JPS63501124A - ザイモモナス属モ−ビリス型菌株を使用して澱粉水解物をエタノ−ルに転化する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ザイモモナス属モーピリス型菌株を使用して澱粉氷解物をエタノールに転化する 方法発明の背景 （１）発明の分野 本発明は、微好気性条件を使用のもとに高効率菌株のザイモモナス属モーピリス 型細菌を使用する単独段階プロセスで沈澱氷解物をエタノールに転化する方法に 関するものである。

（２）先行技術 従来のエタノール生産方法は酵母を使用する２段階バ・ツチ方法で行われており 、それによって第１段階が培養段階と称される酵母の好気性増殖を含み、第２段 階が小量の酸素の存在或いは不在下のエタノール生産の嫌気性プロセスを含む。

エタノールを生産する第２段階の間さらに酵母を増殖させるために空気或は酸素 を若干添加する必要がある。全体のプロセスの効率が沈降あるいは遠沈のような 装置によって酵母セルの随時の再循環を使用して改良すべき場合、後者を必要と する。酵母の発酵が本質的にエタノール生産の速度と成育の結合に左右されるの で、エタノール生産を最適化させるため、その培地は成育を増加する物質或は精 密に調節される曝気で補足しなければならない。

従って従来の酵母発酵プロセス（第２段階）は大きい接種原サイズ約５００〜１ ０００万セル／　ｍ　Ｌに左右される。好ましい最適発酵温度は３０と４０℃と の間にありかつ生育される熱は、冷却装置の使用によって調節しなければならな い。エタノール９〜１１％（ｖ／　ｖ）を得る発酵時間は、第２段階のパッチ或 は半連続発酵系列プロセスで４０〜６０時間である。この発酵時間は、セル再循 環を介して接種原密度を８０〜１００倍までに増加することによって１０時間ま で減少させることができる。

しかしながら、エタノールに対する澱粉氷解物のコストの効率は最高使用効率及 び１１％（ｖ／　ｖ）エタノールを得るため第２段階のプロセスに対して３〜５ 個の発酵槽を使用する発酵系列プロセスで新鮮な酵母の連続添加の使用が好まし い。

エタノール生産に対する第２プロセスは公知であり、それはザイモモナス属モー ビリス型細菌を使用する（ジョージ　ヴエストン会社のヨーロッパ特許第００４ ７６４１号明細書参照）。このプロセスは上述のように酵母パッチ発酵に対する ２段階プロセスでもあるが、しかしその細菌が生育段階（段階１）に対して空気 の添加を必要としない。このプロセスはセル生育に対する有機或は無機窒素源な らびに追加の栄養素の供給を必要とする可能性がありまた厳密な嫌気性条件が発 酵槽への窒素ガスの遅い泡立ちを要求する。エタノールの生産に対するこのプロ セスの第２段階の間、その糖濃度が６％（−／ｖ）を上回ってはならず、従って 濃縮糖溶液の段階或は連続添加を必要とする。好ましい温度は２８〜３３℃であ りまた好ましいｐＨが５゜５である（この特許からは、そのプロセスの第２段階 で発酵槽への窒素の遅い泡立ちをも必要とするかどうかが明瞭ではない）。

エタノール生産に対する第３プロセスは、第２プロセスで固定化酵母或はザイモ モナス属の菌株を使用し、それぞれ限定量の糖（１０％　ｗ／ｖ）で存在してい ることを説明している（田辺製薬株式会社の英国特許第２０５５１２１号明細書 参照）。

エタノール生産に対する第４プロセスは公知であり、このプロセスではセル再循 環で連続的にザイモモナス属モーピリス型菌株を使用するか（ユニサーチリミテ ッドのオーストラリア特許第ＡＵ−Ｂ−６７６９６／８１号明細書）或は半バッ チ培養条件下の線状のザイモモナス属モービリス型菌株を使用する（ユニサーチ リミテッドのオーストラリア特許第ＡＵ−Ｂ−７８１９９／８１号）。

