JPS6391400A - リンホトキシンの疎水性クロマトグラフイ−による精製法 - Google Patents
リンホトキシンの疎水性クロマトグラフイ−による精製法Info
- Publication number
- JPS6391400A JPS6391400A JP61236719A JP23671986A JPS6391400A JP S6391400 A JPS6391400 A JP S6391400A JP 61236719 A JP61236719 A JP 61236719A JP 23671986 A JP23671986 A JP 23671986A JP S6391400 A JPS6391400 A JP S6391400A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- chromatography
- lymphotoxin
- hydrophobic chromatography
- purification
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 title claims abstract description 15
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- GUPXYSSGJWIURR-UHFFFAOYSA-N 3-octoxypropane-1,2-diol Chemical compound CCCCCCCCOCC(O)CO GUPXYSSGJWIURR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- -1 n-octyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 abstract description 7
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 abstract description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 2
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KYARBIJYVGJZLB-UHFFFAOYSA-N 7-amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid Chemical compound OC1=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(N)=CC=C21 KYARBIJYVGJZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZPZQHISQHRLFP-UHFFFAOYSA-J [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-] Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-] IZPZQHISQHRLFP-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はヒト・リンホトキシンの精製法に係る。更に本
発明は、本発明による精製法によって精製されたヒト・
リンホトキシンに係る。
発明は、本発明による精製法によって精製されたヒト・
リンホトキシンに係る。
ヒト・リンホトキシン（以下、ＬＴという）は、癌細胞
に対し選択的に毒性を示し壊死させる作用を持ち（Ｋｖ
ａｎｓ Ｏ，Ｈ，ら（１９７７年）キャンサー・リサー
チ（（！ａｎｏｅｒ ｎｅ！！、）、 ３７巻。
に対し選択的に毒性を示し壊死させる作用を持ち（Ｋｖ
ａｎｓ Ｏ，Ｈ，ら（１９７７年）キャンサー・リサー
チ（（！ａｎｏｅｒ ｎｅ！！、）、 ３７巻。
８９８頁〕、制癌剤としての応用が期待さｈている。
（従来の技術）
ＬＴは、リンパ芽球様細胞ＲＰＭ工 １７８８からＤＩ
ＣＡＩ！ｉ−セルロース、等電点電気泳動、レジφル・
レクφン・クロマトグラフィー、ポリアクリルアミド・
ゲル電気泳動により精製されることは知られている（
Ａｇｇａｒｗａｌ Ｂ、Ｂ、ら（１９８４年）ザ・リ
サーチＶ・オプ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｎ、 ）、２５９巻、６８６頁Ｓ
ＡｇｇａｒＷ＆１Ｂ、 Ｂ、ら（１９８５年）ザ・ジャ
ーナル・オプ・パイオロジカＶ−ケミストリ゛−（Ｊ、
Ｂｌｏｔ、 Ｃｈｅｎ、 ）、２６０巻、２３３４頁
〕。
ＣＡＩ！ｉ−セルロース、等電点電気泳動、レジφル・
レクφン・クロマトグラフィー、ポリアクリルアミド・
ゲル電気泳動により精製されることは知られている（
