JPWO2012063894A1 - マイクロrnaのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物 - Google Patents
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Abstract
がん細胞の生育阻害が可能な、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド含む組成物の提供。一態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。
Description
本発明は、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物に関する。
マイクロRNA(microRNA / miRNA)は、18〜25塩基からなる小分子RNAであり、標的mRNAに結合することで、そのタンパク質への翻訳を阻害する。現在までに約1,100種類のヒトmiRNAがデータベース(例えば、miRBase (http://www.miRbase.org/))に登録されており、これらmiRNAの発現或いは機能異常が種々の疾患に関与していることが明らかにされている(非特許文献1参照)。特に、がんに関しては、miRNAマイクロアレイを用いた網羅的発現解析によって、がん組織又はがん細胞で発現亢進又は発現抑制されているmiRNAが多数同定されている(特許文献1)。
がんで発現亢進するmiRNAとしては、miR-21、miR-155、miR-17-5p、miR-19等が知られており、中でもmiR-19は細胞がん化に必要十分であり、その標的の一つががん抑制遺伝子PTENであることが示された。このようにがん抑制遺伝子を標的としてがん遺伝子的な性質を有するmiRNAは、OncomiRと呼ばれている。
また、多くのmiRNAはがんで発現低下しており、そのようなmiRNAとしては、let-7、miR-15a、miR-34a、miR-143、miR-145等が報告されている。なかでも、let-7は、肺がんにおいて発現低下と予後とが相関することが明らかにされており、その標的にがん遺伝子Rasが含まれていることが知られている。がん遺伝子を標的としてがん抑制遺伝子様の機能を発揮するmiRNAは、Tumor suppressor miRと呼ばれる。
一方、OncomiRなどのような疾病に関与するmiRNAを標的分子として阻害しようとする試みも行われている。例えば、標的miRNAと相補的な配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを細胞に導入することにより、細胞内で標的miRNAと二本鎖を形成させて標的miRNAの機能を阻害することが提案されている(特許文献2)。
Schickel R, et al. Oncogene 27: 5959-5974, 2008.
がん治療の可能性をより高めるため、さらなるOncomiRの同定と、該OncomiRを阻害できる分子の開発が期待されている。そこで、本発明は、がん細胞の生育阻害が可能な、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド含む組成物を提供する。
本発明は、一態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。
本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。
本発明によれば、がん細胞の生育阻害が可能となる。したがって、本発明によれば、がんの治療や予防、再発予防などに寄与できる。
本発明は、以下の態様、すなわち、
[1]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物;
[2]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物;
[3]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される、非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物;
[4]前記がんが、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、[1]から[3]のいずれかに記載の組成物;
[5]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物;
[6]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物;
[7]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される、非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物;
[8]ヒトがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法;
[9]ヒトのがんの治療又は予防方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防方法;
[10]非ヒトのがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される、非ヒトのがん細胞の生育を抑制する方法;
[11]前記がんが、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、[8]から[10]のいずれかに記載の方法;
[12]ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法;
[13]ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法;
[14]非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される、非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法;
に関する。
[1]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物;
[2]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物;
[3]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される、非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物;
[4]前記がんが、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、[1]から[3]のいずれかに記載の組成物;
[5]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物;
[6]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物;
[7]マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される、非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物;
[8]ヒトがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法;
[9]ヒトのがんの治療又は予防方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防方法;
[10]非ヒトのがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される、非ヒトのがん細胞の生育を抑制する方法;
[11]前記がんが、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、[8]から[10]のいずれかに記載の方法;
