JPWO2019151097A1 - 心筋細胞の製造方法 - Google Patents
心筋細胞の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2019151097A1 JPWO2019151097A1 JP2019569055A JP2019569055A JPWO2019151097A1 JP WO2019151097 A1 JPWO2019151097 A1 JP WO2019151097A1 JP 2019569055 A JP2019569055 A JP 2019569055A JP 2019569055 A JP2019569055 A JP 2019569055A JP WO2019151097 A1 JPWO2019151097 A1 JP WO2019151097A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- inhibitor
- cells
- agonist
- cardiomyocytes
- somatic cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 119
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 81
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 90
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 79
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 75
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 74
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 53
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 37
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 91
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 71
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 58
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 58
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims description 58
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 57
- 229940123932 Phosphodiesterase 4 inhibitor Drugs 0.000 claims description 51
- 239000002587 phosphodiesterase IV inhibitor Substances 0.000 claims description 51
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N forskolin group Chemical group C(C)(=O)O[C@H]1[C@H]([C@@H]2[C@@]([C@]3(C(C[C@](O[C@]13C)(C)C=C)=O)O)([C@H](CCC2(C)C)O)C)O OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 claims description 42
- 239000012824 ERK inhibitor Substances 0.000 claims description 36
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 26
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 26
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 19
- RZUOCXOYPYGSKL-GOSISDBHSA-N 1-[(1s)-1-(4-chloro-3-fluorophenyl)-2-hydroxyethyl]-4-[2-[(2-methylpyrazol-3-yl)amino]pyrimidin-4-yl]pyridin-2-one Chemical group CN1N=CC=C1NC1=NC=CC(C2=CC(=O)N([C@H](CO)C=3C=C(F)C(Cl)=CC=3)C=C2)=N1 RZUOCXOYPYGSKL-GOSISDBHSA-N 0.000 claims description 18
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 18
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 14
- HJORMJIFDVBMOB-UHFFFAOYSA-N rolipram Chemical group COC1=CC=C(C2CC(=O)NC2)C=C1OC1CCCC1 HJORMJIFDVBMOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229950005741 rolipram Drugs 0.000 claims description 14
- 229940096885 Retinoic acid receptor agonist Drugs 0.000 claims description 9
- 229940121908 Retinoid X receptor agonist Drugs 0.000 claims description 9
- 102100037263 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 Human genes 0.000 claims 2
- 101000600756 Homo sapiens 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 claims 2
- 101001117146 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial Proteins 0.000 claims 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 3
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 abstract 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 63
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 48
- 102000003676 Glucocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 47
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 47
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 14
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 13
- 102000007665 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Human genes 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 102000003702 retinoic acid receptors Human genes 0.000 description 13
- 108090000064 retinoic acid receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000034527 Retinoid X Receptors Human genes 0.000 description 11
- 108010038912 Retinoid X Receptors Proteins 0.000 description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 101100296720 Dictyostelium discoideum Pde4 gene Proteins 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 101100082610 Plasmodium falciparum (isolate 3D7) PDEdelta gene Proteins 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 9
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 8
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 8
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 8
- LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N trametinib Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC(N2C(N(C3CC3)C(=O)C3=C(NC=4C(=CC(I)=CC=4)F)N(C)C(=O)C(C)=C32)=O)=C1 LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 7
- LLJYFDRQFPQGNY-QINSGFPZSA-N (z)-5-(4-chlorophenyl)-3-phenylpent-2-enoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=C/C(=O)O)\CCC1=CC=C(Cl)C=C1 LLJYFDRQFPQGNY-QINSGFPZSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 229960004066 trametinib Drugs 0.000 description 6
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 6
- 102000010825 Actinin Human genes 0.000 description 5
- 108010063503 Actinin Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 5
- -1 Steroid compounds Chemical class 0.000 description 5
- FOIVPCKZDPCJJY-JQIJEIRASA-N arotinoid acid Chemical compound C=1C=C(C(CCC2(C)C)(C)C)C2=CC=1C(/C)=C/C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 FOIVPCKZDPCJJY-JQIJEIRASA-N 0.000 description 5
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 5
- 102000006255 nuclear receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 5
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 5
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 4
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 4
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 101100343535 Mus musculus Litaf gene Proteins 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 4
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 4
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 4
- MFIHSKBTNZNJIK-RZTYQLBFSA-N (3s,3ar,6s,6ar)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-6-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrofuro[3,4-c]furan Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1[C@@H]1[C@@H](CO[C@@H]2C=3C=C(OC)C(OC)=C(OC)C=3)[C@@H]2CO1 MFIHSKBTNZNJIK-RZTYQLBFSA-N 0.000 description 3
- FOUVTBKPJRMLPE-FMIVXFBMSA-N 4-[(e)-3-(3,5-ditert-butylphenyl)-3-oxoprop-1-enyl]benzoic acid Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C)C)=CC(C(=O)\C=C\C=2C=CC(=CC=2)C(O)=O)=C1 FOUVTBKPJRMLPE-FMIVXFBMSA-N 0.000 description 3
- SZWKGOZKRMMLAJ-UHFFFAOYSA-N 4-{[(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)carbonyl]amino}benzoic acid Chemical compound C=1C=C2C(C)(C)CCC(C)(C)C2=CC=1C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 SZWKGOZKRMMLAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 3
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 101150013356 TNNT2 gene Proteins 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000000306 component Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVIGNZUDBVLTLU-MRXNPFEDSA-N (6R)-7-[(3,4-difluorophenyl)methyl]-6-(methoxymethyl)-2-[5-methyl-2-[(2-methylpyrazol-3-yl)amino]pyrimidin-4-yl]-5,6-dihydroimidazo[1,2-a]pyrazin-8-one Chemical compound FC=1C=C(CN2C(C=3N(C[C@@H]2COC)C=C(N=3)C2=NC(=NC=C2C)NC2=CC=NN2C)=O)C=CC=1F HVIGNZUDBVLTLU-MRXNPFEDSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- JLOXTZFYJNCPIS-FYWRMAATSA-N (z)-3-amino-3-(4-aminophenyl)sulfanyl-2-[2-(trifluoromethyl)phenyl]prop-2-enenitrile Chemical compound C=1C=CC=C(C(F)(F)F)C=1C(\C#N)=C(/N)SC1=CC=C(N)C=C1 JLOXTZFYJNCPIS-FYWRMAATSA-N 0.000 description 2
