JPS63503200A - アミログルコシダーゼとジモモナスモビリスを用いて前処理液化澱粉をエタノールに転化する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １、発明の名称 アミログルコシダーゼとジモモナスモビリスを用いて前処理液化澱粉をエタノー ルに転化する方法２、発明の背景 （１）発明の分野 本発明は好ましくは微好気性条件下で高効率菌株細菌ジモモナスモビリスを用い て前処理液化澱粉をエタノールに転化する方法に関するものである。

（２）先行技術 エタノールの伝統的製法は酵母を使用する２段階バッチ法で実施し、その第１段 階では成長段階と呼ばれる酵母の好気性増殖を必要とし、第２段階では少量の酸 素の存在あるいは不在においてエタノールの嫌気性製法を必要とする。前記エタ ノール生成の第２段階中酵母をさらに増殖させるために、僅少の空気または酸素 の添加を必要とする。全工程の効率を沈澱法または遠心分離法を使用して増大さ せる場合は後者が必要である。酵母発酵が本質的に生長とエタノール生成速度と の一致にかかっているので、エタノール生成を最も効果的にするためには、生長 強化物質化又は通気をきめ細かく制御して培養基を補足する必要がある。

伝統的な酵母発酵法（第２段階）は従って１　ｍ　ｌ当り約５００万乃至１００ ０万細胞という大型接種物によっている。発酵の好ましい最適温度は３０℃と４ ０℃との間で、発生熱は冷却装置を使用して制御する必要がある。９％乃至１１ ％（ｖ／ｖ）のエタノールを得る発酵時間は第２段階又は半連続発酵装置法で４ ０乃至６０時間である。この発酵時間は接種物密度を細胞再循環法によって８０ 乃至１００倍だけ増大させて１０時間にまで短縮できる。しかし、澱粉氷解物の エタノール転換法の原価効率を考えた場合、最大限の利用効率と１１％（ｖ／ｖ ）エタノールを得るには第２段階法の３乃至５基の発酵槽を用いて新鮮な酵母を 発酵装置工程で連続添加する方法が好ましい。

エタノール生成の２つ目の方法は周知の細菌ジモモナスモビリス（ジョージ　ウ ニストン　リミテッド名義のヨーロッパ特許第４７６４１号参照）を利用するも のである。この方法はまた酵母ハツチ発酵で上述した２段階法であるが、細菌は その生長段階（第１段階）の空気添加を必要としないが、その代りに十分な窒素 を供給し条件を嫌気性にしておく必要がある。エタノール生成工程の第２段階中 は糖濃度を６％（Ｗ／ｖ）以下に保たねばならないので、濃縮糖溶液を段階的に 間断な（ずっと添加する必要がある。好ましい温度は２８℃乃至３３℃、好まし いｐＨは５．５である。この方法では、栄養素をさらに必要とするのと同様に窒 素の供給も必要である。

エタノール生成の第３の方法は上述した２段階法におけるジモモナスモビリスの 固定化酵母又は菌株を用い、そのおのおのに、制限量の糖（１０％（ｗ／ｖ）） が含まれるようにする（田辺製薬株式会社名義の英国特許第２０５５１２１号参 照）。

エタノール生成の第４法は周知であって、これはジモモナスモビリスを細胞再循 環（オーストラリア特許第ＡＵ−Ｂ−６７６９６／８１号）と共に連続利用する か、あるいは柔毛性ジモモナスモビリス菌株を半バッチ培養条件（オーストラリ ア特許ＡＵ−Ｂ−７８１９９／８１号）下で利用するものである。両者の場合と も、発酵温度を３０℃に制細し、ｐＨを５．０に抑え、培養基には１ｔ！あたり ５乃至１０ｇ酵母抽出物の添加で純粋グルコースを含有させる。

酵母発酵の場合、炭素源転換の代表例はスクロース、グルコース、糖みつ、さと うきびジュースおよび澱粉氷解物で周知のものであるが、前記ジモモナスモビリ ス発酵の場合、代表例はグルコースに限られ、また固定化細胞の場合、グルコー スおよび糖蜜に限られるが、本発明者の先の特許出願では、スクロース、糖蜜、 さ′とうきびシロップ、テンサイ糖シロップおよびグルコースとフルクトースの 混合物に限られている。

