JPS6345542B2 - - Google Patents
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- JPS6345542B2 JPS6345542B2 JP56160384A JP16038481A JPS6345542B2 JP S6345542 B2 JPS6345542 B2 JP S6345542B2 JP 56160384 A JP56160384 A JP 56160384A JP 16038481 A JP16038481 A JP 16038481A JP S6345542 B2 JPS6345542 B2 JP S6345542B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
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Description
本発明は、血液染色系に関し、更に詳しくは、
ロマノウスキイ（Romanowsky）型染色溶液の
安定化に関する。ロマノウスキイ型染色溶液、例
えば、ライト（Wright）溶液及びギームザ
（Giemsa）溶液は、メチレンブルー及びエオジン
染料のメタノール溶液を、他の類似染料と共に含
有している。代表的な類似染料としては、アズー
ル（Azure）Ａ、アズールＢ及びアズールＣが挙
げられる。 かかる染料を使用するためには、通常、乾燥染
料のメチルアルコール溶液を調製し、この溶液を
血液塗抹標本等に加えることが必要である。次い
で、この染色された塗抹標本に、緩衝溶液及び洗
浄溶液を、目に見える物理的変化が生じるまで段
階的に加える。 メチレンブルーの他に第二成分の染料、特にエ
オジン（Eosin）Ｙが存在することは、溶液の染
色性能を高めるために望ましい。他の類似した染
料、即ち、アズールＡ、アズールＢ及びアズール
Ｃもまた、血液塗抹標本を染色するための溶液の
能力を高めるに望ましいものである。染料を使用
する通常の方法は、まず溶液にし、次いで一定時
間経過後に使用するものである。染料粉末中のア
ズール染料は、メタノールに殆んど溶解しない。
しかしながら、メチレンブルーは、エオジンの存
在下に溶液中で熟成している間にアズール減成す
る。通常、最適の染色効果を達成するためには、
約２週間の放置期間を要する。不都合なことに、
染料は酸化を続け、生じた酸化生成物により、溶
液は所定の目的に適さないものになつてしまう。
更に、熟成後、染色溶液中における不特定の沈殿
により、染色溶液の品質が低下する。例えば、洗
色溶液は、充分効果を発揮するようになるために
は約２週間を要するけれども、その保存寿命は、
約３か月からおおよそ12か月であるにすぎない。 上記したロマノウスキイ型染色溶液を安定化す
るための方法を提供することは望ましいことであ
り、これが本発明の目的である。 又、充分に増加した保存寿命を有する安定化さ
れたロマノウスキイ型染色溶液を提供することも
本発明の目的である。 本発明は、ロマノウスキイ型染色溶液を安定化
する方法に係わり、この染色溶液は、メチレンブ
ルーとエオジン染色のメタノール溶液から成つて
いる。この方法は、上記染色溶液に、 (a) 塩化アンモニウム、臭化アンモニウムもしく
はヨウ化アンモニウム、又は、 (b) １〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖を含
む第一級、第二級もしくは第三級アミンの塩化
水素酸塩、臭化水素酸塩もしくはヨウ化水素酸
塩 のいずれか、あるいは前記(a)及び(b)の混合物から
なる安定化物質を安定化量添加することからな
る。 最も広く使用されているロマノウスキイ型染色
溶液は、ライト及びギームザ溶液として知られて
いる。両者は、アズール、メチレンブルー及びエ
オジン染料のメタノール溶液から成るものであ
り、前者の場合、アズール及びメチレンブルーの
エオジンに対する吸光度比は、約1.70〜2.10であ
り、後者の場合、吸光度比は、約1.70〜1.80であ
る（吸光度比＝A650／A525）。 再生可能な染色性能、一定の染色溶液の吸光度
及び吸光度比（分光光度計により決定されるも
