JPWO2006088126A1 - 遺伝子検知方法 - Google Patents
遺伝子検知方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2006088126A1 JPWO2006088126A1 JP2007503741A JP2007503741A JPWO2006088126A1 JP WO2006088126 A1 JPWO2006088126 A1 JP WO2006088126A1 JP 2007503741 A JP2007503741 A JP 2007503741A JP 2007503741 A JP2007503741 A JP 2007503741A JP WO2006088126 A1 JPWO2006088126 A1 JP WO2006088126A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rna
- gene
- dna
- sample
- target gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6809—Methods for determination or identification of nucleic acids involving differential detection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6865—Promoter-based amplification, e.g. nucleic acid sequence amplification [NASBA], self-sustained sequence replication [3SR] or transcription-based amplification system [TAS]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
さらに、自然または人為的な環境の変化に応じて、地中、水中、大気中などに存在する微生物などの有害性や無毒化や確認する手段として、当該微生物の遺伝子の変化(例えば、有害性に関与する特定の塩基の存否)を知ることも重要になっている。
PCR反応
本発明に従う遺伝子検知においても、標的遺伝子のサンプル(被検遺伝子のサンプル)、および対照遺伝子のサンプル(上記の標的遺伝子に対して野生型または標準型の塩基配列を有する遺伝子のサンプル)は、先ず、PCR(ポリメラーゼ・チェイン・リアクション)反応に供されるが、本発明の特徴は、後の工程で、PCR産物を鋳型にして一本鎖RNAを大量に合成してサンプル量を飛躍的の増大させることができることにある。このため、それぞれの遺伝子サンプルのPCR反応による増幅に際して、プライマーとして通常のPCR反応におけるようにそれぞれの遺伝子に特異的なプライマーの他に、5’末端にRNAポリメラーゼプロモーター配列を有するプライマーを用いる。
本発明に従えば、如上のPCR反応で得られた二本鎖DNAはインビトロ転写反応に供される。ここで、PCR産物である二本鎖DNAは5’末端側にRNAポリメラーゼプロモーター配列を有しているので、RNAポリメラーゼの作用により転写反応を受けて、PCR産物を鋳型とする一本鎖RNAになる。
Scale RNA Production System」(Promega社)が挙げられるが、これに限られるものではない。
本発明に従う遺伝子検知方法においては、如上のインビトロ転写反応で得られた一本鎖RNAを、次に、蛍光標識プローブとハイブリダイゼーションさせて、RNA/DNAハイブリッド(ダブレックス)を形成させる。蛍光標識プローブは、対照遺伝子の塩基配列の少なくとも一部に相補的な配列から成る一本鎖DNAに蛍光色素が結合されたものである。ここで、蛍光色素は、当該プローブの末端(5’末端または3’末端)の塩基と共有結合しており、そして、検出対象となる塩基はその蛍光色素の結合している塩基に可及的に近接するように、すなわち、その末端に存在するかまたは末端塩基から3塩基以内の位置にあるように蛍光標識プローブを設計するのが好ましい。
本発明に従えば、上記のようにして得られた標的遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドと対照遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドの蛍光強度を比較することにより遺伝子変異を検出することができるが、本発明の特に好ましい態様においては、それらのRNA/DNAハイブリッドをRNアーゼ(RNase:リボヌクレアーゼ)を用いるRNA分解反応に供した後に、蛍光強度の比較を行なう。これによって、蛍光標識プローブとハイブリダイズしていないRNAの部分が分解除去される結果、蛍光強度(蛍光消光率)の差がより顕著になり、その比較による変異の検出が容易になり精度よく行なわれる。さらに、既述のように、蛍光標識プローブの蛍光放出領域と重複する吸収帯を有する分子を結合させた蛍光消光プローブを近接するように併存させることで、著しく大きな消光率が達成され、より高い精度での変異検出を可能とする。
以下、本発明の特徴を更に具体的に説明するため実施例を示すが、本発明はこれらの実施例によって制限されるものではない。
1.1 DNAサンプルの調製(PCR)
検知遺伝子として図2の(A)に示すB型肝炎ウイルス遺伝子〔野性型(対照遺伝子)および変異型(標的遺伝子)〕を含むプラスミド遺伝子(pUC18のSmaIサイトに連結されたB型肝炎ウイルス遺伝子)を鋳型としてそれぞれPCR反応を行い、解析対象(検出対象)部位を含む遺伝子断片を得た。PCRプライマーには5’末端にT7 RNAポリメラーゼプロモーター配列を付加したプライマー1(配列番号:5)および遺伝子特異的なプライマー2(配列番号:6)を用い、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(TaKaRa)により行った。反応条件を以下に示す。