- RWEVIPRMPFNTLO-UHFFFAOYSA-N 2-(2-fluoro-4-iodoanilino)-N-(2-hydroxyethoxy)-1,5-dimethyl-6-oxo-3-pyridinecarboxamide Chemical compound CN1C(=O)C(C)=CC(C(=O)NOCCO)=C1NC1=CC=C(I)C=C1F RWEVIPRMPFNTLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RCLQNICOARASSR-SECBINFHSA-N 3-[(2r)-2,3-dihydroxypropyl]-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodoanilino)-8-methylpyrido[2,3-d]pyrimidine-4,7-dione Chemical compound FC=1C(=O)N(C)C=2N=CN(C[C@@H](O)CO)C(=O)C=2C=1NC1=CC=C(I)C=C1F RCLQNICOARASSR-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- BYWWNRBKPCPJMG-UHFFFAOYSA-N 4-dodecyl-n-(1,3,4-thiadiazol-2-yl)benzenesulfonamide Chemical compound C1=CC(CCCCCCCCCCCC)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NN=CS1 BYWWNRBKPCPJMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JFHROPTYMMSOLG-UHFFFAOYSA-N 6-[3-(dimethylcarbamoyl)phenyl]sulfonyl-4-(3-methoxyanilino)-8-methylquinoline-3-carboxamide Chemical compound COC1=CC=CC(NC=2C3=CC(=CC(C)=C3N=CC=2C(N)=O)S(=O)(=O)C=2C=C(C=CC=2)C(=O)N(C)C)=C1 JFHROPTYMMSOLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102000008143 Bone Morphogenetic Protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 108010049931 Bone Morphogenetic Protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 101001031598 Dictyostelium discoideum Probable serine/threonine-protein kinase fhkC Proteins 0.000 description 2
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710146526 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100023266 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710146529 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Proteins 0.000 description 2
- RFWVETIZUQEJEF-UHFFFAOYSA-N GDC-0623 Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=CC2=CN=CN2C=1NC1=CC=C(I)C=C1F RFWVETIZUQEJEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001267 GSK3 Human genes 0.000 description 2
- 108060006662 GSK3 Proteins 0.000 description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 2
- 101000976899 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 15 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KPQQGHGDBBJGFA-QNGWXLTQSA-N MK-8353 Chemical compound C([C@@](C1)(SC)C(=O)NC=2C=C3C(C=4C=NC(OC(C)C)=CC=4)=NNC3=CC=2)CN1CC(=O)N(CC=1)CCC=1C(C=C1)=CC=C1C=1N=CN(C)N=1 KPQQGHGDBBJGFA-QNGWXLTQSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102100023483 Mitogen-activated protein kinase 15 Human genes 0.000 description 2
- IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N Myricetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 2
- YULUCECVQOCQFQ-UHFFFAOYSA-N OSU-03012 Chemical compound C1=CC(NC(=O)CN)=CC=C1N1C(C=2C=C3C(C4=CC=CC=C4C=C3)=CC=2)=CC(C(F)(F)F)=N1 YULUCECVQOCQFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 2
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NAVMQTYZDKMPEU-UHFFFAOYSA-N Targretin Chemical compound CC1=CC(C(CCC2(C)C)(C)C)=C2C=C1C(=C)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 NAVMQTYZDKMPEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFQULUVMLGZVAF-OYJDLGDISA-N U0126.EtOH Chemical compound CCO.C=1C=CC=C(N)C=1SC(\N)=C(/C#N)\C(\C#N)=C(/N)SC1=CC=CC=C1N CFQULUVMLGZVAF-OYJDLGDISA-N 0.000 description 2
- OGQICQVSFDPSEI-UHFFFAOYSA-N Zorac Chemical compound N1=CC(C(=O)OCC)=CC=C1C#CC1=CC=C(SCCC2(C)C)C2=C1 OGQICQVSFDPSEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- LZCDAPDGXCYOEH-UHFFFAOYSA-N adapalene Chemical compound C1=C(C(O)=O)C=CC2=CC(C3=CC=C(C(=C3)C34CC5CC(CC(C5)C3)C4)OC)=CC=C21 LZCDAPDGXCYOEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- IMOZEMNVLZVGJZ-QGZVFWFLSA-N apremilast Chemical compound C1=C(OC)C(OCC)=CC([C@@H](CS(C)(=O)=O)N2C(C3=C(NC(C)=O)C=CC=C3C2=O)=O)=C1 IMOZEMNVLZVGJZ-QGZVFWFLSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N binimetinib Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=C2N(C)C=NC2=C(F)C=1NC1=CC=C(Br)C=C1F ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- VIRRLEDAYYYTOD-YHEOSNBFSA-N colforsin daropate hydrochloride Chemical compound Cl.O[C@H]([C@@]12C)CCC(C)(C)[C@@H]1[C@H](OC(=O)CCN(C)C)[C@H](OC(C)=O)[C@]1(C)[C@]2(O)C(=O)C[C@](C)(C=C)O1 VIRRLEDAYYYTOD-YHEOSNBFSA-N 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- FVYXIJYOAGAUQK-UHFFFAOYSA-N honokiol Chemical compound C1=C(CC=C)C(O)=CC=C1C1=CC(CC=C)=CC=C1O FVYXIJYOAGAUQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N n-[2-chloro-5-(trifluoromethyl)phenyl]-2-[3-(4-ethyl-5-ethylsulfanyl-1,2,4-triazol-3-yl)piperidin-1-yl]acetamide Chemical compound CCN1C(SCC)=NN=C1C1CN(CC(=O)NC=2C(=CC=C(C=2)C(F)(F)F)Cl)CCC1 NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDSACQWTXKSHJT-NSHDSACASA-N n-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodoanilino)-6-methoxyphenyl]-1-[(2s)-2,3-dihydroxypropyl]cyclopropane-1-sulfonamide Chemical compound C1CC1(C[C@H](O)CO)S(=O)(=O)NC=1C(OC)=CC(F)=C(F)C=1NC1=CC=C(I)C=C1F RDSACQWTXKSHJT-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- RZGBUJXSKLDAFE-QYHUGZLJSA-N pacap 1-27 Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)C1=CN=CN1 RZGBUJXSKLDAFE-QYHUGZLJSA-N 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 150000003906 phosphoinositides Chemical class 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000865 phosphorylative effect Effects 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 2
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- MNDBXUUTURYVHR-UHFFFAOYSA-N roflumilast Chemical compound FC(F)OC1=CC=C(C(=O)NC=2C(=CN=CC=2Cl)Cl)C=C1OCC1CC1 MNDBXUUTURYVHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- MUTNCGKQJGXKEM-UHFFFAOYSA-N tamibarotene Chemical compound C=1C=C2C(C)(C)CCC(C)(C)C2=CC=1NC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 MUTNCGKQJGXKEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- BTQHKPHNQVZXOC-HVDRVSQOSA-N (2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoic acid;phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O BTQHKPHNQVZXOC-HVDRVSQOSA-N 0.000 description 1
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- MSYGAHOHLUJIKV-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethyl-1-(3-nitrophenyl)-1h-pyrazole-4-carboxylic acid ethyl ester Chemical compound CC1=C(C(=O)OCC)C(C)=NN1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 MSYGAHOHLUJIKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JFUAWXPBHXKZGA-IBGZPJMESA-N 4-fluoro-2-[(4r)-5,5,5-trifluoro-4-hydroxy-2-methyl-4-(1h-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-ylmethyl)pentan-2-yl]phenol Chemical compound C([C@@](O)(CC=1NC2=CN=CC=C2C=1)C(F)(F)F)C(C)(C)C1=CC(F)=CC=C1O JFUAWXPBHXKZGA-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 6alpha-methylprednisolone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 0.000 description 1
- 229940125927 AZD0364 Drugs 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000005862 Angiotensin II Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100027052 Bone morphogenetic protein receptor type-1B Human genes 0.000 description 1
- VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N 0.000 description 1
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 1
- ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N Cortisone acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BYTORXDZJWWIKR-UHFFFAOYSA-N Hinokiol Natural products CC(C)c1cc2CCC3C(C)(CO)C(O)CCC3(C)c2cc1O BYTORXDZJWWIKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000984546 Homo sapiens Bone morphogenetic protein receptor type-1B Proteins 0.000 description 1
- 101001088883 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 5B Proteins 0.000 description 1
- 101000950687 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 7 Proteins 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 1
- 102100033247 Lysine-specific demethylase 5B Human genes 0.000 description 1
- 230000005723 MEK inhibition Effects 0.000 description 1
- 108090000744 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100037805 Mitogen-activated protein kinase 7 Human genes 0.000 description 1
- FABQUVYDAXWUQP-UHFFFAOYSA-N N4-(1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)-6-(3-methoxyphenyl)pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound COC1=CC=CC(C=2N=C(N)N=C(NCC=3C=C4OCOC4=CC=3)C=2)=C1 FABQUVYDAXWUQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150050438 NPPA gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101150114527 Nkx2-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N Procaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 1
- 102000011117 Transforming Growth Factor beta2 Human genes 0.000 description 1
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101800000304 Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000056172 Transforming growth factor beta-3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000097 Transforming growth factor beta-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000013534 Troponin C Human genes 0.000 description 1
- 102100026893 Troponin T, cardiac muscle Human genes 0.000 description 1
- 101710165323 Troponin T, cardiac muscle Proteins 0.000 description 1
- 102000011017 Type 4 Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases Human genes 0.000 description 1
- 108010037584 Type 4 Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases Proteins 0.000 description 1
- 108010051583 Ventricular Myosins Proteins 0.000 description 1
- 101100460507 Xenopus laevis nkx-2.5 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 229960002916 adapalene Drugs 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 229940092705 beclomethasone Drugs 0.000 description 1
- NBMKJKDGKREAPL-DVTGEIKXSA-N beclomethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(Cl)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O NBMKJKDGKREAPL-DVTGEIKXSA-N 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002537 betamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N betamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-DVTGEIKXSA-N 0.000 description 1
- 229960002938 bexarotene Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001593 brown adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N bucladesine Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](OC(=O)CCC)[C@@H]2N1C(N=CN=C2NC(=O)CCC)=C2N=C1 CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N 0.000 description 1
- 229960005263 bucladesine Drugs 0.000 description 1
- 229960004436 budesonide Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229960003290 cortisone acetate Drugs 0.000 description 1
- 210000001100 crypt cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940126513 cyclase activator Drugs 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002714 fluticasone Drugs 0.000 description 1
- MGNNYOODZCAHBA-GQKYHHCASA-N fluticasone Chemical compound C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@]1(F)[C@@H]2[C@@H]2C[C@@H](C)[C@@](C(=O)SCF)(O)[C@@]2(C)C[C@@H]1O MGNNYOODZCAHBA-GQKYHHCASA-N 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 150000004160 forskolin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229940124750 glucocorticoid receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- VVOAZFWZEDHOOU-UHFFFAOYSA-N honokiol Natural products OC1=CC=C(CC=C)C=C1C1=CC(CC=C)=CC=C1O VVOAZFWZEDHOOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001317 isoprenaline Drugs 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- MFIHSKBTNZNJIK-UHFFFAOYSA-N medioresinol dimethyl ether Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1C(COC2C=3C=C(OC)C(OC)=C(OC)C=3)C2CO1 MFIHSKBTNZNJIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- 239000003697 methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 229960001664 mometasone Drugs 0.000 description 1
- QLIIKPVHVRXHRI-CXSFZGCWSA-N mometasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(Cl)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CCl)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O QLIIKPVHVRXHRI-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229940116852 myricetin Drugs 0.000 description 1
- PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N myricetin Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C(=O)C=2)=C1 PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007743 myricetin Nutrition 0.000 description 1
- DXBJGDVBQPEMOB-UHFFFAOYSA-N n-[4-[1-(4-fluorophenyl)indazol-5-yl]-3-(trifluoromethyl)phenyl]-1-phenylmethanesulfonamide Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1N1C2=CC=C(C=3C(=CC(NS(=O)(=O)CC=4C=CC=CC=4)=CC=3)C(F)(F)F)C=C2C=N1 DXBJGDVBQPEMOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 210000002571 pancreatic alpha cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 229960001309 procaine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229950007231 ravoxertinib Drugs 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 229950008933 refametinib Drugs 0.000 description 1
- 230000025915 regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 1
- 229960002586 roflumilast Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- DMRMZQATXPQOTP-GWTDSMLYSA-M sodium;(4ar,6r,7r,7as)-6-(6-amino-8-bromopurin-9-yl)-2-oxido-2-oxo-4a,6,7,7a-tetrahydro-4h-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-7-ol Chemical compound [Na+].C([C@H]1O2)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1Br DMRMZQATXPQOTP-GWTDSMLYSA-M 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229950010130 tamibarotene Drugs 0.000 description 1
- 229960000565 tazarotene Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960005294 triamcinolone Drugs 0.000 description 1
- GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N triamcinolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@]([C@H](O)C4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000636 white adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0657—Cardiomyocytes; Heart cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/60—Buffer, e.g. pH regulation, osmotic pressure
- C12N2500/62—DMSO
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/01—Modulators of cAMP or cGMP, e.g. non-hydrolysable analogs, phosphodiesterase inhibitors, cholera toxin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/15—Transforming growth factor beta (TGF-β)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
- C12N2501/385—Hormones with nuclear receptors of the family of the retinoic acid recptor, e.g. RAR, RXR; Peroxisome proliferator-activated receptor [PPAR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/405—Cell cycle regulated proteins, e.g. cyclins, cyclin-dependant kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/72—Transferases (EC 2.)