３、発明の概要 本発明の目的は非固定又は固定化形態あるいはその双方の組合せで、酸素アミロ グルコシダーゼ（ＥＣ３゜２．１．３）及びジモモナスモビリスの総合作用を利 用しテ穀物、トウモロコシおよびカッサバの前処理液化澱粉のような澱粉物質か らのエタノール生成の方法を提供することにある。

本発明の他の目的はこの転化法を単一段階法で実施するエタノール生成方法を提 供することにある。

本発明のその他の目的はこの転化法を発酵培養基の存在において実施し、その際 澱粉成分濃度が１０％（ｗ／ｖ）を越えるようにしたエタノール転化法を提供す ることにある。

本発明のさらに他の目的はエネルギー投入量の少ない単一段階バッチ発酵、ある いは、必要の場合はこの培養法の調整装置たとえば、流加半連続発酵装置、連続 又は多段階システムを利用するような方法を提供することにある。

伝流な態様において、本発明は、次の工程を特徴とする発酵槽での前処理液化澱 粉物質からのエタノール生成の方法にある。

（ａ）前処理液化澱粉物質を糖化し、酸素アミログルコシダーゼによりグルコー スにする工程、および（ｂ）　発９　培ｉ　ｉの存在において微生物ジモモナス モビリスを使用してグルコースを発酵させてエタノールにする工程。

「前処理液化澱粉」は植物物質を含む澱粉の湿式または乾式製粉から得られるモ リトリン、デキストリン、澱粉、脂質および蛋白質の複合混合物であり、その生 成物を天然、化学あるいは酸素薬剤で処理して澱粉の粘度を低下させ、従って比 較的高い濃度をその後の発酵工程あるいはその他食品産業に使用できる。

好ましくは、糖化と発酵工程を同一発酵槽において単一段階工程で実質的に同時 に実施する乙とであり、添加されるアミログルコシダーゼの量をなるべきなら調 整あるいは調節して、発酵の前あるいは発酵と同時に十分なグルコースが糖化に より常に生成されて、発酵速度ジモモナスモピリスにより要求されるエタノール の発生に合わせる。

「単一段階法」を生長と生産相が同一発酵槽で起きる方法と規定する。工程の開 始を発酵培養基の入った発酵槽に添加されたジモモナスモビリスを含有するシー ド培養によるか、或いは先の発酵運転からの発酵培養基の一部を含有する発酵槽 に発酵培養基を添加によるいずれかで実施する。前記培養基にはジモモナスモビ リスが含まれている。

発酵を好ましくζよ微好気性条件下で実施する。

「微好気性条件」とは発酵槽にガス（酸素、空気窒素等）を添加しないで、発酵 培養基面を大気に暴露する状態を規定する。前記ジモモナスモビリス生物体は、 エタノールの生長と生成に空気または酸素（好気性の）または窒素（嫌気性の） を必要としないが、発酵培養基面の空気の存在を許容できる。

前記微生物ジモモナスモビリスの好ましい菌株をオーストラリア連邦国、クイン スランド州、セント　ルシー７に所在のザ　ユニバシティー　オブ　クインスラ ンド、微生物学部の培養物コレクションに寄託番号筒ＵＱＭ２７１６号、第ＵＱ Ｍ２８４１号及び第ＵＱＭ２８６４号に基づいて寄託すると共に、アメリカ合衆 国、メリーランド州　２０９５２．ロックビル、パークローンドライブ　１２３ ０１に所在のアメリカ型培養物コレクション（Ａ、ＴＣＣ）に１９８４年４月２ ４日に寄託番号第３９６７６号及び第５３４３２号に基づいて、１９８６年１月 １７日に寄託番号第５３４３１号に基づいてそれぞれ寄託した。

