JPWO2015152198A1 - 表面プラズモン共鳴蛍光分析方法、表面プラズモン共鳴蛍光分析装置および位置合わせ方法 - Google Patents
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Abstract
Description
図1は、本発明の実施の形態1に係る表面プラズモン共鳴蛍光分析装置(SPFS装置)100の構成を示す模式図である。図1に示されるように、SPFS装置100は、励起光照射ユニット110、応答光検出ユニット130(蛍光検出部)、送液ユニット140、搬送ユニット150および制御部160を有する。SPFS装置100は、搬送ユニット150のチップホルダー154に分析チップ10を装着した状態で使用される。そこで、分析チップ10について先に説明し、その後にSPFS装置100の各構成要素について説明する。
分析チップ10は、入射面21、成膜面22および出射面23を有するプリズム20と、成膜面22に形成された金属膜30と、成膜面22または金属膜30上に配置された流路蓋40とを有する。通常、分析チップ10は、分析のたびに交換される。
次に、SPFS装置100の各構成要素について説明する。前述のとおり、SPFS装置100は、励起光照射ユニット110、応答光検出ユニット130、送液ユニット140、搬送ユニット150および制御部160を有する。
実施の形態2に係るSPFS装置200は、励起光αの反射光δを検出する反射光検出ユニット270を有する点において、実施の形態1に係るSPFS装置100と異なる。そこで、実施の形態1に係るSPFS装置100と同じ構成要素については同一の符番を付し、説明を省略する。
図7は、実施の形態2に係るSPFS装置200の構成を示す図である。図7に示されるように、実施の形態2に係るSPFS装置200は、励起光照射ユニット110、応答光検出ユニット130、送液ユニット140、搬送ユニット150、制御部160に加え、反射光検出ユニット270を有する。
20 プリズム
21 入射面
22 成膜面
23 出射面
30 金属膜
40 流路蓋
41 流路
100、200 SPFS装置
110 励起光照射ユニット
111 光源ユニット
112 第1角度調整機構
113 光源制御部
130 応答光検出ユニット
131 受光ユニット
132 位置切り替え機構
133 センサー制御部
134 第1レンズ
135 光学フィルター
136 第2レンズ
137 受光センサー
140 送液ユニット
141 薬液チップ
142 シリンジポンプ
143 送液ポンプ駆動機構
144 シリンジ
145 プランジャー
150 搬送ユニット
152 搬送ステージ
154 チップホルダー
160 制御部
270 反射光検出ユニット
271 反射光検出センサー
272 第2角度調整機構
α 励起光
β 蛍光
γ プラズモン散乱光
δ 反射光
Claims (11)
- 被検出物質を標識する蛍光物質が、表面プラズモン共鳴に基づく局在場光により励起されて発した蛍光を検出して、前記被検出物質の存在またはその量を検出する表面プラズモン共鳴蛍光分析方法であって、
入射面、出射面および成膜面を有するプリズムと、前記成膜面上に配置され、その表面に前記被検出物質を捕捉する捕捉体が固定化された捕捉領域および前記捕捉体が固定化されていない非捕捉領域を含む金属膜と、を有する分析チップを、搬送ステージに固定されたチップホルダーに設置する工程と、
前記チップホルダーに設置された前記分析チップにおける前記捕捉領域および前記非捕捉領域に対応した前記金属膜の裏面に前記入射面を介して励起光を照射するとともに、前記捕捉領域および前記非捕捉領域から放出されたプラズモン散乱光を検出し、または前記金属膜の裏面で反射して前記出射面から出射された励起光の反射光を検出し、検出されたプラズモン散乱光または反射光に基づいて、前記捕捉領域の端部の位置情報を得る工程と、
前記位置情報に基づいて前記搬送ステージにより前記チップホルダーを移動させて、前記捕捉領域を検出位置に移動させる工程と、
前記検出位置に配置された前記捕捉領域に対応した前記金属膜の裏面に励起光を照射するとともに、前記捕捉体に捕捉されている被検出物質を標識する蛍光物質から放出された蛍光を検出する工程と、