- C12N2501/727—Kinases (EC 2.7.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
- C12N2506/1307—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
この出願は、2018年1月30日に出願された日本国出願番号第2018−13301号を基礎とする優先権を主張し、その開示内容は全て本明細書の一部に組み込まれる。
心筋細胞についても、マウス胎児線維芽細胞からGSK3阻害剤(CHIR99021)などを含む一定の化学物質と共に培養することにより直接誘導されることが知られている(非特許文献2)。同様にして、ヒト包皮線維芽細胞(HFF)又は胎児肺線維芽細胞(HLF)から直接誘導されることが知られている(非特許文献3)。
[1]体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造する方法であって、MEK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程を含むことを特徴とする、心筋細胞の製造方法。
[2]前記工程が、さらにcAMP誘導剤の存在下で体細胞を培養する工程である、上記[1]に記載の心筋細胞の製造方法。
[3]前記工程が、さらにTGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニストからなる群から選択される少なくとも1種の存在下で体細胞を培養する工程である、上記[1]又は[2]に記載の心筋細胞の製造方法。
[4]前記工程が、さらにERK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程である、上記[3]に記載の心筋細胞の製造方法。
[5]前記工程が、次の(1)〜(6)のいずれかの組み合わせ存在下で体細胞を培養する工程である、上記[1]〜[3]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
(1)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びTGF−β阻害剤、
(2)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びPDE4阻害剤、
(3)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びGRアゴニスト、
(4)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(5)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(6)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤。
[6]前記工程が、さらにRARアゴニスト、RXRアゴニスト、及びPDK1活性化剤からなる群から選択される少なくとも1種の存在下で体細胞を培養する工程である、上記[1]〜[5]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
[7]MEK阻害剤がPD0325901である、上記[1]〜[6]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
[8]cAMP誘導剤がフォルスコリンである、上記[2]〜[7]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
[9]TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、又はGRアゴニストがデキサメタゾンである、上記[3]〜[8]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
[10]ERK阻害剤がGDC−0994である、上記[4]〜[9]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
[11]体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造する方法であって、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程を含むことを特徴とする、心筋細胞の製造方法。
[12]cAMP誘導剤がフォルスコリン、TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、GRアゴニストがデキサメタゾン、又はERK阻害剤がGDC−0994である、上記[11]に記載の心筋細胞の製造方法。
[13]前記体細胞が線維芽細胞である、上記[1]〜[12]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
[14]上記[1]〜[13]のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法から製造される、心筋細胞。
[16]さらにcAMP誘導剤を含む、上記[15]に記載の組成物。
[17]さらにTGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニストからなる群から選択される少なくとも1種を含む、上記[15]又は[16]に記載の組成物。
[18]さらにERK阻害剤を含む、上記[17]に記載の組成物。
[19]次の(1)〜(6)のいずれかの組み合わせを含む、上記[15]〜[18]のいずれか一項に記載の組成物。
(1)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びTGF−β阻害剤、
(2)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びPDE4阻害剤、
(3)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びGRアゴニスト、
(4)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(5)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(6)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤。
[20]さらにRARアゴニスト、RXRアゴニスト、及びPDK1活性化剤からなる群から選択される少なくとも1種を含む、上記[15]〜[19]のいずれか一項に記載の組成物。
[21]MEK阻害剤がPD0325901である、上記[15]〜[20]のいずれか一項に記載の組成物。
[22]cAMP誘導剤がフォルスコリンである、上記[16]〜[21]のいずれか一項に記載の組成物。
[23]TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、又はGRアゴニストがデキサメタゾンである、上記[17]〜[22]のいずれか一項に記載の組成物。
[24]ERK阻害剤がGDC−0994である、上記[18]〜[23]のいずれか一項に記載の組成物。
[25]体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造するための組成物であって、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤を含むことを特徴とする、体細胞から心筋細胞を製造するための組成物。
[26]cAMP誘導剤がフォルスコリン、TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、GRアゴニストがデキサメタゾン、又はERK阻害剤がGDC−0994である、上記[25]に記載の組成物。
[27]前記体細胞が線維芽細胞である、上記[15]〜[26]のいずれか一項に記載の組成物。
本発明に係る、心筋細胞の製造方法(以下、「本発明製法」という。)は、体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造する方法であって、MEK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程を含むことを特徴とする。
(1)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びTGF−β阻害剤、
(2)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びPDE4阻害剤、
(3)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びGRアゴニスト、
(4)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(5)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(6)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤。
また、本発明として、体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造する方法であって、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程を含むことを特徴とする、心筋細胞の製造方法も挙げることができる。以下、かかる製造方法も含めて本発明製法という。
本発明製法においては、少なくとも上記いずれかの組み合わせの存在下で体細胞を培養すればよく、必要に応じて、任意にさらに他の阻害剤や誘導剤等を存在させて体細胞を培養し心筋細胞を製造することができる。
