JPWO2007037282A1 - 微小粒子に自己集合体を形成させる方法及び標的分析物の検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
即ち、本発明の自己集合体結合粒子の作製方法は、互いにハイブリダイズ可能な相補的塩基配列領域を有する二種のオリゴヌクレオチド・プローブを用いて、表面に蛍光物質を有する微小粒子(以下、蛍光微小粒子とも称する。)上に、二本鎖の規則的な高次構造である自己集合体を形成させ、前記微小粒子の表面に前記自己集合体を結合させてなる微小粒子(以下、自己集合体結合粒子と称する。)を製造することを特徴とする。
前記微小粒子に標的分析物を結合させ、該標的分析物を介して前記微小粒子と前記自己集合体が結合されることが好適である。
前記標的分析物としては、例えば、核酸が挙げられる。
a)表面に蛍光物質を有する微小粒子と標的分析物と、標的分析物を介して互いにハイブリダイズ可能な相補的塩基配列領域を有する二種のオリゴヌクレオチド・プローブを用いて形成される自己集合体とを結合させてなる自己集合体結合粒子を作製する第1工程、及び
b)該自己集合体結合粒子を分析することにより標的分析物を検出する第2工程。
前記a)工程が、前記標的分析物と特異的に結合可能であり、前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブ中の1つのオリゴヌクレオチド・プローブの一部又は全てと同じ塩基配列を有するプローブ(以下、アシストプローブと称する。)を用い、該アシストプローブと前記微小粒子が有する前記捕捉物質に特異的に結合した前記標的分析物との間で複合体を形成する工程、及び前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブを用いて前記アシストプローブと結合した自己集合体を形成させ、前記自己集合体結合粒子を作製する工程を含むことが好適である。
a)表面に蛍光物質を有する微小粒子、及び
b)5’端側から順に少なくとも核酸領域X、核酸領域Y及び核酸領域Zが設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第1プローブと、5’端側から順に少なくとも前記核酸領域Xに相補的な核酸領域X’、前記核酸領域Yに相補的な核酸領域Y’及び前記核酸領域Zに相補的な核酸領域Z’が設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第2プローブと、からなる一対のオリゴヌクレオチド・プローブ。
本発明の検出キットは、更に、前記標的分析物と特異的に結合可能であり、前記一対のオリゴヌクレオチド・プローブ中の1つのオリゴヌクレオチド・プローブの一部又は全てと同じ塩基配列を有するアシストプローブを含むことが好適である。
本発明における標的分析物を含む試料は、血液、血清、尿、糞便、脳脊髄液、組織液、喀痰、細胞培養物等の生体由来試料、ウイルス、細菌、カビ等の含有または感染した可能性のある試料等が挙げられる。試料中の標的分析物は公知の方法により抽出し、場合によっては公知の方法により増幅して使用可能である。
また、前記微小粒子が、ポリスチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリロニトリル、ポリアクリルアミド、ポリアクロレイン、ポリジメチルシロキサン、ポリブタジエン、ポリイソピレン、ポリウレタン、ポリ酢酸ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリビニルピリジン、ポリビニルベンジルクロライド、ポリビニルトルエン、ポリ塩化ビニリデン、ポリジビニルベンゼン、ポリグリシジルメタクリル酸塩、ポリメチルメタクリル酸塩、または、それらの混合物、共重合体、合成物もしくは、磁石または磁気応答性の金属酸化物を有することが好適である。
なお、捕捉用物質と標的分析物との反応、及び標的分析物とアシストプローブとの反応の順序は特に限定されず、いずれを先に行ってもよく、また同時に行ってもよい。
前記蛍光物質は、微小粒子の表面に結合した蛍光物質とは異なるものを選択し、微小粒子認識のための蛍光波長と、標的分析物検出のための蛍光波長を区別することが好ましい。
図1〜図3は、本発明の標的分析物の検出方法の第1の例を原理的に示す概略説明図である。第1の例は、標的物質として核酸を検出する場合の例を示す。図1〜3において、10は蛍光標識された微小粒子、16は標的核酸、12は標的核酸に相補的な塩基配列を有するキャプチャープローブである。20及び22は自己集合体形成に用いられる二種のオリゴヌクレオチド・プローブであり、図中では一対のHCP[20:HCP−1(核酸領域XYZ)、22:HCP−2(核酸領域X’Y’Z’)]を用いた場合の例を示した。両プローブは予め蛍光物質24で標識されている。14はHCP−1と同じ核酸領域(XYZ)を有し、且つ標的核酸20に相補的な核酸領域(T1)を有するアシストプローブである。
図4〜図6中、40a〜40fは微小粒子であり、それぞれ6種類の標的遺伝子42a〜42fに対応したキャプチャープローブ41a〜41fが結合されており、その表面にそれぞれ異なる蛍光物質を含む。44a〜44fはアシストプローブであり、それぞれ6種の標的遺伝子42a〜42fに相補的な核酸領域(Ta〜Tf)を有し、且つHCP−1と同じ核酸領域(XYZ)を有する。
微小粒子上におけるパルサー法の有用性について実証した。1種類の微小粒子を用いて、各濃度(0〜5fmol)の標的遺伝子(以下、ターゲットオリゴDNAと称する)に対する陽性シグナルの蛍光強度をパルサー法の有無で比較した。
パルサー法で用いられる一対のHCPとして、下記塩基配列を有するオリゴヌクレオチド・プローブ(HCP−1A及びHCP−2A)を用いた。
HCP−1Aの塩基配列(配列番号1)
5'-Cy3-CGTATCAATGATAGCCGATC CGCCTAAGTTCGATATAGTC CGCGTATACTAAGCGTAATG-3'
HCP−2Aの塩基配列(配列番号2)
5'-Cy3-GATCGGCTATCATTGATACG GACTATATCGAACTTAGGCG CATTACGCTTAGTATACGCG-3'
ターゲットオリゴDNA−1の塩基配列(配列番号3)
5'-GGCGGAGGAGACGCGGGCACGGCTGTCCAAGGAGCTGCAGGCGGCGCAGGCCCGGCTGGGCGCGGACATGGAGGACGTGTGCGGCCGCCTGGTGCAGTACCGCGGCGAGGTGCAGGCCAT-3'
キャプチャープローブ−1の塩基配列(配列番号4)
5'-ACACGTCCTCCATGTCCGCGCCCAGCCGGGCCTGCGCCGCCTGCAGCTCCTTGGACAGCCG-NH2-3'
アシストプローブ−1の塩基配列(配列番号5)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG GTACTGCACCAGGCGGCCGC-3'
(2−1)第1ハイブリダイゼーション
下記組成の第1ハイブリダイゼーション溶液(全量50μL)を調製し、該溶液を95℃2分間反応させ、68℃120分間反応させた後、15℃に保持した。
〈第1ハイブリダイゼーション溶液の組成〉
微小粒子(キャプチャープローブ固定済):500個
アシストプローブ−1:1.5pmol
ターゲットオリゴDNA−1:0,0.1,0.5,1又は5fmol
1.5M TMAC
0.1% N-Lauroylsarcosine
50mM Tris−HCl(pH8.0)
4mM EDTA(pH8.0)
下記組成の第2ハイブリダイゼーション液(全量50μL)を調製し、該第2ハイブリダイゼーション溶液を2分95℃で熱処理後、前記第1ハイブリダイゼーションの反応後の溶液に添加し(最終量100μL)、68℃で60分間反応させた後、15℃に保持した。
〈第2ハイブリダイゼーション溶液の組成〉
HCP−1A:50pmol(実施例1)又は0(比較例1)
HCP−2A:50pmol
1.5M TMAC
0.1% N-Lauroylsarcosine
50mM Tris−HCl(pH8.0)
4mM EDTA(pH8.0)
前記第2ハイブリダイゼーション反応後、フローサイトメーターにて測定を行った。測定は、フローサイトメーターとしてLuminex100(Luminex社製)を使用し、各項目100個前後微小粒子の蛍光強度を測定後、中央値を求めた。結果を表1及び図7に示す。なお、数値はブランク値を引いた値を示した。
パルサー法による4種類の蛍光微小粒子の同時検出を行った。4種類の蛍光強度の異なる微小粒子にそれぞれ異なる4種類のキャプチャープローブを結合させ、それらに対応するターゲットオリゴDNAを、1種類(実施例2−1)、2種類(実施例2−2)又は4種類(実施例2−3)混ぜて、パルサー法にて同時にシグナルを増幅し、フローサイトメーターで測定した。
パルサー法で用いる一対のHCPとして、実施例1と同じHCP−1A及びHCP−2Aを用いた。
ターゲットオリゴDNA−2の塩基配列(配列番号6)
5'-TGATGCCCATGTCGGTGCATGCCTTCACAAAGCGGAAGAATGTGTCAGCCTCAAAGAAAAGCTGCGTGATGATGAAATCGGCTCCCGCAGACACCTTCTCCTTCAAGTGCTTCAGGTCAG-3'
ターゲットオリゴDNA−3の塩基配列(配列番号7)
5'-TGCCTCAGAGCAGGACCTTGGTCTTTCCTTGTTTGAAGCTTTGGGCTACGTGGATGACCAGCTGTTCGTGTTCTATGATCATGAGAGTCGCCGTGTGGAGCCCCGAACTCCATGGGTTTC-3'
ターゲットオリゴDNA−4の塩基配列(配列番号8)
5'-TGAATTAGCTGTATCGTCAAGGCACTCTTGCCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAAGTTTATATTCAGTCATTTTCAGCAGGCCTCTCTCCCGCACCTGGGAGCCGCTGAGCCTCTGG-3'
キャプチャープローブ−2の塩基配列(配列番号9)
5'-CCGATTTCATCATCACGCAGCTTTTCTTTGAGGCTGACACATTCTTCCGCTTTGTGAAGGC-NH2-3'
キャプチャープローブ−3の塩基配列(配列番号10)
5'-GATCATAGAACACGAACAGCTGGTCATCCACGTAGCCCAAAGCTTCAAACAAGGAAAGACC-NH2-3'
キャプチャープローブ−4の塩基配列(配列番号11)
5'-NH2-AGGTGCGGGAGAGAGGCCTGCTGAAAATGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGG-3
アシストプローブ−2の塩基配列(配列番号12)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG GGAGAAGGTGTCTGCGGGAG-3'
アシストプローブ−3の塩基配列(配列番号13)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATGC TCCACACGGCGACTCTCAT-3'
アシストプローブ−4の塩基配列(配列番号14)
5'-TGGCGTAGGCAAGAGTGCCT CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG-3'
第1ハイブリダイゼーション溶液中の微小粒子、ターゲットオリゴDNA及びアシストプローブを下記の如く変更した以外は実施例1と同様の方法で反応及び測定を行った。
a)微小粒子:4種の微小粒子(キャプチャープローブ固定済)を各500個
b)ターゲットオリゴDNA:ターゲットオリゴDNA−1(実施例2−1)、ターゲットオリゴDNA−1及び2(実施例2−2)、又はターゲットオリゴDNA−1〜4(実施例2−3)を各0,0.1,0.5,1又は5fmol
c)アシストプローブ:アシストプローブ−1〜4を各0.375pmol(4種混合した全量1.5pmol)
パルサー法による14種類の蛍光微小粒子の同時検出を行った。14種類の蛍光強度の異なる微小粒子にそれぞれ異なる種類のキャプチャープローブを結合させ、それらに対応するターゲットオリゴDNAを4種類混ぜて、パルサー法にて同時にシグナルを増幅し、フローサイトメーターで測定した。
a)微小粒子:14種類のキャプチャープローブ(キャプチャープローブ−1〜14)をそれぞれ固定化した14種のカルボキシル基コートビーズ(Luminex社製)を各500個
b)ターゲットオリゴDNA:ターゲットオリゴDNA−1〜4を各0.5fmol
c)アシストプローブ:アシストプローブ−1〜14を各0.11pmol(14種混合した全量1.5pmol)
キャプチャープローブ−5及びアシストプローブ−5:Angiotensinogen(Ang)
キャプチャープローブ−6及びアシストプローブ−6:ApolipoproteinB100(ApoB)
キャプチャープローブ−7及びアシストプローブ−7:ApoE(ターゲットオリゴDNA−1とは異なる領域、ApoE-2と称する)
キャプチャープローブ−8及びアシストプローブ−8:Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase(G3P)
キャプチャープローブ−9及びアシストプローブ−9:HFE(ターゲットオリゴDNA−3とは異なる領域、HFE-2と称する)
キャプチャープローブ−10及びアシストプローブ−10:KRAS(ターゲットオリゴDNA−4とは異なる領域、KRAS-2と称する)
キャプチャープローブ−11及びアシストプローブ−11:MediumChainAcyl-CoADehydrogenase(MCAD)
キャプチャープローブ−12、13及びアシストプローブ−12、13:p53の1領域(それぞれp53-1,p53-2と称する)
キャプチャープローブ−13及びアシストプローブ−13:β-actin(BA)
5'-AAGGGTATGCGGAAGCGAGCACCCCAGTCTGAGATGGCTCCTGCCGGTGTGAGCCTGAGGG-NH2-3'
キャプチャープローブ−6の塩基配列(配列番号16)
5'-NH2-GGGAATATTCAGGAACTATTGCTAGTGAGGCCAACACTTACTTGAATTCCAAGAGCACACG-3'
キャプチャープローブ−7の塩基配列(配列番号17)
5'-NH2-GCCTCCCACCTGCGCAAGCTGCGTAAGCGGCTCCTCCGCGATGCCGATGACCTGCAGAAGC-3'
キャプチャープローブ−8の塩基配列(配列番号18)
5'-TGGTGGTGCAGGAGGCATTGCTGATGATCTTGAGGCTGTTGTCATACTTCTCATGGTTCAC-NH2-3'
キャプチャープローブ−9の塩基配列(配列番号19)
5'-NH2-GACGGTGAGGGCTCCCAGATCACAATGAGGGGCTGATCCAGGCCTGGGTGCTCCACCTGGC-3'
キャプチャープローブ−10の塩基配列(配列番号20)
5'-TGACCTGCTGTGTCGAGAATATCCAAGAGACAGGTTTCTCCATCAATTACTACTTGCTTCC-NH2-3'
キャプチャープローブ−11の塩基配列(配列番号21)
5'-AAAGTTGAACTAGCTAGAATGAGTTACCAGAGAGCAGCTTGGGAGGTTGATTCTGGTCGTC-NH2-3'
キャプチャープローブ−12の塩基配列(配列番号22)
5'-NH2-CCTGAAAACAACGTTCTGTCCCCCTTGCCGTCCCAAGCAATGGATGATTTGATGCTGTCCC-3'
キャプチャープローブ−13の塩基配列(配列番号23)
5'-CGGGGAGCAGCCTCTGGCATTCTGGGAGCTTCATCTGGACCTGGGTCTTCAGTGAACCATT-NH2-3'
キャプチャープローブ−14の塩基配列(配列番号24)
5'-NH2-GGAACCGCTCATTGCCAATGGTGATGACCTGGCCGTCAGGCAGCTCGTAGCTCTTCTCCAG-3'
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG TGTTCTGGGTACTACAGCAG-3'
アシストプローブ−6の塩基配列(配列番号26)
5'-GTCTTCAGTGAAGCTGCAGG CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG-3'
アシストプローブ−7の塩基配列(配列番号27)
5'-GCCTGGCAGTGTACCAGGCC CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG-3'
アシストプローブ−8の塩基配列(配列番号28)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG GGCCAGGGGTGCTAAGCAGT-3'
アシストプローブ−9の塩基配列(配列番号29)
5'-ACGTATATCTCTGCTCTTCC CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG-3'
アシストプローブ−10の塩基配列(配列番号30)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG TCATTGCACTGTACTCCTCT-3'
アシストプローブ−11の塩基配列(配列番号31)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG TGCTGGCTGAAATGGCAATG-3'
アシストプローブ−12の塩基配列(配列番号32)
5'-CGGACGATATTGAACAATGG CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG-3
アシストプローブ−13の塩基配列(配列番号33)
5'-CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG CTGCTGGTGCAGGGGCCACG-3'
アシストプローブ−14の塩基配列(配列番号34)
5'-GGAGGAGCTGGAAGCAGCCG CGTATCAATGATAGCCGATCCGCCTAAGTTCGATATAGTCCGCGTATACTAAGCGTAATG-3'
Claims (15)
- 互いにハイブリダイズ可能な相補的塩基配列領域を有する二種のオリゴヌクレオチド・プローブを用いて、表面に蛍光物質を有する微小粒子上に、二本鎖の規則的な高次構造である自己集合体を形成させ、前記微小粒子の表面に前記自己集合体を結合させてなる自己集合体結合粒子を製造することを特徴とする自己集合体結合粒子の製造方法。
- 前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブが、5’端側から順に少なくとも核酸領域X、核酸領域Y及び核酸領域Zが設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第1プローブと、5’端側から順に少なくとも前記核酸領域Xに相補的な核酸領域X’、前記核酸領域Yに相補的な核酸領域Y’及び前記核酸領域Zに相補的な核酸領域Z’が設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第2プローブと、からなる一対のオリゴヌクレオチド・プローブであることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブの少なくとも1つが蛍光物質又は蛍光物質と結合可能な物質で標識され、該蛍光物質と前記微小粒子表面の蛍光物質とは、蛍光の波長又は強度が異なることを特徴とする請求項1又は2記載の方法。
