JPS63500591A

JPS63500591A - プラスモディウム　ビバックス　スポロゾイド外被タンパク質に相当する免疫原性ペプチド抗原

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Publication number: JPS63500591A
Application number: JP61503736A
Authority: JP
Inventors: アーノット，デイビッド　イー; エネア，ヴィンセンゾ; ヌッセンツヴアイク，ルース　エス; ヌッセンツヴアイク，ヴィクター　エヌ
Original assignee: ニユ−ヨ−ク　ユニバ−シイテイ
Priority date: 1985-07-12
Filing date: 1986-06-24
Publication date: 1988-03-03
Also published as: DE3650242T2; DE3650242D1; NZ216823A; IL79277A0; ES2002467A6; EP0229829A1; ATE118784T1; AU6129286A; DK124087D0; PT82975B; AU590599B2; US5700906A; PT82975A; EP0229829B1; DK124087A; WO1987000533A1; ZA865235B; ES2006631A6; EP0229829A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の技術分野この発明は　−スモーイ　ビバッノス　Ｐ、Ｖｔｖａｘ　のマラリャ寄生体のスポロゾイト段階のスポロゾイト外被（Ｃ８）タンパク質に関する。さらにそのようなタンパク質をコードするＤＮＡ断片に関する。スポロゾイト外被タンパク質またはその免疫学的に活性な断片の免疫優性エピトープに相当するアミノ酸から、なるタンパク質及び免疫原性ペプチドに関する。そのようなペプチドをコードするＤＮＡ断片に関する。

前述のタンパク質及びペプチドはＰ、Ｖｉｖａｘのスポロゾイトによる感染から守るそのような宿主に保護免疫を与え、ヒト及び他の動物に免疫反応を誘起するのに有効である。ＤＮＡ断片は、公知の組換ＤＮＡ技術を用いて本発明のペプチド及びタンパク質を製造する方法において有効である。

従来技術不活性化されたスポロゾイトを持つ宿主の免役は同じマラリャスベシスのスポロゾイトによる感染から守るためそのような宿主に保護免疫性を与えることが示されてきた。Ｂｒｕｃｅ−Ｃｈｗａｔｔ、Ｌ、Ｊ、Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　Ｈａｌａｒｉｏｌｏ　Ｗｉｌｌｉａｍ　ｌｌｅｉｎｅｍａｎ　Ｉｔｄ　（Ｐｕｂ］、）ロンドン、１９８０゜しかしながら、全不活性スポロゾイトに関する免疫は、感染した蚊の腺（ｇｒａｎｄ　）からのみ入手でき、しかもそれ故に非常に限られた供給であるから実際的でない。

或スペシスのスポロゾイトの免疫原性は排他的ではないが、単一の抗原、スポロゾイト外被（Ｃ８）タンパク質に大きく内在する。このタンパク質の免疫原性は同一的にまたは準同−的にタンデムに多数開繰返される単一なエピトープのなかに内在している。

スポロゾイト外被タンパク質はＰ、ｆａｌｃｉ　ａｒｕｍを含むところの或ブラスモデイムスベシスについて特性づけられ、分析され、同定されてきた。化学的合成または生物学的方法により製造された合成ペプチドは、繰返しアミノ酸配列の類似または倍数からなり、マラリャワクチンの開発に有効であり、免疫原性であることが示されてきた。

しかしながら、異なったスポロゾイト外被タンパク質の免疫優性から誘導されるペプチドはただスペシス−特異性の抗原性を表わしている。

それ故、ある人のマラリャスペシスによる感染からヒトを保護するであろうマラリャワクチンの開発のためにヒトに感染するプラスモディムスベシスのすべてについて、そのエピトープ領域またはスポロゾイト外被タンパク質を特性づけし、配列を同定する必要がある。

寄生的原生動物の４つのスペシスがヒトにマラリャをもたらす。これらの２つは熱帯マラリャであるＰ、ｆａｌｃｉ　ａｒｕｍと三日熱マラリャであるＰ、ＶｉＶａＸが優勢である。Ｖｉｖａｘマラリャは中国。

スリランカ、中央アメリカにおけるマラリャの優性形であり、世界にわたってあられれている。

アマシン領域及び東南アジアのような或地域では、ｆａｌｃｉｐａｒＬｌｌｌマラリャが普通である。ｆａｌｃｉｐａｒｕｍマラリャより死亡率がより少ないとはいえＶｉｖａｘマラリャはその特徴的な逆もどり熱病であり、無力にする病気であり、解決困難な公共の健康問題を構成し、経済的開発に対する１つの障壁である。

それ故に、Ｐ、Ｖｉｖａｘの感染から守り、保護するであろうヒトのためのマラリャワクチンを製造することは緊急な必要性がある。

本発明の目的この発明の１つの目的は、三日熱マラリャ原虫（Ｐ、Ｖｉｖａｘ　）寄生者のスポロゾイト外被（Ｃ８）タンパク質及びこのタンパク質をコードしている遺伝子を同定し、特性づけすることである。

この発明の他の目的はＰ、Ｖｉｖａｘの重要な構造及びアミノ酸配列を同定することである。

この発明の他の目的はヒトに対する保護免疫反応を誘起できるＰ、ＶｉＶａＸのＯＳタンパク質の免疫優性エピトープに関連するアミノ酸配列を構成するペプチドまたはタンパク質を提供することである。

この発明の他の目的はＰ、ＶｉＶａＸのマラリャ感染から守るためにヒトに保護免疫反応を誘起できる免疫原性物質をコードするＤＮＡ配列を提供することである。

この発明の目的はさらに化学的にまたは組換ＤＮＡ技術及び他の生物学的方法によって合成することのできる前述のペプチド及びタンパク質を提供することである。

本発明の目的はＰ、Ｖｉｖａｘのマラリャスボロゾイトによる感染から守るため保護的免疫を与えるワクチンを開発することである。

この発明のこれら及び他の目的は当業者にとって本発明の説明、特許請求の範囲及び図面により容易に明らかになるであろう。

発　明　の　要　約この発明の１つの観点はＸはＡＳｐまたはＡｌａを表示しているアミノ酸配列Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａ　ｌ　ａ−Ｘ−Ｇ　ｌ　”ｌ／−Ｇ　１ｎ−Ｐｒｏ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｇ　Ｉ　ｙからなるペプチドに関する。