[12]ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法;
[13]ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法;
[14]非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される、非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法;
に関する。
本明細書において、「マイクロRNA(microRNA/miRNA)」とは、低分子non-codingRNAの一種をいい、当該技術分野において使用される通常の意味を示す。本明細書においてIDを用いて言及するマイクロRNAは、データベース(例えば、miRBase (http://www.miRbase.org/))を参照できる。本明細書においてマイクロRNAは、特に言及がない場合、成熟型の18〜25塩基からなるマイクロRNAをいう。
本明細書において「マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的とするマイクロRNAと相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをいい、好ましい形態は、一本鎖のオリゴヌクレオチドである。本発明の一実施形態として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的とする成熟型マイクロRNAの塩基配列の全部又は一部と相補的な塩基配列を含むオリゴヌクレオチドであり、より好ましくは、標的とする成熟型マイクロRNAの塩基配列の全部又は一部と相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドである。
本発明における「マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド」の長さは、一実施形態において、例えば、8〜25ヌクレオチド、10〜24ヌクレオチド、10〜22ヌクレオチド、12〜22ヌクレオチド、10〜20ヌクレオチド、12〜20ヌクレオチド、10〜19ヌクレオチド、12〜19ヌクレオチド、10〜18ヌクレオチド、12〜18ヌクレオチド、10〜17ヌクレオチド、12〜17ヌクレオチド、10〜16ヌクレオチド、12〜16ヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの配列の長さを短くすることで非特異的なマイクロRNA阻害が一層抑制できることが考えられる。
本明細書において、「相補的(又は、相補性)」とは、2つのヌクレオチド配列が互いに正しく対合する能力を持つことをいう。例えば、あるオリゴヌクレオチドが、ある位置において、標的とするマイクロRNAにおける対応する位置のヌクレオチドと水素結合することができれば、該オリゴヌクレオチドと該マイクロRNAとはその位置で互いに相補性であると考えられる。該オリゴヌクレオチド中の十分な数のヌクレオチドが標的マイクロRNA中の対応するヌクレオチドと水素結合を形成することができ、安定な複合体を形成することができるときは、該オリゴヌクレオチドと該マイクロRNAとは互いに相補性であると考えられる。オリゴヌクレオチドの配列がin vitro又はin vivoで安定であるには、その標的マイクロRNAと100%相補性である必要はない。すなわち、用語「相補性」及び「特異的にハイブリダイズすることができる」は、オリゴヌクレオチドが標的分子と十分に強く特異的に結合し、非標的マイクロRNAの機能に影響を与えずに標的の正常機能と望ましい干渉をもたらすことを意味する。本発明のその他の実施形態において、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、好ましくは、標的とするマイクロRNAと100%相補的な塩基配列を含む、或いは、からなるオリゴヌクレオチドである。
本明細書において、ヌクレオチドの対合は、塩基間の水素結合をいい、DNAでいえば、AとTとの結合形態及びGとCとの結合形態をいい、RNAでいえば、AとUとの結合形態及びGとCとの結合形態を含む。マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的とするマイクロRNAのヌクレオチドと対合可能な範囲で上記A,T(U),G,及びC以外の類似体であってもよい。
本明細書において「オリゴヌクレオチド」は、DNA及びRNAに加え、公知の核酸アナログ、並びにこれらが混合されて構成されるオリゴヌクレオチドをいう。前記オリゴヌクレオチドは、公知の修飾が施された修飾オリゴヌクレオチドの形態を含みうる。核酸アナログとしては、LNA(Locked Nucleic Acid)、PNA(Peptide Nucleic Acid)等の公知の核酸アナログを含む。本明細書におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的マイクロRNAへの特異性の向上、及び細胞増殖抑制の向上の点から、核酸アナログを含むことが好ましく、LNAを含むことがより好ましく、核酸アナログの含有率が50%を超えることがより好ましい。LNAを含むマイクロRNAアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、特表2009‐532392(WO2007/000169)を参照できる。
本明細書において「マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド」における塩基は、標的マイクロRNAの機能を阻害できる範囲であれば、DNA及びRNAの塩基以外の非DNA/RNA塩基であってもよく、DNA及びRNAがフッ素などで置換された形態であってもよい。また、本明細書における「マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド」において、ヌクレオシド間の結合は、リン酸エステル結合の以外の結合であってもよく、安定性の点からは、硫黄(S)含有結合(すなわち、ホスホロチオエート型オリゴヌクレオチドであること)が好ましい。なお、本明細書における「マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチド」は、公知のもの、及び、市販のものを利用できる。
本明細書において「細胞の生育の抑制」は、細胞の増殖の阻害及び細胞の死滅を含み、in vivo、in vitro、ex vivoにおける細胞の生育の抑制を含む。本明細書において「細胞」は、ヒト細胞及び非ヒト細胞を含む。非ヒト細胞としては、マイクロRNAの機構を備える生物が挙げられる。また、本明細書において、「非ヒト」は、ヒトを除く霊長類、ヒトを除く哺乳類、ヒトを除く脊椎動物を含む。
[第1の組成物]
本発明は、一態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第1の組成物」ともいう。)に関する。前記マイクロRNA(成熟型)の配列は、それぞれ、下記表1の配列番号1〜4に記載される。
本発明は、一態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第1の組成物」ともいう。)に関する。前記マイクロRNA(成熟型)の配列は、それぞれ、下記表1の配列番号1〜4に記載される。
本発明の第1の組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一例として、上記表1の配列番号5〜8のいずれかの塩基配列又はその部分配列からなるオリゴヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第1の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