の）、ならびに沈殿の不在は、染色溶液の安定性
の指標である。種々の添加剤が、溶液の安定性を
改良することが見出されており、溶液が使用する
添加剤の量に比例して安定性が改良されるとの考
えに基づいてなされている。有効であることが見
出されたこれらの安定剤としては、ハロゲン化ア
ンモニウム、即ち、塩化アンモニウム、臭化アン
モニウム及び沃化アンモニウム、ならびに１〜６
個の炭素原子のアルキル鎖を有し、ハロゲン化物
が塩化物、臭化物又は沃化物である第一級、第二
級及び第三級アルキルアミンハロゲン化水素酸塩
が挙げられる。本発明において、使用するに適し
たそれらのアルキルアミンハロゲン化水素酸塩と
しては、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジ
ブチルアミン、トリプロピルアミン及びトリブチ
ルアミンの塩化水素酸塩が含まれる。これらのア
ミンの臭化水素酸塩及び沃化水素酸塩もまた使用
される。再生可能な染色性能及び一定の吸光度を
与えることの他に、染色溶液の沈殿の問題が、第
二級及び第三級アルキルアミン（ジメチルアミン
及びトリメチルアミンを除く）の塩化水素酸塩の
存在により除去された。 安定化のための添加剤の量は、特に制限はない
が、0.1〜1.2％（溶液に基づく重量％）の量であ
ることが好ましい。約0.6％（ｗ／ｗ）の濃度で
ジエチルアミン塩化水素酸塩を使用することは、
望ましい安定化を最も低コストで提供する場合に
特に効果的である。又、かかる配合物は、良好な
染色性能を提供し、良く溶解し、且つ、成分の変
化を減少させるのに非常に効果的である。更に、
染色溶液の沈殿物の問題は完全に取り除かれ、且
つ、かかる安定剤を含有する染色溶液の保存寿命
は、2.5〜３年に増加する。 実施例 メタノール1000mlに、ライト染色粉末（エム・
シー・ビー、ノーウツド、オハイオ（MCB、
Norwood、Ohio））３ｇを溶解し、溶液を調製
した。粉末の組成は、エオジンY37％、メチレン
ブルー33％ならびにアズール混合物及びアズール
エオジネート30％であつた。 室温で20分間振盪後、溶液を２週間放置し、不
溶の粉末を過により除去した。次に、過した
染色溶液を、本発明安定剤（candidate
stabilizer）の添加前に、650nｍ（ベツクマン分
光光度計）において吸光度が0.575になるまで希
釈した。 促進されたライト染色溶液に、本発明の安定剤
を添加した際の吸光度比（A650／A525）を第１表
に記載した。これらの比は、染色溶液を1/400希
釈後に、分光光学的走査を行なうことにより得ら
れたものである。525nｍに対する650nｍにおけ
る吸光度の比（ピークの極大は525nｍ或いはそ
の近傍）は、洗色溶液の安定性を監視するために
表示されている。この比は、染色溶液の減成に伴
つて低下することが知見された。 第１表から次の結論が導き出される： 対照染色溶液（安定剤無添加）は、吸光度比の
低下によつて、表示されているように、熟成の際
に、23℃ではゆつくりと、そして50℃では急速に
減成する。安定化された染色溶液は、同一の促進
条件下（即ち、温度及び熟成時間）において、対
応する対照よりも比較的高い吸光度比を有してい
る。 第２表は、安定化された染色溶液の代表的な例
を示す。Et2NH2 +Cl-を0.6％添加したこの溶液
は、50℃で28日間促進を行なつた前後においても
良好な染色性能を示した。対照溶液は、50℃で28
日間の促進を行なつた後に不安定な染色性能を示
した。かかる結果は、染色溶液中の安定剤が、血
液塗抹標本の染色において、何ら好ましくない効
果はないことを示している。染色溶液の保存寿命
は、安定剤の添加により延長されている。
ロマノウスキイ（Romanowsky）型染色溶液の
安定化に関する。ロマノウスキイ型染色溶液、例
えば、ライト（Wright）溶液及びギームザ
（Giemsa）溶液は、メチレンブルー及びエオジン
染料のメタノール溶液を、他の類似染料と共に含
有している。代表的な類似染料としては、アズー
ル（Azure）Ａ、アズールＢ及びアズールＣが挙
げられる。 かかる染料を使用するためには、通常、乾燥染
料のメチルアルコール溶液を調製し、この溶液を
血液塗抹標本等に加えることが必要である。次い
で、この染色された塗抹標本に、緩衝溶液及び洗
浄溶液を、目に見える物理的変化が生じるまで段
階的に加える。 メチレンブルーの他に第二成分の染料、特にエ
オジン（Eosin）Ｙが存在することは、溶液の染
色性能を高めるために望ましい。他の類似した染
料、即ち、アズールＡ、アズールＢ及びアズール
Ｃもまた、血液塗抹標本を染色するための溶液の
能力を高めるに望ましいものである。染料を使用
する通常の方法は、まず溶液にし、次いで一定時
間経過後に使用するものである。染料粉末中のア
ズール染料は、メタノールに殆んど溶解しない。
しかしながら、メチレンブルーは、エオジンの存
在下に溶液中で熟成している間にアズール減成す
る。通常、最適の染色効果を達成するためには、
約２週間の放置期間を要する。不都合なことに、
染料は酸化を続け、生じた酸化生成物により、溶
液は所定の目的に適さないものになつてしまう。
更に、熟成後、染色溶液中における不特定の沈殿
により、染色溶液の品質が低下する。例えば、洗
色溶液は、充分効果を発揮するようになるために
は約２週間を要するけれども、その保存寿命は、
約３か月からおおよそ12か月であるにすぎない。 上記したロマノウスキイ型染色溶液を安定化す
るための方法を提供することは望ましいことであ
り、これが本発明の目的である。 又、充分に増加した保存寿命を有する安定化さ
れたロマノウスキイ型染色溶液を提供することも
本発明の目的である。 本発明は、ロマノウスキイ型染色溶液を安定化
する方法に係わり、この染色溶液は、メチレンブ
ルーとエオジン染色のメタノール溶液から成つて
いる。この方法は、上記染色溶液に、 (a) 塩化アンモニウム、臭化アンモニウムもしく
はヨウ化アンモニウム、又は、 (b) １〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖を含
む第一級、第二級もしくは第三級アミンの塩化
水素酸塩、臭化水素酸塩もしくはヨウ化水素酸
塩 のいずれか、あるいは前記(a)及び(b)の混合物から
なる安定化物質を安定化量添加することからな
る。 最も広く使用されているロマノウスキイ型染色
溶液は、ライト及びギームザ溶液として知られて
いる。両者は、アズール、メチレンブルー及びエ
オジン染料のメタノール溶液から成るものであ
り、前者の場合、アズール及びメチレンブルーの
エオジンに対する吸光度比は、約1.70〜2.10であ
り、後者の場合、吸光度比は、約1.70〜1.80であ
る（吸光度比＝A650／A525）。 再生可能な染色性能、一定の染色溶液の吸光度
及び吸光度比（分光光度計により決定されるも
の）、ならびに沈殿の不在は、染色溶液の安定性
の指標である。種々の添加剤が、溶液の安定性を
改良することが見出されており、溶液が使用する
添加剤の量に比例して安定性が改良されるとの考
えに基づいてなされている。有効であることが見
出されたこれらの安定剤としては、ハロゲン化ア
ンモニウム、即ち、塩化アンモニウム、臭化アン
モニウム及び沃化アンモニウム、ならびに１〜６
個の炭素原子のアルキル鎖を有し、ハロゲン化物
が塩化物、臭化物又は沃化物である第一級、第二
級及び第三級アルキルアミンハロゲン化水素酸塩
が挙げられる。本発明において、使用するに適し
たそれらのアルキルアミンハロゲン化水素酸塩と
しては、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジ
ブチルアミン、トリプロピルアミン及びトリブチ
ルアミンの塩化水素酸塩が含まれる。これらのア
ミンの臭化水素酸塩及び沃化水素酸塩もまた使用
される。再生可能な染色性能及び一定の吸光度を
与えることの他に、染色溶液の沈殿の問題が、第
二級及び第三級アルキルアミン（ジメチルアミン
及びトリメチルアミンを除く）の塩化水素酸塩の
存在により除去された。 安定化のための添加剤の量は、特に制限はない
が、0.1〜1.2％（溶液に基づく重量％）の量であ
ることが好ましい。約0.6％（ｗ／ｗ）の濃度で
ジエチルアミン塩化水素酸塩を使用することは、
望ましい安定化を最も低コストで提供する場合に
特に効果的である。又、かかる配合物は、良好な
染色性能を提供し、良く溶解し、且つ、成分の変
化を減少させるのに非常に効果的である。更に、
染色溶液の沈殿物の問題は完全に取り除かれ、且
つ、かかる安定剤を含有する染色溶液の保存寿命
は、2.5〜３年に増加する。 実施例 メタノール1000mlに、ライト染色粉末（エム・
シー・ビー、ノーウツド、オハイオ（MCB、
Norwood、Ohio））３ｇを溶解し、溶液を調製
した。粉末の組成は、エオジンY37％、メチレン
ブルー33％ならびにアズール混合物及びアズール
エオジネート30％であつた。 室温で20分間振盪後、溶液を２週間放置し、不
溶の粉末を過により除去した。次に、過した
染色溶液を、本発明安定剤（candidate
stabilizer）の添加前に、650nｍ（ベツクマン分
光光度計）において吸光度が0.575になるまで希
釈した。 促進されたライト染色溶液に、本発明の安定剤
を添加した際の吸光度比（A650／A525）を第１表
に記載した。これらの比は、染色溶液を1/400希
釈後に、分光光学的走査を行なうことにより得ら
れたものである。525nｍに対する650nｍにおけ
る吸光度の比（ピークの極大は525nｍ或いはそ
の近傍）は、洗色溶液の安定性を監視するために
表示されている。この比は、染色溶液の減成に伴
つて低下することが知見された。 第１表から次の結論が導き出される： 対照染色溶液（安定剤無添加）は、吸光度比の
低下によつて、表示されているように、熟成の際
に、23℃ではゆつくりと、そして50℃では急速に
減成する。安定化された染色溶液は、同一の促進
条件下（即ち、温度及び熟成時間）において、対
応する対照よりも比較的高い吸光度比を有してい
る。 第２表は、安定化された染色溶液の代表的な例
を示す。Et2NH2 +Cl-を0.6％添加したこの溶液
は、50℃で28日間促進を行なつた前後においても
良好な染色性能を示した。対照溶液は、50℃で28
日間の促進を行なつた後に不安定な染色性能を示
した。かかる結果は、染色溶液中の安定剤が、血
液塗抹標本の染色において、何ら好ましくない効
果はないことを示している。染色溶液の保存寿命
は、安定剤の添加により延長されている。
【表】
【表】
＊：温度〔℃〕
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ アズール、メチレンブルー及びエオジン染料
のメタノール溶液から成るロマノウスキイ型染色
溶液に組み合わせて、更に (a) 塩化アンモニウム、臭化アンモニウムもしく
はヨウ化アンモニウム、又は、 (b) １〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖を含
む第一級、第二級もしくは第三級アミンの塩化
水素酸塩、臭化水素酸塩もしくはヨウ化水素酸
塩 のいずれか、あるいは前記(a)及び(b)の混合物から
なる安定化物質を安定化量含有することを特徴と
する改良染色溶液。 ２ １〜６個の炭素原子を有するアルキル鎖を含
む第一級、第二級もしくは第三級アミンの塩化水
素酸塩、臭化水素酸塩もしくはヨウ化水素酸塩
が、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジブチ
ルアミン、トリプロピルアミン又はトリブチルア
ミンの塩化水素酸塩、臭化水素酸塩もしくはヨウ
化水素酸塩からなる群より選ばれたものである特
許請求の範囲第１項記載の改良染色溶液。 ３ アルキルアミンの塩化水素酸塩が安定剤とし
て使用される特許請求の範囲第２項記載の改良染
色溶液。 ４ 安定化物質が、溶液中に0.1〜1.2重量％の量
で存在する特許請求の範囲第１項記載の改良染色
溶液。 ５ 安定化物質がジエチルアミン塩化水素酸塩で
ある特許請求の範囲第１項記載の改良染色溶液。 ６ ジエチルアミン塩化水素酸塩が、溶液中に約
0.1〜1.2重量％の量で存在する特許請求の範囲第
５項記載の改良染色溶液。 ７ ジエチルアミン塩化水素酸塩が、溶液中に約
0.6重量％の量で存在する特許請求の範囲第６項
記載の改良染色溶液。
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