JPWO2020004014A1 - エルゴチオネイン、アスコルビン酸2−グルコシド、アスコルビン酸、およびそれらの組み合わせの筋分化促進作用 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための培地。
(2)さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、(1)記載の培地。
(3)エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための培地添加剤。
(4)さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、(3)記載の培地添加剤。
(5)エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するためのキット。
(6)さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、(5)記載のキット。
(7)エルゴチオネインを含む培地にて細胞を培養することを含む、細胞の筋分化を促進する方法。
(8)培地がさらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含むものである、(7)記載の方法。
(9)エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための医薬組成物。
(10)さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、(9)記載の医薬組成物。
(11)筋肉の再生を促進するための、(9)または(10)記載の医薬組成物。
(12)エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための飲食物。
(13)さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、(12)記載の飲食物。
(14)筋肉の再生を促進するための、(12)または(13)記載の飲食物。
筋肉が受傷などの刺激を受けるとサテライト細胞が活性化され、筋芽細胞へと分化する。
筋芽細胞は筋細胞へと分化し、筋管を形成する。筋管は筋線維を形成あるいは筋線維と融合して骨格筋を再生する。EGTはサテライト細胞または筋芽細胞の筋細胞への筋分化を促進することから、本発明の医薬組成物を筋肉の再生、とりわけ骨格筋の再生を促進するために用いてもよい。再生される筋肉はいずれの部位にあってもよい。
(b)AGおよび/またはVCを含む、筋分化を促進するための培地添加剤。
(c)AGおよび/またはVCを含む、筋分化を促進するためのキット。
(d)AGおよび/またはVCを含む培地にて細胞を培養することを含む、細胞の筋分化を促進する方法。
(e)AGおよび/またはVCを含む、筋分化を促進するための医薬組成物。
(f)筋肉の再生を促進するための、(e)記載の医薬組成物。
(g)AGおよび/またはVCを含む、筋分化を促進するための飲食物。
(h)筋肉の再生を促進するための、(g)記載の飲食物。
(i)EGTを添加することを含む、筋分化を促進するための培地の製造方法。
(j)EGTを添加することを含む、筋分化を促進するための培地添加剤の製造方法。
(k)EGTを添加することを含む、筋分化を促進するためのキットの製造方法。
(l)EGTを含む培地で細胞を培養することを含む、細胞の筋分化を促進するための方法。
(m)筋分化促進を要する対象にEGTを含む医薬組成物を投与することを含む、該対象において筋分化を促進するための方法。
(n)筋肉を再生するための、(n)記載の方法。
(o)EGTを含む飲食物を摂取することを含む、筋分化を促進するための方法。
(p)筋肉を再生するための、(o)記載の方法。
(q)筋分化を促進するための培地の製造のためのEGTの使用。
(r)筋分化を促進するための培地添加剤の製造のためのEGTの使用。
(s)筋分化を促進するためのキットの製造のためのEGTの使用。
(t)培地中の細胞の筋分化を促進するための、EGTの使用。
(u)対象における筋分化を促進するための医薬の製造のためのEGTの使用。
(v)該医薬が対象において筋肉を再生させるためのものである、上記使用。
(w)対象における筋分化を促進するための飲食物の製造のためのエルゴオネインの使用。
(x)該飲食物が対象において筋肉を再生させるためのものである、(w)記載の使用。
(y)対象において筋分化を促進するためのEGTの使用。
(z)対象において筋肉を再生させるための(y)記載の使用。
(aa)AGおよび/またはVCを添加することを含む、筋分化を促進するための培地の製造方法。
(bb)AGおよび/またはVCを添加することを含む、筋分化を促進するための培地添加剤の製造方法。
(cc)AGおよび/またはVCを添加することを含む、筋分化を促進するためのキットの製造方法。
(dd)AGおよび/またはVCを含む培地で細胞を培養することを含む、細胞の筋分化を促進するための方法。
(ee)筋分化促進を要する対象にAGおよび/またはVCを含む医薬組成物を投与することを含む、該対象において筋分化を促進するための方法。
(ff)筋肉を再生するための、(ee)記載の方法。
(gg)AGおよび/またはVCを含む飲食物を摂取することを含む、筋分化を促進するための方法。
(hh)筋肉を再生するための、(gg)記載の方法。
(ii)筋分化を促進するための培地の製造のためのAGおよび/またはVCの使用。
(jj)筋分化を促進するための培地添加剤の製造のためのAGおよび/またはVCの使用。
(kk)筋分化を促進するためのキットの製造のためのAGおよび/またはVCの使用。
(ll)培地中の細胞の筋分化を促進するための、AGおよび/またはVCの使用。
(mm)対象における筋分化を促進するための医薬の製造のためのAGおよび/またはVCの使用。
(nn)該医薬が対象において筋肉を再生させるためのものである、上記使用。
(oo)対象における筋分化を促進するための飲食物の製造のためのAGおよび/またはVCの使用。
(pp)該飲食物が対象において筋肉を再生させるためのものである、(oo)記載の使用。
(qq)対象において筋分化を促進するためのAGおよび/またはVCの使用。
(rr)対象において筋肉を再生させるための(qq)記載の使用。