なお、本明細書において、hsa-miR-133a又はhsa-miR-133bのマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一実施形態としては、hsa-miR-133a及びhsa-miR-133bの双方を阻害できるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
本発明の第1の組成物が生育を抑制する対象のヒトがん細胞のがんは、特に制限されず、例えば、頭頸部がん、悪性黒色腫、基底細胞がん、卵巣がん、乳がん、非小細胞肺がん、腎細胞がん、膀胱がん、再発性表在性膀胱がん、胃がん、前立腺がん、胆道がん、膵臓がん、肺がん、子宮頸がん、子宮頸部形成異常、喉頭乳頭腫症、結腸がん、結腸直腸がん、及びカルチノイド腫瘍を含む。本態様の組成物が生育を抑制する対象のヒトがん細胞のがんは、好ましくは、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんを含む。
本明細書において、「頭頸部がん」とは、脳と眼を除いた首から上にできるがんをいい、一般的に、口腔がん、鼻副鼻腔がん、口唇がん、咽頭がん、喉頭がん、頸部腫瘍、耳のがんを含む。また、本明細書において、口腔がんとは、一般に、歯肉、舌、頬部、口蓋、口底、唾液腺等の口腔を構成する部位の粘膜により発生するがんをいう。
本発明の第1の組成物は、対象のヒトがん細胞と接触させて当該細胞の生育を抑制するために適した試薬、薬剤、媒体を含んでもよい。或いは、本発明の第1の組成物は、凍結乾燥された形態であってもよい。
[第1の医薬組成物]
上述した本発明の第1の組成物は、上述したがんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第1の医薬組成物」ともいう。)に関する。本明細書において、がんの予防は、がんの再発の予防を含む。
上述した本発明の第1の組成物は、上述したがんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第1の医薬組成物」ともいう。)に関する。本明細書において、がんの予防は、がんの再発の予防を含む。
本発明の第1の医薬組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一例として、上記表1の配列番号5〜8のいずれかの塩基配列又はその部分配列からなるオリゴヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第1の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明の第1の医薬組成物には、さらに、薬学的に許容されるキャリアを含んでもよい。前記薬学的キャリアとしては、特に制限されないが、例えば、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的の部位、組織、細胞等に侵入する効率を高めることができるキャリア、例えば、アテロコラーゲン、リポソーム、カチオンリポソーム等が挙げられる。本態様の医薬組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。
[第2の組成物]
本発明は、さらなる態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第2の組成物」ともいう。)に関する。例えば、イヌのがん細胞の生育を抑制する場合には、cfa-miR-133a/b/c(MIMIAT0009834, 0009835, 0009833)、cfa-miR-346(MIMIAT0004949)、及びcfa-miR-361(MIMIAT0006751)からなる群から選択されるマイクロRNAのアンチセンスヌクレオチドを使用することができ、他の生物についても同様に対応するマイクロRNA配列についてのアンチセンスヌクレオチドを使用できる。なお、本発明の第2の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明は、さらなる態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第2の組成物」ともいう。)に関する。例えば、イヌのがん細胞の生育を抑制する場合には、cfa-miR-133a/b/c(MIMIAT0009834, 0009835, 0009833)、cfa-miR-346(MIMIAT0004949)、及びcfa-miR-361(MIMIAT0006751)からなる群から選択されるマイクロRNAのアンチセンスヌクレオチドを使用することができ、他の生物についても同様に対応するマイクロRNA配列についてのアンチセンスヌクレオチドを使用できる。なお、本発明の第2の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明の第2の組成物が生育を抑制する対象の非ヒトがん細胞のがんは、特に制限されず、例えば、頭頸部がん、悪性黒色腫、基底細胞がん、卵巣がん、乳がん、非小細胞肺がん、腎細胞がん、膀胱がん、再発性表在性膀胱がん、胃がん、前立腺がん、胆道がん、膵臓がん、肺がん、子宮頸がん、子宮頸部形成異常、喉頭乳頭腫症、結腸がん、結腸直腸がん、及びカルチノイド腫瘍を含む。本態様の組成物が生育を抑制する対象の非ヒトがん細胞のがんは、好ましくは、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんを含む。本発明の第2の組成物は、対象の非ヒトがん細胞と接触させて当該細胞の生育を抑制するために適した試薬、薬剤、媒体を含んでもよい。或いは、本発明の第2の組成物は、凍結乾燥された形態であってもよい。
[第2の医薬組成物]
上述した本発明の第2の組成物は、上述したがんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む非ヒトの医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、非ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第2の医薬組成物」ともいう。)に関する。本発明の第2の医薬組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第2の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
上述した本発明の第2の組成物は、上述したがんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む非ヒトの医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、非ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第2の医薬組成物」ともいう。)に関する。本発明の第2の医薬組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第2の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明の第2の医薬組成物には、さらに、薬学的に許容されるキャリアを含んでもよい。前記薬学的キャリアとしては、特に制限されないが、例えば、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的の部位、組織、細胞等に侵入する効率を高めることができるキャリア、例えば、アテロコラーゲン、リポソーム、カチオンリポソーム等が挙げられる。本態様の医薬組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。
[第3の組成物]