Ａｇｇａｒｗａｌ Ｂ、Ｂ、ら（１９８４年）ザ・リ
サーチＶ・オプ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｎ、 ）、２５９巻、６８６頁Ｓ
ＡｇｇａｒＷ＆１Ｂ、 Ｂ、ら（１９８５年）ザ・ジャ
ーナル・オプ・パイオロジカＶ−ケミストリ゛−（Ｊ、
Ｂｌｏｔ、 Ｃｈｅｎ、 ）、２６０巻、２３３４頁
〕。
またＬＴの一次アミノ酸配列はＩ、ＴのｏＤＮＡのクロ
ーニングの結果（Ｇｒａｙ Ｐ、 Ｗ、ら（１９Ｂ４年
）ネイφヤー（１ｉａｔｕｒｅ ）、３１２巻、７２１
頁〕、明らかに々つた。上記Ｔ、Ｔの精製法では無血清
培地を用いてＬＴを誘導後、培養液を濃縮透析するとい
う操作を行っておシ、また回収率は１α７％と低いもの
であった。更に等電点電気泳動、ポリアクリルアミド・
ゲＡ／１１ｔ気泳動等、ＬＴの大量調製法としては不向
きな方法を用いていた。
ーニングの結果（Ｇｒａｙ Ｐ、 Ｗ、ら（１９Ｂ４年
）ネイφヤー（１ｉａｔｕｒｅ ）、３１２巻、７２１
頁〕、明らかに々つた。上記Ｔ、Ｔの精製法では無血清
培地を用いてＬＴを誘導後、培養液を濃縮透析するとい
う操作を行っておシ、また回収率は１α７％と低いもの
であった。更に等電点電気泳動、ポリアクリルアミド・
ゲＡ／１１ｔ気泳動等、ＬＴの大量調製法としては不向
きな方法を用いていた。
（発明が解決しようとする問題点）
細胞の培養には一般に血清が用いられるが、無血清培地
を用いない限り、培地に含まれる蛋白の多くは血清由来
の蛋白である。含血清培地を用いてＩ、Ｔを生産した場
合、血清に由来する蛋白との分離が大きな問題点となる
。またＬＴの大量精製の為には大量の培養液を出発材料
として精製を行なわなければならないが、大量の培養液
をイオン交換クロマトグラフィーで精製する場合には、
大量の培養液を低イオン濃度の透析液に対し透析を行な
わねばならず、これは時間と労力の要るものである。ｌ
たＴ、Ｔの精製の全工程を通しての収率が高くなければ
良い精製法とは言えない。
を用いない限り、培地に含まれる蛋白の多くは血清由来
の蛋白である。含血清培地を用いてＩ、Ｔを生産した場
合、血清に由来する蛋白との分離が大きな問題点となる
。またＬＴの大量精製の為には大量の培養液を出発材料
として精製を行なわなければならないが、大量の培養液
をイオン交換クロマトグラフィーで精製する場合には、
大量の培養液を低イオン濃度の透析液に対し透析を行な
わねばならず、これは時間と労力の要るものである。ｌ
たＴ、Ｔの精製の全工程を通しての収率が高くなければ
良い精製法とは言えない。
本発明者らは以上の様な問題点に対処すぺ〈研究を行っ
た結果、含血清培地を用いた培養液からでも透析操作を
必要としない、且つ高収率の精製法を確立し、・本発明
に至った。
た結果、含血清培地を用いた培養液からでも透析操作を
必要としない、且つ高収率の精製法を確立し、・本発明
に至った。
Ｃ問題点を解決するための手段）
ＬＴ生産細胞を含血清培地で培養し、その培養液に含ま
れるＬＴを金属キレートアフィニティークロマトグラフ
ィー及びＤｙｒｈｖ−七Ｍロースｔ−用いたイオン交換
クロマトグラフィーにより部分精製し、そのＩ、Ｔ標品
を用いてＬＴがクロマトグラフィー担体に吸着され、ま
た溶出されるかを睡々のクロマトグラフィー担体につい
て検討した結果、２０％硫安を含む標品がフェニル−セ
ファロース（ファ〃マシア社）、或イはオクφルーセフ
ァロース（ファルマシア社）に吸着され、また３０％工
≠レンゲリコールを含む緩衝液で溶出されることを見い
出した。
れるＬＴを金属キレートアフィニティークロマトグラフ
ィー及びＤｙｒｈｖ−七Ｍロースｔ−用いたイオン交換
クロマトグラフィーにより部分精製し、そのＩ、Ｔ標品
を用いてＬＴがクロマトグラフィー担体に吸着され、ま
た溶出されるかを睡々のクロマトグラフィー担体につい
て検討した結果、２０％硫安を含む標品がフェニル−セ
ファロース（ファ〃マシア社）、或イはオクφルーセフ
ァロース（ファルマシア社）に吸着され、また３０％工
≠レンゲリコールを含む緩衝液で溶出されることを見い
出した。
疎水性クロマトグラフィー（ハイドロフォービッククロ
マトグラフィー）は、疎水性基を有するクロマトグラフ
ィー担体と蛋白の疎水性部分の親和性の強さの違いによ
って種々の蛋白を分離する方法であゐ。塩を加えてＬＴ
試量溶液のイオン強度を高めると担体とＬＴの疎水性相
互作用が増加し、ＬＴけ担体に吸着される。また吸着さ
れたＬＴはイオン強度を下げ、エチレンゲルコールなど
で極性を低くしたａ″ｔＩ液で溶出可能である。
マトグラフィー）は、疎水性基を有するクロマトグラフ
ィー担体と蛋白の疎水性部分の親和性の強さの違いによ
って種々の蛋白を分離する方法であゐ。塩を加えてＬＴ
試量溶液のイオン強度を高めると担体とＬＴの疎水性相
互作用が増加し、ＬＴけ担体に吸着される。また吸着さ
れたＬＴはイオン強度を下げ、エチレンゲルコールなど