上記阻害剤や誘導剤等は、それぞれにおいて、1種を用いても2種以上を併用してもよい。
具体的な上記阻害剤等においては、2種類以上の阻害作用等を有するものもあり得るが、その場合、一つで複数の阻害剤等が存在しているとみなすことができる。
生物の細胞は、体細胞と生殖細胞とに分類できる。本発明製法には、その出発材料として任意の体細胞を使用することができる。体細胞には特に限定はなく、生体から採取された初代細胞、又は株化された細胞の何れでもよい。本発明製法では、分化の種々の段階にある体細胞、例えば、最終分化した体細胞(例、線維芽細胞、臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)、肝細胞(Hepatocytes)、胆管細胞(Biliary cells)、膵α細胞(Pancreatic α cells)、膵腺房細胞(Acinar cells)、膵管腺細胞(Ductal cells)、小腸腺窩細胞(Intestinal crypt cells)など)、最終分化への途上にある体細胞(例、間葉系幹細胞、神経幹細胞、内胚葉前駆細胞など)、又は初期化され多能性を獲得した体細胞を使用することができる。本発明製法に使用できる体細胞としては、任意の体細胞、例えば、造血系の細胞(各種のリンパ球、マクロファージ、樹状細胞、骨髄細胞等)、臓器由来の細胞(肝細胞、脾細胞、膵細胞、腎細胞、肺細胞等)、筋組織系の細胞(骨格筋細胞、平滑筋細胞、筋芽細胞、心筋細胞等)、線維芽細胞、神経細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、内皮細胞、間質細胞、脂肪細胞(褐色脂肪細胞、白色脂肪細胞等)等が挙げられる。また、これらの細胞の前駆細胞、癌細胞にも本発明製法を適用できる。好ましくは、線維芽細胞を使用することができる。
1.2.1 MEK阻害剤
MEK(MAPK/ERKキナーゼ)は、EGF(上皮増殖因子)などの増殖因子によって活性化されるMAPKシグナル伝達経路に属するリン酸化酵素であり、哺乳類では2つの遺伝子によってコードされるMEK1とMEK2が存在する。MEKは、上流のRAFによってリン酸化され、これによって活性化されたMEKはERKをリン酸化することでさらに下流へシグナルを伝達させる。MEK阻害剤によってERKのリン酸化が阻害されることで、MEKを介したMAPKシグナル伝達経路が阻害される。
TAK−733(CAS No.:1035555−63−5)
BI−847325(CAS No.:1207293−36−4)
Honokiol(CAS No.:35354−74−6)
Myricetin(CAS No.:529−44−2)
AS703026(CAS No.:1236699−92−5)
AZD8330(CAS No.:869357−68−6)
CI−1040(CAS No.:212631−79−3)
Cobimetirlib(CAS No.:934660−93−2)
GDC−0623(CAS No.:1168091−68−6)
MEK162(CAS No.:606143−89−9)
PD318088(CAS No.:391210−00−7)
PD98059(CAS No.:167869−21−8)
Refametinib(CAS No.:923032−37−5)
Selumetinib(CAS No.:606143−52−6)
SL327(CAS No.:305350−87−2)
cAMP(環状アデノシン1リン酸)は、セカンドメッセンジャーとして種々の細胞内シグナル伝達に関わっている物質である。cAMPは、細胞内ではアデニル酸シクラーゼ(adenylate cyclase)によりアデノシン3リン酸(ATP)が環状化されることで生成する。
NKH477(CAS No.:138605−00−2)
PACAP1−27(CAS No.:127317−03−7)
PACAP1−38(CAS No.:137061−48−4)
TGF−β(transforming growth factor−β、形質転換増殖因子β)には、TGF−β1、TGF−β2、TGF−β3の3種類が存在し、ほぼ全ての細胞から生産されている。TGF−βは、上皮細胞をはじめ、多くの細胞の増殖を抑制するなど細胞増殖、形質転換、分化、発生、アポトーシスの制御等の多種多様な細胞機能に関与している。
SB525334(CAS No.:356559−20−1)
SD208(CAS No.:627536−09−8)
Galunisertib(LY2157299)(CAS No.:700874−72−2)
LY2109761(CAS No.:700874−71−1)
SB505124(CAS No.:694433−59−5)
GW788388(CAS No.:452342−67−5)
EW−7197(CAS No.:1352608−82−2)
PDE4(Phosphodiesterase−4)は、ホスホジエステラーゼスーパーファミリーの一つである。ホスホジエステラーゼは、リン酸ジエステル結合を加水分解する酵素であり、特にPDE4は、シグナル伝達経路のセカンドメッセンジャーであるcAMPの環状リン酸ジエステル結合を加水分解し、その細胞内濃度の調節に重要な役割を担っている。PDE4は、免疫細胞や脳・神経細胞などに存在する。
Cilomilast(CAS No.:153259−65−5)
GSK256066(CAS No.:801312−28−7)
Apremilast(CC−10004)(CAS No.:608141−41−9)
GR(Glucocorticoid Receptor、グルココルチコイド受容体)は、核内受容体スーパーファミリーに属し、ステロイドホルモンであるグルココルチコイドと結合してその転写活性を調節する転写因子として働く。GRは広くヒトの全身に発現しており、その機能的な重要性から、デキサメタゾンなどの合成アゴニストが多数開発されている。
選択的グルココルチコイド受容体修飾物質あるいは選択的グルココルチコイド受容体アゴニストに分類される非ステロイド化合物。
RAR(Retinoic acid receptor、レチノイン酸受容体)は、核内受容体スーパーファミリーに属し、レチノイン酸をリガンドとしその転写活性が活性化される。RARは、生体内で様々な機能を有しており、特に細胞の分化に密接に関わっていることから、人工の合成アゴニストが多数開発されている。
RXR(retinoid X receptor、レチノイドX受容体)は、核内受容体スーパーファミリーに属し、RARと同様にレチノイン酸などをリガンドとしその転写活性が調節される。RXRは、RARをはじめとする様々な核内受容体とヘテロダイマーを形成し、特定の塩基配列への結合や転写共役因子のリクルートなどを介して、パートナーとなる核内受容体の転写活性を複雑に調節している。
Tretinoin(CAS No.:302−79−4)
Adapalene(CAS No.:106685−40−9)
Bexarotene(CAS No.:153559−49−0)
Tazarotene(CAS No.:118292−40−3)
Tamibarotene(CAS No.:94497−51−5)
CH55(CAS No.:110368−33−7)
AM580(CAS No.:102121−60−8)
PDK1(phosphoinositide−dependent protein kinase−1、ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼ1)は、AKTをリン酸化し活性化するリン酸化酵素であり、イノシトールリン脂質を介したシグナル伝達経路の中心として機能している。このPDK1/AKTシグナル経路は、細胞の生存、増殖、糖および脂質代謝などに極めて重要な役割を果たしている。PDK1活性化剤であるPS48は、PDK1に直接結合しAKTをリン酸化させ、このシグナル経路を活性化する。
OSU−03012(AR−12)(CAS No.:742112−33−0)
BX795(CAS No.:702675−74−9)
BX912(CAS No.:702674−56−4)
PHT−427(CAS No.:1191951−57−1)
ERK(Extracellular Signal−regulated Kinase、細胞外シグナル調節キナーゼ)は、EGF(上皮増殖因子)、血清刺激又は酸化ストレスなどによって活性化されるMAPKのサブファミリーで、ERKはその関わるシグナル伝達経路の違いからERK1/2、ERK5、ERK7、ERK8に分けられる。上皮増殖因子受容体(EGFR)などのチロシンキナーゼ受容体にリガンドが結合することでシグナルが流れた結果、ERKの活性化ループに存在するTEYモチーフがリン酸化されて活性化する。
MK−8353(SCH900353)(CAS No.:1184173−73−6)
Magnolin(CAS No.:31008−18−1)
LY3214996(CAS No.:1951483−29−6)
FR 180204(CAS No.:865362-74-9)
AZD0364(CAS No.:2097416-76-5)
本発明製法における体細胞の培養は、使用する体細胞の種類に応じた培地、温度、その他の条件を選択し、上記の各種の阻害剤(及び、場合により誘導剤ないし活性化剤)の存在下において実施すればよい。培地は、公知の培地又は市販の培地から選択することができる。例えば、一般的な培地であるMEM(最少必須培地)、DMEM(ダルベッコ改変イーグル培地)、DMEM/F12、又はこれらを改変した培地に、適切な成分(血清、タンパク質、アミノ酸、糖類、ビタミン類、脂肪酸類、抗生物質等)を添加して使用することができる。
本発明製法においては、上記した各種の阻害剤等を含む培地において体細胞を培養することにより、一段階の培養によって体細胞から心筋細胞を製造することができる。
上記した本発明製法により、心筋細胞を含有する細胞集団を得ることができる。本発明製法により製造される心筋細胞も本発明の範囲内である。本発明製法で製造される心筋細胞は、最終分化した細胞の他、心筋細胞に分化することが運命づけられた前駆細胞でもよい。