そのペプチドはＰ、Ｖｉｖａｘのマラリャ感染から守るために宿主に反応する免疫を引き出すことのできるものである。

この発明の他の観点は上のペプチドをコードしているＤＮＡ断片に関する。

本発明の他の観点は実質的にＡＳＩ）−Ａｒｇ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｘ−Ｇ　ｌ　ｙ− Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｐｒｏ−Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　Ｉ　ｙの配列がタンデムに最後は２回繰返されてなるアミノ酸配列からなるタンパク質に関する。

この発明の他の観点は、そのようなタンパク質をコードしているＤＮＡ配列に関する。

本発明の他の観点はＰ、Ｖｉｖａｘのスポロゾイト外被（Ｃ８）タンパク質のアミノ酸配列の断片に相当するアミノ酸配列を構成するペプチドまたはタンパク質に関する。Ｐ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質はタンデムに繰返し領域の境界の外側に位置していて他の種のＣＳタンパク質の相当する断片に実質的に相同である。

そのようなペプチド及びタンパク質をコードしているＤＮＡ配列に関する。

この発明の他の観点はＰ、Ｖｔｖａｘのタンパク質及びタンパク質をコ、−ドしているＤＮＡに関する。

図面の簡単な説明第１図は類比ザルのマラリャであるＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ　ｃ　ｎｏｍｏｌ　ｔのＤＮＡクローンで調べたＰ、Ｖｉｖａｘのゲノム内すウザーン　プロット（ｇｅｎｏｍｉｃ　５ｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ　）のラジオオートグラフである。

第２図はＰ、Ｖｉｖａｘのスポロゾイト外被遺伝子を汚染したラムダファージクローン（ｌａｍｂｄａ　ｐｈａｏｅ　ｃｌｏｎｅ）　Ｖ　Ｘ　Ｉ　Ｂの粗いそして微細な構造のマツプを示す。

第３図はＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質をコードする全部の遺伝子配列及びその翻訳を示す。

第４図はＰ、　Ｖｉｖａｘ及び籏」【グ」どのマラリャである立ユ旦ヱ」虫（Ｐ、ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ　＞のＣ８遺伝子によってコードされたアミノ酸を一列にならべたものを示し、彼等の間に本質的な相同性の存在を明らかにしている。

第５図は本発明によるペプチドに対する結合（ｂｉｎｄｉｎＧ　）を示す図であり、（ａ）は本発明によるペプチドまたは関係ないペプチドの競合濃度の存在または単独で使用されるａｎｔｉ−Ｐ、Ｖｉｖυのモノクローナル抗体を（ｂ）は関係のないモノクローナル抗体発明の詳細な説明Ｐ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質を同定するという問題に接近する１つの方法はＣＤＮＡ（ＤＮＡのコピー）のクローンをスポロゾイトかまたはＰ、Ｖｉｖａｘの寄生者の血液段階のいずれかのＤＮＡから作ることから行われるであろう。しかしながら、スポロゾイトとして多くの困難性を提示するスポロゾイト物質の使用はただ得られる量として不十分であり、蚊の胸部物質で汚染されている。ざらにＣＤ　Ｎ　Ａクローンの使用は時間の浪費であり、関心のあるタンパク質の完全構造を明らかにできない。

Ｃ８３１１伝子が十分に保存され交差するスペシスであると思われないとはいえ、次の観察がなされてきた。

（ａ）免疫学的に明確なスポロゾイト外被（Ｃ８）エピトープの存在はＣＳタンパク質間開全相同を評価するのに充分な基準でない。Ｅｎｅａ、Ｅ、等　Ａｎｎａｌｉ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｏ　５ｕｐｅｒｉｏｒｃ　ｔｏ　５ａｎｔｔｅ、Ｒｏｍｅ　（１９８５）　：　Ｃｏｃｈｒａｎｅ、Ａ、Ｈ等　Ｈｏ１ｅｃ、ａｎｄ　ＢｉｏｃｈｅＩＩｌ、Ｐａｒａｓｉｔｏｌ、１４：　１１１　（１９８５）（ｂ）すくなくとも５の免疫学的に明確な類比ザルのマラリャであるＰ、ｃ　ｎｏｍｏｌ　ｉ系列のＣＳタンパク質は繰返しペプチド配列の外側に高度に相同配列を与えている。

（Ｃ）類比ザルのマラリャであるｐ、ｃ　ｎｏｍｏｌ　ｔとアカグサルのマラリャであるＰ、　ＫｎｏｗｌｅｓｉとのＣ８遺伝子は関係している。Ａｒｎｏｔ、Ｄ、Ｅ　、等手書ぎで提出された。１９８５年及び（ｄ）　Ｐ、Ｖｉｖａｘは他の普通のヒトのマラリャである熱帯熱マラリャ原虫ＬＪ互（ゆ旦ｒｕｍ−に対するよりも類人猿のマラリャにさらに密に関係しているように思われる。Ｄａｍｅ、　Ｊ、　Ｂ、等　５ｉｃｅｎｃｅ、２２５，５９３　（１９８４）　これらの著者はこの出願の譲渡人に加入してない。それ故にＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質を配列し、同定する試みにおいて本発明の発明者達アカグサルのマラリャであるＰ、ｃ　ｎｏｍｏｌ　ｉの遺伝子試料に頼った。アカゲサルのマラリャであるＰ、ｃ　ｎｏｍｏｌ　ｉのＣＳタンパク質をコードする遺伝子の完全なヌクレオチド配列は本発明者達及び彼等の共同研究者達によって発見され、その翻訳に関して第６図に充分に開示される。