本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第3の組成物」ともいう。)に関する。なお、本発明の第3の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第3の組成物」ともいう。)に関する。なお、本発明の第3の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明の第3の組成物は、一実施形態において、生育を抑制する対象のがんがヒト口腔扁平上皮がんであり、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、下記表2の配列番号1〜4及び9〜18であることが好ましい。また、本実施形態の第3の組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一例として、下記表2の配列番号5〜8及び19〜28のいずれかの塩基配列又はその部分配列からなるオリゴヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。
本発明の第3の組成物は、その他の実施形態において、生育を抑制する対象のがんがヒト唾液腺がんであり、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、下記表3の配列番号1、2及び4であることが好ましい。また、本実施形態の第3の組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一例として、下記表3の配列番号5、6及び8のいずれかの塩基配列又はその部分配列からなるオリゴヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。
本発明の第3の組成物は、対象のヒトがん細胞と接触させて当該細胞の生育を抑制するために適した試薬、薬剤、媒体を含んでもよい。或いは、本発明の第1の組成物は、凍結乾燥された形態であってもよい。
[第3の医薬組成物]
上述した本発明の第3の組成物は、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第3の医薬組成物」ともいう。)に関する。なお、本発明の第3の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
上述した本発明の第3の組成物は、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第3の医薬組成物」ともいう。)に関する。なお、本発明の第3の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明の第3の医薬組成物は、一実施形態において、治療又は予防対象のがんがヒト口腔扁平上皮がんであり、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、上記表2の配列番号1〜4及び9〜18であることが好ましい。また、本発明の第3の組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一例として、上記表2の配列番号5〜8及び19〜28のいずれかの塩基配列又はその部分配列からなるオリゴヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。
本発明の第3の医薬組成物は、その他の実施形態において、治療又は予防対象のがんがヒト唾液腺がんであり、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、上記表3の配列番号1、2及び4であることが好ましい。また、本実施形態の第3の組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの一例として、上記表3の配列番号5、6及び8のいずれかの塩基配列又はその部分配列からなるオリゴヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。
本発明の第3の医薬組成物には、さらに、薬学的に許容されるキャリアを含んでもよい。前記薬学的キャリアとしては、特に制限されないが、例えば、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的の部位、組織、細胞等に侵入する効率を高めることができるキャリア、例えば、アテロコラーゲン、リポソーム、カチオンリポソーム等が挙げられる。本態様の医薬組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。
[第4の組成物]
本発明は、さらなる態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第4の組成物」ともいう。)に関する。なお、本発明の第4の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。含まれうるオリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第4の組成物は、凍結乾燥された形態であってもよい。
本発明は、さらなる態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物(以下、「本発明の第4の組成物」ともいう。)に関する。なお、本発明の第4の組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。含まれうるオリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第4の組成物は、凍結乾燥された形態であってもよい。
本発明の第4の組成物は、一実施形態において、生育を抑制する対象のがんが非ヒト口腔扁平上皮がんであり、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、対象となる非ヒト生物における対応するマイクロRNA配列についてのアンチセンスヌクレオチドを使用できる。
本発明の第4の組成物は、その他の実施形態において、生育を抑制する対象のがんが非ヒト唾液腺がんであり、miR-133a、miR-133b、及びmiR-361-3pからなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、対象となる非ヒト生物における対応するマイクロRNA配列についてのアンチセンスヌクレオチドを使用できる。
[第4の医薬組成物]
上述した本発明の第4の組成物は、非ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む非ヒトの医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択されるヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第4の医薬組成物」ともいう。)に関する。本発明の第4の医薬組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第4の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
上述した本発明の第4の組成物は、非ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物として使用できる。したがって、本発明は、その他の態様として、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む非ヒトの医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択されるヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物(以下、「本発明の第4の医薬組成物」ともいう。)に関する。本発明の第4の医薬組成物に含まれうるマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さ及び核酸アナログについては、上述のとおりである。なお、本発明の第4の医薬組成物は、1種類又は複数種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含みうる。
本発明の第4の医薬組成物は、一実施形態において、治療又は予防の対象のがんが非ヒト口腔扁平上皮がんであり、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、対象となる非ヒト生物における対応するマイクロRNA配列についてのアンチセンスヌクレオチドを使用できる。
