JPWO2015119115A1 - 赤血球沈降防止剤 - Google Patents
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Abstract
Description
赤血球沈降速度の測定は垂直に静置した血沈管内に血液を収容し、一定時間(30分〜2時間)あたりの赤血球の沈降を測定する(日本人の基準値は1〜15mm/1時間)。また、健常な血液検体においても赤血球の沈降は、血液容器が傾斜した場合に容器の壁又は底を赤血球が転がることで、血沈が促進されることが知られている。
(1)赤血球膜のイオン輸送阻害剤を含む、赤血球沈降防止剤。
(2)前記イオン輸送阻害剤がバンド3固定化剤である、(1)に記載の赤血球沈降防止剤。
(3)バンド3固定化剤が4,4'-diisothiocyanatostilbene-2,2'-disulfonic acid(DIDS)またはDisodium 4,4'-Dinitrostilbene-2,2'-disulfonate(DNDS)である、(2)に記載の赤血球沈降防止剤。
(4)終濃度0.15mg/ml以上となるようにDIDSが血液に添加される、(3)に記載の赤血球沈降防止剤。
(5)終濃度0.02mg/ml以上となるようにDNDSが血液に添加される、(3)に記載の赤血球沈降防止剤。
(6)(1)〜(5)のいずれかに記載の赤血球沈降防止剤を用いて処理された血液を使用して血液性状を検査することを特徴とする、血液性状の検査方法。
(7)血栓形成能または血小板機能の測定である、(6)に記載の血液性状の検査方法。
ここで、バンド3(AE1とも呼ばれる)は、赤血球の細胞膜(赤血球膜)に多く存在する膜輸送タンパク質で、血液に溶け込んだ二酸化炭素を検知して、赤血球内にあるヘモグロビンからの酸素放出を促すことが知られている(Leg Med (Tokyo). 2005 Jul;7(4):270-3.Molecular aspects of Rh antigens.)。この働きはイオン交換輸送機構によるもので、代謝が活発な組織に重点的に酸素を放出して、酸素を過不足なく供給することを可能にしている。
DNDSは、終濃度0.02 mg/ml以上となるように血液に添加されることが好ましく、終濃度0.10mg/ml以上となるように血液に添加されることがより好ましく、終濃度0.20mg/ml以上となるように血液に添加されることがさらに好ましい。
濃度の上限は、血液を用いた検査を阻害しない濃度であれば特に制限はないが、例えば、100.00mg/ml以下である。
血液は、抗凝固処理されている全血が好ましい。
DNDSは水溶性で有り、血液に加えられる試薬としては、DNDS水溶液は適しており、例えばクエン酸、ヒルジン、トリプシンインヒビターなどの抗凝固剤やカルシウムなどの試薬とDNDSの混合水溶液を作成する事が可能である。
DIDS(東京化成)を生理食塩水にそれぞれ、0.15mg/ml, 1.5mg/mlの濃度で添加した溶液を、クエン酸ナトリウムで抗凝固処理した血液に対し、5%の終濃度で添加して混和した後、直径6mmのガラス管(図1)および血栓形成測定用の血液容器(図2)に加え、静置した。
その結果、30分後、0.15mg/mlの溶液では、やや血沈が抑制され、1.5mg/mlの場合には、ガラス管や底が傾斜している容器(血栓形成測定用の血液容器)であっても血沈は完全に抑制された。
その結果、30分後、0.02mg/ml および0.1mg/mlの溶液は、コントロールに比べ血沈が抑制されていた。また、0.2mg/mlの溶液では、ほとんど血沈は抑制された。
その結果、30分後、0.5mg/mlおよび1.0mg/mlの溶液は、コントロールに比べ血沈が抑制されていた。
特許文献1の図12に記載されたような装置を用いた。
マイクロチップ上に形成された幅300μm、深さ80μm、長さ1.5cmのキャピラリーに、タイプIコラーゲン(新田ゼラチン株式会社製)及び組織トロンボプラスチン(シスメックス株式会社製)をコートした。そして、キャピラリーに、血液容器に入れられたCTI(コーントリプシンインヒビター)(終濃度50μg/ml)と塩化カルシウム(終濃度12mM)とDIDS(終濃度0又は1.5mg/ml)またはDNDS(終濃度0.3mg/ml)を添加したクエン酸血液を、30分間、10μl/minの流速でかん流し、フィブリンと血小板よりなる血栓形成によって引き起こされる圧力変化を連続的に測定した。
Claims (9)
- 赤血球膜のイオン輸送阻害剤を含む、赤血球沈降防止剤。
- 前記イオン輸送阻害剤がバンド3固定化剤である、請求項1に記載の赤血球沈降防止剤。
- バンド3固定化剤がdisodium 4,4'-dinitrostilbene-2,2'-disulfonate(DNDS)である、請求項2に記載の赤血球沈降防止剤。
- DNDSが終濃度 0.02mg/ml以上となるように血液に添加される、請求項3に記載の赤血球沈降防止剤。
- バンド3固定化剤が4,4'-diisothiocyanatostilbene-2,2'-disulfonic acid(DIDS)である、請求項2に記載の赤血球沈降防止剤。
- DIDSが終濃度0.15mg/ml以上となるように血液に添加される、請求項5に記載の赤血球沈降防止剤。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の赤血球沈降防止剤を用いて処理された血液を使用して血液性状を検査することを特徴とする、血液性状の検査方法。
- 血栓形成能または血小板機能の測定である、請求項7に記載の血液性状の検査方法。
- 赤血球膜のイオン輸送阻害剤を単離された血液に添加する工程を含む、赤血球沈降防止方法。
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