で極性を低くしたａ″ｔＩ液で溶出可能である。
一ハイドロフオービッククロマトグヲフイーに用いる担
体としてはフエニ／Ｌ／基、アルキル基等の疎水性の強
い残基を有している担体が用いられる。ハイドロフォー
ビッククロマトグラフィーに用いられる市販されている
担体としてはオクチル−セファロース、フェニル−セフ
ァロース（ファルマシア社）が知られている。ｔた、こ
れらの方法とゲル罪過等の他の方法を組合わせることに
よシ更に効率よく精製することができる。
体としてはフエニ／Ｌ／基、アルキル基等の疎水性の強
い残基を有している担体が用いられる。ハイドロフォー
ビッククロマトグラフィーに用いられる市販されている
担体としてはオクチル−セファロース、フェニル−セフ
ァロース（ファルマシア社）が知られている。ｔた、こ
れらの方法とゲル罪過等の他の方法を組合わせることに
よシ更に効率よく精製することができる。
（実施例）
以下に実施例を示す。
実施例１
ＬＴ生産細胞の培養
Ｉ、Ｔ生産細胞ＣＨＯ２−３Ｅ−ｄＢは、特願昭６１−
２３６３７に記載の方法なより、ＣＨＯｄｈｆｒ−２−
３株をＬＴ発現ベクターｐｓＶｅＬ’Ｍｈｆｒによシ形
質転換して得た細胞である。この（ＨＯ２−Ｋｍ−４１
３株を２％牛脂児血清を含むＭｖＭアルファ培地（Ｇよ
りＣＯ社製）で培養し、約４万ユニツト／ｍｌのＬＴ活
性を有する培養液１０Ａ’を得た。
２３６３７に記載の方法なより、ＣＨＯｄｈｆｒ−２−
３株をＬＴ発現ベクターｐｓＶｅＬ’Ｍｈｆｒによシ形
質転換して得た細胞である。この（ＨＯ２−Ｋｍ−４１
３株を２％牛脂児血清を含むＭｖＭアルファ培地（Ｇよ
りＣＯ社製）で培養し、約４万ユニツト／ｍｌのＬＴ活
性を有する培養液１０Ａ’を得た。
実施例２
ＬＴの部分精製
キレーテイングーセブアロース６Ｂをカラム（２，５Ｘ
１７ ｃｍ ）に詰め、５１ｎ９ ／ ｍｌの塩化亜
鉛水溶液を通し、亜鉛イオンをゲルにキレートさせた。
１７ ｃｍ ）に詰め、５１ｎ９ ／ ｍｌの塩化亜
鉛水溶液を通し、亜鉛イオンをゲルにキレートさせた。
カラムを蒸溜水で洗浄後、ＬＴを含む培養液ｂｉをチャ
ージした。次に５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐ
Ｈ７，８）、Ｉ Ｍ４化ナトリウム、１ｍＭアジ化ナト
リウムで洗浄し、０から５０ｍＭのイミダゾ−Ｖの直線
濃度勾配をもつ上記バッファー８００ｇｊ？で溶出し九
。Ｉ、Ｔは蛋白の主ピークから遅れて溶出され、精製倍
率約６００倍、回収率８５％で精製された。
ージした。次に５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐ
Ｈ７，８）、Ｉ Ｍ４化ナトリウム、１ｍＭアジ化ナト
リウムで洗浄し、０から５０ｍＭのイミダゾ−Ｖの直線
濃度勾配をもつ上記バッファー８００ｇｊ？で溶出し九
。Ｉ、Ｔは蛋白の主ピークから遅れて溶出され、精製倍
率約６００倍、回収率８５％で精製された。
亜鉛キレートアフイニテイークロマトグフフィーによっ
て精製したＬＴ活性画分を５ｍＭｊＪン酸ナトリウムバ
ッファー（ｐＨ８，０）、１ ｍＭアジ化ナトリウムＳ
ｌＫＳ回透析し、脱塩した。次に同バッファーで平衡
化したＤＩ！！ＡＩＤ−七Ｖロースカラム（１，５Ｘ２
０備）Ｋチャージし、０からα３Ｍの塩化ナトリウムの
直線濃度勾配をもつ同バッファー５００ ｍｌで溶出し
た。ＬＴは０．１Ｍ以下の塩化ナトリウムで溶出され精
製倍率は４．３倍、収率は８８％であった。
て精製したＬＴ活性画分を５ｍＭｊＪン酸ナトリウムバ
ッファー（ｐＨ８，０）、１ ｍＭアジ化ナトリウムＳ
ｌＫＳ回透析し、脱塩した。次に同バッファーで平衡
化したＤＩ！！ＡＩＤ−七Ｖロースカラム（１，５Ｘ２
０備）Ｋチャージし、０からα３Ｍの塩化ナトリウムの
直線濃度勾配をもつ同バッファー５００ ｍｌで溶出し
た。ＬＴは０．１Ｍ以下の塩化ナトリウムで溶出され精
製倍率は４．３倍、収率は８８％であった。
実施例３
ＬＴの７ ｘ ニアＬ／−セファロースＯｆ、−ｄＢに
よる精製 実施例２で得られたＬＴ部分Ｍ農標品に終濃度２０％に
なるように硫安を加え、フェニル−セファロース０Ｌ−
４Ｂカラム（１，５Ｘ５．７ ｃｍ ）にφヤージした
。次に２０％硫安を含む５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ
７，６）、Ｉ Ｍ Ｎａ１ｌ ＆ １ｍＭ ＮｆＬＮ
ｓで洗浄後、硫安濃度を下げる一方工φレンゲリコール
濃度を上げてゆくグラジェントをもつバッファーで溶出
した。ＬＴは第１図に示したように単一ピークとして溶
出された。収率は９５％であシ、５ＤＳ−ポリアクリン
アミドゲル電気泳動でほぼ単一のバンドとして検出され
た。
よる精製 実施例２で得られたＬＴ部分Ｍ農標品に終濃度２０％に
なるように硫安を加え、フェニル−セファロース０Ｌ−
４Ｂカラム（１，５Ｘ５．７ ｃｍ ）にφヤージした