Ｐ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質の配列の研究においてこの寄生者の血液段階から遊離されたＤＮＡが大きさによって分別化されニトロセルローズの上に移され、Ｌ虹坦肚劇りのＣ８遺伝子からの標識化されたＤＮＡプローブにより雑種をつくった。用いられたブＯ−ブはＣ−末端区域をコードする７００の塩基対ＰｓＢ断片であり、類比ザルのマラリャである巳五ｙルＶユ力戸−のＣＳタンパク質をコードする遺伝子のｃＤ　Ｎ　Ａクローンの３′の未翻訳領域の約３５０のヌクレオチドであった。特別にＰ２３６−７と名付けられたプローブはＣ及びＧの尾（ｔａｉｌ）によって隣接し、第６図に示された配列の８５１から１８２７を通してヌクレオチドを包む。

前述のＬエヱ部」Ａ上戸−のプローブは第１図のレーン１−４に示されるように三日熱マラリャのＰ、Ｖｉｖａｘのゲノム内ＤＮＡの断片単一の八ｃａｌ（３，３キロベース（ｋｉｌｏｂａｓｅｓ　）　Ｈｐａ　ＩＩ　（４。

２にｂ）及び８１　Ｉ［（１５Ｋｂ）と共に媒体のきびしい条件下で雑種をつくることが見いだされた。レーン５はＢｇＪＩ［で切断した巳」ヱｙ」刃土ｌ−（Ｇｏｉｂａｋ）のゲノム内ＤＮＡを含有している。

雑種形成に使用される方法はＴ、）ｌａｎｉａｔｉｓ等が記載されたものと同じここに文献としてとり入れられる。Ｎｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ　；Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ　、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８２）、３８１−３８９頁。１５キロベース（Ｋｂ）　Ｂｇｔ　■断片は「ｒｉｓｃｈａＵｆ　Ａ、Ｈ，等によって記載された方法により細菌ファージラムダ　ＥＨＢ１４ベクターのなかにクーロンするのに適した大きさであった。Ｊ、ｔ（ｏｌ、Ｂｉｏｌ、１７０　：　８２７　（１９８３）。その開示は、この出願の文献としてとり入れられる。そのようなベクター（または彼等のＤＮＡ）はプロメガビオチク（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｒｉｏｔｅｃ）、マジソン、ウイスコンシン；またはベクター　クローニング　システム（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）　、サンジエゴ、カルホルニャのようなところから商業的に入手できる。

ラムダベクターの分離、バッキング、遺伝子内クローンの取り扱い、プラークの雑種形成（ｐｌａｑｕｅ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）は、Ｈａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、、等の紅災量ヌ７５−８５頁＋２５６−２６８頁、２６９−２９４頁、３１２−３２８頁に記載のようにして処理された。これらの全開示は文献としてとり入れられる。

Ｐ、Ｖｉｖａｘの大きさで分画した遺伝子内ライブラリの約５０００のプラークはプローブとしてのＰｘ凹玉ｎＬ（Ｇｏｍｂａｋ　）のＣＤＮＡクローンのＰＳｔｌ断片を使用してスクリーンされた。３つのポジティブなプラークが得られた。これらのクローンの１つの制限マツプ（ｓａｐ　）はラムブＶＸＩＢとして示され、第２図の上のマツプに示される。このクローンは第１図のレーン４の遺伝子の５ｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔのなかに得られる交差−雑種形成断片の大きさに一致するマツプを持っている。プラスミドサブクローンの系列はそれ故さらにマツピング及びＤＮＡ配列分析で得られた。

１、帯　マラリャ、　（Ｐ、ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ　）　ＣＤ　Ｎ　Ａクローンと交差−雑種形成した領域のさらに詳しい制限マツプは、第２図の下のマツプに示されている。斜線を入れた棒はＣＤＮＡプローブと交差雑種形成した断片を示している。

ＤＮＡ配列分析は最初Ｘｂａ　Ｉ及びＡｃｃ　Ｉサイトから行われた第２図に見られるように遺伝子のコーディング配列に関して同じ位置にＬ■匹鯰劇辷のスボロソイド外被遺伝子が生起している。

Ｐ、ｃヱ隻」遼オり一遺伝子と配列相同はこれらの位置のまわりで検知され、第２図の微細構造マツプに示された領域にＰ、Ｖｉｖａｘゲノム内ＤＮＡの完全分析が行われた。連続的オーブン読み取りフレームはＬ匹ヱル」Ａ力戸−及びＰ、　ＫｎＯＷｌｅＳｉｒのＯ８遺伝子内の相当する領域に実質的に相同の繰返しないＮ及びＣ末端領域によって隣接される繰返しアミノ酸の中央領域と共にタンパク質をコードするこの領域内に起る。Ｐ、Ｖｉｖａｘ　ｃｓ遺伝子の全配列及びその翻訳は第３図に示されている。

かくして同定された遺伝子における繰返しヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列はＡＳＤ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｘ−Ｇ　ｌ　ｙ−ａ　ｌ　ｎ− Ｐｒｏ−Ａ　ｌ　ａ・−Ｇ　Ｉ　Ｖである。Ｘは第３図に説明されるようにＡｓｐかＡｌａかのいずれかを示プ。

このアミノ酸配列は１９回繰返され、３７３のアミノ酸タンパク賀の４９％を構成している。

他のプラスモディムスペシスのすでに同定されたｃｓ抗原のすべてにおいて、繰返しアミノ酸配列はＣＳタンパク質の免疫優先エピトープを含んでいた。それ故上に同定された繰返しアミノ酸配列は事実ｐ、　ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質の免疫優性エピトープを構成するであろうことを前提とした。このことは試験され、Ｐ、ＶｉｖａＸのＣＳタンパク質に向かってモノクロナール抗体の異なるａ度で繰返し配列のタンデム繰返しく２Ｘ）からなるペプチドを露出することにより確認された。