両事例では発酵温度は１０℃でまたｐＨは、５．０で調節され、培地が酵母抽出 物５〜１０　ｇ／Ｌの添加物をもつ純粋グルコースを含んでいた。

酵母発酵の場合では、炭素源転化に対する諸例は遮糖、グルコース、糖蜜、サト ウキビジュース及び澱粉氷解物であるのが公知である一方、ザイモモナス属発酵 の場合ではそれらの例がグルコースに限定され、固定化セルの場合ではグルコー スおよび糖蜜へ限定され、また本発明者による前述の特許出願に対して遮糖、糖 蜜、サトーキビシロップ、砂糖大根シロップおよびグルコース／果糖混合物類に 限定される。

発明の概要 本発明の目的は、穀粒或は根茎作物からの澱粉氷解物のような澱粉を基礎とする 材料からエタノールを製造する方法を提供することにあり、その場合に変質の純 度が発酵剤としてザイモモナス属モービリス型微生物を使用する方法の成功に対 して重要ではない。

本発明の好ましい目的は、グルコーズ成分の濃度が１０％（、／ｖ）より大きい 発酵培地の存在下でこの方法を行うことにある。

本発明の別の好ましい目的は、単独段階バッチ発酵或は必要に応じて、この培養 方法に対する調節、例えば、供給バッチ、半連続発酵槽系列、連続或は多段階装 置であって、エネルギー人力の少ないも−のを使用するような方法を提供するこ とにある。

本発明の別の好ましい目的は、下記の説明から明瞭になるｔ！ろう。

広汎な面では本発明は、単独発酵培地においてエタノールに対する澱粉氷解物を 発酵させる諸段階を特徴とし、この発酵培地でザイモモナス属モービリス型菌株 を使用する発酵によるエタノール生産に対する方法にある。

それらの発酵段階は、下記より成っている。

（ａｌ単独発酵培地のアミノグルコシダーゼ作用によるグルコースに対する澱粉 の糖化 （ｂ）糖化後単独発酵培地へ添加される菌株の作用によるこの発ｍ培地のグルコ ースからエタノールの生成。

これと異なり、菌株は発酵培地へ添加される澱粉水解物混合物で作用してもよく 、それによってエタノールが生成される。

“澱粉氷解物゛′とは、転化合物としてマルトリン、デキストリン、マルトース 、脂質および蛋白質をもつ主成分としてグルコースを含有する物理、化学或は酵 素処理によって液化される澱粉から得られろ複素混合物である。

゛単独段階プロセス”とは、微生物の生育およびエタノール生成相が同一発酵槽 で発生するプロセスとして規定す・ろ。このプロセスの開始は、その発酵培地を 含む発酵槽に対して添加されるザイモモナス属モービリス型を含む種培養物によ って或は前の発酵生産からの一部分の発酵培地、ザイモモナス属モービリス型を 含む発酵済培地を含む発酵槽に対する発酵培地を添加することによって行うこと ができる。好ましくはこの発酵は、微好気性条件下で行われる。゛微好気性条件 “′とはガス（酸素、空気、窒素等）が発酵槽へ添加されず、また発酵培地の表 面が大気へ曝されない条件として規定する。このザイモモナス属モービリス型微 生物は、エタノールの増殖及び生成に対して空気或は酸素（好気性）或は窒素（ ｆｉ気性）を要求しないが、しかし発酵培地の表面での空気の存在を許容できる 。

好ましい微生物ザイモモナス属モーピリス型の菌株はオーストラリア国、　４０ ６７　クィーンズランド州、セントルシアに所在のクイーンズランド大学の微生 物学部の培養コレクシシンに寄託番号ＶＱＭ２７１６号、第ＵＱＭ２７号、第Ｕ ＱＭ２８１４号及び第ＵＱＭ２８６４号の下に及びアメリカ合衆国、　２０８５ ２メリーランド州、ロックビル、パーク四−ン　ドライブ　１２３０１に所在の アメリカ型式培養物コレクション（ＡＴＣＣ）にそれぞれ寄託番号第３９６７６ 号、第５３４３２号及び第５３４３１号の下に１９８４年４月２４日及び１９８ ６年１月１７日付で寄託されている。