。次に２０％硫安を含む５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ
７，６）、Ｉ Ｍ Ｎａ１ｌ ＆ １ｍＭ ＮｆＬＮ
ｓで洗浄後、硫安濃度を下げる一方工φレンゲリコール
濃度を上げてゆくグラジェントをもつバッファーで溶出
した。ＬＴは第１図に示したように単一ピークとして溶
出された。収率は９５％であシ、５ＤＳ−ポリアクリン
アミドゲル電気泳動でほぼ単一のバンドとして検出され
た。
精製されたＴ、Ｔの比活性は３）ｌｏｕｔ／＋９蛋白で
あった、 実施例４ ＬＩｒのオクチル−セファロース０Ｌ−４ＢＩ／Ｃよる
精製 実施例２で得られたＩ、Ｔ部分ｖＩ製標品に終濃度２０
％になるように硫安を加え、オクチル−セファロース０
Ｌ−ｄＢカラム（ＩＸ４ＣＩ＋１）Ｋチャージした。次
に２０％硫安を含む５ｍＭＩＪン酸バッファー（ｐＨ７
，８） 、１ ｍＭ ＮａＮ５で洗浄後、第２図に示し
たようにステップワイズに溶出した。ＬＴは単一ピーク
として溶出された。回収率Ｆｉ９５％であり、精製され
たＬＴＯ比活性は３Ｘ１０ Ｕ／■蛋白であった。
あった、 実施例４ ＬＩｒのオクチル−セファロース０Ｌ−４ＢＩ／Ｃよる
精製 実施例２で得られたＩ、Ｔ部分ｖＩ製標品に終濃度２０
％になるように硫安を加え、オクチル−セファロース０
Ｌ−ｄＢカラム（ＩＸ４ＣＩ＋１）Ｋチャージした。次
に２０％硫安を含む５ｍＭＩＪン酸バッファー（ｐＨ７
，８） 、１ ｍＭ ＮａＮ５で洗浄後、第２図に示し
たようにステップワイズに溶出した。ＬＴは単一ピーク
として溶出された。回収率Ｆｉ９５％であり、精製され
たＬＴＯ比活性は３Ｘ１０ Ｕ／■蛋白であった。
！１１１ＬＴのフェニル−セファロース０Ｌ−ＡＢカラ
ムクロマトグラフィーの溶出パターンを示す図、第２図
はＬＴのオクφルーセファロース（！Ｌ−ｄＢカラムク
ロマトグヲフイーの溶出パターンを示す図である。
ムクロマトグラフィーの溶出パターンを示す図、第２図
はＬＴのオクφルーセファロース（！Ｌ−ｄＢカラムク
ロマトグヲフイーの溶出パターンを示す図である。
Claims (13)
- （１）疎水性クロマトグラフィーを用いることを特徴と
するヒト・リンホトキシンの精製法。 - （２）クロマトグラフィー担体がフェニル基を有する担
体である特許請求の範囲第１項記載の精製法。 - （３）クロマトグラフィー担体がフェニル−セファロー
スである特許請求の範囲第１項或いは第２項記載の精製
法。 - （４）クロマトグラフィー担体がアルキル基を有する担
体である特許請求の範囲第１項記載の精製法。 - （５）アルキル基がｎ−オクチル基である特許請求の範
囲第４項記載の精製法。 - （６）クロマトグラフィー担体がオクチル−セファロー
スである特許請求の範囲第５項記載の精製法。 - （７）少くとも３×１０＾７Ｕ／ｍｇ蛋白以上の比活性
を有するヒト・リンホトキシン。 - （８）疎水性クロマトグラフィーにより精製された特許
請求の範囲第７項記載のヒト・リンホトキシン。 - （９）クロマトグラフィー担体がフェニル基を有する担
体である特許請求の範囲第８項記載のヒト・リンホトキ
シン。 - （１０）クロマトグラフィー担体がフェニル−セファロ
ースである特許請求の範囲第８項或いは第９項記載のヒ
ト・リンホトキシン。 - （１１）クロマトグラフィー担体がアルキル基を有する
担体である特許請求の範囲第８項記載のヒト・リンホト
キシン。 - （１２）アルキル基がｎ−オクチル基である特許請求の
範囲第１１項記載のヒト・リンホトキシン。 - （１３）クロマトグラフィー担体がオクチル−セファロ
ースである特許請求の範囲第１２項記載のヒト・リンホ
トキシン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61236719A JPS6391400A (ja) | 1986-10-03 | 1986-10-03 | リンホトキシンの疎水性クロマトグラフイ−による精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61236719A JPS6391400A (ja) | 1986-10-03 | 1986-10-03 | リンホトキシンの疎水性クロマトグラフイ−による精製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6391400A true JPS6391400A (ja) | 1988-04-22 |
Family
ID=17004761
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61236719A Pending JPS6391400A (ja) | 1986-10-03 | 1986-10-03 | リンホトキシンの疎水性クロマトグラフイ−による精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6391400A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008018516A (ja) * | 2006-07-14 | 2008-01-31 | Eiji Matsumoto | 果菜カッティング装置 |