本発明製法により製造される心筋細胞は、低分子化合物により体細胞から直接誘導される、いわゆる低分子化合物誘導性心筋細胞(ciCMs)であって、ES細胞やiPS細胞から分化誘導される心筋細胞とは区別される。また、使用する低分子化合物の相違によって、特許文献1等に記載の低分子化合物誘導性心筋細胞とも区別される。
心筋細胞は、自律的に拍動するという他の細胞にない特徴を有しており、顕微鏡下での観察により他の細胞と区別することができる。また、心筋細胞の特異的マーカーとしては、心筋トロポニンC(cTnT)、αミオシン重鎖、αアクチン等が挙げられるが、これに限定されるものではない。
本発明製法で製造される心筋細胞は、さらに、心筋細胞の機能発揮や生着性向上に有効な他の細胞や成分と組み合わせた組成物とすることもできる。
本発明に係る組成物(以下、「本発明組成物」という。)は、体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造するための組成物であって、MEK阻害剤を含むことを特徴とする。
特に好ましくは、次の(1)〜(6)のいずれかの組み合わせを含む本発明組成物である。
(1)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びTGF−β阻害剤、
(2)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びPDE4阻害剤、
(3)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びGRアゴニスト、
(4)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(5)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(6)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤。
また、本発明として、体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造するための組成物であって、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤を含むことを特徴とする、体細胞から心筋細胞を製造するための組成物も挙げることができる。以下、かかる組成物も含めて本発明組成物という。
本発明組成物においては、少なくとも上記いずれかの組み合わせを含んでいればよく、必要に応じて、任意にさらに他の阻害剤や誘導剤等を含むことができる。
上記阻害剤や誘導剤等は、それぞれにおいて、1種を用いても2種以上を併用してもよい。
具体的な上記阻害剤等においては、2種類以上の阻害作用等を有するものもあり得るが、その場合、一つで複数の阻害剤等を含んでいるとみなすことができる。
上記した阻害剤や誘導剤等の具体例や好ましい例などは、前記と同義である。
<ヒト線維芽細胞から心筋細胞への直接誘導>
(1)ヒト線維芽細胞
材料としたヒト線維芽細胞はDSファーマバイオメディカル株式会社から購入した。38才のヒト皮膚に由来する線維芽細胞である。
ヒト線維芽細胞を、ゼラチン(Cat#:190−15805,和光純薬工業社製)でコーティングされた35mmディッシュに8×104個ずつ播種し、10%ウシ胎児血清(Fetal bovine serum;FBS)、100U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシンを添加したDMEM high glucose培地(Gibco社製)で、37℃、5%CO2条件下で2日間培養した(80−90%以上がコンフルエント)。なおDMEMは、ダルベッコ改変イーグル培地(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)を示す。
2μM PD0325901(Cat#:162−25293,Wako)
15μM フォルスコリン(Cat#:063−02193,Wako)
5μM レプソックス(Cat#:1894−25,BioVision)
3μM ロリプラム(Cat#:180−01411,Wako)
1μM デキサメタゾン(Cat#:047−18863,Wako)
1μM レチノイン酸(Cat#:186−01114,Wako)
2μM TTNPB(Cat#:16144,Cayman Chemical)
10μM PS48(Cat#:164−25011,Wako)
上記(2)に従って培養した結果を表1・表2、及び図1〜6に示す。表中、「+」は培地中に当該化合物が存在することを示し、「−」は培地中に当該化合物が存在しないことを示す。
本実験において、低分子化合物を添加して培養後5日目程度から心筋様の細胞が出現した。これは、顕微鏡下において自発的かつ周期的に収縮する細胞塊を観察することによって評価した。細胞の写真(図1〜6)は、当該低分子化合物を添加して培養7日後と10日後(図1〜3)、7日後と13日後(図4、5)、又は13日後と17日後(図6)に、それぞれ撮影したものである。
M:実施例A
F:比較例2
MF:実施例7
MF+Rep:実施例8
MF+Roli:実施例9
MF+Dex:実施例10
MF+Rep+Roli+Dex:実施例12
(1)心筋細胞に係る遺伝子発現
PD0325901(MEK阻害剤)、フォルスコリン(cAMP誘導剤)、レプソックス(TGF−β)、及びロリプラム(PDE4阻害剤)の4種類(4C)、又はこれらにデキサメタゾン(GRアゴニスト)を加えた5種類の化合物の組み合わせについて、前記実施例と同様に添加して細胞培養を行い、培養18日後の細胞からtotal RNAを抽出し、リアルタイムPCRによって心筋前駆細胞特異的遺伝子Hand2及びTbx1、並びに心筋細胞特異的遺伝子Tnnt2、Nppa、及びNkx2.5の発現量を定量した。その結果を図8に示す。図中のTbpとは内部標準となる遺伝子を示し、このmRNA量による相対値により各遺伝子のmRNA量が評価している。図中、「No compound」は当該化合物を一つも添加しなかった場合の結果であることを、「4C+Dex」は上記5種類の化合物を全て添加した場合の結果であることを示す。
上記(1)において、4Cにデキサメタゾン(GRアゴニスト)を加えた化合物群を添加培養した細胞について、培養後18日目に細胞を4%パラホルムアルデヒドで固定した後、免疫染色を行った。染色には抗Sarcomeric Alpha Actinin抗体(ab9465、Abcam社製;200倍希釈で使用)を使用した。その結果を図9に示す。図中、赤がAlpha Actininの染色結果、青がDAPI(4’,6−ジアミジノ−2−フェニルインドール)による核染色を示す。なお、図9はグレー表示であるため、赤色と青色等は表示されないが、実際のオリジナル写真では、赤色と青色等が表示されている。
下記低分子化合物の組み合わせについて、前記実施例と同様に添加して細胞培養を行った。当該化合物群を添加して培養後13日目と19日目の細胞の状態を図10に示す。
図10中、「5C」は、下記6種類の低分子化合物の中、Trametinib以外の5種類の化合物の組み合わせを表し、左側2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。「5C−M」は、5Cの化合物群からPD0325901(MEK阻害剤)を除いた化合物群を表し、中2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。「5C−M+Trametinib」は、5Cの化合物群からPD0325901(MEK阻害剤)を除き、別のMEK阻害剤であるTrametinibを加えた化合物群を表し、右側2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。
2μM PD0325901(Cat#:162−25293,Wako)
15μM フォルスコリン(Cat#:063−02193,Wako)
5μM レプソックス(Cat#:1894−25,BioVision)
3μM ロリプラム(Cat#:180−01411,Wako)
1μM デキサメタゾン(Cat#:047−18863,Wako)
3μM Trametinib(Cat#:HY-10999,MedChem Express)
下記低分子化合物の組み合わせについて、前記実施例と同様に添加して培養を行った。当該低分子化合物を添加して培養後7日目と12日目の細胞の状態を図11に示す。
図11中、「5C」は、下記6種類の低分子化合物の中、GDC−0994以外の5種類の化合物の組み合わせを表し、左端2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。「5C−M」は、5Cの化合物群からPD0325901(MEK阻害剤)を除いた化合物群を表し、左側から2つ目の2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。「5C−M+GDC−0994」は、5Cの化合物群からPD0325901(MEK阻害剤)を除き、代わりにGDC−0994(ERK阻害剤)を加えた化合物群を表し、右側から2つ目の2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。「5C+GDC−0994」は、5Cの化合物群にGDC−0994(ERK阻害剤)を加えた化合物群を表し、右端2写真は、その化合物群の添加培養結果を示す。
2μM PD0325901(Cat#:162−25293,Wako)
15μM フォルスコリン(Cat#:063−02193,Wako)
5μM レプソックス(Cat#:1894−25,BioVision)
3μM ロリプラム(Cat#:180−01411,Wako)
1μM デキサメタゾン(Cat#:047−18863,Wako)