菌株ＵＱＭ２７１６は英国　ＡＢ９　８ＤＧ　アバジーン、アベーロードに所在 のトーレー研究所、工業バクテリア国家コレクションで寄託番号第ＮＣｌＢ１１ １９９号及びＡＴＣＣ寄託番号第２９１９１号及びクィーンズランド大学に寄託 番号第ＵＱＭ２００７号の下に寄託される菌株から連続培養技術を使用する選択 によって派生された。この選択は、親菌株ＵＱＭ２００７に関して改良される性 能及び遮糖化代謝速度に基づいて決定された。

菌株ＵＱＭ２８６４は菌株ＶＱＭ２７１６から派生される果糖使用陰性突然変位 体であり、また第３菌株ＶＱＭ２８４１は菌株ＵＱＭ２００７から派生される果 糖使用陰性突然変位体である。それらの菌種は自由或は固定化形式にしてもよく またそれら菌株の突然変位体及び変種を使用してもよい。

好ましくはそのグルコースは、穀物（例えば、小麦、大麦、燕麦、ライ麦、ライ コムギ、トウモトコシ）或は根茎作物（例えば、カッサバ、クズウコン等）から 得られる澱粉氷解物から得られまた濾過されるか或は濾過されない、或は任意に 指定された他の基質と組み合わせたグルコースシロップはグルコース／果糖混合 物の形式にして発酵槽へ供給してもよい。

本発明の代表的工業用の実施では第３者供給者は発酵槽操作者に対して澱粉加水 分解産物の化学的に不確定（複素）混合物の澱粉氷解物を提供し、上記混合物が 通常供給者によって企業秘密として取り扱われる酵素的或は非酵素的方法によっ てつくられている。（今までのところはザイモモナス属モービリス型を使用する 科学的に十分規定される“澱粉材料”と区別されるように、一連の澱粉氷解物の 複素混合物を発酵させることが可能であると考えられていなかった。） 好ましくはそのグルコース成分は、濃度範囲１０〜３０％（、／ｖ）にすべきで 、濃度範囲１５〜２０％（、／ｖ）が単独バッチ発酵の最高エタノール収量或は 連続供給系の比較的に高いエタノール収量にとって一層好ましいものとされる。

グルコースシロップ及び糖化澱粉の場合では、培地は１つ或はそれ以上の任意の 下記成分を含んでもよい。即ち、ペプトン（カゼイン氷解物）酵母抽出物、燐酸 二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）　、硫酸アンモニウム［（ＮＨ４）２ＳＯ４］ 或は水酸化アンモニウム（ＣＨ４０）Ｔ）　或は尿素及び硫酸マグネシウム（Ｍ ｇ　ＳＯ４，４Ｈ２０）及び燐酸ニアンモニウム［（ＮＨ４）　２　ＨＰＯ，］ である。好ましくはそれらの成分は、それぞれ濃度範囲０．０１乃至０．５％（ ｗ／ｖ）で提供され、はぼ０．０５〜０．５％が好ましいとされる。それらの成 分酵母抽出物及びペプトン（カゼイン氷解物）は、パントテン酸カルシウム或は β−アラニンによって置換することができる。

上述の培地成分は、サト−キビジュース、砂糖大根ジュース或は適当な濃度の糖 蜜、或は最終濃度範囲１．５〜７．５％（乾燥固体）のコーン浸漬リカーの添加 によって置換してもよい。浸漬リカー水は植物材料から澱粉を強制的に出させる ため澱粉製造工業で使用される温式磨砕プロセスの副成物である。使用法に従っ て、全乾燥固体含量は、９〜１３％に変化してもよく或は３５〜５０％へ濃縮し てもよい（動物給餌３０〜３５％（発酵栄養素）それは蛋白質、アミノ酸、炭水 化物、フィチン酸及び多数の無機及び有機形式の異なる鉱物の混合物を含んでい る）。