- 前記微小粒子に標的分析物を結合させ、該標的分析物を介して前記微小粒子と前記自己集合体が結合されることを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項記載の方法。
- 請求項1〜4のいずれか1項記載の方法で製造されることを特徴とする自己集合体結合粒子。
- 試料内の少なくとも1つの標的分析物の存在を検出する方法であって、下記工程a)及びb)を含むことを特徴とする標的分析物の検出方法。
a)表面に蛍光物質を有する微小粒子と標的分析物と、標的分析物を介して互いにハイブリダイズ可能な相補的塩基配列領域を有する二種のオリゴヌクレオチド・プローブを用いて形成される自己集合体とを結合させ、自己集合体結合粒子を作製する第1工程、及び
b)該自己集合体結合粒子を分析することにより標的分析物を検出する第2工程。 - 前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブが、5’端側から順に少なくとも核酸領域X、核酸領域Y及び核酸領域Zが設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第1プローブと、5’端側から順に少なくとも前記核酸領域Xに相補的な核酸領域X’、前記核酸領域Yに相補的な核酸領域Y’及び前記核酸領域Zに相補的な核酸領域Z’が設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第2プローブと、からなる一対のオリゴヌクレオチド・プローブであることを特徴とする請求項6記載の方法。
- 前記微小粒子が前記標的分析物と特異的に結合する捕捉用物質を有することを特徴とする請求項6又は7記載の方法。
- 前記a)工程が、前記標的分析物と特異的に結合可能であり、前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブ中の1つのオリゴヌクレオチド・プローブの一部又は全てと同じ塩基配列を有するアシストプローブを用い、該アシストプローブと前記微小粒子が有する前記捕捉物質に特異的に結合した前記標的分析物との間で複合体を形成する工程、及び前記複数種のオリゴヌクレオチド・プローブを用いて前記アシストプローブと結合した自己集合体を形成させ、前記自己集合体結合粒子を作製する工程を含むことを特徴とする請求項8記載の方法。
- 前記二種のオリゴヌクレオチド・プローブの少なくとも1つが蛍光物質又は蛍光物質と結合可能な物質で標識され、該蛍光物質と前記微小粒子表面の蛍光物質とは、蛍光の波長又は強度が異なることを特徴とする請求項6〜9のいずれか1項記載の方法。
- 前記b)工程において、前記自己集合体結合粒子を、フローサイトメトリーを用いて分析することを特徴とする請求項6〜10のいずれか1項記載の方法。
- 前記標的分析物が核酸であることを特徴とする請求項6〜11のいずれか1項記載の方法。
- 試料内の少なくとも1つの標的分析物の存在を検出する、下記a)及びb)を含むことを特徴とする標的分析物の検出キット。
a)表面に蛍光物質を有する微小粒子、及び
b)5’端側から順に少なくとも核酸領域X、核酸領域Y及び核酸領域Zが設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第1プローブと、5’端側から順に少なくとも前記核酸領域Xに相補的な核酸領域X’、前記核酸領域Yに相補的な核酸領域Y’及び前記核酸領域Zに相補的な核酸領域Z’が設けられた、3箇所以上の核酸領域からなる第2プローブと、からなる一対のオリゴヌクレオチド・プローブ。 - 前記微小粒子が前記標的分析物と特異的に結合する捕捉用物質を有する請求項13記載の検出キット。
- 更に、前記標的分析物と特異的に結合可能であり、前記一対のオリゴヌクレオチド・プローブ中の1つのオリゴヌクレオチド・プローブの一部又は全てと同じ塩基配列を有するアシストプローブを含む請求項13又は14記載の検出キット。
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JP2002501184A (ja) * | 1998-01-22 | 2002-01-15 | ルミネックス コーポレイション | 多数の蛍光シグナルを有する微小粒子 |
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WO2002018642A1 (en) * | 2000-08-30 | 2002-03-07 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Method of detecting gene |
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