3μM GDC−0994(Cat#:21107,Cayman Chemical)
Claims (27)
- 体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造する方法であって、MEK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程を含むことを特徴とする、心筋細胞の製造方法。
- 前記工程が、さらにcAMP誘導剤の存在下で体細胞を培養する工程である、請求項1に記載の心筋細胞の製造方法。
- 前記工程が、さらにTGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニストからなる群から選択される少なくとも1種の存在下で体細胞を培養する工程である、請求項1又は2に記載の心筋細胞の製造方法。
- 前記工程が、さらにERK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程である、請求項3に記載の心筋細胞の製造方法。
- 前記工程が、次の(1)〜(6)のいずれかの組み合わせ存在下で体細胞を培養する工程である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
(1)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びTGF−β阻害剤、
(2)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びPDE4阻害剤、
(3)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びGRアゴニスト、
(4)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(5)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(6)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤。 - 前記工程が、さらにRARアゴニスト、RXRアゴニスト、及びPDK1活性化剤からなる群から選択される少なくとも1種の存在下で体細胞を培養する工程である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
- MEK阻害剤がPD0325901である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
- cAMP誘導剤がフォルスコリンである、請求項2〜7のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
- TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、又はGRアゴニストがデキサメタゾンである、請求項3〜8のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
- ERK阻害剤がGDC−0994である、請求項4〜9のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
- 体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造する方法であって、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程を含むことを特徴とする、心筋細胞の製造方法。
- cAMP誘導剤がフォルスコリン、TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、GRアゴニストがデキサメタゾン、又はERK阻害剤がGDC−0994である、請求項11に記載の心筋細胞の製造方法。
- 前記体細胞が線維芽細胞である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の心筋細胞の製造方法から製造される、心筋細胞。
- 体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造するための組成物であって、MEK阻害剤を含むことを特徴とする、体細胞から心筋細胞を製造するための組成物。
- さらにcAMP誘導剤を含む、請求項15に記載の組成物。
- さらにTGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤からなる群から選択される少なくとも1種を含む、請求項15又は16に記載の組成物。
- 前記工程が、さらにERK阻害剤の存在下で体細胞を培養する工程である、請求項17に記載の心筋細胞の製造方法。
- 次の(1)〜(6)のいずれかの組み合わせを含む、請求項15〜18のいずれか一項に記載の組成物。
(1)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びTGF−β阻害剤、
(2)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びPDE4阻害剤、
(3)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、及びGRアゴニスト、
(4)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(5)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、及びGRアゴニスト、
(6)MEK阻害剤、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤。 - さらにRARアゴニスト、RXRアゴニスト、及びPDK1活性化剤からなる群から選択される少なくとも1種を含む、請求項15〜19のいずれか一項に記載の組成物。
- MEK阻害剤がPD0325901である、請求項15〜20のいずれか一項に記載の組成物。
- cAMP誘導剤がフォルスコリンである、請求項16〜21のいずれか一項に記載の組成物。
- TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、GRアゴニストがデキサメタゾンである、請求項17〜22のいずれか一項に記載の組成物。
- ERK阻害剤がGDC−0994である、請求項18〜23のいずれか一項に記載の組成物。
- 体細胞から直接分化誘導することにより心筋細胞を製造するための組成物であって、cAMP誘導剤、TGF−β阻害剤、PDE4阻害剤、GRアゴニスト、及びERK阻害剤を含むことを特徴とする、体細胞から心筋細胞を製造するための組成物。
- cAMP誘導剤がフォルスコリン、TGF−β阻害剤がレプソックス、PDE4阻害剤がロリプラム、GRアゴニストがデキサメタゾン、又はERK阻害剤がGDC−0994である、請求項25に記載の組成物。
- 前記体細胞が線維芽細胞である、請求項15〜26のいずれか一項に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018013301 | 2018-01-30 | ||
JP2018013301 | 2018-01-30 | ||
PCT/JP2019/002193 WO2019151097A1 (ja) | 2018-01-30 | 2019-01-24 | 心筋細胞の製造方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2019151097A1 true JPWO2019151097A1 (ja) | 2021-01-14 |
Family
ID=67479671
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019569055A Pending JPWO2019151097A1 (ja) | 2018-01-30 | 2019-01-24 | 心筋細胞の製造方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11834679B2 (ja) |
EP (1) | EP3747993A4 (ja) |
JP (1) | JPWO2019151097A1 (ja) |
CN (1) | CN111684059A (ja) |
WO (1) | WO2019151097A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112608883B (zh) * | 2020-12-25 | 2023-02-24 | 武汉睿健医药科技有限公司 | 一种光感受器神经元细胞的化学诱导方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013524837A (ja) * | 2010-04-28 | 2013-06-20 | ザ ジェイ. デヴィッド グラッドストーン インスティテューツ | 心筋細胞を発生させるための方法 |
JP2014525268A (ja) * | 2011-08-30 | 2014-09-29 | ザ ジェイ. デヴィッド グラッドストーン インスティテューツ | 心筋細胞を生成するための方法 |
JP2015213441A (ja) * | 2014-05-08 | 2015-12-03 | 学校法人慶應義塾 | 心筋様細胞の作製方法及びそれに用いる培地 |
WO2016056438A1 (ja) * | 2014-10-06 | 2016-04-14 | 学校法人 慶應義塾 | 心筋様細胞の作製方法及びそれに用いる心筋様細胞の作製用組成物 |