好ましくはこの発酵プロセスのｐＨは、範囲３．５〜７．０以内ニアリ、初期ｐ Ｈ４，５〜７．０及び３．９と５．０との間の調節が好ましいとされている。こ れと異なり、澱粉氷解物／コーン浸漬リカー混合物の初期ｐＨ通常約４．１及び ４．３と５．０との間に対するこの天然ｐＨの若干の調節によってｐＨ調節装置 を使用しなくてもよく、範囲４．５〜４．５が好ましいとされる。

それから発酵は、進行しかつｐＨがその混合物の天然緩衝作用によって維持され る。このためこのプロセスに重要な経済的長所を生ずる。

好ましくは発酵槽の温度は範囲２５〜４０℃で維持されており、一定温度調節３ ０〜３５℃の間が好ましいとされる。

発明を実施するための最良の形態 本発明を十分理解させるため、この方法の好ましい実施例を説明する。

第１実施例 ・カッサバ根をすり潰し、アミラーゼ酵素（例えばアミログルコシダーゼ）を使 用して６０℃で糖化した。７５％ｇ／Ｌグルコースを含んで加水分解されるマツ シュは、３Ｌ発酵槽へ移された。培地２００ｍＬは、ペプトン（カゼイン氷解物 ）、酵母抽出物燐酸二水素カリウム、硫酸アンモニウム或は尿素及び硫酸マグネ シウムのうち任意の１つの或はそれ以上を含んで無菌に添加され、各成分が濃度 ２％をもち、それによってペプトン及び酵母抽出物をペントテン酸カルシウムに よって置換、或は全培地を適量のサトウキビシロップ、糖蜜或は砂糖大根シロッ プの添加によって置換することができる。

遮糖或はグルコース１０％（、／ｖ）　、酵母抽出物０゜２％（、／ｖ）　、カ ゼイン氷解物０．２％（＊／　ｖ　）　、　Ｋ　Ｈ２ＰＯ４０，２％（ｗ／ｖ） 、或はＭｇ　ＳＯ４，７８２００，２％（、／ｖ）、（ＮＨ４）２Ｓｏ４０，２ ％を含む培地において３７％で増殖されるザイモモナス属モービリス型（ＡＴＣ Ｃ３９６７６）の１２〜２４時間種培養物３００　ｍ　Ｌが発酵槽へ添加された 。初期ｐＨが７゜０へもたらされかつｐＨが２Ｎアルカリ（例えば　８０ｇ　／ 　Ｌ　Ｎ　ａ　ＯＨ）の添加によって５．５で調節された。

培養は、攪拌速度８０ｒｐｍで温度を３５℃にして行われた。

１２時間後、最高エタノール生産量が発生し、転化効率９２％のエタノール濃度 ３６．３１ｇ／Ｌを生じた。

若しカッサバ氷解物が糖化後遠沈される場合、転化効率は、少な（とも９５％ま で増加できる。

第２実施例 グルコース３３０ｇが蒸留水１．ＯＬ中に溶解されかつ１０分間６０℃へ加熱さ れた。５００　ｍ　Ｌ中コーン浸漬リカー（４８〜５０％乾燥物質）１００ｇが 溶解されかっ８００　ｍ　Ｌへ近づけられ、次にグルコース溶液１゜ＯＬへ混合 された。生ずる溶液１．８Ｌが３Ｌ発酵槽へ仕込まれかつ温度が２５〜３８℃へ 調節され、３２℃が最も好ましいものとされる。接種原の添加に先行してそのｐ Ｈを範囲３．９〜５．５にすべきであり、４．２〜５．０が最も好ましいものと されろ。

酵母抽出物３　ｇ／Ｌ、ペプトン３　ｇ／Ｌ及びＫＨ２ＰＯ４、（ＮＨ４）２Ｓ ０４及びＭ２ＳＯ４，７Ｈ２ｏの各々２　ｇ／Ｌと共にグルコース５〜１０％（ ｗ／ｖ）を含む培地で増殖されかつ２２〜３７℃で培養されるバイモモナス属モ ービリス型の１２〜２４時間培養物２００　ｍ　Ｌが発酵槽へ添加された。