-
1986
- 1986-10-03 JP JP61236719A patent/JPS6391400A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008018516A (ja) * | 2006-07-14 | 2008-01-31 | Eiji Matsumoto | 果菜カッティング装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR0139209B1 (ko) | 단백질 정제방법 | |
| JP3379758B2 (ja) | イソプロパノール含有水溶液を用いる核酸のトランスフェクション効率の増強 | |
| KR100771252B1 (ko) | 양이온 교환 크로마토그래피를 통한 약리학적 활성단백질의 정제방법 | |
| JPS63503352A (ja) | タンパク質の精製 | |
| JP2004535197A (ja) | 酵素の精製方法およびその方法で製造された精製済み酵素並びに該酵素の用途 | |
| Dixon et al. | A simple procedure for the preparation of highly purified (sodium+ potassium) adenosinetriphosphatase from the rectal salt gland of Squalus acanthias and the electric organ of Electrophorus electrieus | |
| EP0057600B1 (en) | Affinity resins and their use in isolating bacterial luciferase | |
| JPS63275600A (ja) | 高純度プロテインａ製剤の製法 | |
| Raibaud et al. | Purification of E. coli enzymes by chromatography on amphiphilic gels | |
| JPS6391400A (ja) | リンホトキシンの疎水性クロマトグラフイ−による精製法 | |
| JPS6034916A (ja) | 第１ｘ因子および他のビタミンｋ依存性タンパク質の高純度精製 | |
| Dunn et al. | Purification of Escherichia coli alkaline phosphatase on an ion-exchange high-performance liquid chromatographic column using carboxymethyl dextrans | |
| JPS62259596A (ja) | ハイブリツドタンパク質の精製方法 | |
| JPS61224996A (ja) | マウスインタ−フエロンの精製法 | |
| JP2661790B2 (ja) | 入尿トリプシンインヒビターの精製方法 | |
| Rubiyana et al. | Comparison of immobilized metal affinity chromatography Ni-NTA and Co-TALON for the purification of recombinant human erythropoietin | |
| JPS633796A (ja) | リンホトキシンの精製法 | |
| JPH0679172A (ja) | クロマトグラフィー剤およびタンパク質、ポリペプチドまたは金属の分離のためのその使用法 | |
| US5760187A (en) | Purification process of a human growth hormone | |
| JPH0260316B2 (ja) | ||
| Heinrikson et al. | Purification and characterization of recombinant proteins: opportunities and challenges | |
| JPS633797A (ja) | リンホトキシンの精製方法 | |
| JPS61191699A (ja) | マウスインタ−フエロンの精製法 | |
| JPS6150925A (ja) | 抗原または抗体の精製方法 | |
| US4078972A (en) | Method of purification of carboxypeptidase G1 |