US20160186141A1 (en) * | 2013-09-11 | 2016-06-30 | The J. David Gladstone Institutes, a testamentary trust established under the Will of J. David Glad | Small molecule cellular reprogramming to generate cardiomyocytes |
JP2017104091A (ja) * | 2015-11-27 | 2017-06-15 | タカラバイオ株式会社 | 間葉系細胞の製造方法 |
WO2017159463A1 (ja) * | 2016-03-15 | 2017-09-21 | 学校法人慶應義塾 | 線維芽細胞からの心臓前駆細胞と心筋細胞の直接製造方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4990446B2 (ja) | 2001-05-28 | 2012-08-01 | 電気化学工業株式会社 | 関節症治療用注入剤 |
JP6819112B2 (ja) | 2016-07-21 | 2021-01-27 | 株式会社富士通ゼネラル | 空気調和装置 |
KR102595903B1 (ko) | 2016-08-26 | 2023-10-30 | 삼성전자주식회사 | 모뎀 칩, 이를 포함하는 어플리케이션 프로세서 및 모뎀 칩의 동작방법 |
CN109996867A (zh) * | 2016-09-30 | 2019-07-09 | 京都府公立大学法人 | 制备体细胞的方法、体细胞和组合物 |
-
2019
- 2019-01-24 CN CN201980010936.3A patent/CN111684059A/zh active Pending
- 2019-01-24 WO PCT/JP2019/002193 patent/WO2019151097A1/ja unknown
- 2019-01-24 US US16/960,441 patent/US11834679B2/en active Active
- 2019-01-24 JP JP2019569055A patent/JPWO2019151097A1/ja active Pending
- 2019-01-24 EP EP19746735.0A patent/EP3747993A4/en active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013524837A (ja) * | 2010-04-28 | 2013-06-20 | ザ ジェイ. デヴィッド グラッドストーン インスティテューツ | 心筋細胞を発生させるための方法 |
JP2014525268A (ja) * | 2011-08-30 | 2014-09-29 | ザ ジェイ. デヴィッド グラッドストーン インスティテューツ | 心筋細胞を生成するための方法 |
US20160186141A1 (en) * | 2013-09-11 | 2016-06-30 | The J. David Gladstone Institutes, a testamentary trust established under the Will of J. David Glad | Small molecule cellular reprogramming to generate cardiomyocytes |
JP2015213441A (ja) * | 2014-05-08 | 2015-12-03 | 学校法人慶應義塾 | 心筋様細胞の作製方法及びそれに用いる培地 |
WO2016056438A1 (ja) * | 2014-10-06 | 2016-04-14 | 学校法人 慶應義塾 | 心筋様細胞の作製方法及びそれに用いる心筋様細胞の作製用組成物 |
JP2017104091A (ja) * | 2015-11-27 | 2017-06-15 | タカラバイオ株式会社 | 間葉系細胞の製造方法 |
WO2017159463A1 (ja) * | 2016-03-15 | 2017-09-21 | 学校法人慶應義塾 | 線維芽細胞からの心臓前駆細胞と心筋細胞の直接製造方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CELL RES., vol. 25, no. 9, JPN6019012853, 2015, pages 1013 - 1024, ISSN: 0005015502 * |
SCIENCE, 2016, VOL.352, ISSUE 6290, P.1216-1220, JPN6019012852, ISSN: 0004840144 * |
京府医大誌、2018.01.25, VOL.127, NO.1, P.1-12, JPN6019012855, ISSN: 0004840146 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20200354680A1 (en) | 2020-11-12 |
CN111684059A (zh) | 2020-09-18 |
WO2019151097A1 (ja) | 2019-08-08 |
EP3747993A4 (en) | 2021-11-24 |
EP3747993A1 (en) | 2020-12-09 |
US11834679B2 (en) | 2023-12-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7236114B2 (ja) | 体細胞を製造する方法、体細胞、及び組成物 | |
Raynaud et al. | Comprehensive characterization of mesenchymal stem cells from human placenta and fetal membrane and their response to osteoactivin stimulation | |
Lim et al. | Trichostatin A enhances differentiation of human induced pluripotent stem cells to cardiogenic cells for cardiac tissue engineering | |
CN105358679A (zh) | 干细胞培养基和增加细胞存活的方法 | |
US10874698B2 (en) | Therapy using cardiac stem cells and mesenchymal stem cells | |
KR20160131096A (ko) | 내피 집락 형성 세포유사 세포를 생성하는 방법 | |
JP2017104091A (ja) | 間葉系細胞の製造方法 | |
JP6968347B2 (ja) | 肝細胞の製造方法 | |
US9034820B2 (en) | Method and composition for modulating erythropoiesis | |
US20210246421A1 (en) | Production method for neuron-like cells | |
Cancedda et al. | Transit Amplifying Cells (TACs): a still not fully understood cell population | |
JPWO2019151097A1 (ja) | 心筋細胞の製造方法 | |
WO2021106697A1 (ja) | 褐色脂肪細胞の製造方法 | |
JP7369347B2 (ja) | インスリン産生細胞の製造方法 | |
EP1619242A1 (en) | Control of stem cell differentiation induction and differentiation potency | |
JP7248986B2 (ja) | インスリン産生細胞の製造方法 | |
JP7369346B2 (ja) | インスリン産生細胞の製造方法、及び組成物 | |
Lang et al. | The ERK signaling pathway is involved in cardiotrophin-1-induced neural differentiation of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells in vitro |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210820 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210820 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220802 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220906 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20221122 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230220 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20230220 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230228 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20230301 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20230324 |
|
C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20230329 |