モノクロナール抗体は第３図の繰返しアミノ酸配列の２つのタンデム繰返しからなるペプチドに定量的に結合した。

さらに重要なことは、このペプチドは全スブロゾイド抽出物を固定するためにモノクロナール抗−スボロゾイト外被（Ｃ８）の結合を定量的に抑制した。アカゲザルのマラリャであるＰ、にｎｏｗｌｅｓｉ及び熱帯熱マラリャであるＬコ旦ｌｃｉ且現」−のＣＳタンパク質の繰返しに相当するペプチドの挙動及びこれらの観察に基いて好ましくはタンデムに２回のこの繰返し配列を含むペプチドはＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質に向かって、それ故Ｐ、Ｖｉｖａｘのスポロゾイトに向って抗体の形成を誘起するであろう。このマラリャ寄生体による感染から守るためヒトに保護的免疫を与えるのに役立つであろう。そのようなペプチドの全部のアミノ酸配列は繰返し単位より他のセグメン１−から構成できる。ただ必要な条件はＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質の繰返し単位（複数）に相当する配列が免疫反応を誘起するのに利用できることである。択一的にはこのＣＳタンパク質の繰返し単位に相当するアミノ酸配列は全タンパク質の部分を構成でき、Ｐ、ＶｉＶａＸに向かう免疫学的活性はそのようなタンパク質で保護されることを提供した。

上述のように免疫学的試験の結果は合成ペプチド）−１（ＡＳｐ−Ｇｌｙ　Ｇｉｎ−Ｐｒｏ−Ａｌａ　Ｇｌ’ｉ’−ＡＳｐ　Ａｒｇ−ＡＩａ）２がＰ、ＶｉＶａＸのＣＳタンパク質の免疫優性エピトープを含むことを確認するものである。

２Ｆ２抗体に関してタイ、インド、エルサルバドル、ブラジル、スリランカ、北朝鮮及びパファニューギニャに生じた菌株からＰ、Ｖｉｖａｘのスポロゾイトのスクリーニングはこの抗体により判別されたＯＳエピトープがすべて分離されたものとして存在することが示された。Ｊ、ＩＩＩｌｍｕｎｏｌ　、　１９８５．　Ｚａｖａｌａ、Ｆ、等（印刷中）これらの実験はブラジルのＶｉｖａｘマラリＡ７からのスポロゾイトの抽出物に対して混合されたＳ、Ｅ、Ａｓ１ａｎ　Ｐ、Ｖｉｖａｘのスポロゾイトに向って生起したモノクロナール抗体の結合に競合できることを証明している。かくしてＰ、ＶｉｖａｘのＣ８遺伝子がブラジルのＰ、Ｖｉｖａｘの菌株から分離されたとはいえクローンされた遺伝子の配列から引き出されるエピトープがさらに研究されたすべてのＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質のなかに存在しているように思われる。この遺伝子の特性及びそのコードされたアミノ酸配列は多聞の繰返しエピトープの合成、及びＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質の他の抗原性的に活性な領域及びそのような領域に相当するペプチドを使用するため保護ワクチンの開発を与えている。

本発明によるペプチドは鎖長及び構成されるアミノ酸の性質が認められ、または組換ＤＮＡ技術を含む生物学的方法によって認められるならば、公知の合成方法によって製造することができる。

本発明によるタンパク質は組換ＤＮＡ技術を含む公知の生物学的方法によって製造することができる。

最後に繰返しアミノ酸の同相及び類似またはその倍数はここに文献としてとり入れられるスポロゾイト表面タンパク質の免疫優性エピトープという名称の１９８５年１月２８日出願されたＶ、Ｎｕｓｓｅｎｇｗｅｉｇのアメリカ特許出願番号Ｎα６９５．２５７の通常に誼渡され係属中のものに類似する方法で製造することができる。

Ｐ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質の繰返しアミノ酸配列につけ加えてＰ、ＶｉｖａｘのＣＳタンパク質の２つの他の領域がＬ四ヱぶりＡ上戸＝及びＰ、にｎｏｗｌｅｓｉのＣＳタンパク質における相当する領域に広汎に相同すること（ま興味がある。これらの相同配列はＬ肛匹且造りのＧｏｍｂａｋ菌株と比較して第４図に並べである。

Ｐ、Ｖｉｖａｘ及びＬ匹ヱ■」旦力戸−の両Ｎ−末端及びＣ−末端の領域はヌクレオチドレベルで実質的に相同であるばかりでなくアミノ酸レベルでもまた実質的に相同である。その２つのタンパク質はＮ−及びＣ−末端において３０のアミノ酸が殆ど完全に同一であり、それは恐らく保護された親水性な１ｅａｄｅｒ及び膜内外（ｔｒａｎｓ−ｍｅｍｂｒａｎ　）配列をそれぞれ構成している。

Ｐ、　Ｋｎｏｗ　Ｉｅｓ　ｉ配列はＰ、Ｖｉｖａｘ配列に対してわずかに相同性がすくない。

ｕ、　ｖｅｒｇａｒａ等の名前で（その開示はここに文献としてとり入れられるが）１９８４年９月１２日に出願されたアメリカ特許出願６４９９０３において、本発明者及び共同研究者は相当するＰ、　Ｋｎｏｗｌｅｓｉ領域と実質的に相同であったところの繰返し配列領域の近傍のＰ、ｆａｌｃ扛と」のＣ８Ｍ伝子０領域について記載し、奇生体表面に露出され、抗原性を持っていた。同様に、Ｐ、ＶｉｖａＬのＣＳタンパク質における相同のＮ２及びＣ２領域が異なつに対して免疫原性であり、非常に実用であると期待されている。

そのＮｚ領域は２０のアミノ酸がＮ−末端領域の方向において繰返しを隣接して構成している。Ｃ２領域はＣ−末端領域に近く位置しているシスチン残基の２つの組の内にある。

実　施　例実施例１：Ｐ、Ｖｉｖａｘの血’７’＋１７７）Ｎ（７）寄生されたヒトの赤血球は文献として取り入れられる５ａｕｓ＋ｙ及びＡｔｋｉｎｓｅｎの方法により白血球から精製された。Ｔｒｏｎｓ　。

匠、Ｓｏｃ　、　囮、シ＞ｄ　、肛り、競：　４　（１９７２）　寄生体ベレットは段階的に温めたく５０℃）の０．１Ｍのエチレンジアミンテトラアセテート（ＥＤＴΔ）ｐｔ（，８，０及び０．５％のサルコシル（５ａｒｃｏｓｙｉ　）を加えて解凍された。

