JPWO2020009215A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2020009215A5 JPWO2020009215A5 JP2020529058A JP2020529058A JPWO2020009215A5 JP WO2020009215 A5 JPWO2020009215 A5 JP WO2020009215A5 JP 2020529058 A JP2020529058 A JP 2020529058A JP 2020529058 A JP2020529058 A JP 2020529058A JP WO2020009215 A5 JPWO2020009215 A5 JP WO2020009215A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- luciferase
- seq
- variant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims description 18
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 claims description 18
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 claims description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims 11
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000254064 Photinus pyralis Species 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
Description
北米産ホタルルシフェラーゼについて、３回の試験を行って測定値の平均値を求め、３７℃保管時間０分のときの値を１とした場合の、３７℃保管時間２０分での相対値、及び変異なしの場合の２０分後の残存活性を1とした場合の各変異体の残存活性比（２０分後残存活性比）を以下の表に示す。
表５～７に示される通り、ゲンジボタルルシフェラーゼ、フォツリス・ペンシルバニカルシフェラーゼ、及び北米産ホタルルシフェラーゼについても、配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸残基を置換した場合に、耐熱性が向上し得ることが示された。
Claims (15)
- 配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸残基が置換されたアミノ酸配列を含むホタルルシフェラーゼの変異体であって、熱安定性が改善されたルシフェラーゼ変異体。
- 配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸残基がシステインであるアミノ酸配列を含むホタルルシフェラーゼの変異体であって、前記位置のアミノ酸がシステイン以外の非酸性アミノ酸であるアミノ酸配列を含む、熱安定性が改善されたルシフェラーゼ変異体。
- ホタルルシフェラーゼの変異体であって、配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸が、ロイシン、プロリン、バリン、イソロイシン、ヒスチジン、メチオニン、アラニン、フェニルアラニン、グルタミン、トリプトファン、チロシン、セリン、グリシン、アスパラギン、リシン、トレオニン、及びアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、熱安定性が改善されたルシフェラーゼ変異体。
- 配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸残基がチロシンであるアミノ酸配列を含むホタルルシフェラーゼの変異体であって、前記位置のアミノ酸がチロシン及びシステイン以外のアミノ酸配列を含む、熱安定性が改善されたルシフェラーゼ変異体。
- 配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸が、ロイシン、プロリン、バリン、イソロイシン、ヒスチジン、メチオニン、及びアラニンからなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載のルシフェラーゼ変異体。
- 配列番号１の３９３位に対応する位置のアミノ酸が、ロイシン、プロリン、又はバリンである、請求項５に記載のルシフェラーゼ変異体。
- 配列番号１の２１７位に対応する位置のアミノ酸がロイシン又はイソロイシンであり、
配列番号１の４９０位に対応する位置のアミノ酸がリシンであり、及び／又は
配列番号１の２５２位に対応する位置のアミノ酸がメチオニンである、
請求項１～６のいずれか一項に記載のルシフェラーゼ変異体。 - ルシフェラーゼ変異体が、以下の（ｉ）～（ｉｉｉ）からなる群より選択されるアミノ酸配列：
（ｉ）配列番号１、３、５、及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列、
（ｉｉ）前記（ｉ）のいずれかのアミノ酸配列において、配列番号１の３９３位に対応する位置以外の位置において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列、及び
（ｉｉｉ）前記（ｉ）のいずれかのアミノ酸配列に対して全長で７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列であって、かつ配列番号１の以下の位置：４～５位、９～１０位、１３～１４位、１６～１７位、１９位、２３位、２５～２６位、２８位、３５～３７位、４０位、４２～４３位、４５位、４７位、５５位、５７位、６２位、６５位、７２～７４位、８０位、８３～８６位、９０～９１位、９３位、９８位、１０１位、１０５～１０６位、１１１位、１１４～１１６位、１１９位、１２２位、１２５位、１２９位、１３１～１３２位、１３７位、１４１位、１５１位、１５３位、１５５位、１５９位、１６２位、１６４位、１６９位、１８３位、１９０位、１９５～１９６位、１９８位、２００～２０２位、２０４～２０５位、２０８～２１０位、２１２位、２１４位、２２０～２２３位、２２６～２２７位、２３０～２３１位、２３５位、２３７～２３８位、２４０位、２４２位、２４４～２５１位、２５３～２５７位、２６０～２６３位、２７０位、２７２位、２７５～２７６位、２７９～２８３位、２８６位、２８９～２９３位、３００位、３０２位、３０５～３０９位、３１１位、３１３～３２４位、３２６～３２７位、３２９位、３３２～３３３位、３３５位、３３９～３５０位、３５３～３５５位、３５８位、３６１～３６２位、３６５～３６６位、３６８～３６９位、３７４～３７５位、３７７位、３８０位、３８２位、３８４～３８５位、３８７位、３９０～３９１位、３９６位、３９８位、４００位、４０３位、４０６位、４０８～４１０位、４１４位、４１８～４２０位、４２３～４２５位、４２７位、４２９位、４３３～４３４位、４３６～４５１位、４５３～４５５位、４５７位、４６０～４６４位、４６６位、４６８～４７１位、４７３位、４７５～４７６位、４７９～４８３位、４８５位、４８７～４８８位、４９２～４９３位、４９７位、５０４位、５０６～５０８位、５１１～５１２位、５１４～５１８位、５２０位、５２２～５２３位、５２５～５２７位、５２９～５３１位、５３３位、５３８位、５４３位、及び５４７位のアミノ酸配列からなる領域と、ルシフェラーゼ変異体におけるこれらの位置と対応する位置のアミノ酸配列からなる領域とが９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のルシフェラーゼ変異体。 - ルシフェラーゼ変異体が、以下の（ｉ）～（ｉｉｉ）からなる群より選択されるアミノ酸配列：
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列、
（ｉｉ）前記（ｉ）のアミノ酸配列において、配列番号１の３９３位に対応する位置以外の位置において１又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列、及び （ｉｉｉ）前記（ｉ）のアミノ酸配列に対して９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