前記第ＵＱＭ２７１６号菌株を連続培養技術を用いてイギリス国、アバディーン 、アッベイロード、ドアレイリサーチステーションに所在の工業バクテリヤの国 際コレクシぢン（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓ ｔｒｉａｌ　Ｂａｃｔｅｒｉａ）における寄託番号第ＮＣｌＢ１１１９９号と、 ＡＴＣＣ寄託番号第２９１９１号と、ザ　ユニバシティー　オブ　クインスラン ドの寄託番号筒ＵＱＭ２００７号とに基づいて寄託した菌株から選択誘導したも のである。選択を、親株筒ＵＱＭ２００７号に対するスクロース転換の改善能力 と代謝速度で決める。

前記第ＵＱＭ２８６４号菌株は第ＵＱＭ２７１６号菌株からの誘導フルクトース 利用陰性変異体であり、第３菌株第ＵＱＭ２８４１号は第ＵＱＭ２００７号菌株 からの誘導フルクトース利用陰性変異体である。菌株は非固定化又は固定化品種 でもよく、またその変異体又は変異株も利用できる。

前処理液化澱粉を好ましくは穀物（たとえば、小麦、大麦、燕麦、ライ麦、ライ コムギ、トウモロコシ、カッサバ、クズウコン等）から得ることであり、それを 濾過または不濾過、あるい（よその他指定支持体であればどのようなものの組合 わせで可溶性にした形で発酵槽に供給できる。澱粉物質に適用される前処理法は その物質に左右される。

本発明の商業的に実現された主要点は、第三者供給者が発酵槽運転者に、生成物 の化学的未確定（「複合」）混合物の形になっている前処理液化澱粉を供給でき ることである。前記混合物は前記供給者によって企業秘密として通常取扱われて いる酵素法または非酵素法で生成される。

好ましくは、澱粉成分が１０％乃至３０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲であることであ るが、単一バッチ発酵における最大エタノール収量又は連続供給システムにおい てそれ以上の収量を得るためにさらに好ましくは１５％乃至２０％（ｗ／ｖ）の 濃度範囲である。

好ましくは、発酵培養基には次の成分のうち１つ以上が含まれる。アミログルコ シダーゼ（ＥＣ３，２゜１．３）と、ペプトン（カゼイン氷解物）と、酵母抽出 物ト、燐酸二水素カリウム（またはアンモニウムまたはナトリウム）と、硫酸ア ンモニウム、または水酸化アンモニウムあるいは尿素及び硫酸マグネシウム。

アミログルコシダーゼの例外はあるが、前記成分をおのおの約０．０１％乃至０ ．５％の範囲、好ましくは、０．２％の濃度で備える。前記成分アミログルコシ ダーゼをむしろ１１当り１０乃至１００ｍｇすなわち澱粉１ｇ当り０．３２乃至 １，０Ｇｐｕの濃度範囲で備え、それによってＧｐｕがグルコース生成ユニット （１つのユニットは５５℃の温度、ｐｉ４４．５で３分間に可溶澱粉から１．０ ｍｇのグルコースを遊離させる）における酵母活性を湿す。前記成分酵母抽出物 とペプトン（カゼイン氷解物）をパントテン酸カルシウムまたはβアラニンで置 換できる。

アミログルコシダーゼは例外として、上記の培養基成分を、適当な濃度のとうも ろこし浸漬液、さとうきびジュースまたはシロップあるいは糖蜜で置換できる。

好ましくは、発酵工程のｐＨを３．５乃至７．０の範囲内におくが、初期ｐＨを ４．５乃至７．０に、特に３．９乃至５．０の調整が好ましい。変形例としてｐ Ｈの調整を使用せず、前処理液化澱粉・とうもろこし浸漬液混合物の初期ｐＨを 通常約４．１とし、またこの自然ｐＨを約４．３乃至５．０に微調整し、４゜３ 乃至４．５の範囲にすることが好ましい。その時発酵が進むが、ｐＨを前記混合 物の自然緩衝作用で保持する。これが工程にとって重要な経済的利点となる。

