JPWO2021220251A5

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Publication number: JPWO2021220251A5
Application number: JP2022566389A
Authority: JP
Publication date: 2024-05-09

Claims

目的のタンパク質と、バリアントである１以上の低分子量（ＬＭＷ）種とを含むタンパク質混合物から前記目的のタンパク質を精製するプロセスであって、
ａ．前記タンパク質混合物を、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）カラムに、バッファーでロードすることと；
ｂ．前記ＣＨＴカラムを、バッファーで洗浄することと；
ｃ．精製された前記目的のタンパク質を、勾配のリン酸バッファーで溶出することと、
を含み、
前記目的のタンパク質が実質的に純粋であり、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、ＬＭＷ種が０．４％未満であることを特徴とするプロセス。
目的のタンパク質と、バリアントである１以上の低分子量（ＬＭＷ）種と、１以上の塩基性バリアント（ＢＶ）とを含むタンパク質混合物から前記目的のタンパク質を精製するプロセスであって、
ａ．前記タンパク質混合物を、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）カラムに、バッファーでロードすることと；
ｂ．前記ＣＨＴカラムを、バッファーで洗浄することと；
ｃ．精製された前記目的のタンパク質を、勾配のリン酸バッファーで溶出することと、
を含み、
前記精製された前記目的のタンパク質が実質的に純粋であり、ＣＥＸ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、前記塩基性バリアント（ＢＶ）が１５％未満であることを特徴とするプロセス。
前記精製された前記目的のタンパク質が、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって測定したときに、少なくとも９７％低減されたＬＭＷ種を含む、請求項１又は請求項２に記載のプロセス。
前記精製された前記目的のタンパク質が、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって測定したときに、少なくとも９５％低減されたＬＭＷ種を含む、請求項１又は請求項２に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、約０．３％以下のＬＭＷ種、０．２％以下のＬＭＷ種、０．１％以下のＬＭＷ種から選択されるＬＭＷ種を含む、請求項１又は請求項２に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、０．４％未満のＬＭＷ種を含む、請求項１又は請求項２に記載のプロセス。
前記ＬＭＷ種が、ＬＣ、ＨＣ、ＨＨ、及び２Ｈ１Ｌから選択される、請求項１又は請求項２に記載のプロセス。
前記２Ｈ１Ｌの量が、ＣＥ－ＳＤＳによって測定したときに、約３％以下、２．６％以下、２．５％以下、２．３％以下、２％以下、１．７％以下、１．５％以下、１．４％以下から選択される、請求項７に記載のプロセス。
前記ＨＨの量が、ＣＥ－ＳＤＳによって測定したときに、約０．２％以下、０．２４％以下、０．２１％以下、０．１５％以下、０．１２％以下、０．０９％以下、又は０．０８％以下、０．０６％以下、又は０．０４％以下、及び０．０３％以下から選択される、請求項７に記載のプロセス。
前記ＨＣの量が、ＣＥ－ＳＤＳによって測定したときに、約０．４％以下、０．１６％以下、０．１５％以下、０．１２％以下、及び０．１８％以下から選択される、請求項７に記載のプロセス。
前記ＬＣの量が、ＣＥ－ＳＤＳによって測定したときに、約０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、及び０．２以下から選択される、請求項７に記載のプロセス。
前記ＬＣ、ＨＣ、ＨＨ、及び２Ｈ１Ｌが、ＣＥ－ＳＤＳによって測定したときに、約２．２％～約２．６％の量で存在する、請求項７に記載のプロセス。
目的のタンパク質と、１以上の塩基性バリアント（ＢＶ）とを含むタンパク質混合物から前記目的のタンパク質を精製するプロセスであって、
ａ．前記タンパク質混合物を、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）カラムに、バッファーでロードすることと；
ｂ．前記ＣＨＴカラムを、バッファーで洗浄することと；
ｃ．精製された前記目的のタンパク質を、勾配のリン酸バッファーで溶出することと、
を含み、
前記精製された前記目的のタンパク質が実質的に純粋であり、ＣＥＸ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、前記塩基性バリアント（ＢＶ）が１５％未満であることを特徴とするプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、約１４％以下のＢＶ、１３％以下のＢＶ、１２％以下のＢＶ、１１％以下のＢＶ、１０％以下のＢＶ、９％以下のＢＶ、８％以下のＢＶ、７％以下のＢＶ、６％以下のＢＶ、５％以下のＢＶ、４％以下のＢＶ、３％以下のＢＶ、２％以下のＢＶ、１％以下のＢＶから選択される低いＢＶを含む、請求項２又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、１０％未満のＢＶを含む、請求項１４に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、５％のＢＶを含む、請求項１４に記載のプロセス。
溶出リン酸塩勾配が、リン酸塩の濃度を、約２４ｍＭから１０４ｍＭまで徐々に増加させる線形勾配である、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記リン酸塩の濃度を、約４０ｍＭから９６ｍＭまで徐々に増加させる、請求項１７に記載のプロセス。
前記リン酸塩の濃度を、約３２ｍＭから８８ｍＭまで徐々に増加させる、請求項１７に記載のプロセス。
勾配溶出が、１９ＣＶで行われる、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記溶出が、約１．０ＡＵ／ｃｍ上方値で開始し、約１．５ＡＵ／ｃｍ下方値で終了する、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムが、ロードバッファーによる処理の前に、平衡化バッファーで処理される、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ロード及び洗浄バッファーが、同一の導電率及びｐＨを有する、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ロード、洗浄、及び溶出バッファーが、ｐＨ７．０±０．２を有する、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ロード、洗浄、及び溶出バッファーは、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、及びグリシンから選択される添加剤を含まない、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムが、プロテインＡクロマトグラフィーの後に行われる、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムが、アニオン交換クロマトグラフィーの後に行われる、請求項１、請求項２、又は請求項１３に記載のプロセス。
タンパク質混合物から目的のタンパク質を精製するプロセスであって、
ａ．前記目的のタンパク質と、酸性バリアント、塩基性バリアント（ＢＶ）、低分子量（ＬＭＷ）種、高分子量（ＨＭＷ）種から選択される少なくとも１つの不純物とを含む哺乳動物発現系からタンパク質混合物を得ることと；
ｂ．前記タンパク質混合物を、アフィニティークロマトグラフィーカラムにアプライすることと；
ｃ．前記タンパク質混合物を、アフィニティークロマトグラフィーカラムから溶出することと；
ｄ．工程で得られた前記タンパク質混合物のウイルス不活化を行うことと；
ｅ．工程（ｄ）で得られた前記タンパク質混合物を、アニオン交換クロマトグラフィーにアプライすることと；
ｆ．前記タンパク質混合物を、フロースルーモードで溶出することと；
ｇ．工程（ｆ）で得られた前記タンパク質混合物を、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）カラムにアプライすることと；
ｈ．任意に、前記ＣＨＴカラムを、洗浄バッファーで洗浄することと；
ｉ．前記タンパク質混合物を、バッファーで前記ＣＨＴカラムから溶出することと、
を含み、
溶出された前記タンパク質混合物が、前記目的のタンパク質で濃縮されており、酸性バリアント、塩基性バリアント（ＢＶ）、低分子量（ＬＭＷ）種、及び高分子量（ＨＭＷ）種から選択される不純物が実質的に低減されていることを特徴とするプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、約０．３％以下のＬＭＷ種、０．２％以下のＬＭＷ種、０．１％以下のＬＭＷ種から選択されるＬＭＷ種を含む、請求項２８に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析によって分析したときに、０．４％未満のＬＭＷ種を含む、請求項２９に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、約１４％以下のＢＶ、１３％以下のＢＶ、１２％以下のＢＶ、１１％以下のＢＶ、１０％以下のＢＶ、９％以下のＢＶ、８％以下のＢＶ、７％以下のＢＶ、６％以下のＢＶ、５％以下のＢＶ、４％以下のＢＶ、３％以下のＢＶ、２％以下のＢＶ、１％以下のＢＶから選択される低いＢＶを含む、請求項２８に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、１０％未満のＢＶを含む、請求項３１に記載のプロセス。
前記ＣＨＴカラムから溶出された前記タンパク質混合物が、５％のＢＶを含む、請求項３２に記載のプロセス。
アニオン交換クロマトグラフィーにより、酸性バリアントが実質的に除去される、請求項２８に記載のプロセス。
前記酸性バリアントが、約１４％以下のＡＶ、１３％以下のＡＶ、１２％以下のＡＶ、１１％以下のＡＶ、１０％以下のＡＶ、９％以下のＡＶ、８％以下のＡＶ、７％以下のＡＶ、６％以下のＡＶ、５％以下のＡＶ、４．５％以下のＡＶ、４％以下のＡＶ、３％以下のＡＶ、２％以下のＡＶ、１％以下未満のＡＶである、請求項３４に記載のプロセス。
アニオン交換クロマトグラフィーにより、高分子量不純物（ＨＭＷ）が実質的に除去される、請求項２８に記載のプロセス。
前記高分子量不純物が、約０．５％以下、約０．４％以下、又は０．３％以下、又は０．２％以下、又は０．１％以下から選択される、請求項３６に記載のプロセス。
前記目的のタンパク質が、ＩｇＧ１抗体又はその断片、及び融合タンパク質から選択される、請求項１から３７のいずれかに記載のプロセス。
前記ＩｇＧ１抗体又は融合タンパク質が、６～９の等電点を有する、請求項３８に記載のプロセス。
前記ＩｇＧ１抗体又は融合タンパク質が、エタネルセプト、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、アダリムマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、エクリズマブ、セルトリズマブペゴル、ウステキヌマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、オファツムマブ、トシリズマブ、デノスマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、ブレンツキシマブベドチン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ラキシバクマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ダルシズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、エボロクマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、イキセキズマブ、レスリズマブ、オララツマブ、ベズロトクスマブ、アテゾリズマブ、オビルトキサキシマブ、サリルマブ、オクレリズマブ、チルドラキズマブ、ロモソズマブ、ブロルシズマブ、クリザンリズマブから選択される、請求項３８に記載のプロセス。
前記ＩｇＧ１抗体が、ＩｇＥに結合する、請求項３８に記載のプロセス。
前記結合する前記ＩｇＧ１抗体が、オマリズマブである、請求項４１に記載のプロセス。
ＩｇＥに結合する抗体の医薬組成物であって、少なくとも９０％の純度を有する前記抗体の実質的に精製された単量体と、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定したときに、約０．２％未満のＬＭＷ種とを含むことを特徴とする医薬組成物。
オマリズマブの医薬組成物であって、少なくとも９０％の純度を有する前記オマリズマブの実質的に精製された単量体と、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定したときに、約５％未満のＬＭＷ種とを含むことを特徴とする医薬組成物。
前記単量体の純度が、９０％、又は９１％、又は９２％、又は９３％、又は９４％、又は９５％、又は９６％、又は９７％、又は９８％、又は９９％を超える純度から選択される、請求項４３又は請求項４４に記載の医薬組成物。