PIA[NM_008907]:フォワード5‘GTCTCCTTCGAGCTGTTTGC3’(配列番号:3)、リバース5‘GATGCCAGGACCTGTATGCT3’(配列番号:4))を添加し、CFX96 TouchTM リアルタイムPCR 解析システム(バイオラッド)にかけることによって、MyoDおよびPPIAの遺伝子発現量を測定した。MyoDは筋肉分化を誘導するマスターレギュレーターとして知られている。PPIAはハウスキーピング遺伝子として知られており、PPIA遺伝子発現量を内部標準として用いた。MyoD mRNAの発現量をPPIA mRNAの発現量で割ることによって補正しMyoD mRNA発現レベルを算出した。図2には、NTのMyoD mRNA発現レベルを1としてEGT添加時の遺伝子発現レベル(相対値)を示した。MyoD mRNA発現レベルはEGTの濃度に依存して増加した。
C2C12細胞を増殖培地に懸濁し、65X104個/mlの細胞密度に調製した。その細胞懸濁液を1.5mlずつ6ウェルプレートに添加し、5%CO2インキュベーターで24時間培養を行った。増殖培地を除去した後、EGT0.5mMもしくはエダラボン(以下、Edvと略す)25μM、Edv50μMを含んだ分化培地を2mlずつ添加した。Edvは強力な合成抗酸化剤である。培地は1日おきに新しいものに交換し培養を続けた。対照群(NT)は、EGTを含まないこと以外は、全く同じ操作を行った。4日後に、培地を除去し、TRIzol(インビトロジェン)を1mlずつ添加しTRIzolのプロトコールに従ってRNAを回収した。回収したRNAを逆転写キット(タカラバイオ)によりmRNAの相補鎖DNAを得た。TB GreenTM Premix Ex TaqTM IIキット(タカラバイオ)を用い、そのプロトコールに従い、得られた相補鎖DNAに以下のプライマーDNA(MyH2[NM_001039545]:フォワード5‘GAGCAAAGATGCAGGGAAAG3’(配列番号:5)、リバース5‘TAAGGGTTGACGGTGACACA3’(配列番号:6)、PPIA[NM_008907]:フォワード5‘GTCTCCTTCGAGCTGTTTGC3’(配列番号:3)、リバース5‘GATGCCAGGACCTGTATGCT3’(配列番号:4))を添加し、CFX96 TouchTM リアルタイムPCR 解析システム(バイオラッド)にかけることによって、MyH2およびPPIAの遺伝子発現量を測定した。MyH2 mRNAの発現量をPPIA mRNAの発現量で割ることによって補正しMyH2 mRNA発現レベルを算出した。図4には、NTのMyH2 mRNA発現レベルを1としてEGTもしくはEdv添加時の遺伝子発現レベル(相対値)を示した。
抗酸化剤EdvはC2C12のMyH2発現レベルに影響を与えなかった。この結果から、単なる抗酸化効果ではMyH2発現レベルが上昇しないことがわかった。
配列番号:2はMyoD遺伝子を増幅するためのリバースプライマーの塩基配列を示す。
配列番号:3はPPIA遺伝子を増幅するためのフォワードプライマーの塩基配列を示す。
配列番号:4はPPIA遺伝子を増幅するためのリバースプライマーの塩基配列を示す。
配列番号:5はMyH2遺伝子を増幅するためのフォワードプライマーの塩基配列を示す。
配列番号:6はMyH2遺伝子を増幅するためのリバースプライマーの塩基配列を示す。
配列番号:7はACTA1遺伝子を増幅するためのフォワードプライマーの塩基配列を示す。
Claims (22)
- エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための培地。
- さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、請求項1記載の培地。
- エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための培地添加剤。
- さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、請求項3記載の培地添加剤。
- エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するためのキット。
- さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、請求項5記載のキット。
- エルゴチオネインを含む培地にて細胞を培養することを含む、細胞の筋分化を促進する方法。
- 培地がさらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含むものである、請求項7記載の方法。
- エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための医薬組成物。
- さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、請求項9記載の医薬組成物。
- 筋肉の再生を促進するための、請求項9または10記載の医薬組成物。
- エルゴチオネインを含む、筋分化を促進するための飲食物。
- さらにアスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、請求項12記載の飲食物。
- 筋肉の再生を促進するための、請求項12または13記載の飲食物。
- アスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、筋分化を促進するための培地。
- アスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、筋分化を促進するための培地添加剤。
- アスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、筋分化を促進するためのキット。
- アスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む培地にて細胞を培養することを含む、細胞の筋分化を促進する方法。
- アスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、筋分化を促進するための医薬組成物。
- 筋肉の再生を促進するための、請求項19記載の医薬組成物。
- アスコルビン酸2−グルコシドおよび/またはアスコルビン酸を含む、筋分化を促進するための飲食物。
- 筋肉の再生を促進するための、請求項21記載の飲食物。
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