JPWO2015166689A1 - エビアレルゲンに結合する核酸分子およびその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)配列番号1、2および3の少なくともいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなり、前記エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
(d)前記(a)のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに、相補的な塩基配列からなり、エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
本発明のエビアレルゲン結合核酸分子は、前述のように、エビアレルゲンに対する解離定数が、50nM以下の核酸分子であることを特徴とする。
(a)配列番号1、2および3の少なくともいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなり、前記エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
(d)前記(a)のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに、相補的な塩基配列からなり、エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
本発明のエビアレルゲン分析用センサは、前述のように、本発明のエビアレルゲン結合核酸分子を含むことを特徴とする。本発明のセンサは、前記本発明のエビアレルゲン結合核酸分子を含んでいればよく、その他の構成は、何ら制限されない。
本発明の分析方法は、前述のように、エビアレルゲンの分析方法であって、試料と前記本発明のエビアレルゲン結合核酸分子とを接触させ、前記試料中のエビアレルゲンと前記核酸分子とを結合させることにより、前記試料中のエビアレルゲンを検出する工程を含むことを特徴とする。本発明の分析方法は、前記本発明の核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件等は、特に制限されない。また、本発明の分析方法は、前記本発明の核酸分子として、前記本発明のエビアレルゲン分析用センサを使用してもよい。
本発明の検出キットは、前記本発明のエビアレルゲン結合核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の検出キットは、前記本発明の核酸分子を含んでいればよく、その他の構成は何ら制限されない。本発明の検出キットを使用すれば、前述のように、例えば、前記エビアレルゲンの検出等を行うことができる。
各アプタマーについて、エビアレルゲンに対する結合能および動態パラメータを確認した。
下記ポリヌクレオチドを合成し、実施例のアプタマーとした。
トロポミオシン(Met e 1)にヒスチジンタグ(Hisタグ)付加した状態で、発現させ、これを試料として、以下の試験に使用した。前記トロポミオシンをコードする遺伝子の全長塩基配列および前記タンパク質の全長アミノ酸配列は、UniProtアクセッション番号Q25456に登録された通りとし、前記Hisタグは、10個のHisが連続したペプチドとして、前記トロポミオシンのN末端に付加した。
結合能の解析には、ProteON XPR36(BioRad社)を、その使用説明書にしたがって使用した。
Claims (11)
- エビアレルゲンに対する解離定数が、50nM以下の核酸分子であることを特徴とするエビアレルゲン結合核酸分子。
- 前記エビアレルゲンが、トロポミオシンまたはそのサブユニットである、請求項1記載のエビアレルゲン結合核酸分子。
- 前記エビアレルゲンが、未変性アレルゲンまたは加熱変性アレルゲンである、請求項1または2記載のエビアレルゲン結合核酸分子。
- 下記(a)〜(d)からなる群から選択された少なくとも一つのポリヌクレオチドを含む、請求項1から3のいずれか一項に記載のエビアレルゲン結合核酸分子。
(a)配列番号1、2および3の少なくともいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなり、前記エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド
(d)前記(a)のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに、相補的な塩基配列からなり、エビアレルゲンに結合するポリヌクレオチド - 前記ポリヌクレオチドが、DNAである、請求項4記載のエビアレルゲン結合核酸分子。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載のエビアレルゲン結合核酸分子を含むことを特徴とする、エビアレルゲン分析用センサ。
- さらに、Gカルテット構造を形成する核酸分子を含む、請求項6記載のエビアレルゲン分析用センサ。
- 前記Gカルテット構造を形成する核酸分子が、DNAzymeまたはRNAzymeである、請求項7記載のエビアレルゲン分析用センサ。
- さらに、ポルフェリンを含む、請求項6から8のいずれか一項に記載のエビアレルゲン分析用センサ。
- 試料と請求項1から5のいずれか一項に記載のエビアレルゲン結合核酸分子とを接触させ、前記試料中のエビアレルゲンと前記核酸分子とを結合させることにより、前記試料中のエビアレルゲンを検出する工程を含むことを特徴とする、エビアレルゲンの分析方法。
- 前記試料が、食品、食品原料および食品添加物からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項10記載のエビアレルゲンの分析方法。
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Class et al. | Patent application title: Method For Affinity Purification Inventors: Maxim V. Berezovski (Ottawa, CA) Mohamed Wehbe (Ottawa, CA) Mahmoud Aziz Mahmoud Labib (Ottawa, CA) Darija Muharemagic (Gatineau, CA) Anna S. Zamay (Krasnoyarsk, RU) Shahrokh Ghobadloo (Ottawa, CA) Assignees: UNIVERSITY OF OTTAWA |
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