グルコースは、澱粉氷解物によって置換してもよく、酵母抽出物、ペプトン、Ｋ 　Ｈ２Ｐ　Ｏ４、ＮＨ４）２Ｓ０４及びＭｇ５Ｏ，，７Ｈ２Ｏ接種原および主発 酵の両段階においてコーン浸漬リカー（４８〜５０％乾燥物質コーン浸漬リカー 溶液）１．５〜７．５％（乾燥物質）によって置換してもよい。

初期ｐＨは４．５へもたらされた。発酵している間そのｐＨは、攪拌速度６０〜 ８０　ｒ　ｐ　ｍにして１〜２Ｎアルカリ　（例えば水酸化ナトリウム８０　ｇ ／Ｌ）の添加によって４．０〜４．１０で調節された。初期混合後攪拌を必要と しない。１７時間後最高エタノール生産量が発生し、エタノール濃度８３．Ｏｇ ／Ｌ或はＮｏ、５４％（ｖ／ｖ）を示した。発酵槽の温度は、好ましくは範囲２ ５〜３９℃に維持され、３２℃が最も好ましいとされる。最高エタノール生産の 時発酵槽でグルコース０．１ｇ／Ｌ以下が残る。

第３実施例 容［ＩＬ中グルコース１６５ｇ及びコーン浸漬リカー（４５〜５０％乾燥物質） ５０ｇを使用して第２実施例を反復した。第２実施例で説明されるように種培養 物１００　ｍ　Ｌを使用して発酵を出発させた。１７時間後最高エタノール生産 が発生し、エタノール濃度８３．７ｇ／Ｌ或は１０．６３％（ｗ／ｖ）を示した 。温度は３２℃で維持されかっｐＨが４．１で調節された。最高生産時グルコー ス０．Ｉｇ／Ｌ以下が残る。

第４実施例 容ｉｌＬ中グルコース１８０６及びコーン浸漬リカー（４８〜５０％乾燥物質） ５０ｇを使用して第２例を反復した。第２例で説明されるように種培養物１００ ｍＬを使用して発酵を出発させた。２３゜６時間後最高生産が発生し、最高生産 時発酵槽でグルコース０．６ｇ／Ｌを残してエタノール濃度９３．１ｇ／Ｌ或い は１１．８％ｃｗ／’Ｖ）を示した。

第５実施例 グルコース２５５ｇ及びコーン浸漬リカー（４８，９８％乾燥物質）７５ｇを含 む培養培地１５００　ｍ　Ｌが１．５Ｌ発酵槽へ仕込まれた。グルコース５％（ 、／Ｖ）、酵母抽出物５　ｇ／Ｌ、ペプトン３　ｇ／Ｌ及びＫ　Ｈ２Ｐ　Ｏ，。

Ｍｇ５Ｏ，／７Ｈ２０及び（ＮＨ４）２Ｓｏ４　の各々２ｇ／Ｌを含む培地にお いて２２〜３０℃で増殖される１２〜２４時間種培養物３００　ｍ　ｌは、２５ 分間環境温度で２５００Ｘｇで遠沈された。生じるセルペレットが保持されかつ グルコース／コーン浸漬リカー混合物の一部分（はぼ２００ｍＬ）を使用してそ れらのセルを再懸濁させた。このセル懸濁液は、次に１．５Ｌ培養容器へ添加さ れた。

培養温度は、６０　ｒ　ｐｍで攪拌して３２℃へ設定された。最も好ましい温度 範囲３０〜３８℃をもつ温度範囲２５〜３４℃が適当である。攪拌は重要ではな い。

ｐＨ調節を必要としない。１５時間後グルコースの使用を完了し、エタノール濃 度８２．９ｇ／Ｌ或は１０゜５％（ｗ／ｖ）を示した。

すべての例において、ザイモモナス属モービリス型の小さい種培養物しか発酵槽 へ添加されなかった。発酵槽の特定条件のために、ザイモモナス属モービリス型 の増殖及びエタノール生産は、正真正銘の単独段階プロセスで同時に発生される 。このためセル懸濁液をつくり、次いで、例えばヨーロッパ特許第００４７６４ ．１号明細書で説明されるように、発酵槽に対してこのセル懸濁液を移すため、 発酵培地で最初ザイモモナス属モービリス型セルを増殖する要求条件が避けられ た。

この発酵を完成する場合、ザイモモナス属モービリス型セルは、その発酵培地か ら分離してもよ（、従ってエタノールが蒸留して除かれる。これと異なり、先行 する発酵から一部分の発酵法培地は、続く発酵に対するザイモモナス属モービリ ス型セルの接種原として発酵槽に対して添加してもよい。

生成されるエタノールはガソリンに対する成分としてまた化学工業、例えば、エ チレンの生産に対する基幹産物として商業価値をもつ一方、他の副成物、二酸化 炭素は、ドライアイスに或りよ藻類バイオマス（人１ｇａｅ　ｂｉｏｍａｓｓ） の増殖に対する炭素源として使用してもよい。

この発酵プロセスは、微生物が発酵プロセスの間相当量の熱を発生するから、小 量のエネルギ入力しか必要としなかった。加うるに、その発酵は、微好性条件で 行われており、それらの発酵成分及び産物が僅かな機械攪拌及びｐＨ調節しか必 要としない。（場合によっては、ｐＨ調節を必要としない。） 多数の実験の示すところによれば、その発酵プロセスの成功は、濾過されない氷 解物を使用したから、基質の品質に全面的に左右されない。

本発明は上述した特定の実施例に限定するものではなく、特許請求の範囲で規定 される本発明の範囲を逸脱することなく、それらの実施例に対して各種の変形及 び変更を行うことができる。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の７第１項） 昭和６２年６月２５日 １、国際出願番号 ユ・′、／−ぐ７　亡　７．ンｙ；に ＰＣＴ／ＡＵ　８６１００３１５ ２　発明の名称 ザイモモナス属モービリス型菌株を使用して澱粉氷解物をエタノールに転化する 方法３、特許出願人 ユニバージティー　オブ　クイーンスラント４代理人 ５、　補正書の提出年月日 ２７）単独発酵培地において、この発酵培地でザイモモナス属モービリス型菌株 を使用し、その際この培地のグルコース濃度が範囲１０％乃至３０％（、／ｖ） にあるエタノールに対して澱粉氷解物を発酵させる段階よりなることを特徴とす る発酵によるエタノール製造方法。

２８）ザイモモナス属モービリス型の菌株がグルコース耐性菌株であることを特 徴とする特許請求の範囲第２７項記載の方法。

２９）ザイモモナス属モーピリス型セルが゛″自由生活性セル”であることを特 徴とする特許請求の範囲第１項乃至第２５項、第２７項或は第２８項のいずれが １項記載の方法。

国際調査報告 ｂｕａ＋＊ｍ−＠＋”ム・−＜ｌ＋４’ｌ　ＮφＰＣＴ／Ａｌｌ　Ｉ’１６１０ １’＋１１１；讐０．８６０４９２５　ＮＬ　８６００４３１　ＺＡ　８６０１ ３０８　ＡＵ５５１０３／８６εＮＤ　ＯＦ　ＡＮＮＥＸ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）単独発酵培地において、この発酵培地でザイモモナス属モーピリス型菌株を 使用すろ澱粉水解物をエタノールに発酵させる段階を特徴とする発酵によるエタ ノール生産方法。 ２）ザイモモナス属モーピリス型がＡＴＣＣの寄託番号第３９６７６号或はＡＴ ＣＣ第３９６７６号の突然変位体或は変種の下にＡＴＣＣにおいて寄託されてい る菌株であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３）ザイモモナス属モーピリス型が寄託番号第２９１９４号或はＡＴＣＣ第２９ １９１号の突然変位体或は変種の下にＡＴＣＣにおいて寄託されている菌株であ ることを特徴とすろ特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４）ザイモモナス属モーピリス型がＡＴＣＣの寄託番号第５３４３１号或はＡＴ ＣＣ第５３４３１号の突然変位体或は変種の下にＡＴＣＣにおいて寄託されてい る菌株であることを特徴とすろ特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５）ザイモモナス属モーピリス型がＡＴＣＣの寄託番号第５３４３２号或はＡＴ ＣＣ第５３４３２号の突然変位体或は変種の下にＡＴＣＣにおいて寄託されてい る菌株であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６）（ａ）発酵培地のアルミログルコシダーゼ作用によるグルコースに対する澱 粉の糖化； （ｂ）糖化後発酵培地に対して添加される菌株の作用により発酵培地のグルコー スからエタノールの生成； 上記発酵段階から成ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ７）菌株が発酵培地へ添加されろ澱粉水解物混合物へ働き、それによってエタノ ールを生成することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８）澱粉或は澱粉水解物が殼粒或は根茎作物から得られることを特徴とする特許 請求の範囲第１項乃至第７項のいずれか１項記載の方法。 ９）殼粒が小麦、大麦、燕麦、ラィ麦、トゥモロコシ或はライコムギから成るこ とを特徴とする特許請求の範囲第８項記載の方法。 １０）根茎作物がカツサバ或はクズウコンから成ることを特徴とする特許請求の 範囲第８項記載の方法。 １１）澱粉水解物が澱粉加水分解産物の化学的に不確定（或は複素）混合物の形 状であり、上記混合物が酵素的或は非酵素的方法によってつくられることを特徴 とする特許請求の範囲第７項記載の方法。 １２）発酵培地のグルコース濃度が範囲１０〜３０％（ｗ／ｖ）にあることを特 徴とする特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいずれか１項記載の方法。 １３）発酵培地が１つ或はそれ以上の任意の下記成分、即ち、ペプトン（カゼイ ン水解物）、酵母抽出物、燐酸二水素カリウム（或はアンモニウム或はナトリウ ム）、硫酸アンモニウム、或いは水酸化アンモニウム或は尿素、硫酸マグネシウ ム或は燐酸二ァンモニウムを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第 １２項のいずれか１項記載の方法。 １４）各成分の濃度が範囲０．０１〜０．５％（ｗ／ｖ）にあることを特徴とす る特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １５）各成分の濃度が範囲０．０５〜０．５％（ｗ／ｖ）にあることを特徴とす る特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １６）酵母抽出物及びペプトンがパントテン酸カルシウム或はβ−アラニンであ ることを特徴とする特許請求の範囲第１３項乃至第１５項のいずれか１項記載の 方法。 １７）発酵培地がコーン浸漬リカーを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１ ３項乃至第１６項のいずれか１項記載の方法。 １８）コーン浸漬リカーの濃度が範囲２．０〜７．０％（ｗ／ｖ）にあることを 特徴とする特許請求の範囲第１７項記載の方法。 １９）発酵培地のｐＨが範囲３．５乃至７．０以内に維持されることを特徴とす る特許請求の範囲第１項乃至第１８項のいずれか１項記載の方法。 ２０）ｐＨが範囲３．９乃至５．０にあることを特徴とする特許請求の範囲第１ ９項記載の方法。 ２１）発酵段階の間ｐＨ調節がない特許請求の範囲第１項乃至第１８項のいずれ か１項記載の方法。 ２２）発酵槽の温度が範囲２５℃乃至４０℃に維持されることを特徴とする特許 請求の範囲第１項乃至第１８項のいずれか１項記載の方法。 ２３）発酵槽の温度が範囲３０℃乃至３５℃に維持されることを特徴とする特許 請求の範囲第２１項記載の方法。 ２４）発酵を完了する場合、ザイモモナス属モーピリス型セルが発酵培地から分 離されかつエタノールが蒸留して除去されることを特徴とすろ特許請求の範囲第 １項乃至第２２項のいずれか１項記載の方法。 ２５）先行する発酵から一部分の発酵培地が続く発酵に対してザイモモナス属モ ーピリス型セルに対する接種原として発酵槽に添加されていることを特徴とする 特許請求の範囲第１項乃至第２３項のいずれか１項記載の方法。 ２６）特許請求の範囲第１項乃至第２５項のいずれか１項記載の方法により澱粉 材料からつくられるエタノール。