発酵槽内の温度を２５℃乃至４０℃の範囲に保持することであるが、３０℃乃至 ３５℃に恒温調整することが好ましい。

４好ましい実施態様の詳細な説明 本発明を完全に理解できるように、本発明の好ましい実施例を以下に詳述する。

第１実施例 ６００ｇのマルトリン（ＤＥＩＯ）を２１の蒸留類に可溶化した。７５ｇのとう もろこし浸漬液（５０％固形分）の添加後、混合物を５乃至１０分間９２℃の温 度に加熱し、４４発酵槽に移動した。冷却後その量に蒸留水を加えて２７００　 ｍ　ｌにした。この発酵培養基に澱粉１ｇあたり０．６４Ｇｐｕ等量のアミログ ルコシダーゼを添加しｔこ。１０％（Ｗ／ｖ）グルコース、０．２％（ｗ／ｖ） 酵母抽出物、０．２％（Ｗ／ｖ）カゼイン氷解物（ペプトン）、０．２％（Ｗ／ ｖ）　燐酸二水素カリウム、０．２％（Ｗ／Ｖ）水和硫酸マグネシウム、０．２ ％（ｗ／ｖ）硫酸アンモニウムを含有する培養基で３７℃の温度で生長させた１ ２乃至２４時間シード培養ジモモナスモビリスを３００　ｍ　ｌ　発酵槽に添加 した。

初期ｐＨを４，８に導いて、アルカリ性２Ｎ（たとえば１１当り８０ｇのＮａ０ Ｈ）の添加によりｐｂを４．５に調節した。３５℃の温度で１５Ｏｒｐｍの攪拌 速度で培養を実施した。

１５時間後、エタノール生成が最高に達し、エタノール濃度が１１当り７８ｇす なわち９．７８％（ｖ１５００ｇのマルトリンＭ−１００を５乃至１０分間９２ ℃の温度で加熱した２ｊ’の蒸留水で可溶化して、４１発酵槽に移動させた。ペ プトン（カゼイン氷解物）、酵母抽出物、燐酸二水素カリウム、硫酸アンモニウ ム又は尿素又はアンモニヤ又は燐酸二水素アンモニウム及び水和硫酸マグネシウ ムのいずれか１つ以上を含み、おのおのの成分が０．２％（ｗ／ｖ）の濃度をも つ２００　ｍ　ｌの培養基を無菌にして添加し、それによってペプトンと酵母抽 出物をパントテン酸カルシウムで置換できるか、あるいは全培養基を適量のとう もろこし浸漬液、さとうきびシロップ、糖蜜またはテンサイシロップの添加で置 換できる。

第２実施例に説明したように生長に１２乃至２４時間シード培養ジモモナスモビ リスの３００　ｍ　ｌを、１ｇ　当す０　、６４　Ｇ　ｐ　ｕ等量のアミログル コシダーゼとともに発酵槽に添加した。初期ｐＨを５．０に導き、アルカリ性２ Ｎ（たとえば１ＪＮａＯＨ当り８０ｇ）の添加によってｐＨを４．５に調節した 。３５℃の温度で１５Ｏｒｐｍの攪拌速度で培養を実施した。

１５時間後、エタノール生成が最高に達し、エタノール濃度が１１当り７８ｇす なわち９．３６％（ｖ／Ｖ）になった。

第３実施例 で溶融し、１０分間９２℃に加熱した。７００　ｍ　ｊ中で、９ｇのＷＪｆｔ抽 出物、９　ｇのペプトンおよび各６ｇの燐酸二水素カリウム、水和硫酸マグネシ ウムおよび硫酸アンモニウムを溶融する。培養基全部を適量のとうもろこし浸漬 液（量で１％乃至５％）に加えて澱粉氷解物、さとうきびシロップ又はジュース 又は糖蜜、或いはテンサイシロップ又は糖蜜の添加で置換できる。

前記２１のマルトリンに加えて７００　ｍ　ｌの栄養素溶液を３１発酵槽に装填 し、温度を２５℃乃至３８℃、最も好ましくは３０℃乃至３５℃に調整する。接 種物の添加に先立って、ｐＨを４．５乃至６．５、最も好ましくは５．０乃至５ ．５の範囲内においた。