PCR反応組成(100μl):鋳型DNA(<1μg)、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(2.5 unit)、プライマー1(1μM)、プライマー2(1μM)、dNTP(200μM)、1 x Pyrobest
Buffer II。
PCR条件:熱変性(95℃、5min)1サイクルを行った後、[熱変性(95℃、15sec)−アニーリング(55℃、30sec)−伸長反応(72℃、30sec)]35サイクルを行った。
プライマー1:
5’−ATGATCACTAATACGACTCACTATAGGGCTTTCCCCCACTGTTTGGC−3’
プライマー2:
5’−GGTACCCCAACTTCCAATTACATAT−3’
1.1に示す工程により得られたPCR産物をインビトロ転写反応に供し一本鎖RNAを調製した。転写反応は、T7 RiboMAXTM Express Large
Scale RNA Production System (Promega)により行った。RNA産物はエタノール沈殿を通じて回収し、滅菌水に再溶解させたものをRNAサンプルとした。反応条件を以下に示す。
反応組成(20μl):PCR反応液(2μL)、Enzyme Mix, T7 Express(2μL)、1 x RiboMAXTM Express T7 buffer
反応条件:合成反応(30℃、30min)の後、Dr. GenTLETM Precipitation
Carrier (TaKaRa)を用いてRNAサンプルを回収した。
図2(B)に示すように、5’末端に各種の蛍光色素を結合したオリゴDNA(5’−CATATAACTGAAAGCCAAAC−3’)を蛍光標識プローブとして用いた。
蛍光標識プローブ(40pmol)を1mLのハイブリダイゼーション緩衝液(10mM Tris−HCl、10mM MgCl2、pH7.0)に溶解し蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度値をF0とした。これにRNAサンプル(15μL)を添加しRNA/DNAのハイブリッドを得た。これに、リボヌクレアーゼA(0.5μg)を作用させた後の蛍光強度値を測定しF1とした。下記の演算式1を用いて補正演算し消光率(Qr)を算出した。
その結果を図3に示す。一連の結果より、RNAサンプルと蛍光標識プローブが完全相補的であるときにおいて〔すなわち、検出対象部位の塩基がGである対照(野性型)遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドにおいては〕高い消光率を与え、末端部位において相補性を有さない場合には〔すなわち、検出対象部位の塩基がG以外である標的(変異型)遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドにおいては〕消光率を著しく減少させることが示された。このように、ハイブリダイゼーション前後における蛍光強度値を測定し、これを演算補正することで遺伝子の変異を検出することができる。
また、図6に示すように、5’末端に蛍光色素(FITC)を結合したオリゴDNA(5’−CCATATAACTGAAAGCCAAA−3’)および3’末端に消光分子(BHQ−1)を結合したオリゴDNA(5’−GGCCCCCAATACCACATCAT−3’)をそれぞれ蛍光標識プローブおよび蛍光消光プローブとして用いた。
演算式1 Qr=(F0−F1)/F0×100(%)
2.1 DNAサンプルの調製(PCR)
検知遺伝子として図4に示すヒトアルデヒドヒドロゲナーゼ(野性型および変異型)遺伝子を含むプラスミド遺伝子(pUC18のSmaIサイトに連結されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子)を鋳型としてそれぞれPCR反応を行い、検出対象部位を含む遺伝子断片を得た。PCRプライマーには5’末端にT7 RNAポリメラーゼプロモーター配列を付加したプライマー1(配列番号:7)および遺伝子特異的なプライマー2(配列番号:8)を用い、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(TaKaRa)により行った。反応条件を以下に示す。
PCR反応組成(100μl):鋳型DNA(<1μg)、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(2.5 unit)、プライマー1(1μM)、プライマー2(1μM)、dNTP(200μM)、1 x Pyrobest
Buffer II。
PCR条件:熱変性(95℃、5min)1サイクルを行った後、[熱変性(95℃、15sec)−アニーリング(55℃、30sec)−伸長反応(72℃、30sec)]35サイクルを行った。
プライマー1:
5’−ATGATCACTAATACGACTCACTATAGGGTCAACTGCTATGATGTG−3’
プライマー2:
5’−CCACACTCACAGTTTTCACTT−3’
2.1に示す工程より得られたPCR産物をインビトロ転写反応に供し一本鎖RNAを調製した。転写反応は、T7 RiboMAXTM Express Large Scale RNA
Production System (Promega)により行った。RNA産物はエタノール沈殿を通じて回収し、滅菌水に再溶解させたものをRNAサンプルとした。反応条件を以下に示す。
反応組成(20μl):PCR反応液(1μL)、Enzyme Mix, T7 Express(2μL)、1x RiboMAXTM