凍結した寄生体ベレットの容積当りの緩衝液の比率は１０：１であった。ブロティナーゼＫを寄生体−緩衝液混合物の最終濃度の１００マイクログラム／ミリリツトルに加えた。それはそこで５０℃で２時間培養された。

石炭酸（０，８容積、ｐＨ８，２−８，５）が等容積のクロロホルムとつづいて加えられた。その混合物は撹拌され、室温で５分間３０００　ｒｐｍの回転数的１０００ｇで遠心分離された。

下の相はとり除かれ、石炭！／クロロホルムによる抽出は有機相が透明になるまで上述のように繰返された。

最終ｉｌａ度が０．２Ｍになるよう食塩を加えた。エタノールの２容積が加えられ、混合物は少なくとも２時間、−２０℃で培養された。

混合物を１０分間約３０００ｇで遠心分離した。ベレットは１１０ｆｆ１のＴｒｉｓと１１０１１ＩのＥＤＴＡｐＨ８（０／１０／１０緩衝液）を含む緩衝液に再懸濁された。ＲＮａｓｅ　ＡがＲ１！Ｉｌ！度２０マイクログラム／ミリリットルになるよう加えられ、ＲＮａｓｅ　Ｔ１が最終濃度１ユニット／ミリリットルになるよう加えられた。

その混合物を６０分間３７℃で培養した。

ＤＮＡは上述のようにエタノール及び食塩により沈澱させた。

沈澱混合物は３０分間−２０℃で培養され、１０分間３０００９で遠心分離され、そのベレットはＯ／１０／１０緩衝液に再懸濁された。エタノール沈澱法が繰返された。沈澱物は最後に０／１０／１０のＴｒｉｓＥ　Ｄ　Ｔ　Ａ中で再懸濁された。

そのＤＮＡは２２Ｇの針（ｎｅｅｄｌｅ）を通過させ、５から１５倍に粘度を減少させ、石炭酸／クロロホルム（上述のように）で２〜３回抽出し、上述のようにエタノールで沈澱させた。

その混合物は遠心分離され、そのベレットはｐＨ８で１０ｍＭのＴｒｉｓ、　１　ｍＭのＥＤＴＡ中に再懸濁された。ＤＮＡ′ａ度をラムダファージＤＮＡの既知量に加えて１％アガローズゲルについて連続的稀釈を行うことにより概算した。

ＤＮＡはＣａｒｂｏｗａｘ８　、　ＯＯＯ（ポリエチレングリコール）と食塩と共に７％（重量／容積）及び０．４ＭでそれぞれＢ（７１■消化物（ｄｉｇｅｓｔ）を−夜間３７℃でそれぞれ培養することにより大きさによって分画した。

実施例２：（ｌ肛弐及髪１旦二１Ｌ）ユ５ｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔの雑種形式は３０％のホルムアミド、　６ｘｓｓｃ。

５０１１１Ｍの燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６，４，１０％のデキストラン硫酸塩、１００マイクログラム／ミリリツトル　サーモン精子（ｓａｌｎ＋ｏｎ　５ｐｅｒｉ）　Ｄ　Ｎ　Ａのなかで前掲のＨａｎｉａｔｉｓ等の文献に記載された標準方法を使用して移され、３Ｘ１０６ｃｐｍのｐｒｏｂｅｎｉｃｋを使用して行われた。

４２℃で一夜間の雑種形成の後、濾過物は３ＸＳＳＣ，５０１ＢＭの燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６，４，０，１％のＳＤＳを含むなかで室温、５分間４回洗浄され、４２℃で同じ緩衝液中で１分間、洗浄された。ラジオオートグラフィは一７０℃で補力したスクリーンをもって行われた。

実施例３：ファージを“、（−ること　１ｊａｔｉＯ０びファージ　ＮＡのｌ　込固五上実施例２　で分離されたＤＮＡＩＦｉ片は前掲Ｈａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、の７５− ８５頁に記載されたようにしてＥＭＢＬ３に結紮され、ガラス管中に入れられ、提供者の指示によりベクターク［］−ニングシステム（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｃｆｏｎｉｎａ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）から抽出物をつめこむに使用される。ゲノム内ライブラリは２６９−２９３頁に記載されるように構成され、３２０−３２２頁に記載されたように同じ辺比ザルのマラリャのｐ＋ａｓｍｏｄ＋ｕｍ　Ｃｎ匹射近のプローブを使用してスクリーンした。雑種形成の条件は実施例１の雑種形成と同じであった。

配列化＜　５ｅｑｕｅｎｃ　ｒ　ｎｇ　＞はＨａｘａｍとＧ１１ｂｅｒｔの手法によって行ワレタ。Ｈｅｔｈ、願証鱈り、６５（ＰａｒｔＩ）　：　４９７−５５９頁（１９８０）：及びＳａｎｇｅｒ　Ｎ１ｃｋｉｅｒとＣｏｕｌｓｏｎ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ’ＩＡｃａｄ、　Ｓｃｉ　、（Ｕ、Ｓ、Ａ、）　７４；　５４５６　（１９７７）　。遺伝子は分子量３７．２５３タルトンを有する３７３のアミノ酸のタンパク質をコードする中断されない読みとりフレームを有した。９のアミノ酸からなる１９のタンデム繰返し単位が第３図につめこんで示した。これらの繰返しは全タンパク質の４９パーセント（４９％）を構成している。

他の一般的スボロゾイド外被ＣＣＳ＞タンパク質の形は中央の繰返しく免疫優性の）エピトープアミノ末端信号配列、カルボキシ末端親水性のトランス膜配列が注目できるし、荷電残基の若干の基は窒素（Ｎ）及び炭素（Ｃ）末端領域の両方を提示している。

実施例４：笠ヱ工且立１１８−残塁のペプチドアミドはＨ−（Ａｓ　ｐ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｇ　１ｎ−Ｐｒｏ −Ａｉａ−Ｇｌｙ　Ａｓｐ−ＡｒＣｌ　Ａｌａ）２の構造をもって合成された。

カルボキシ末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）はアルファカルボキシアミドであり、フリーのカルボン酸ではない。