１４当り３ｇの酵母抽出物、ＩＲ当り３ｇのペプトンおよび１１当り各２ｇの燐 酸二水素カリウム、水和硫酸マグネシウム及び硫酸アンモニウムを加えた５％乃 至１０％（Ｗ／Ｖ）グルコースを含有する培養基中で生長させ、３０℃乃至３７ ℃の温度で培養した３００　ｍ　ｊの１２乃至２４時間シード培養ジモモナスモ ビリスを１ｔ！当り４００　ｍ　ｇのアミログルコシダーゼ（酵母１ｇ当り１２ ００００）といっしょに発酵槽（３４）に添加した。

初期ｐＨを４．５乃至６．５に導き、６．０を選択した。発酵工程中、ｐｈをア ルカリ性２Ｎ（たとえば１４当り８０ｇのＮａ０Ｈ）を添加して４．５に調節し た。最低６０　ｒ　ｐｍの攪拌速度で３５℃で実施した。

２２時間後、エタノ、−ル生成は最高に達し、ＩＪ！当り８９．７ｇすなわち１ １．４％（ｖ／ｖ）のエタノール濃度になった。発酵槽の温度をむしろ２８℃乃 至４０℃の範囲、最も好ましくは３５℃の温度に保持する。

第４実施例 １４当り３００　ｍ　ｇのアミログルコシダーゼを発酵槽に添加し、１８時間発 酵を実施した第３実施例を反復した。

エタノールの濃度はその結果１１当り８８．６ｇすなわち１１．２％（ｖ／ｖ） となった。

第５実施例 １１当り２０　ｍ　ｇのアミログルコシダーゼを使用し、発酵時間を４３時間に して第４実施例を反復した。エタノール濃度はその結果１１当り８６．４ｇすな わち１１．０％（ｖ／ｖ）となった。

生成エタノールは、ガソリン成分として、あるいは化学工業たとえばエチレンの 生産の基礎生成物として商業価値を有し、一方それ以外の副生成物、二酸化炭素 をドライアイスに、あるいは藻類バイオマス生長に必要な炭素源として使用でき る。

微生物としてただ低エネルギーの投入を必要とする発酵工程では、その工程中に かなりの発熱がある。加えて、機械的攪拌とｐＨ調節をほとんど必要としない発 酵成分と生成物への通気も、窒素ポンプの増設を必要としない微好気性条件で発 酵を実施する。

発酵が完了すると、ジモモナスモピリス細胞を発酵培養基から分離させ、エタノ ールを蒸留できる。変形例として先行発酵で発酵させた培養基の一部を、後続発 酵のジモモナスモビリス細胞の接種物として発酵藻に添加することができる。