本発明の第4の医薬組成物は、その他の実施形態において、治療又は予防の対象のがんが非ヒト唾液腺がんであり、miR-133a、miR-133b、及びmiR-361-3pからなる群から選択されるマイクロRNAを標的とするアンチセンスヌクレオチドを含む。標的とするマイクロRNA(成熟型)の配列は、対象となる非ヒト生物における対応するマイクロRNA配列についてのアンチセンスヌクレオチドを使用できる。
本発明の第4の医薬組成物には、さらに、薬学的に許容されるキャリアを含んでもよい。前記薬学的キャリアとしては、特に制限されないが、例えば、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的の部位、組織、細胞等に侵入する効率を高めることができるキャリア、例えば、アテロコラーゲン、リポソーム、カチオンリポソーム等が挙げられる。本態様の医薬組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。
[ヒトがん細胞の増殖抑制方法]
本発明における第1及び第3の組成物によれば、対象とするヒトのがん細胞の生育を抑制できる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの組成物を対象のヒトがん細胞と接触させることを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する。接触方法は特に制限されず、前記組成物中のマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象とするがん細胞に導入できる方法が採用できる。マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドをがん細胞に導入する実施形態の一つとしてリポフェクション法が挙げられる。また、リポフェクション法及びその他の導入方法時における前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞への投与量としては、例えば、10〜25nMが挙げられる。
本発明における第1及び第3の組成物によれば、対象とするヒトのがん細胞の生育を抑制できる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの組成物を対象のヒトがん細胞と接触させることを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する。接触方法は特に制限されず、前記組成物中のマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象とするがん細胞に導入できる方法が採用できる。マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドをがん細胞に導入する実施形態の一つとしてリポフェクション法が挙げられる。また、リポフェクション法及びその他の導入方法時における前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞への投与量としては、例えば、10〜25nMが挙げられる。
[ヒトのがんの治療及び又は予防方法]
本発明における第1及び第3の医薬組成物によれば、対象とするヒトのがんの治療や予防が可能となる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの医薬組成物を対象に投与することを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する投与する組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。投与は、治療する病状の重症度と反応性、及び治療経過に依存する。最適な投薬スケジュールは、対象の体内への薬剤の蓄積量の測定値から計算することができる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的有効性によって異なりうる。一般的には、in vitro及びin vivo動物モデルで有効であることが分かったEC50に基づいて推定することができる。一般的には、用量は0.01μg〜1g/kg体重、好ましくは0.01〜100mg/kg体重であり、より好ましくは1〜10mg/kg体重である。投与回数としては、1日、1週間、1月間又は1年間に1回又はそれ以上、又は2〜10年間に1回投与するか、あるいは数時間〜数カ月間連続注入により投与することができる。投与の反復回数は、測定した体液又は組織中の薬剤濃度と滞留時間に基づいて推定することができる。治療の成功後、病状の再発を防ぐために対象は維持療法を受けることが望ましい場合もある。
本発明における第1及び第3の医薬組成物によれば、対象とするヒトのがんの治療や予防が可能となる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの医薬組成物を対象に投与することを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する投与する組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。投与は、治療する病状の重症度と反応性、及び治療経過に依存する。最適な投薬スケジュールは、対象の体内への薬剤の蓄積量の測定値から計算することができる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的有効性によって異なりうる。一般的には、in vitro及びin vivo動物モデルで有効であることが分かったEC50に基づいて推定することができる。一般的には、用量は0.01μg〜1g/kg体重、好ましくは0.01〜100mg/kg体重であり、より好ましくは1〜10mg/kg体重である。投与回数としては、1日、1週間、1月間又は1年間に1回又はそれ以上、又は2〜10年間に1回投与するか、あるいは数時間〜数カ月間連続注入により投与することができる。投与の反復回数は、測定した体液又は組織中の薬剤濃度と滞留時間に基づいて推定することができる。治療の成功後、病状の再発を防ぐために対象は維持療法を受けることが望ましい場合もある。
[非ヒトがん細胞の増殖抑制方法]
本発明における第2及び第4の組成物によれば、対象とする非ヒトのがん細胞の生育を抑制できる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの組成物を対象の非ヒトがん細胞と接触させることを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する。接触方法は特に制限されず、前記組成物中のマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象とするがん細胞に導入できる方法が採用できる。
本発明における第2及び第4の組成物によれば、対象とする非ヒトのがん細胞の生育を抑制できる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの組成物を対象の非ヒトがん細胞と接触させることを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する。接触方法は特に制限されず、前記組成物中のマイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象とするがん細胞に導入できる方法が採用できる。
[非ヒトのがんの治療及び又は予防方法]
本発明における第2及び第4の医薬組成物によれば、対象とする非ヒトのがんの治療や予防が可能となる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの医薬組成物を非ヒト対象に投与することを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する投与する組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。投与は、治療する病状の重症度と反応性、及び治療経過に依存する。最適な投薬スケジュールは、対象の体内への薬剤の蓄積量の測定値から計算することができる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的有効性によって異なりうる。一般的には、in vitro及びin vivo動物モデルで有効であることが分かったEC50に基づいて推定することができる。一般的には、用量は0.01μg〜1g/kg体重、好ましくは0.01〜100mg/kg体重であり、より好ましくは1〜10mg/kg体重である。投与回数としては、1日、1週間、1月間又は1年間に1回又はそれ以上、又は2〜10年間に1回投与するか、あるいは数時間〜数カ月間連続注入により投与することができる。投与の反復回数は、測定した体液又は組織中の薬剤濃度と滞留時間に基づいて推定することができる。治療の成功後、病状の再発を防ぐために対象は維持療法を受けることが望ましい場合もある。
本発明における第2及び第4の医薬組成物によれば、対象とする非ヒトのがんの治療や予防が可能となる。したがって、本発明は、その他の態様として、これらの医薬組成物を非ヒト対象に投与することを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する投与する組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。投与は、治療する病状の重症度と反応性、及び治療経過に依存する。最適な投薬スケジュールは、対象の体内への薬剤の蓄積量の測定値から計算することができる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的有効性によって異なりうる。一般的には、in vitro及びin vivo動物モデルで有効であることが分かったEC50に基づいて推定することができる。一般的には、用量は0.01μg〜1g/kg体重、好ましくは0.01〜100mg/kg体重であり、より好ましくは1〜10mg/kg体重である。投与回数としては、1日、1週間、1月間又は1年間に1回又はそれ以上、又は2〜10年間に1回投与するか、あるいは数時間〜数カ月間連続注入により投与することができる。投与の反復回数は、測定した体液又は組織中の薬剤濃度と滞留時間に基づいて推定することができる。治療の成功後、病状の再発を防ぐために対象は維持療法を受けることが望ましい場合もある。
1.ヒト頭頸部がん細胞にけるOncomiRの同定
miRNA knockdown libraryを用い、下記2種類のヒト頭頸部がん細胞株におけるマイクロRNAを阻害した場合の生育に対する影響を網羅的に解析した。具体的には下記の条件で行った。
〔使用した細胞株〕
ヒト口腔扁平上皮がん細胞株SAS及びヒト唾液腺がん細胞株ACCMにgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入して分離樹立したGFP安定発現株GFP-SAS及びGFP-ACCMを使用した。
〔miRNA knockdown library を用いた網羅的機能解析〕
96ウェルプラスチックプレート(商品名:BD Falcon、BD社製)の各ウェルに、ヒト口腔がん細胞株GFP-SASあるいはGFP-ACCMを2x103個含む10%FBS含有DMEM培地160μlと918種類のヒトマイクロRNAに対するLNA(Locked Nucleic Acid)/DNA knockdown probe(商品名:miRCURY LNATM microRNA Knockdown Library-Human v12.0、EXIQON社製)各5pmol、RNAiMAX(Invitrogen社製)0.4μlを含むOpti-MEM(Invitrogen社製)40μlを混合し、加えた。80時間培養した後、各ウェルのGFP蛍光強度をWallac ARVO MX 1420 Multilabel Counter(PerkinElmer社製)にて測定し、つづいてCell Counting Kit-8(Dojindo社製)を用いて細胞数を定量した。
miRNA knockdown libraryを用い、下記2種類のヒト頭頸部がん細胞株におけるマイクロRNAを阻害した場合の生育に対する影響を網羅的に解析した。具体的には下記の条件で行った。
〔使用した細胞株〕
ヒト口腔扁平上皮がん細胞株SAS及びヒト唾液腺がん細胞株ACCMにgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入して分離樹立したGFP安定発現株GFP-SAS及びGFP-ACCMを使用した。
〔miRNA knockdown library を用いた網羅的機能解析〕
96ウェルプラスチックプレート(商品名:BD Falcon、BD社製)の各ウェルに、ヒト口腔がん細胞株GFP-SASあるいはGFP-ACCMを2x103個含む10%FBS含有DMEM培地160μlと918種類のヒトマイクロRNAに対するLNA(Locked Nucleic Acid)/DNA knockdown probe(商品名:miRCURY LNATM microRNA Knockdown Library-Human v12.0、EXIQON社製)各5pmol、RNAiMAX(Invitrogen社製)0.4μlを含むOpti-MEM(Invitrogen社製)40μlを混合し、加えた。80時間培養した後、各ウェルのGFP蛍光強度をWallac ARVO MX 1420 Multilabel Counter(PerkinElmer社製)にて測定し、つづいてCell Counting Kit-8(Dojindo社製)を用いて細胞数を定量した。
上記のknockdown libraryを用いた網羅的機能解析により、ヒト口腔扁平上皮がん細胞GFP-SASにおいて14種類(下記表4)、ヒト唾液腺がん細胞GFP-ACCMにおいて2種類(下記表5)のOncomiRを同定した。なお、ヒト唾液腺がん細胞における2種類のOncomiRは、いずれもヒト口腔扁平上皮がん細胞におけるOncomiRであった。なお、下記表4及び5において、同定されたOncomiRのmiRBase(データベース)におけるID、アクセション番号、及び、成熟マイクロRNAの配列を示す。
2.アンチセンスオリゴヌクレオチド導入による増殖抑制の確認
下記のhsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを下記条件でヒト口腔扁平上皮がん細胞GFP-SASに導入し、細胞増殖に与える影響を評価した。
〔使用したアンチセンスオリゴヌクレオチド〕
hsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、下記表6の配列のknockdown probe(商品名:miRCURY LNA microRNA Inhibitor、EXIQON社製)を用いた。なお、ネガティブコントロールとしては、商品名:miRCURY Knockdown control probe(配列番号32、EXIQON社製)を使用した。これらのオリゴヌクレオチドは、LNA(商品名;Locked Nucleic Acid)を含む(約20塩基のDNAに対して約8塩基程度のLNAを含む)。
〔miRNA knockdown probeの導入と細胞増殖評価法〕
96ウェルプラスチックプレートの各ウェルに、種々のヒトがん細胞を2x103個含むcomplete medium80μlとmiRNAに対する下記表3の配列のknockdown probe2.5pmol、RNAiMAX(Invitrogen社製)0.2μlを含む Opti-MEM(Invitrogen社製)20μlを混合し、加えた。80時間培養した後、各ウェルの生存細胞が発するGFPの蛍光を蛍光顕微鏡観察した。その結果を図1に示す。
下記のhsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを下記条件でヒト口腔扁平上皮がん細胞GFP-SASに導入し、細胞増殖に与える影響を評価した。
