JPWO2018216726A1 - グリセロールキナーゼ活性を強化したpha産生微生物とそれを用いたphaの製造方法 - Google Patents
グリセロールキナーゼ活性を強化したpha産生微生物とそれを用いたphaの製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2018216726A1 JPWO2018216726A1 JP2019520282A JP2019520282A JPWO2018216726A1 JP WO2018216726 A1 JPWO2018216726 A1 JP WO2018216726A1 JP 2019520282 A JP2019520282 A JP 2019520282A JP 2019520282 A JP2019520282 A JP 2019520282A JP WO2018216726 A1 JPWO2018216726 A1 JP WO2018216726A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pha
- gene
- glycerol kinase
- strain
- gene encoding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 title claims abstract description 94
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 title claims abstract description 94
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 77
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 68
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 178
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 108010010718 poly(3-hydroxyalkanoic acid) synthase Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 claims abstract description 18
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 18
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 18
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 11
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 11
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 10
- 241001528539 Cupriavidus necator Species 0.000 claims description 9
- 241001528480 Cupriavidus Species 0.000 claims description 7
- 241000607516 Aeromonas caviae Species 0.000 claims description 6
- HPMGFDVTYHWBAG-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyhexanoic acid Chemical compound CCCC(O)CC(O)=O HPMGFDVTYHWBAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 description 55
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 54
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 27
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 26
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 26
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 16
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 8
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 8
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 8
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 8
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 8
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 6
- 101150056064 glpK gene Proteins 0.000 description 6
- 101150040073 glpK2 gene Proteins 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 101150051591 phaZ1 gene Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 5
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 5
- 241000481518 Ralstonia eutropha H16 Species 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 101150104605 phaZ2 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- REKYPYSUBKSCAT-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypentanoic acid Chemical compound CCC(O)CC(O)=O REKYPYSUBKSCAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 4
- 239000003346 palm kernel oil Substances 0.000 description 4
- 235000019865 palm kernel oil Nutrition 0.000 description 4
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 3
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 3
- 101150053431 phaZ gene Proteins 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NDPLAKGOSZHTPH-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyoctanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)CC(O)=O NDPLAKGOSZHTPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALRHLSYJTWAHJZ-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropionic acid Chemical compound OCCC(O)=O ALRHLSYJTWAHJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940006015 4-hydroxybutyric acid Drugs 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone phosphate Chemical compound OCC(=O)COP(O)(O)=O GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 101150071897 glpF gene Proteins 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N kanamycin A sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N 0.000 description 2
