む、
請求項１０に記載の核酸コンストラクト。
上記リコンビナーゼ挿入因子が、付着部位（ａｔｔ）であり、
好ましくは、上記付着部位（ａｔｔ）が、ａｔｔＢである、
請求項１０に記載の核酸コンストラクト。
請求項１～１２のいずれか１項に記載の核酸コンストラクトを有しており、
好ましくは、約１～１０００コピーの上記核酸コンストラクトを有している、
宿主細胞。
請求項１３に記載の宿主細胞を培養する工程と、
上記宿主細胞の培養物から上記目的タンパク質を精製する工程と、
を有する、目的タンパク質の作製方法。
請求項１～１２のいずれか１項に記載の第１核酸コンストラクト；および
酵素をコードする第２核酸コンストラクト
を含んでおり、
好ましくは、上記酵素が、トランスポザーゼ、インテグラーゼ、リコンビナーゼ、ヌクレアーゼおよびニッカーゼからなる群より選択される、
システム。