を含む、請求項８に記載のルシフェラーゼ変異体。 - 請求項１～９のいずれか一項に記載のルシフェラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項１０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 請求項１０に記載のポリヌクレオチド又は請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項１２に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、熱安定性が改善されたルシフェラーゼ変異体の生産方法。
- 請求項１～９のいずれか一項に記載のルシフェラーゼ変異体を含む、ＡＴＰ、ＡＤＰ、及びＡＭＰの少なくとも一つを検出するためのキット。
- 請求項１～９のいずれか一項に記載のルシフェラーゼ変異体を使用することを含む、ＡＴＰ、ＡＤＰ、及びＡＭＰの少なくとも一つを検出する方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018129384 | 2018-07-06 | ||
| JP2018129384 | 2018-07-06 | ||
| PCT/JP2019/026784 WO2020009215A1 (ja) | 2018-07-06 | 2019-07-05 | ルシフェラーゼ変異体 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2020009215A1 JPWO2020009215A1 (ja) | 2021-07-15 |
| JPWO2020009215A5 true JPWO2020009215A5 (ja) | 2022-07-08 |
| JP7472021B2 JP7472021B2 (ja) | 2024-04-22 |
Family
ID=69060439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020529058A Active JP7472021B2 (ja) | 2018-07-06 | 2019-07-05 | ルシフェラーゼ変異体 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220064606A9 (ja) |
| JP (1) | JP7472021B2 (ja) |
| WO (1) | WO2020009215A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7385134B2 (ja) * | 2021-03-12 | 2023-11-22 | 東亜ディーケーケー株式会社 | 変異型甲虫ルシフェラーゼ、遺伝子、組換えベクター、形質転換体、及び変異型甲虫ルシフェラーゼの製造方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5229285A (en) * | 1991-06-27 | 1993-07-20 | Kikkoman Corporation | Thermostable luciferase of firefly, thermostable luciferase gene of firefly, novel recombinant dna, and process for the preparation of thermostable luciferase of firefly |
| EP1015601B1 (en) * | 1997-09-19 | 2015-01-07 | Promega Corporation | Thermostable luciferases and methods of production |
| EP2221386B1 (en) * | 2007-11-20 | 2012-06-20 | Kikkoman Corporation | Composition for analysis of nucleic acid |
| JP2010081908A (ja) * | 2008-10-02 | 2010-04-15 | Hitachi Ltd | 変異型のホタルルシフェラーゼ |
| JP2011120559A (ja) * | 2008-12-26 | 2011-06-23 | Kikkoman Corp | ホタルルシフェラーゼ、その遺伝子、およびホタルルシフェラーゼの製造法 |
-
2019
- 2019-07-05 US US17/257,745 patent/US20220064606A9/en active Pending
- 2019-07-05 JP JP2020529058A patent/JP7472021B2/ja active Active
- 2019-07-05 WO PCT/JP2019/026784 patent/WO2020009215A1/ja active Application Filing
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AR128541A2 (es) | Métodos para modificar el punto isoeléctrico de anticuerpos mediante la sustitución de aminoácidos en la región de determinación de la complementariedad (cdr) | |
| JP2014506790A5 (ja) | ||
| JP2013520426A5 (ja) | ||
| JP2012149070A5 (ja) | ||
| IL288070B2 (en) | Luciferases derived from Eulophorus, new coelantrazine materials and methods of use | |
| JP2019519216A5 (ja) | ||
| JPWO2020009215A5 (ja) | ||
| RU2011129068A (ru) | Антитела против ингибитора метаболического пути тканевого фактора | |
| DK532180A (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af acylpeptider eller salte eller komplekser deraf | |
| RU2008135433A (ru) | Гибриды рекомбинантных антител-белков стресса | |
| JP2007513634A5 (ja) | ||
| RS53685B1 (en) | HUMAN ANTI-IL-23 ANTIBODIES, COMPOSITIONS, METHODS AND APPLICATIONS | |
| AR040046A1 (es) | Anticuerpo neutralizante humano anti-igfr | |
| DE69634640D1 (de) | Mutierte alpha-amylase enzyme mit erhöhter stabilität | |
| PE20140630A1 (es) | Derivados de acido 3-fenilpropionico ramificados y su uso | |
| JP2010507639A5 (ja) | ||
| EP3083666A1 (en) | Single chain il-12 nucleic acids, polypeptids, and uses thereof | |
| EA200870237A1 (ru) | Последовательности пептидов и композиции | |
| KR20140006708A (ko) | 신규한 유기발광화합물 및 이를 포함하는 유기전기발광소자 | |
| JP2015500864A5 (ja) | ||
| JP2021505156A5 (ja) | ||
| RU2011154363A (ru) | Комбинации клад rrgb пневмококков | |
| HRP20231175T1 (hr) | Postupci kultiviranja stanica | |
| JPWO2017090685A1 (ja) | Ｄｎａポリメラーゼ変異体 | |
| DK1490492T3 (da) | Hybridt hepatocytvækstfaktorgen med höj ekspressionseffektivitet af to heterotyper af hepatocytvækstfaktor |