ペプチドはＪ、八ｍ、ｃｈｅｍ、ｓｏｃ、８５　：　２１４９　（１９６３）のＲ，Ｂ、Ｈｅｒｒｉｆｉｅｌｄの段階的固相方法を使用して、マルチデタッチブルな（ｍｕｌｔｉｄｅｔａｃｈａｂｌｅ　）ベンツヒドリルアミン樹脂（ｐ−アシロキシベンツヒドリルアミン−コーポリスチレン１％ジビニルベンゼン樹脂）上でＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、２８５１　（１９８１）のＴａｍ、、１．Ｐ等による記載のようにして合成された６Ｂｏｃ−Ａｌａ−ｐ−アシロキシベンツヒドリルアミン樹脂（樹脂のグラム置換当りＱ、　４ｍ　ｍｏｌ　）カヘツクマン９９０Ｍ合成器の反応容器のなかに置かれ、ジクロへキシルカルボジイミドを経由してダブルカップリングプロトコール（ｐｒｏｔｏｃｏ＋　）が使用され段階当り９９．８５％以上のカンプリング効率を与えた。ベンチルー塩基側鎖を保護する基及びターシャリ−ブトキシカルボニル（’Ｂｏｃ　）が窒素− アルファ末端のために使用された。配列ＡＳｐ−ＧＩｙは合成及び保護されたペプチド樹脂の酸の非保護の間でアスバルチミド（ａＳｐａｒｔｉｍｉｄｅ　）を形成して環形成反応をする傾向がある。合成及び強酸により触媒された非保護段階の間、塩基により触媒されるアスバルヂミド（ａｓｐａｒｔｉｉ＋ｉｄｅ　）の形成を避けるために、新しい保護基Ａ　Ｓ　ｐ　（ＯｃＨｅｘ　、アスパルチル−ベーターシフ［１ヘキシルエステル）がＴａｍ、　Ｊ、　Ｐ等による記載のようにして用いられた。ここに文献としてとり入れられる。ＴｅｔｒａｈｅｄｒＯｎ　ｔｅｔｔ。

４０３３　、　（１９７９）。未精製ペプチドは高圧液クロマトグラフィにより検査されるときに全ペプチド含量の８３％以上と計測される単一の対称的なピークを与えた。粗ペプチドはアセトニトリルの勾配とＣＦ３　ＣＯ叶（０，０５％）水溶液を用いて逆相Ｃ−１８カラム＜２．５Ｘ３０ｃｍ＞上で低圧液クロマトグラフィ（１００−１２０ｐｓｉ　）により精製された。精製された材料は分析用高圧液クロマトグラフィにより単一の対称的ピークを与え、アミノ酸分析はアミノ酸の訂正された理論値を与えた。樹脂に（＝１着する第１のアラニンを基にした全収量は７２％であった。

実施例５：Ｐ、Ｖｔｖａｘのモノクロナール−スポロゾイトζよｊＪ！ａのぺ　゛の＋　１ｒｅｃｏ　ｎ１ｔｉｏｎ上実施例５からのモノクロナール−抗体２Ｆ２はＰＢＳ −ＢＳＡ（黒三角印により第５図に示されている）に、また合成ペプチド（ＮＡＮＰ）　３の２５マイクログラム／ミリリツトルを含むＰＢＳ−ＢＳＡ　Ｃ第５図でオーブンの三角印によって示されている）に、また実施例４の合成ペプチド（ＤＲＡＤＧＱＰＡＧ　）　２の２５マイクログラム／ミリリツトルを含むＰＢＳ−ＢＳＡ　（黒丸印で示されている）に連続的に稀釈された。関係のないモノクロナール−抗体２Ａ１０（抗−ｆａｌｃｉｐａｒｕｎスポロシイ［−外被（Ｏ８）タンパク質）はＰＢＳ−ＢＳＡ　（オーブンの四角中で示されている）に連続的に稀釈された。各稀釈物の２０−ミクロングラム／ミリリットルはまえもって１％のＢＳＡで飽和された（ＤＲＡＤＧＱＰＡＧ　）　２合成ペプチドで被覆されたマイクロタイタープレートの底に加えられた。１時間の培養ののちウェルは１２５Ｉ−標識された親和性−精製したヤギの抗−ネズミＩｃＩＧ（１０”ｃｐｍ、比親和性約２×１１０６０ｐ／マイクログラム）の５０マイクロリツトル中のＰＢＳ−ＢＳＡによって洗浄された。追加して１時間培養後、ウェルはＰＢＳ−ＢＳＡで洗浄されカウントされた。第５図に示されるように２Ｆ２は固定された（ＤＲＡＤＧＱＰＡＧ　）　２ペプチドに結合した。逆に２Ａ１０は結合しない。２Ｆ２の結合は全体的に（ＤＲＡＤＧＱＰＡＧ　）　２により抑制されるが（ＮＡＮＰ）　３によっては作用されない。

他の同様な実験において抗り堕江並五匹抗体２Ａ１０の結合はエピトープ（ＮＡＮＰ）　３に相当している合成ペプチド（ＤＲＡＤＧＱＰＡＧ　）　２によって妨害されない。ここで、Ａ、アラニン：Ｃ，シスチン：Ｄ、アスパラギンＳａＥ、グルタミン酸；Ｆ、フェニルアラニン：Ｇ、グリシン；Ｈ，ヒスチジン；１．イソロイミン；に、リジン：１−、ロイシン：Ｍ。

メチオニンＨＮ、アスパラギン：Ｐ、ブＯリン：Ｑ、グルタミン：Ｒ，アルギニン；Ｓ、セリン：Ｔ、トレオニン：■、バリン；Ｗ、トリプトファン：Ｙ、チロシンを示す。

同様な結果はもしも（ＤＲＡＡＧＱＰＡＧ　）　２が（ＤＲＡＤＧＱＰＡＧ　）　２の代りに使用されるときにも得られることがｌ１１１侍される。ざらに、各繰返し単位のｆｏｒｃｅアミノ酸としてＸがアラニン及びアスパラギン酸の両方を示すペプチドまたはこれらのペプチドのオリゴマーであっても同じ結果が期待される。

実流例６：八　ベブチ゛　八ｓ　−Ｇｌ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇコ−Ａｓ　、−Ａｌａ−）−２−によるｂ　されたＰ、杜■しＥ取１リローゑ−モノクロナール−− ２Ｆ２の１Ａの一１約２Ｘ　１０１６ｃｐｍ　１マイクログラムの比親和性を有する１２５Ｉにより標識化した１　００．ＯＯＯｃｐｍの２Ｆ２抗体は１％の８８Ａを含むＰＢＳ中に稀釈された。またＮ衝液は合成ペプチドの吊を変化させた含有させた。混合物はＰ、ＶｉνａＸのスポロゾイト抽出物をもって被覆されたマイクロタイタウエルに加えられた。１時間、Ｖ渇での培養の後に「シェルは１％のＢＳＡを含むＰＢＳでもって３回洗浄され、ガンマ線力つターでカウントした。その結果は第１表にまとめられている。

第−二し一人固定Ｐ、Ｖｉｖａｘ抽出物に対する１２５Ｉ、識モノクロナール抗体２Ｆ２の結合の合成ペプチドＨ（Ａｓ　ｐ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｇ　ｌ　ｎ　−Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　Ｉ　Ｖ−△５ｐ−Ａｌａ）２による抑制合成ペプチドの　結合（ｂｏｕｎｄ　）濃度（マイクログラム／ミリリットル）　（ｃｐｍ）０　１６．３８７±１．０８５ ※ ※４つのウェルにお（）るカウントの平均±ＳＤ他の予備実験においてＰ、Ｖｉｖａｘの抽出物に対する標識化Ｆ２Ｆモノクロナール抗体の結合は冷たい２Ｆ２抗体における抽出物の稀釈により抑制されるが、同じサブクラスの冷たい関係のないモノクロナール抗体ではそうでないために特異性であることを示された。

ＦＩＧ／Ｆノθ２Ｆ／θ５国際調査報告ＭＩＩｌｌｌｌｌ１６Ｎ１１＾鐸ｌｉＮｍｂ６Ｌｌｓｏ、ＰＣＴ１０ｓ８６／ｎ１１７’）ＰＣＴ／ＵＳ８６１０１３７３Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｔｏ　Ｆｏｒｍ　ＰＣＴ／ｒｓＡ／２１０゜Ｐａｒｔ　ＶＸ、工。

τ５ｌｅｐｈｏｎａ　ａｐｐｒｏｖａｌ：５２８０．ＯＯｐａｙｍｅｎｔ　ａｐｐｒｏｖｅｄ　ｂｙ　Ａｄｄａ　Ｇｏｇｏｒｉｓ　ｏｎ　１４Ａｕｇｕｓｔ　１９８６　ｆｏｒ　Ｇｒｏｕｐｓ　ＸＸ　ａｎｄ　エエエ；　ｃｈａｒｇ６　ヒｏ　ＤｅｐｏｓｉｔＡＣＣＯｕｎヒＮｏ、０４−０１００゜Ｒｅａｓｏｎｓ　ｆｏｒ　ｈｏｌｄｉｎｇ　１ａｃｋ　ｏｆ　ｕｎｉｔｙ　ｏｆ　１ｎｖｅｎセｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｒｏｕｐエエａｎｄセｈｅ　ｐｅｐ−ｔｉｄｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｇｒｏｕｐ　Ｉ　ａｒｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｓ　ｍｕｔｕａｌｌｙｅｘｃｌｕｓｉｖｅ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａヒ５−ｆｉｎａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｒｅｌａ−ｔｉｏｎｓｈｉｐ、Ｔｂｅ　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｉｓ　ｄａｅｍａｄセｏ　ｂｅ　ｕｓ６−ｆｕｌ　ａｓ　ａ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｏｒ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｐｒｏｂｅ。

Ｔｈ＠ｖａｃｃｉｎａ　ａｎｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｒｏｕｐエエエａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｇｒｏｕｐ　Ｘ　ａｒｅ　ｒｅｌａセｅｄ　ａｓｃｏｍｂｉｎａセｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｕｂｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ、Ｔｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｏｒ　ｃｏｍｂｉｎａ−ｔｉｏｎ　ａｓ　ｃｌａｉｍｅｄ　ｄｏｅｓ　ｎｏｔ　ｒｅｑｕｉｒｅ　ｔｈｅ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｓ　ｏｆ　セｈｅｐｅｐｅｉｄｅ／ｐｒｏｔａｉｎ　ｓｕｂｃｏｍＭｎａｔｉｏｎ　ａｓ　ｃｌａｉｍｅｄ　ｆｏｒ　ｐａａｓｎｔ−ａｂｉｌｉｔｙ　ｂｅｃａｕｓｅ　ｅｈｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｃｏｕｌｄ　ｅｍｐｌｏｙ　ｔｈｅ　ｉｎセａｃｔ　ｃｅｌｌｗａｌｌ　ａｎセｉｇｅｎｉｃ　ｃｏｍｐｏｎｅｎセｏｆ　ｔｈｅ　５ｐｏｒｏｚｏｉセｅ　Ｏｒ　ｃｈｅｍｉｃａｌｏｒ　ｐｈｙｓｉｃａｌ　ｆｒａｃセ１ｏｎｓ　ｔｈｅｒｅｏｆ。

Ｔｉｍｅ　Ｌｉｍ１ｔ：　ｆｏｒ　Ｆｉｌｉｎ　ａ　ＰｒｏＩ−ｅｓｔＰＣＴ／ＵＳ８６１０１３７３Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｔｏ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎセａｌ　５ｈｅｅｔ　Ｐａｒｔ　ＶＬ工、　Ｃｌａｉｍｓ　１−５．　９−１１．　１４−１８．　２１−２３．　２６　ａｎｄ　２７　ｄｒａｗｎ　ｔ。

ａ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ；　ｃｌａｓｓ　５３０　５ｕｂｃｌａｓｓ　３２Ｂ−エエ、Ｃｌａｉｍｓ　６−８．　２５．　ａｎｄ　２８　ｄｒａｗｎ　ｔｏ　ａ　Ｉ）ＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎセフｃｌａｓｓ　５３６５ｕｂｃＬａｓｓ　２７゜エエエ、Ｃ１ａｉｍｓ　１２．　１３．　１９．　２０　ａｎｄ　２４　ｓｈＯｗｎ　ｔｏ　ａ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｎｄｍｅｔ、ｈｏｄ　ｏｆ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｎｇ；　ｃｌａｓｓ　４２４　５ｕｂｃｌａｓｓ　８８゜

Claims

【特許請求の範囲】

１．次のアミノ酸配列を含み、【配列があります】ここでＸはＡＳＰ，Ａｌａからなる群より選はれた１つであり、三日熱マラリヤ原虫ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍＶｉｖａｘのスポロゾイトのスポロゾイト外被タンパク質を判別する抗体の形成を引き出すことのできるペプチドであり、アミノ酸配列からなることを特徴とする合成ペプチド。
２．前記アミノ酸配列【配列があります】がすくなくとも２回連続して繰返されることを特徴とする請求の範囲第１項記載のペプチド。
３．前記アミノ酸配列【配列があります】が１９倍のところまで連続して繰返されることを特徴とする請求の範囲第２項記載のペプチド。
４．スペシスＰ．Ｖｉｖａｘのスポロゾイトのスポロゾイト外被タンパク質のエピトープに相当するアミノ酸配列からなることを特徴とする合成ペプチド。
５．スポロゾイト外被タンパク質Ｐ．Ｖｉｖａｘの配列に相当するアミノ酸配列から実質的になるアミノ酸配列を有する合成タンパク質。
６．特許請求の範囲第１項記載のペプチドをコードしているヌクレオチド配列からなることを特徴とするＤＮＡ断片。
７．特許請求の範囲第２項記載のペプチドをコードしているヌクレオチド配列からなることを特徴とするＤＮＡ断片。
８．特許請求の範囲第５項記載のタンパク質をコードしているヌクレオチド配列からなることを特徴とするＤＮＡ断片。
９．前記ペプチドが化学的に合成されることを特徴とする請求の範囲第１項記載のペプチド。
１０．生物学的方法により製造される請求の範囲第１項記載のペプチド。
１１．前記タンパク質の免疫優性の繰返しエピトープ領域の外側でＰ．Ｖｉｖａｘのスポロゾイト外被タンパク質の配列のセグメントに相当するアミノ酸配列からなることを特徴とする合成ペプチドであり、前記ペプチドの前記配列は他のプラスモディウムスペシスのスポロゾイト外被タンパク質の相当する領域に対し案質的に同類であり、前記ペプチドはＰ．Ｖｉｖａｘのスポロゾイト外被タンパク質を判別する抗体の形成をひき出すことのできることを特徴とする合成ペプチド。
１２．製薬的に認められる媒体中にキャリヤタンパク質に共有的に結び付けられた請求の範囲第１項記載のペプチドからなることを特徴とするマラリヤを阻止するワクチン。
１３．前記ワクチンはまた佐剤（ａｄｊｕｖａｎｔ）からなり請求の範囲第１２項記載によれマラリヤから守るためにヒトに免疫を与えるワクチン。
１４．さらに配列【配列があります】は連続して少なくとも２回繰返され、ここでＸがＡｌａ，Ａｓｐからなる群より選ばれる１つであることを特徴とする請求の範囲第１１項記載のペプチド。
１５．アミノ酸配列（【配列があります】）２からなることを特徴とする合成ペプチド。
１６．アミノ酸配列（【配列があります】）２からなることを特徴とする合成ペプチド。
１７．アミノ酸配列【配列があります】からなることを特徴とする合成ペプチド。
１８．アミノ酸配列【配列があります】からなる合成タンパク質であり、前記タンパク質がＰ．Ｖｉｖａｘスポロゾイトのスポロゾイト外被タンパク質を判別する抗体の形成をひき出すことのできることを特徴とする合成ペプチド。
１９．ＸがＡｓｐ，Ａｌａからなる群から選はれる１つであるアミノ酸配列【配列があります】からなるペプチド及びタンパク質からなる群より選ばれる化合物の免疫学的に活性量を宿主に投薬することを特徴とするＰ．Ｖｉｖａｘスポロゾイト感染から守るべく免疫反応を引き出す方法。
２０．Ｐ．Ｖｉｖａｘスポロゾイト感染から守るべく免疫反応を引き出す方法であり、前記方法は、Ｐ．Ｖｉｖａｘスポロゾイトのスポロゾイト外被タンパク質の免疫優性エピトープに相当するアミノ酸配列からなるタンパク質及びペプチドからなる群より選ばれる化合物の免疫学的に活性量をそのような免疫を必要とする宿主に投薬することからなることを特徴とする方法。
２１．Ｐ．Ｖｉａｘスポロゾイトのスポロゾイト外被タンパク質の免疫優性エピトープからなることを特徴とするアミノ酸配列を有する合成ペプチド。
２２．Ｐ．Ｖｉｖａｘスポロゾイトのスポロゾイト外被タンパク質の免疫優性エピトープからなることを特徴とするアミノ酸配列を有する合成タンパク質。
２３．組換ＤＮＡ技術により製造される請求の範囲第１８項記載のタンパク質。
２４．【配列があります】ここでＸはＡｓｐ，Ａｌａからなる群より選ばれる１つである配列からなるペプチドのＰ．Ｖｉｖａｘにより生じるマラリヤから守るべく免疫を与える有効量をヒトに投薬することからなるＰ．Ｖｉｖａｘにより生ずるマラリヤからヒトを守るために免疫を与える方法。
２５．第３図に示されるヌクレオチド配列の塩基の１５７から１２９６を通してなることを特徴とするスポロゾイト外被タンパク質をコードする遺伝子。
２６．請求の範囲第２５項記載のヌクレオチド配列によってコードするアミノ酸配列からなることを特徴とするタンパク質。
２７．次のアミノ酸配列からなることを特徴とするタンパク質：【配列があります】
２８．請求の範囲第２７項記載のアミノ酸配列を生ずる翻訳によるヌクレオチド配列からなることを特徴とする遺伝子。