Express T7 buffer
反応条件:合成反応(30℃、30min)の後、Dr. GenTLETM Precipitation
Carrier (TaKaRa)を用いてRNAサンプルを回収した。
図4に示すように、3’末端を蛍光色素TAMRAを結合したオリゴDNA(5’−ACACTCACAGTTTTCACTTC−3’)(配列番号9)を蛍光標識プローブとして用いた。
蛍光標識プローブ(40pmol)を1mLのハイブリダイゼーション緩衝液(10mM Tris-HCl、10mM MgCl2、pH7.0)に溶解し蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度値をF0とした。これにRNAサンプル(15μL)を添加しRNA/DNAのハイブリッドを得た。これに、リボヌクレアーゼA(0.5μg)を作用させた後の蛍光強度値を測定しF1とした。既述の演算式1を用いて補正演算し消光率(Qr)を算出した。結果を図4に示す。図に示されるように、野性型のみからなるRNAサンプル(野性型ホモ接合体)において高い消光率(55%)を与えた。一方、変異型のみからなるRNAサンプル(変異型ホモ接合体)においては消光率を著しく減少させた(2%)。また、野性型および変異型を含むヘテロ接合体においては28%の消光率を与えた。このように、ハイブリダイゼーション前後における蛍光強度値を測定し、これを演算補正することで各アレルの変異を検出することができる。
3.1 DNAサンプルの調製(PCR)
検知遺伝子としてヒトのβ2−アドレナリンレセプター(β2−Adrenergic Receptor:ADRB2)遺伝子(野性型および変異型)を含むプラスミド遺伝子を鋳型としてそれぞれPCR反応を行い、検出対象部位を含む遺伝子断片を得た。PCRプライマーには5’末端にT7 RNAポリメラーゼプロモーター配列を付加したプライマー1(配列番号:9)および遺伝子特異的なプライマー2(配列番号:10)を用い、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(TaKaRa)により行った。反応条件を以下に示す。
PCR反応組成(100μl):鋳型DNA(<1μg)、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(2.5 unit)、プライマー1(1μM)、プライマー2(1μM)、dNTP(200μM)、1x Pyrobest Buffer
II
PCR条件:熱変性(95℃、5min)1サイクルを行った後、[熱変性(95℃、15sec)−アニーリング(55℃、30se)−伸長反応(72℃、30sec)]35サイクルを行った。
プライマー1:
5’−ATGATCACTAATACGACTCACTATAGGGCAACCCGGGAACGGCAG−3’
プライマー2:
5’−ATTGCCAAACACGATGGCCA−3’
HBV遺伝子についても、既述の実施例1の1.1の場合と同様にPCR反応を行なった。
3.2に示す工程より得られた2種類のPCR産物をインビトロ転写反応に供し一本鎖RNAを調製した。転写反応は、T7 RiboMAXTM Express Large
Scale RNA Production System (Promega)により行った。RNA産物はエタノール沈殿を通じて回収し、滅菌水に再溶解させたものをRNAサンプルとした。反応条件を以下に示す。
反応組成(20μl):PCR反応液(各1μL)、Enzyme Mix, T7 Express(2μL)、1x RiboMAXTM
Express T7 buffer
反応条件:合成反応(30℃、30min)の後、Dr. GenTLETM Precipitation
Carrier (TaKaRa)を用いてRNAサンプルを回収した。
5’末端に蛍光色素FITCを結合したHBV用オリゴDNA(5’−CCATATAACTGAAAGCCAAAC−3’)(配列番号:11)および3’末端に蛍光色素TAMRAを結合したADRB2用オリゴDNA(5’−ACCCACACCTCGTCCCTTTC−3’)(配列番号:12)を蛍光標識プローブとして用いた。
各蛍光標識プローブ(40pmol)を1mLのハイブリダイゼーション緩衝液(10mM Tris-HCl、10mM MgCl2、pH7.0)に溶解しFITCおよびTAMRAに由来する蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度値をF0とした。これにRNAサンプル(15μL)を添加しRNA/DNAのハイブリッドを得た。これに、リボヌクレアーゼA(0.5μg)を作用させた後の蛍光強度値を測定しF1とした。既述の演算式1を用いて補正演算し消光率(Qr)を算出し、これを演算補正した。結果を図5に示す。それぞれのQrは各蛍光プローブの相補性に応答した値を与え、異なる複数のSNPs部位を同時に検出することができた。これらの結果は、本発明の方法により、異なる遺伝子鎖または同一遺伝子鎖内に存在する複数箇所のSNPsを同時に検出可能であることを示している。
4.1 DNAサンプルの調製(PCR)
検知遺伝子としてマグロ魚種ミトコンドリアDNAを鋳型としてそれぞれPCR反応を行い、解析対象(検出対象)部位を含む遺伝子断片を得た。PCRプライマーには5’末端にT7 RNAポリメラーゼプロモーター配列を付加したプライマー1(配列番号:13)および遺伝子特異的なプライマー2(配列番号:14)を用い、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(TaKaRa)により行った。反応条件を以下に示す。