経験から、発酵法が成功するかどうかはすべてが基質の品質によるものでないこ とがわかった。

本発明は上述した実施例に制限するものではなく、様々の変更と修正を特許請求 の範囲に明記された本発明の範囲から逸脱することなしに上述の実施例に行うこ とができる。

国際調査報告 １１１ｍ５ｌｌｌＬｌａｌＡ＊−ｋｊ１ｍＮ＆　ＰＣＴ７Ａυ　８７１００１２ ０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）澱粉物質を糖化して酵母アミログルコシダーゼによりグルコースにする工程 （ａ）と、前記グルコースを発酵培養基の存在において微生物ジモモナスモピワ スを使用して発酵させエタノールにする工程（ｂ）とから成ることを特徴とする 発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 ２）ジモモナスモビリスは寄託番号第３９６７６号に基づいてＡＴＣＣに寄託さ れた菌株又はＡＴＣＣ寄託第３９６７６号の変異体もしくは変異株であることを 特徴とする特許請求の範囲第１項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノー ル生成法。 ３）ジモモナスモビリスは寄託番号第２９１９１号に基づいてＡＴＣＣに寄託さ れた菌株又はＡＴＣＣ寄託第２９１９１号の変異体もしくは変異株であることを 特徴とする特許請求の範囲第１項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノー ル生成法。 ４）ジモモナスモビリスは寄託番号第５３４３１号に基づいてＡＴＣＣに寄託さ れた菌株またはＡＴＣＣ寄託第５３４３１号の変異体もしくは変異株であること を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノ ール生成法。 ５）ジモモナスモビリスは寄託番号第５３４３２号に基づいてＡＴＣＣに寄託さ れた菌株またはＡＴＣＣ寄託第５３４３１号の変異体もしくは変異株であること を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノ ール生成法。 ６）前記糖化と発酵工程とを同時に単一段階工程で同一発酵槽において実施し、 ジモモナスモビリス細胞の数を調整または調節して糖化工程により生成されるグ ルコースを直ちに発酵させてエタノールにすることを特徴とする特許請求の範囲 第１項乃至第５項のいずれか１項に記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノ ール生成法。 ７）発酵を微好気性条件下で実施することを特徴とする特許請求の範囲第１項乃 至第６項のいずれか１項に記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成 法。 ８）澱粉水解体を、穀物、とうもろこし、カッサバ又はクズウコンから得ること を特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれか１項に記載の発酵槽に おける澱粉物質からのエタノール生成法。 ９）穀物は、小麦、大麦、燕麦、ライ麦、ライコムギから成ることを特徴とする 特許請求の範囲第８項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 １０）澱粉を漉過又は未濾過可溶化形にして発酵槽に供給することを特徴とする 特許請求の範囲第８項又は第９項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノー ル生成法。 １１）澱粉の濃度を１０％乃至３０％（Ｗ／Ｖ）の範囲にすることを特徴とする 特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいずれか１項に記載の発酵槽における澱粉 物質からのエタノール生成法。 １２）澱粉の濃度を１５％乃至２０％（Ｗ／Ｖ）の範囲にすることを特徴とする 特許請求の範囲第１１項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法 。 １３）発酵培養基には次の成分すなわち、アミログルコシダーゼ（ＥＣ３．２． １．３）、ペプトン（カゼイン水解物）、酵母抽出物、燐酸二水素カリウム（ま たはアンモニウムまたはナトリウム）、硫酸アンモニウム、または水酸化アンモ ニウム、又は尿素及び硫酸マグネシウムが含まれることを特徴とする特許請求の 範囲第１項乃至第１２項のいずれか１項に記載の発酵槽における澱粉物質からの エタノール生成法。 １４）各成分の濃度はアミログルコシダーゼを例外として、０．０１％乃至８． ５％（Ｗ／Ｖ）の範囲にすることを特徴とする特許請求の範囲第１３項記載の発 酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 １５）各成分の濃度はアミログルコシダーゼを例外として、０．２％（Ｗ／Ｖ） であることを特徴とする特許請求の範囲第１４項記載の発酵槽における澱粉物質 からのエタノール生成法。 １６）アミログルコシダーゼの濃度は１ｅ当り１０乃至１００ｍｇ又は澱粉１ｇ 当り０．３２乃至１０．Ｇｐｕの範囲であることを特徴とする特許請求の範囲第 １３項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 １７）酵母抽出物とペプトンを、パントテン酸カルシウム又はβ−アラニンで置 換することを特徴とする特許請求の範囲第１３項乃至第１６項のいずれか１項に 記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 １８）発酵培養基のｐＨを３．５乃至７．０７範囲内に保持することを特徴とす る特許請求の範囲第１項乃至第１７項のいずれか１項に記載の発酵槽における澱 粉物質からのエタノール生成法。 １９）ｐＨは、４．５乃至５．０の範囲にすることを特徴とする特許請求の範囲 第１８項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 ２０）温度を３４℃乃至４０℃の範囲に保持することを特徴とする特許請求の範 囲第１項乃至第１９項記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 ２１）温度を３５℃で保持することを特徴とする特許請求の範囲第２０項記載の 発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 ２２）発酵が完了すると、ジモモナスモピリス細胞を発酵培養基から分離し、エ タノールを蒸留することを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第２１項のいず れか１項に記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 ２３）先行発酵から発酵培養基の一部を後続発酵のジモモナスモピリスの接種物 として発酵槽に添加することを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第２１項の いずれか１項に記載の発酵槽における澱粉物質からのエタノール生成法。 ２４）特許請求の範囲第１項乃至第２３項のいずれか１項に記載の発酵槽におけ る澱粉物質からのエタノール生成法で生成したエタノール。