を含む、表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。 - 前記捕捉領域の端部の位置情報を得る工程では、前記金属膜の裏面に励起光を照射するとともに、前記捕捉領域および前記非捕捉領域から放出されたプラズモン散乱光を検出し、検出されたプラズモン散乱光の、励起光の入射角度に対する依存特性に基づいて、前記捕捉領域の端部の位置情報を得る、請求項1に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記捕捉領域の端部の位置情報を得る工程では、所定の入射角度で前記金属膜の裏面上を励起光の照射スポットで走査するとともに、前記捕捉領域および前記非捕捉領域上から放出されたプラズモン散乱光を検出し、検出されたプラズモン散乱光の光量の変動に基づいて、前記捕捉領域の端部の位置情報を得る、請求項2に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記励起光の入射角度は、検出されたプラズモン散乱光の光量が最大となる前記捕捉領域における増強角である、請求項3に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記励起光の入射角度は、検出されたプラズモン散乱光の光量が最大となる前記非捕捉領域における増強角である、請求項3に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記捕捉領域の端部の位置情報を得る工程では、前記金属膜の裏面に励起光を照射するとともに、前記出射面から出射された励起光の反射光を検出し、検出された反射光の、励起光の入射角度に対する依存特性に基づいて、前記捕捉領域の端部の位置情報を得る、請求項1に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記捕捉領域の端部の位置情報を得る工程では、所定の入射角度で前記金属膜の裏面上を励起光の照射スポットで走査するとともに、前記出射面から出射された励起光の反射光を検出し、検出された反射光の光量の変動に基づいて、前記捕捉領域の端部の位置情報を得る、請求項6に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記励起光の入射角度は、検出された反射光の光量が最小となる前記捕捉領域における共鳴角である、請求項7に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 前記励起光の入射角度は、検出された反射光の光量が最小となる前記非捕捉領域における共鳴角である、請求項7に記載の表面プラズモン共鳴蛍光分析方法。
- 被検出物質を標識する蛍光物質が、表面プラズモン共鳴に基づく局在場光により励起されて発した蛍光を検出して、前記被検出物質の存在またはその量を検出する表面プラズモン共鳴蛍光分析装置であって、
入射面、出射面および成膜面を有するプリズムと、前記成膜面上に配置され、その表面に前記被検出物質を捕捉する捕捉体が固定化された捕捉領域および前記捕捉体が固定化されていない非捕捉領域を含む金属膜と、を含む分析チップを着脱可能に保持するチップホルダーと、
前記チップホルダーを移動させる搬送ステージと、
前記チップホルダーに保持された前記分析チップの前記捕捉領域および前記非捕捉領域に対応した前記金属膜の裏面に前記入射面を介して励起光を照射する励起光照射部と、
前記捕捉領域および前記非捕捉領域から放出されたプラズモン散乱光を検出するプラズモン散乱光検出部、または前記金属膜の裏面で反射され前記出射面から出射された励起光の反射光を検出する反射光検出部と、
前記プラズモン散乱光検出部または前記反射光検出部の検出結果に基づいて、前記チップホルダーに保持された前記分析チップの前記捕捉領域の端部の位置を特定するとともに、前記搬送ステージにより前記チップホルダーを移動させて、前記分析チップの前記捕捉領域を検出位置に移動させる位置調整部と、
前記捕捉体に捕捉されている被検出物質を標識する蛍光物質から放出された蛍光を検出する蛍光検出部と、
を有する、表面プラズモン共鳴蛍光分析装置。 - 表面プラズモン共鳴を利用して、検体に含まれる被検出物質の存在またはその量を検出するときに、前記被検出物質が捕捉された捕捉領域を、前記被検出物質を検出する検出位置に位置合わせする位置合わせ方法であって、
入射面、出射面および成膜面を有するプリズムの前記成膜面上に配置され、その表面に前記被検出物質を捕捉する捕捉体が固定化された捕捉領域および前記捕捉体が固定化されていない非捕捉領域を含む金属膜の裏面であって、前記捕捉領域および前記非捕捉領域に対応した領域に対して前記入射面を介して励起光を照射するとともに、前記捕捉領域および前記非捕捉領域から放出されたプラズモン散乱光を検出し、または前記捕捉領域および前記非捕捉領域に対応した前記金属膜の裏面で反射して前記出射面から出射された励起光の反射光を検出し、検出された前記プラズモン散乱光または前記反射光に基づいて、前記捕捉領域の端部の位置情報を得る工程と、
前記位置情報に基づいて、前記捕捉領域を検出位置に移動させる工程と、
を含む、位置合わせ方法。
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