PCR反応組成(100μl):鋳型DNA(<1μg)、Pyrobest(登録商標)DNAポリメラーゼ(2.5 unit)、プライマー1(1μM)、プライマー2(1μM)、dNTP(200μM)、1 x Pyrobest
Buffer II。
PCR条件:熱変性(95℃、5min)1サイクルを行った後、[熱変性(95℃、15sec)−アニーリング(55℃、30sec)−伸長反応(72℃、30sec)]35サイクルを行った。
プライマー1:
5’−ATGATCACTAATACGACTCACTATAGGGACTTGCATTCCCTCTCTG−3’
プライマー2:
5’−TTAGAAGGAAAAGTAGGGTTGCTGTTAG−3’
4.1に示す工程により得られたPCR産物をインビトロ転写反応に供し一本鎖RNAを調製した。転写反応は、T7 RiboMAXTM Express Large
Scale RNA Production System (Promega)により行った。RNA産物はエタノール沈殿を通じて回収し、滅菌水に再溶解させたものをRNAサンプルとした。反応条件を以下に示す。
反応組成(20μl):PCR反応液(2μL)、Enzyme Mix, T7 Express(2μL)、1 x RiboMAXTM Express T7 buffer
反応条件:合成反応(30℃、30min)の後、Dr. GenTLETM Precipitation
Carrier (TaKaRa)を用いてRNAサンプルを回収した。
図8に示すように、5’末端に蛍光色素(FITC)を結合したオリゴDNA(5’−GAAGGACAGTTGCTGCTGTA−3’)(配列番号:15)および3’末端に消光分子(BHQ−1)を結合したオリゴDNA(5’−TACAGTTGGCATTAGTGGTA−3’)(配列番号:16)をそれぞれ蛍光標識プローブおよび蛍光消光プローブとして用いた。
蛍光標識プローブ(20pmol)および蛍光消光プローブ(100pmol)を1mLのハイブリダイゼーション緩衝液(10mM Tris−HCl、10mM MgCl2、pH7.0)に溶解し蛍光強度を測定した。得られた蛍光強度値をF0とした。これにRNAサンプル(15μL)を添加しRNA/DNAのハイブリッドを得た。これに、リボヌクレアーゼA(0.5μg)を作用させた後の蛍光強度値を測定しF1とした。既述の演算式1を用いて補正演算し消光率(Qr)を算出した。この例では、太平洋産クロマグロを判別することを目的とし、その遺伝子を標的遺伝子(配列番号:17)とした。
その結果を図9に示す。一連の結果より、RNAサンプルと蛍光標識プローブが完全相補的であるときにおいて〔すなわち、検出対象部位の塩基がTである対照遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドにおいては〕高い消光率を与え、末端部位において相補性を有さない場合には〔すなわち、検出対象部位の塩基がT以外である標的遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドにおいては〕消光率を著しく減少させることが示された。このように、ハイブリダイゼーション前後における蛍光強度値を測定し、これを演算補正することで太平洋マグロ魚種を判別することができた。
Claims (3)
- 標的遺伝子中の特定の塩基の変異または特定の塩基の存否を判定する遺伝子検知方法であって、前記標的遺伝子のサンプル、および該標的遺伝子に対して野生型または標準型の塩基配列を有する対照遺伝子のサンプルのそれぞれを、(i)5’末端にRNAポリメラーゼプロモーター配列を有するプライマーを含むプライマー対を用いるPCR反応に供して増幅し、(ii)前記PCR反応で得られた二本鎖DNAをインビトロ転写反応に供して一本鎖RNAを形成し、(iii)前記一本鎖RNAに、前記対照遺伝子の塩基配列の少なくとも一部に相補的な配列から成る一本鎖DNAに蛍光色素が結合された蛍光標識プローブをハイブリダイゼーションさせてRNA/DNAハイブリッドを形成させた後、(iv)標的遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドと対照遺伝子サンプル由来のRNA/DNAハイブリッドの蛍光強度を比較する、
以上の諸工程を含むことを特徴とする方法。 - 前記(iii)のRNA/DNAハイブリッド形成工程において、前記対照遺伝子の塩基配列の少なくとも一部に相補的な配列から成る一本鎖DNAに、前記蛍光色素を消光する機能を有する消光色素が結合された蛍光消光プローブを、前記一本鎖RNAにハイブリダイゼーションさせることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記工程(iii)で得られたRNA/DNAハイブリッドをRNアーゼを用いるRNA分解反応に供した後、工程(iv)の蛍光強度の比較を行なうことを特徴とする請求項1または請求項2に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007503741A JP4937106B2 (ja) | 2005-02-18 | 2006-02-17 | 遺伝子検知方法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005041479 | 2005-02-18 | ||
JP2005041479 | 2005-02-18 | ||
JP2007503741A JP4937106B2 (ja) | 2005-02-18 | 2006-02-17 | 遺伝子検知方法 |
PCT/JP2006/302824 WO2006088126A1 (ja) | 2005-02-18 | 2006-02-17 | 遺伝子検知方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2006088126A1 true JPWO2006088126A1 (ja) | 2008-07-03 |