- 229960002064 kanamycin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RNFJDJUURJAICM-UHFFFAOYSA-N 2,2,4,4,6,6-hexaphenoxy-1,3,5-triaza-2$l^{5},4$l^{5},6$l^{5}-triphosphacyclohexa-1,3,5-triene Chemical compound N=1P(OC=2C=CC=CC=2)(OC=2C=CC=CC=2)=NP(OC=2C=CC=CC=2)(OC=2C=CC=CC=2)=NP=1(OC=1C=CC=CC=1)OC1=CC=CC=C1 RNFJDJUURJAICM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150033839 4 gene Proteins 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588881 Chromobacterium Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000989055 Cronobacter Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000589601 Francisella Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000000587 Glycerolphosphate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010041921 Glycerolphosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221089 Jatropha Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 241001293415 Mannheimia Species 0.000 description 1
- 101100425947 Mus musculus Tnfrsf13b gene Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 241000498271 Necator Species 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 241000531155 Pectobacterium Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000190932 Rhodopseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000186339 Thermoanaerobacter Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 241000204366 Xylella Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000002216 antistatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000000071 blow moulding Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000003063 flame retardant Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- ZOCHHNOQQHDWHG-UHFFFAOYSA-N hexan-3-ol Chemical compound CCCC(O)CC ZOCHHNOQQHDWHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 1
- 239000011256 inorganic filler Substances 0.000 description 1
- 229910003475 inorganic filler Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H magnesium phosphate Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[Mg+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000004137 magnesium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960002261 magnesium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000157 magnesium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010994 magnesium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002667 nucleating agent Substances 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 101150048611 phaC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150032462 phaC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150028013 phaP gene Proteins 0.000 description 1
- 108010033574 phasin Proteins 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 1
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011342 resin composition Substances 0.000 description 1
- 101150025220 sacB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004416 thermosoftening plastic Substances 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 1
- 229910021654 trace metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
- C12P7/625—Polyesters of hydroxy carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
- C12Y207/0103—Glycerol kinase (2.7.1.30)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
[1]Aeromonas属由来のPHA合成酵素をコードする遺伝子を有し、PHA分解酵素遺伝子の少なくとも一部が置換、欠失、挿入及び/又は付加されることにより該遺伝子がコードするPHA分解酵素の活性が低下又は失われており、さらに、グリセロールキナーゼ活性が強化されている、PHA産生微生物。