〔使用したアンチセンスオリゴヌクレオチド〕
hsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、下記表6の配列のknockdown probe(商品名:miRCURY LNA microRNA Inhibitor、EXIQON社製)を用いた。なお、ネガティブコントロールとしては、商品名:miRCURY Knockdown control probe(配列番号32、EXIQON社製)を使用した。これらのオリゴヌクレオチドは、LNA(商品名;Locked Nucleic Acid)を含む(約20塩基のDNAに対して約8塩基程度のLNAを含む)。
〔miRNA knockdown probeの導入と細胞増殖評価法〕
96ウェルプラスチックプレートの各ウェルに、種々のヒトがん細胞を2x103個含むcomplete medium80μlとmiRNAに対する下記表3の配列のknockdown probe2.5pmol、RNAiMAX(Invitrogen社製)0.2μlを含む Opti-MEM(Invitrogen社製)20μlを混合し、加えた。80時間培養した後、各ウェルの生存細胞が発するGFPの蛍光を蛍光顕微鏡観察した。その結果を図1に示す。
図1に示すとおり、下記表6のhsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒト口腔扁平上皮がん細胞GFP-SASの増殖を完全に抑制した。
3.アンチセンスオリゴヌクレオチド導入による種々のがん細胞に対する増殖抑制の確認
上記表6のhsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを、下記のさまざまながん細胞に導入して細胞増殖に与える影響を下記条件で評価した。
〔使用した細胞株〕
ヒト口腔扁平上皮がん細胞株SAS及びヒト唾液腺がん細胞株ACCMにgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入して分離樹立したGFP安定発現株GFP-SAS及びGFP-ACCMに加え、ヒト口腔扁平上皮がん細胞株B88、ヒト膵臓がん細胞株MIAPaCa-2、ヒト胆道がん細胞株HuCCT1、ヒト肺扁平上皮がん細胞株EBC-1、ヒト肺腺がん細胞株A549、ヒト前立腺がん細胞株 LNCaP(アンドロゲン依存性)、PC-3(アンドロゲン非依存性)を用いた。これら細胞株の培養には、10%牛胎児血清(FBS;Biosource International社製)、100μg/mlストレプトマイシン、100U/mlペニシリン、0.25mg/mlアンホテリシンB(Invitrogen社製)を含むダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)あるいはRPMI1640培地(Sigma-Aldrich社製)を増殖培養液として用い、空気中に5%の割合で炭酸ガスを含む培養器内で、37℃にて行った。
〔miRNA knockdown probe の導入と細胞増殖評価法〕
96ウェルプラスチックプレートの各ウェルに、種々のヒトがん細胞を2x103個含むcomplete medium80μlとmiRNAに対する上記表3の配列のknockdown probe2.5pmol、RNAiMAX(Invitrogen社製)0.2μlを含むOpti-MEM(Invitrogen社製)20μlを混合し、加えた。80時間培養した後、各ウェルの細胞数をCell Counting Kit-8(Dojindo社製)を用いて細胞数を定量した。なお、ネガティブコントロールとしては、商品名:miRCURY Knockdown control probe(配列番号32、EXIQON社製)を使用した。その結果を図2に示す。
上記表6のhsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを、下記のさまざまながん細胞に導入して細胞増殖に与える影響を下記条件で評価した。
〔使用した細胞株〕
ヒト口腔扁平上皮がん細胞株SAS及びヒト唾液腺がん細胞株ACCMにgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入して分離樹立したGFP安定発現株GFP-SAS及びGFP-ACCMに加え、ヒト口腔扁平上皮がん細胞株B88、ヒト膵臓がん細胞株MIAPaCa-2、ヒト胆道がん細胞株HuCCT1、ヒト肺扁平上皮がん細胞株EBC-1、ヒト肺腺がん細胞株A549、ヒト前立腺がん細胞株 LNCaP(アンドロゲン依存性)、PC-3(アンドロゲン非依存性)を用いた。これら細胞株の培養には、10%牛胎児血清(FBS;Biosource International社製)、100μg/mlストレプトマイシン、100U/mlペニシリン、0.25mg/mlアンホテリシンB(Invitrogen社製)を含むダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)あるいはRPMI1640培地(Sigma-Aldrich社製)を増殖培養液として用い、空気中に5%の割合で炭酸ガスを含む培養器内で、37℃にて行った。
〔miRNA knockdown probe の導入と細胞増殖評価法〕
96ウェルプラスチックプレートの各ウェルに、種々のヒトがん細胞を2x103個含むcomplete medium80μlとmiRNAに対する上記表3の配列のknockdown probe2.5pmol、RNAiMAX(Invitrogen社製)0.2μlを含むOpti-MEM(Invitrogen社製)20μlを混合し、加えた。80時間培養した後、各ウェルの細胞数をCell Counting Kit-8(Dojindo社製)を用いて細胞数を定量した。なお、ネガティブコントロールとしては、商品名:miRCURY Knockdown control probe(配列番号32、EXIQON社製)を使用した。その結果を図2に示す。
図2に示すとおり、上記表6のhsa-miR-133a/b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、頭頸部がん以外のがん細胞に対しても増殖抑制効果を示した。
4.hsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドのin vivoにおけるがん細胞に対する増殖抑制の確認
hsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド及びネガティブコントロールをそれぞれ、下記条件で腫瘍モデルマウスに投与して腫瘍の増殖(大きさ)の経時変化を観察した。その結果を図3及び図4に示す。図3は、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びコントロールを投与して3、6、9、及び12日後の腫瘍の大きさを下記条件で算出したグラフであり、図4は、12日後における腫瘍の写真である。
〔腫瘍モデルマウス、アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与方法及び観察方法〕
腫瘍モデルマウスは、GFP-SAS細胞1x106個を6週齢雄のBalb/Cヌードマウス背部皮下に移植して作製した。移植後12日目に腫瘍形成を確認し、hsa-miR-361-3p に対するLNA/DNAアンチセンスオリゴヌクレオチド及びコントロールLNA/DNAオリゴヌクレオチド(いずれも上記表6に記載の塩基配列のホスホロチオエート型オリゴヌクレオチド;約20塩基のDNAに対して約8塩基程度のLNAを含む)を尾静脈から8nmol全身投与し、さらに7日後にも同様に全身投与した。初回投与から3、6、9、及び12日後に腫瘍体積を[腫瘍体積=長径×短径×高さ×0.5236 ]の計算式を用いて算出し、抗hsa-miR-361-3pアンチセンスオリゴヌクレオチドの抗腫瘍活性を評価した。
hsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド及びネガティブコントロールをそれぞれ、下記条件で腫瘍モデルマウスに投与して腫瘍の増殖(大きさ)の経時変化を観察した。その結果を図3及び図4に示す。図3は、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びコントロールを投与して3、6、9、及び12日後の腫瘍の大きさを下記条件で算出したグラフであり、図4は、12日後における腫瘍の写真である。
〔腫瘍モデルマウス、アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与方法及び観察方法〕
腫瘍モデルマウスは、GFP-SAS細胞1x106個を6週齢雄のBalb/Cヌードマウス背部皮下に移植して作製した。移植後12日目に腫瘍形成を確認し、hsa-miR-361-3p に対するLNA/DNAアンチセンスオリゴヌクレオチド及びコントロールLNA/DNAオリゴヌクレオチド(いずれも上記表6に記載の塩基配列のホスホロチオエート型オリゴヌクレオチド;約20塩基のDNAに対して約8塩基程度のLNAを含む)を尾静脈から8nmol全身投与し、さらに7日後にも同様に全身投与した。初回投与から3、6、9、及び12日後に腫瘍体積を[腫瘍体積=長径×短径×高さ×0.5236 ]の計算式を用いて算出し、抗hsa-miR-361-3pアンチセンスオリゴヌクレオチドの抗腫瘍活性を評価した。
図3及び図4に示す通り、hsa-miR-361-3pに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドはin vivoにおいてもがん細胞の増殖抑制効果を示した。
本発明は、がんに関する医薬開発、がんの医療分野、がんの研究分野等において有用である。
配列番号1〜4:miRBaseに登録されているマイクロRNAの配列(hsa-miR-133a/b MIMAT0000427/ MIMAT0000770、hsa-miR-346 MIMAT0000773、hsa-miR-361-3p MIMAT0004682)
配列番号5〜8:配列番号1〜4の相補配列
配列番号9〜18:miRBaseに登録されているマイクロRNAの配列(hsa-miR-92a MIMAT0000092、hsa-miR-139-5p MIMAT0000250、hsa-miR-197 MIMAT0000227、hsa-miR-328 MIMAT0000752、hsa-miR-605 MIMAT0003273、hsa-miR-766 MIMAT0003888、hsa-miR-1228 MIMAT0005583、hsa-miR-1252 MIMAT0005944、hsa-miR-1260 MIMAT0005911、hsa-miR-1271 MIMAT0005796)
配列番号19〜28:配列番号9〜18の相補配列
配列番号29:抗hsa-miR-133a/bアンチセンスオリゴヌクレオチド
配列番号30:抗hsa-miR-346アンチセンスオリゴヌクレオチド
配列番号31:抗hsa-miR-361-3pアンチセンスオリゴヌクレオチド
配列番号32:ネガティブコントロール
配列番号5〜8:配列番号1〜4の相補配列
配列番号9〜18:miRBaseに登録されているマイクロRNAの配列(hsa-miR-92a MIMAT0000092、hsa-miR-139-5p MIMAT0000250、hsa-miR-197 MIMAT0000227、hsa-miR-328 MIMAT0000752、hsa-miR-605 MIMAT0003273、hsa-miR-766 MIMAT0003888、hsa-miR-1228 MIMAT0005583、hsa-miR-1252 MIMAT0005944、hsa-miR-1260 MIMAT0005911、hsa-miR-1271 MIMAT0005796)
配列番号19〜28:配列番号9〜18の相補配列
配列番号29:抗hsa-miR-133a/bアンチセンスオリゴヌクレオチド
配列番号30:抗hsa-miR-346アンチセンスオリゴヌクレオチド
配列番号31:抗hsa-miR-361-3pアンチセンスオリゴヌクレオチド
配列番号32:ネガティブコントロール
Claims (14)
- マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物。
- マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物。
- マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される、非ヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物。
- 前記がんが、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、請求項1から3のいずれかに記載の組成物。
- マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物。
- マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物。
- マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される、非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物。
- ヒトがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法。
- ヒトのがんの治療又は予防方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-346、及びhsa-miR-361-3pからなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防方法。
- 非ヒトのがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、miR-133、miR-346、及びmiR-361からなる群から選択される、非ヒトのがん細胞の生育を抑制する方法。
- 前記がんが、頭頸部がん、肺がん、胆道がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、請求項8から10のいずれかに記載の方法。
- ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法。
- ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロRNAが、hsa-miR-92a、hsa-miR-133a、hsa-miR-133b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-197、hsa-miR-328、hsa-miR-346、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-605、hsa-miR-766、hsa-miR-1228、hsa-miR-1252、hsa-miR-1260、及びhsa-miR-1271からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法。
- 非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロRNAのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロRNAが、miR-92、miR-133、miR-139、miR-197、miR-328、miR-346、miR-361、miR-605、miR-766、miR-1228、miR-1252、miR-1260、及びmiR-1271からなる群から選択される、非ヒトの頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法。
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