JP4937106B2 JP4937106B2 (ja) | 2012-05-23 |
Family
ID=36916523
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007503741A Expired - Fee Related JP4937106B2 (ja) | 2005-02-18 | 2006-02-17 | 遺伝子検知方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7838269B2 (ja) |
EP (1) | EP1862558A4 (ja) |
JP (1) | JP4937106B2 (ja) |
CN (1) | CN101137759A (ja) |
AU (1) | AU2006215038B2 (ja) |
WO (1) | WO2006088126A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2006215038B2 (en) | 2005-02-18 | 2011-07-07 | Kyushu University, National University Corporation | Gene detection method |
CN103228785B (zh) | 2010-11-24 | 2016-09-07 | 株式会社钟化 | 扩增核酸的检测方法和检测装置 |
US9783844B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-10-10 | Kaneka Corporation | Method for amplifying nucleic acid and method for detecting amplified nucleic acid |
WO2015076356A1 (ja) | 2013-11-22 | 2015-05-28 | 株式会社カネカ | 短鎖rnaの検出方法 |
JP6611206B2 (ja) | 2016-02-09 | 2019-11-27 | 栄研化学株式会社 | 標的核酸を検出する方法およびそれに用いる核酸プローブ |
CN107463796B (zh) * | 2017-07-12 | 2019-10-18 | 北京航空航天大学 | 基于基因共表达网络传播分析的早期致病因子探测方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5256555A (en) * | 1991-12-20 | 1993-10-26 | Ambion, Inc. | Compositions and methods for increasing the yields of in vitro RNA transcription and other polynucleotide synthetic reactions |
AU4745896A (en) * | 1995-01-09 | 1996-07-31 | Ambion, Inc. | Methods and compositions for use in cleavage and detection of base pair mismatches in double-stranded nucleic acids |
JP3968810B2 (ja) * | 1997-01-24 | 2007-08-29 | 東ソー株式会社 | 核酸配列分析方法 |
US20020037507A1 (en) * | 1999-12-16 | 2002-03-28 | Walkerpeach Cindy R. | Compositions, methods and kits for allele discrimination |
JP3965872B2 (ja) * | 2000-06-27 | 2007-08-29 | 日鉄環境エンジニアリング株式会社 | 新規な定量的多型解析方法 |
WO2002008414A1 (fr) * | 2000-06-27 | 2002-01-31 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Nouvelles sondes d'acides nucléiques et procédés d'essai d'acide nucléique par utilisation des mêmes |
JP3963422B2 (ja) * | 2000-08-03 | 2007-08-22 | 日鉄環境エンジニアリング株式会社 | 核酸の測定方法 |
EP1546380A4 (en) * | 2002-05-28 | 2007-02-14 | Us Genomics Inc | METHODS AND APPARATUSES FOR ANALYZING SIMPLE POLYMERS |
AU2006215038B2 (en) | 2005-02-18 | 2011-07-07 | Kyushu University, National University Corporation | Gene detection method |
-
2006
- 2006-02-17 AU AU2006215038A patent/AU2006215038B2/en not_active Ceased
- 2006-02-17 EP EP06713965A patent/EP1862558A4/en not_active Withdrawn
- 2006-02-17 CN CNA200680005232XA patent/CN101137759A/zh active Pending