[2]PHA合成酵素をコードする遺伝子がAeromonas caviae由来である[1]に記載のPHA産生微生物。
[3]グリセロールキナーゼ活性の強化が、外来のグリセロールキナーゼをコードする遺伝子を導入することによって行われている、[1]又は[2]に記載のPHA産生微生物。
[4]外来のグリセロールキナーゼをコードする遺伝子が、Escherichia属由来である、[3]に記載のPHA産生微生物。
[5]外来のグリセロールキナーゼをコードする遺伝子が、Escherichia coli由来である、[4]に記載のPHA産生微生物。
[6]グリセロールキナーゼ活性の強化が、PHA産生微生物の宿主が本来有する内生のグリセロールキナーゼ活性の強化によって行われている、[1]又は[2]に記載のPHA産生微生物。
[7]細胞内へのグリセロール取り込み活性は強化されていない、[1]〜[6]のいずれか1項に記載のPHA産生微生物。
[8]PHA産生微生物が、Cupriavidus属に属する微生物を宿主とする形質転換体である、[1]〜[7]のいずれか1項に記載のPHA産生微生物。
[9]前記Cupriavidus属に属する微生物が、Cupriavidus necatorである、[8]に記載のPHA産生微生物。
[10][1]〜[9]のいずれか1項に記載のPHA産生微生物を培養する工程を含む、PHAの製造方法。
[11]前記培養において、グリセロール及び/又はグリセロール骨格含有化合物を含む炭素源が使用される、[10]に記載のPHAの製造方法。
[12]前記PHAが、3−ヒドロキシ酪酸に由来する構成単位を含む共重合PHAである、[10]又は[11]に記載のPHAの製造方法。
[13]前記共重合PHAが、少なくとも3−ヒドロキシ酪酸と3−ヒドロキシヘキサン酸に由来する構成単位を含む、[12]に記載のPHAの製造方法。
グリセロールキナーゼ活性強化用プラスミドpCUP2-PlacN17-glpKEcを作製した。
グリセロールキナーゼ活性を強化した菌株の作製を目的とし、KNK-005 ΔphaZ1,2,6株(国際公開第2015/146195号参照)を親株として、製造例1記載のプラスミドを導入した菌株を作製した。KNK-005 ΔphaZ1,2,6株は、染色体上のphaZ1遺伝子およびphaZ6遺伝子を全長欠失し、phaZ2遺伝子の16番目のコドンから終止コドンまでを欠失し、染色体上に配列番号3に記載のPHA合成酵素をコードする遺伝子を有する菌株である。
グリセロールキナーゼ活性を強化した菌株の作製を目的とし、KNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6株(国際公開第2015/146195号参照)を親株とし、製造例2と同様の方法で、製造例1記載のプラスミドを導入した菌株を作製した。KNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCReΔZ2,6株は、染色体上のphaZ1遺伝子およびphaZ6遺伝子を全長欠失し、phaZ2遺伝子の16番目のコドンから終止コドンまでを欠失し、phaJ4b遺伝子の直上流にREPプロモーターおよびphaC1SD(REP-SD)配列からなる発現調節配列が挿入され、phaZ1遺伝子を欠失した領域にlacプロモーター、phaC1SD(REP-SD)配列、およびphaCRe構造遺伝子配列が挿入され、染色体上に配列番号3に記載のPHA合成酵素をコードする遺伝子を有する菌株である。得られた菌株をKNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株と命名した。
KNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6株のphaZ6遺伝子を欠失した領域に、グリセロールキナーゼ活性強化用の遺伝子発現カセットを導入することを目的とし、DNA挿入用プラスミドを作製した。
KNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6株のphaZ6遺伝子を欠失した領域に、グリセロールキナーゼ活性強化用の遺伝子発現カセットを導入することを目的とし、DNA挿入用プラスミドを作製した。
染色体上のh16_A2507遺伝子の上流にh16_A2507の発現を強化するための発現調節配列を挿入することを目的とし、発現調節配列挿入用プラスミドを作製した。
KNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6株のphaZ6遺伝子を欠失した領域に、グリセロールキナーゼ活性強化用の遺伝子発現カセットを導入することを目的とし、DNA挿入用プラスミドを作製した。
製造例2で得られたKNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株を以下の条件で培養、精製し、PHA生産量を算出した。また、得られたPHAの重量平均分子量を測定した。PHA生産量は11.8 g/L、重量平均分子量は217×104であった。得られた結果を表1に示した。
菌株は以下のように培養した。
培養終了後、遠心分離によって菌体を回収し、エタノールで洗浄後真空乾燥し、乾燥菌体を取得した。
PHAの重量平均分子量をゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー法により分析した。精製したPHA 10 mgを10 mlのクロロホルムに溶解し、0.2 mmのフィルターで濾過して測定用サンプルを調製し、そのうち0.05 mlを用いて分析した。測定システムはSCL-10A(島津製作所社製)、カラムはShodex GPC K-806L(昭和電工社製)を2本直列に接続し、40℃で測定した。移動層は1.0 ml/分のクロロホルムとし、RI検出器(RID-10A、島津製作所社製)を用いた。標準品としては、同様に処理したポリスチレン(昭和電工社製、重量平均分子量:711万、192万、66.8万、19.7万、3.14万、0.295万)を用い、検量線によりPHAの重量平均分子量を算出した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えてKNK-005株(米国特許第7384766号明細書参照)を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。KNK-005株は、染色体上に配列番号3に記載のPHA合成酵素をコードする遺伝子を有する菌株である。PHA生産量は10.4 g/L、重量平均分子量は91×104であった。結果を表1に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えてKNK-005 ΔphaZ1,2,6株を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。PHA生産量は10.7 g/L、重量平均分子量は136×104であった。結果を表1に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えて製造例3で得られたKNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。PHA生産量は11.2 g/L、重量平均分子量は160×104であった。結果を表2に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えて製造例4で得られたKNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔphaZ6::Plac-glpKEc ΔZ2株を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。PHA生産量は12.2 g/L、重量平均分子量は186×104であった。結果を表2に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えて製造例5で得られたKNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔphaZ6::PlacN17-glpKEc ΔZ2株を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。PHA生産量は11.9 g/L、重量平均分子量は195×104であった。結果を表2に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えて製造例6で得られたKNK-005 REP-phaJ4b PlacUV5-A2507 ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6株を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。PHA生産量は7.6 g/L、重量平均分子量は186×104であった。結果を表2に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えて製造例7で得られたKNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔphaZ6::PlacUV5-A2507 ΔZ2株を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。PHA生産量は10.8 g/L、重量平均分子量は177×104であった。結果を表2に示した。
KNK-005 ΔphaZ1,2,6 / pCUP2-PlacN17-glpKEc株に代えてKNK-005 REP-phaJ4b ΔphaZ1::Plac-phaCRe ΔZ2,6株(国際公開第2015/146195号参照)を用いて、実施例1と同様の方法でPHAを生産し、得られたPHAの生産量、及び、重量平均分子量を測定した。ただし、種培地にカナマイシンは添加しなかった。PHA生産量は10.0 g/L、重量平均分子量は117×104であった。結果を表2に示した。
Claims (13)
- Aeromonas属由来のPHA合成酵素をコードする遺伝子を有し、PHA分解酵素遺伝子の少なくとも一部が置換、欠失、挿入及び/又は付加されることにより該遺伝子がコードするPHA分解酵素の活性が低下又は失われており、さらに、グリセロールキナーゼ活性が強化されている、PHA産生微生物。
- PHA合成酵素をコードする遺伝子がAeromonas caviae由来である、請求項1に記載のPHA産生微生物。
- グリセロールキナーゼ活性の強化が、外来のグリセロールキナーゼをコードする遺伝子を導入することによって行われている、請求項1又は2に記載のPHA産生微生物。
- 外来のグリセロールキナーゼをコードする遺伝子が、Escherichia属由来である、請求項3に記載のPHA産生微生物。
- 外来のグリセロールキナーゼをコードする遺伝子が、Escherichia coli由来である、請求項4に記載のPHA産生微生物。
- グリセロールキナーゼ活性の強化が、PHA産生微生物の宿主が本来有する内生のグリセロールキナーゼ活性の強化によって行われている、請求項1又は2に記載のPHA産生微生物。
- 細胞内へのグリセロール取り込み活性は強化されていない、請求項1〜6のいずれか1項に記載のPHA産生微生物。
- PHA産生微生物が、Cupriavidus属に属する微生物を宿主とする形質転換体である、請求項1〜7のいずれか1項に記載のPHA産生微生物。
- 前記Cupriavidus属に属する微生物が、Cupriavidus necatorである、請求項8に記載のPHA産生微生物。
- 請求項1〜9のいずれか1項に記載のPHA産生微生物を培養する工程を含む、PHAの製造方法。
- 前記培養において、グリセロール及び/又はグリセロール骨格含有化合物を含む炭素源が使用される、請求項10に記載のPHAの製造方法。
- 前記PHAが、3−ヒドロキシ酪酸に由来する構成単位を含む共重合PHAである、請求項10又は11に記載のPHAの製造方法。
- 前記共重合PHAが、少なくとも3−ヒドロキシ酪酸と3−ヒドロキシヘキサン酸に由来する構成単位を含む、請求項12に記載のPHAの製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017103343 | 2017-05-25 | ||
JP2017103343 | 2017-05-25 | ||
PCT/JP2018/019815 WO2018216726A1 (ja) | 2017-05-25 | 2018-05-23 | グリセロールキナーゼ活性を強化したpha産生微生物とそれを用いたphaの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018216726A1 true JPWO2018216726A1 (ja) | 2020-03-26 |
JP7256740B2 JP7256740B2 (ja) | 2023-04-12 |
Family
ID=64395542
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019520282A Active JP7256740B2 (ja) | 2017-05-25 | 2018-05-23 | グリセロールキナーゼ活性を強化したpha産生微生物とそれを用いたphaの製造方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11268113B2 (ja) |
EP (1) | EP3633033A4 (ja) |
JP (1) | JP7256740B2 (ja) |
WO (1) | WO2018216726A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3633033A4 (en) * | 2017-05-25 | 2021-03-31 | Kaneka Corporation | MICRO-ORGANISM PRODUCING PHA IN WHICH THE ACTIVITY OF GLYCEROL KINASE IS ENHANCED AND PROCESS FOR THE PRODUCTION OF PHA USING THIS MICRO-ORGANISM |
AU2019349142B2 (en) * | 2018-09-27 | 2024-09-19 | Sumitomo Forestry Co., Ltd. | Technique for controlling molecular weight of PHA copolymer produced by halobacterium |
JP7425783B2 (ja) * | 2019-02-28 | 2024-01-31 | 株式会社カネカ | 形質転換微生物、及びポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
WO2020174988A1 (ja) * | 2019-02-28 | 2020-09-03 | 株式会社カネカ | 形質転換微生物、及びポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
CN117701488B (zh) * | 2024-02-05 | 2024-05-10 | 北京蓝晶微生物科技有限公司 | 一种生产pha的重组菌以及提高pha产量的方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120135480A1 (en) * | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Nakas James P | Methods for producing polyhydroxyalkanoates from biodiesel-glycerol |
WO2015146195A1 (ja) * | 2014-03-28 | 2015-10-01 | 株式会社カネカ | Pha合成酵素をコードする遺伝子を複数有する微生物、およびそれを用いたphaの製造方法 |
WO2016021604A1 (ja) * | 2014-08-04 | 2016-02-11 | 国立大学法人東京工業大学 | 糖質原料からの共重合ポリヒドロキシアルカン酸の製造法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004065253A2 (en) | 2003-01-23 | 2004-08-05 | Southpac Trust International, Inc. | Floral wrapper with decorative portion and method |
JP2007259708A (ja) | 2006-03-27 | 2007-10-11 | Kaneka Corp | 新規生分解性ポリエステルの製造方法 |
US7384766B2 (en) | 2006-07-26 | 2008-06-10 | Kaneka Corporation | Gene-substituted microorganisms, and production method of polyesters using the same |
EP3633033A4 (en) * | 2017-05-25 | 2021-03-31 | Kaneka Corporation | MICRO-ORGANISM PRODUCING PHA IN WHICH THE ACTIVITY OF GLYCEROL KINASE IS ENHANCED AND PROCESS FOR THE PRODUCTION OF PHA USING THIS MICRO-ORGANISM |
-
2018
- 2018-05-23 EP EP18806141.0A patent/EP3633033A4/en active Pending
- 2018-05-23 US US16/616,276 patent/US11268113B2/en active Active
- 2018-05-23 WO PCT/JP2018/019815 patent/WO2018216726A1/ja unknown
- 2018-05-23 JP JP2019520282A patent/JP7256740B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120135480A1 (en) * | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Nakas James P | Methods for producing polyhydroxyalkanoates from biodiesel-glycerol |
WO2015146195A1 (ja) * | 2014-03-28 | 2015-10-01 | 株式会社カネカ | Pha合成酵素をコードする遺伝子を複数有する微生物、およびそれを用いたphaの製造方法 |
WO2016021604A1 (ja) * | 2014-08-04 | 2016-02-11 | 国立大学法人東京工業大学 | 糖質原料からの共重合ポリヒドロキシアルカン酸の製造法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
APPL. MICROBIOL. BIOTECHNOL., vol. 98, JPN6018032466, 2014, pages 7559 - 7568, ISSN: 0004710882 * |
JOURNAL OF BACTERIOLOGY, vol. 193, no. 18, JPN6018032467, 2011, pages 5017, ISSN: 0004710883 * |
POLYMER DEGRADATION AND STABILITY, vol. 98, JPN6018032469, 2013, pages 1586 - 1590, ISSN: 0004710884 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7256740B2 (ja) | 2023-04-12 |
US20200087687A1 (en) | 2020-03-19 |
US11268113B2 (en) | 2022-03-08 |
EP3633033A1 (en) | 2020-04-08 |
WO2018216726A1 (ja) | 2018-11-29 |
EP3633033A4 (en) | 2021-03-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7001596B2 (ja) | 3hh単位含有共重合phaを生産する形質転換体、及び当該phaの製造方法 | |
US11453896B2 (en) | Transformed microorganism for producing PHA copolymer comprising 3HH monomer unit at high composition rate and method for producing PHA using same | |
JP7256740B2 (ja) | グリセロールキナーゼ活性を強化したpha産生微生物とそれを用いたphaの製造方法 | |
JP6663221B2 (ja) | R体特異的エノイル−CoAヒドラターゼ遺伝子の発現が調節された微生物及びそれを用いたポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法 | |
JP7382315B2 (ja) | 変異型ポリヒドロキシアルカン酸合成酵素、その遺伝子および形質転換体、並びに、ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 | |
JP7360329B2 (ja) | 変異型ポリヒドロキシアルカン酸合成酵素、その遺伝子および形質転換体、並びに、ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 | |
EP3358002B1 (en) | Microorganism having pha synthase-coding genes and method for producing pha using same | |
US20100136637A1 (en) | Recombinant microorganism having a producing ability of polylactate or its copolymers and method for preparing polyactate or its copolymers using the same | |
JP6313708B2 (ja) | 高分子量pha生産微生物とそれを用いた高分子量phaの製造方法 | |
JP6853787B2 (ja) | スクロース資化性を有するpha生産微生物、及び該微生物を用いたphaの製造方法 | |
EP1862536A1 (en) | Microorganism capable of accumulating ultra high molecular weight polyester | |
WO2024162411A1 (ja) | 形質転換微生物、及び共重合ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 | |
WO2024058182A1 (ja) | 形質転換微生物、及び、共重合ポリエステルの製造方法 | |
JP2008212114A (ja) | 共重合ポリエステルの製造法 | |
WO2024166829A1 (ja) | 形質転換微生物、及びポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 | |
WO2024166830A1 (ja) | 形質転換微生物、及びポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220222 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220421 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220620 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221101 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221227 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230307 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230331 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7256740 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |