JPWO2020150478A5

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Publication number: JPWO2020150478A5
Application number: JP2021541017A
Authority: JP
Publication date: 2023-01-25

Claims

内在性ＣＤ３３遺伝子のエクソン３中に遺伝子変異を含み、前記遺伝子変異が、ＣＣＵＣＡＣＵＡＧＡＣＵＵＧＡＣＣＣＡＣ（配列番号７０）のヌクレオチド配列を含む、ｇＲＮＡにより標的にされる部位にあり、前記遺伝子変異が、野生型の対応細胞に比べて低減した発現レベルのＣＤ３３を生じさせる、遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
前記野性型の対応細胞により発現されるＣＤ３３の２０％未満のＣＤ３３を発現し、任意選択でＣＤ３３を発現しない、請求項１に記載の遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
ＣＤ３４＋である、請求項１または２に記載の遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
対象の骨髄細胞または末梢血単核球由来であり、任意選択で前記対象が造血器悪性腫瘍を有するヒト患者であるか健康なヒトドナーである、請求項１～３のいずれか１項に記載の遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
予測されるいずれのオフターゲット部位中にも、例えば、図３０に列挙されたいずれの部位にも変異を含まない、請求項１～４のいずれかに記載の遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
請求項１～５のいずれか１項に記載の複数の遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞を含む、細胞集団。
遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞を製造する方法であって、
（ｉ）造血幹細胞または前駆細胞を用意すること、および
（ｉｉ）（ａ）配列番号７０に少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）；および（ｂ）Ｃａｓエンドヌクレアーゼを前記細胞中に導入し、それにより遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞を製造すること、
を含む、方法。
前記遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞が、前記野性型の対応細胞により発現されるＣＤ３３の２０％未満を発現し、任意選択で前記遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞が、ＣＤ３３を発現しない、請求項７に記載の方法。
（ａ）および（ｂ）が、前記細胞中に導入される、１つのベクターにコードされ、任意選択で前記ベクターが、ウィルスベクターである、請求項７または８に記載の方法。
（ａ）および（ｂ）が、予め形成されたリボ核タンパク質複合体として前記細胞中に導入され、任意選択で前記リボ核タンパク質複合体が、電気穿孔法により前記細胞中に導入される、請求項７または８に記載の方法。
前記Ｃａｓエンドヌクレアーゼが、ＣａｓエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ分子を細胞中に送達することにより前記細胞中に導入される、請求項７または８に記載の方法。
前記ｇＲＮＡが、単一分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）であり、任意選択で前記ｇＲＮＡが、化学的に修飾されたｓｇＲＮＡである、請求項７～１１のいずれか１項に記載の方法。
前記造血幹細胞または前駆細胞が、ＣＤ３４＋である、請求項７～１２のいずれか１項に記載の方法。
前記造血幹細胞または前駆細胞が、対象の骨髄細胞または末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来であり、任意選択で前記対象が、造血障害を有するかまたは健康なヒトドナーである、請求項７～１３のいずれか１項に記載の方法。
請求項７～１４のいずれか１項に記載の方法により製造される、遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
それを必要としている対象における造血障害の治療に使用するための、請求項１～５および１５のいずれか１項に記載の遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞、または請求項６に記載の細胞集団。
前記造血障害が、造血器悪性腫瘍である、請求項１６に記載の遺伝子操作された造血幹細胞、前駆細胞、または細胞集団。
前記使用が、ＣＤ３３を標的にする物質の有効量を前記対象に投与することをさらに含み、かつ前記物質が、ＣＤ３３を結合する抗原結合フラグメントを含む、請求項１６または請求項１７に記載の遺伝子操作された造血幹細胞、前駆細胞、または細胞集団。
前記ＣＤ３３を標的にする物質が、ＣＤ３３を結合する抗原結合フラグメントを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞であり、任意選択で前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、請求項１８に記載の遺伝子操作された造血幹細胞、前駆細胞、または細胞集団。
前記免疫細胞、前記遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞、または両方が、同種であるか、または前記免疫細胞、前記遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞、または両方が、自己である、請求項１９に記載の遺伝子操作された造血幹細胞、前駆細胞、または細胞集団。
前記キメラ受容体中の抗原結合フラグメントが、ヒトＣＤ３３を特異的に結合する単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１９または２０に記載の遺伝子操作された造血幹細胞、前駆細胞、または細胞集団。
前記対象が、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫を有するヒト患者であり、任意選択で前記対象が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、または慢性リンパ性白血病である、請求項１６～２１のいずれか１項に記載の遺伝子操作された造血幹細胞、前駆細胞、または細胞集団。
配列番号７０に少なくとも約９０％同一であるスペーサー配列を含むガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）であって、任意選択で前記ｇＲＮＡが、単一分子ｇＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）であり、任意選択で前記ｇＲＮＡが、化学的に修飾されている、ガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）。
前記スペーサー配列が、配列番号７０である、請求項２３に記載のｇＲＮＡ。
標的細胞中の予測されるいずれのオフターゲット部位へも遺伝子編集を指示せず、任意選択で前記ｇＲＮＡが、前記標的細胞中の図３０中に列挙されたいずれの部位にも遺伝子編集を指示しない、請求項２３または２４に記載のｇＲＮＡ。
内在性ＣＤ３３遺伝子のエクソン３中に遺伝子変異を含み、前記遺伝子変異が、ＡＵＣＣＣＵＧＧＣＡＣＵＣＵＡＧＡＡＣＣ（配列番号６７）のヌクレオチド配列を含むｇＲＮＡにより標的にされる部位にある、遺伝子操作された造血幹細胞または前駆細胞。
配列番号６７に少なくとも約９０％同一であるスペーサー配列を含む、ガイドリボ核酸（ｇＲＮＡ）。