- 2006-02-17 US US11/884,814 patent/US7838269B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-02-17 WO PCT/JP2006/302824 patent/WO2006088126A1/ja active Application Filing
- 2006-02-17 JP JP2007503741A patent/JP4937106B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2006215038A1 (en) | 2006-08-24 |
US7838269B2 (en) | 2010-11-23 |
EP1862558A1 (en) | 2007-12-05 |
US20080274464A1 (en) | 2008-11-06 |
AU2006215038B2 (en) | 2011-07-07 |
EP1862558A4 (en) | 2009-07-15 |
JP4937106B2 (ja) | 2012-05-23 |
CN101137759A (zh) | 2008-03-05 |
WO2006088126A1 (ja) | 2006-08-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP3394287B1 (en) | A method of fluorescent detection of isothermal loop-mediated amplification (lamp) of a target nucleic acid | |
JP5286283B2 (ja) | 一塩基変異多型(snp)を判別する方法 | |
JP5235905B2 (ja) | 核酸配列の検出方法 | |
US9809846B2 (en) | Compositions, kits, uses and methods for amplified detection of an analyte | |
JP4937106B2 (ja) | 遺伝子検知方法 | |
JP4190562B2 (ja) | 遺伝子配列検査法 | |
KR101358416B1 (ko) | 리가제 반응과 절단효소 증폭반응을 이용한 표적 유전자 또는 이의 돌연변이 검출방법 | |
WO2009036514A2 (en) | Method of amplifying nucleic acid | |
JP2012105644A (ja) | 多型検出用プローブ、多型検出方法、薬効評価方法、および多型検出用キット | |
JP2016534708A (ja) | オーバーラッププライマー及び融解プローブを用いた一塩基多型の検出 | |
CN101246142B (zh) | 一种检测单核苷酸多态性的方法 | |
JP2006075126A (ja) | 一塩基変異を検出する方法および検出用プローブ | |
EP1606389B1 (en) | Methods for polynucleotide sequence detection | |
JP5530185B2 (ja) | 核酸検出方法及び核酸検出用キット | |
JP2004236651A (ja) | 核酸解離曲線の波形を解析ソフトウエアで解析して核酸を同定する方法 | |
JP4310675B2 (ja) | 塩基多型の同定方法 | |
MXPA00005083A (es) | Oligonucleotidos para la amplificacion y deteccion de genes de hemocromatosis. | |
JP2015073506A (ja) | 遺伝子多型の判定方法 | |
JP2009232764A (ja) | ハプロタイプの検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090130 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20110601 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110601 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110708 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110906 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110913 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111004 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20111020 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111108 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111227 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120123 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120221 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150302 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |