JPS6344891A

JPS6344891A - アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法

Info

Publication number: JPS6344891A
Application number: JP62015920A
Authority: JP
Inventors: Yoshiji Shinmen; 新免　芳史; Hideaki Yamada; 秀明山田; Akira Shimizu; 昌清水
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1986-03-31
Filing date: 1987-01-28
Publication date: 1988-02-25
Anticipated expiration: 2010-04-19
Also published as: CA1340433C; JPH0734752B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は醗酵法によるアラキドン酸の製造方法に関する
。

（ｊ）〔従来の技−術〕従来から、微生物によるアラキドン酸の生産方法として
は、炭素源として、炭水化物、又は炭化水素を用い、微
生物として、ペニシリューム（Ｐｅｎｔｃｉｌｌｉｕｍ
）属、了スベルギルスｍ旦旦）属、・ロードトルラ１３
ｈｏｄｏ　ｔｏｒｕ　Ｉａ）属・又はフザリューム叩旦
肛り１属に属する微生物を使用する方法が報告されてい
る（特公昭５６−１９２３１．５６−１９２３２゜５６
−１９２３３を参照のこと）。　　　□・しかしながら
、いずれの方法においても収量が低く、または培養時間
が長く、あるいは、工程が複雑である。

また、モルティエレラ刊虹旦ｅｒｅｌｌａ）属の微生物
を用いるアラキドン酸の製造方法は知られていない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は、従来アラキト・ン酸を生産する能力を有する
ことが知られていなかったモルティエレラ属微生物を使
用して、安価な常用の培地を用いて、従来法より短い培
養時間で、高収率で、しかも単純な工程でアラキドン酸
を製造することができる方法を提供しようとするもので
ある。　　　　。

〔問題点を解決するための手段〕

上記の目的はモルティエレラ属に属しアラキドン酸生産
能を有する微生物を培養してアラキドン酸、又はアラキ
ドン酸を含有する脂質を生成せしめ、そしてアラキドン
酸を採取することを特徴とするアラキドン酸の製造方法
により達成される。

〔具体的な説明〕

本発明においては、モルティエレラ属に属し、アラキド
ン酸生産能を有する微生物であれば、すべて使用するこ
とができる。このような微生物として、例えばモルティ
エレラ・エロンガタ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｅｌｏ
ｎｇａｔａ）　ＩＦＯ８５７’０　、モルテイエレラ・
エキシグア（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｅｘｔ　ｕａ）
　ＩＦＯ８５７１、モルティエレラ・ヒグロフイラ（Ｍ
ｏｒｔｉｅｒｅｌ　１ａｈＵ亜１ハ）　ＩＰｏ　５９４
１等を挙げることができる。

これらの菌株はいずれも、財団法人醗酵研究所からなん
ら制限なく入手することができる。

・　また、本発明者らが土壌□から分離した菌株モルテ
ィエレラ・エロンガタＳＡＭ　Ｏ２１９（ｍ工研条寄第
１２３９号）を使用することもできる。

次に、上記の菌株ＳＡＭ　ｏ２１９（ｍ工研条寄第１２
３９号）の菌学的性質を記載する。

各培地における生育状態培養条件：２５℃、暗黒下１、麦芽エキス寒天培地コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーは直径２
８−３１ｍｍ　、培養５日目のコロニーは直径６５−７
２ｍｍ　、コロニーは浅裂状を呈する、気菌糸の発達は
乏しい、胞子のう胞子の形成□　　は良好、胞子のう柄
は気菌糸より生じ北、ニンニクに類似した臭いあり。

２、　バレイショ・ブドウ糖寒天培地コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーは直径２
７−３１ｍｍ　、培養５日目のコロニーは直径７５−８
０ｍｍ　、コロニーはバラの庇状を呈する、コロニー中
心部で気菌糸が著しく発達する、コロニーの裏側は黄白
色あるいは黄色、胞子のう胞子の形成は不良、ニンニク
に類似した臭いあり、臭いはやや強い。

３、　ツアペック寒天培地コロニーの生育は比較的良好、培養２日目のコロニーの
直径は２２−２４ｍｍ　＜培養５日目のコロニーの直径
は５Ｏ−５３ｎ＋ｍ　、気菌糸の発達は乏しい、気菌糸
が密にからまりあうことがある。

胞子のう胞子の形成は非常に良好、胞子のう柄は気菌糸
より生じる。ニンニクに類似した臭いあり。

４、ＬＣＡ寒天培地（培地の調製方法は、三浦宏一部、
工藤光代著“水生不完全菌のための一寒天培地”日本画
学会会報１１巻、１１６−１１８頁、１９７０年に従っ
た）コロニーの生育は良好、培養２日目のコロニーの直径は
２７−２９ｍｍ　、培養５日目のコロニーは直径６４−
６６ｍｍ　、コロニーは浅裂状を呈する、気菌糸の発達
はコロニーの中心部を除いて乏しい、胞子のう胞子の形
成は良好。胞子のう柄は気菌糸より生じる。ニンニクに
類似した臭いあり。

検鏡観察各培地の検鏡積木およびコロニーの直接検鏡で、胞子の
う柄、胞子のう柄の分岐の仕方、胞子のう、胞子のう胞
子などを観察した。

・胞子のう柄は長さ８７．５−３２０μｍ、幅は基部で
３−７．５μｍ５先端に向けて先細り、１．０−２．５
μｍとなる。胞子のう柄はしばしば基部で分岐する。胞
子のうば球形、直径１５−３０μｍ、内部に多数の胞子
のう胞子を含む、離脱後やや不明瞭なカラーを残す。胞
子のう胞子は楕円形、希に腎臓形、表面は平滑、７．５
−１２．５ｘ５−７．５μｍ１厚膜胞子は比較的多数形
成される。単独、希に連鎖することがある。時に数本の
菌糸を周囲に出すことがある。楕円形また亜球形、１２
．５−３０Ｘ７．５−１５μｍ０または直径１２．５−
１５μｍ０接合胞子は観察されない。

３、生理的性質最適生育条件ｐＨ：６−９温度：２０−３０℃ 生育の範囲ｐＨ：４−１０温度：５−ｔＯ℃ 以上の菌学的諸性質に従い本発明の菌株（ＳＡＭ−０２
１９）の分類学的位置の検索を、Ｊ、八、ν０ｎＡｒｘ
＋　”　Ｔｈｅ　Ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　Ｆｕｎｇｉ　ｓ
ｐｏｒｕｌａｔｉｎｇ　ｉｎ　ＰｕｒｅＣｕｌｔｕｒｅ
＋”３ｒｄ　ｅｄ、、　Ｊ、　Ｃｒａｍｅｒ、　１９８
１およびに、Ｈ。

Ｄｏｍｓｃｈ、　Ｗ、Ｇａｍ５．　＆　Ｔ、−）１．Ａ
ｎｄｅｒｓｏｎ、“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆ　５ｏｉ
ｌ　Ｆｕｎｇｉ＋”　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、
　１９８０に準拠して求めると、胞子のう柄の先端に球
状の胞子のうを形成する、柱軸を持たない、胞子のう胞
子に付属糸がない、培養菌糸がニンニクに類似した臭い
を発する、ということから本菌株はＭｏｒｔｉｅｒｅｌ
　ｉａ属に属する真菌であると考えられる。

そこで、Ｗ、Ｇａｍ５＋″八ｋｅｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　５
ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ、”　Ｐｅ
ｒｓｏｏｎｉａ　　９＋３８１−３９１＋１９７７に準
拠して既知のＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ属の種類と菌学的
諸性質を比較すると、本菌株はコロニーがビロード状で
ない、培養菌糸がニンニクに類似した臭いを発する、胞
子のう柄が長さ８７．５−３２０μｍで分岐は下部での
み生じ、葡萄の房状に分岐しない、胞子のうば内部に多
数の胞子のう胞子を含む、ということからＭｏｒｔｉｅ
ｒｅｌ　ｌａ属Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ亜属（Ｓｕｇｅ
ｍ。

Ｍｏｒｔｉ−ｅｒｅｌｌａ）Ｈｒｏ　ｈｉｌａ節（Ｓｅ
ｃｔ、肛肛並ｕハ）に含まれると考えられる。打肛叩ｕ
圏節には２２種が含まれている。本菌株とこれら２２種
と菌学的諸性質を比較すると、本菌株はＭｏｒｔｉｅｒ
ｅｌｌａｕ並並、　Ｍ、ｅｌｏｎ　ａｔｕｌａ＋　およ
びＬ鮭匹■圏の３種に類似すると考えられる。そこで、
Ｋ、　Ｈ，Ｄｏｍｓｃｈ。

Ｗ、Ｇａｍ５．　　＆　Ｔ、−Ｈ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ、
”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ　ｏｆ　ＳｏｉｌＦｕｎｇｉ　
、　’Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８０、およ
びＷ、Ｇａｍ５゜”Ｓｏｍｅ　ｎｅｗ　ｏｒ　ｎｏｔｅ
ｗｏｒｔｈｙ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｍｏｒｔｉｅｒ
ｅｌｌａ＋″Ｐｅｒｓｏｏｎｉａ　９，１１１−１４０
．１９７７　、およびＧ。

Ｌｉｎｎｅｍａｎｎ＋　”Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　　
Ｃｏｅｍａｎｓ　１８６３．”　Ｈ。

Ｚｙｃｈａ　＆　Ｒ，Ｓｉｅｐｍａｎｎ、Ｍｕｃｏｒａ
ｌｅｓ　Ｅｉｎｅ　Ｂｅｓｃｈ−ｒｅｉｂｕｎｇ　　Ａ
１１ｅｒ　　Ｇａｔｔｕｎｇｅｎ　　ｕｎｄ　　Ａｒｔ
ｅｎ　　ｄｉｅｓｅｒＰｉｌｚｇｒｕｐｐｅ、”ｐｐ、
１５５−１４０＋　Ｊ、Ｃｒａｍｅｒ、１９６９を参考
にして、本菌株とこれら３種と菌学的諸性質を比較した
。本菌株は、Ｌαｃｈａｅとは胞子のう柄の長さと基部
の幅、胞子のうの大きさで、明瞭に異なる。Ｍ、ｅｌｏ
ｎ■ｔｕｌａとは胞子のう胞子の形態と大きさで、明瞭
に異なる。五旦並眩的とは胞子のう柄がやや短い、厚膜
胞子の形態が楕円形または亜球形でときに連鎖すること
があり、さらに厚膜胞子がときに数本の菌糸を周囲に出
す、という点で異なるが、本発明者らはこのような差異
は本菌株を肋も山江蛙圏」七四迫ハと別種であるとする
には十分でないと判断した。そこで、本発明者らは本菌
株をＭｏｒｔｉｅｒｅｌ頃」■」ｌ垣ＳＡＭ　０２１９
と同定した。

ＳＡＭ　０２１９株は昭和６１年３月１９日に通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番
号ＦＥＲＭ　ＢＰ−１２３９として寄託されている。

本発明に使用される菌株を培養する為には、その菌株の
胞子、菌糸又は予め培養して得られた前培養液を、液体
培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場合に
、炭素源としてはグルコ−ス、フラクトース、キシロー
ス、サッカロース、マルトース、可溶性デンプン、糖蜜
、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用されて
いるものがいずれも使用できるが、これらに限られるも
のではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキス、麦
芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンステイブリカ
ー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、ならび
に硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム等の無機窒素源を用いることができる。この他必要に
応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅等の
無機塩及びビタミン等も微量栄養源として使用できる。

これらの培地成分は微生物の生育を害しない濃度であれ
ば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は０．１〜３
０重量％、好ましくは１〜１０重量％、窒素源は０．０
１〜５重量％、好ましくは０．１〜２重量％の濃度とす
るのが良い。又、培養温度は５〜４０℃、好ましくは２
０〜３０℃とし、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６
〜９として、通気攪拌培養、振盪培養、又は静置培養を
行なう。培養は通常２〜１０日間行う。

固体培地で培養する場合は、固形物重量に対して５０−
１００重量％の水を加えたふすま、もみがら、米ぬか等
を用い、５〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃の温度に
おいて、３〜１４日間培養を行う。この場合に必要に応
じて培地中に窒素源、無機塩類、微量栄養源を加えるこ
とができる。

アラキドン酸の生産量を増加せしめるためには、培地中
にヘキサデカンもしくはオクタデカンのごとき炭化水素
；オレイン酸もしくはリノール酸のごとき脂肪酸又はそ
の塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩；又はオ
リーブ油、綿実油もしくはヤシ油のごとき油脂類を単独
で、又は組み合わせて存在せしめるのが好ましい。これ
らの添加物は培養開始前の培地又は培養中の培養液に添
加することができる。これらの添加物は一度に添加する
こともでき、又は連続的に、もしくは複数回に分けて経
時的に添加することもできる。培養開始前においては炭
化水素、脂肪酸もしくはその塩、又は油脂類の添加が好
ましく、培養中においては脂肪酸もしくはその塩、又は
油脂類の添加が好ましい。

このように培養して、菌体内に、アラキドン酸を含有す
る脂質が生成蓄積される。液体培地を使用した場合には
、培養菌体から、次のようにしてアラキドン酸の採取を
行なう。

培養終了後、培養液より遠心分離及び濾過等の常用の固
液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いることが
でき、またメタノールと石油エーテルの交互抽出や、ク
ロロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いた抽
出によっても良好な結果を得ることができる。抽出物か
ら減圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度のア
ラキドン酸を含有した脂質が得られる。

また、上記の方法に代えて湿菌体を用いて抽出を行うこ
とができる。この場合にはメタノール、エタノール等の
水に対して相溶性の溶媒、又はこれらと水及び／又は他
の溶媒とから成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用す
る。その他の手順は上記と同様である。

上記のようにして得られた脂質中には、アラキドン酸が
脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として含まれている
。これらを、直接分離することもできるが、低級アルコ
ールとのエステル、例えばアラキドン酸メチルとして分
離するのが好ましい。

このようなエステルにすることにより、他の脂質性分か
ら容易に分離することができ、また、培養中に生成する
他の脂肪酸、例えばパルミチン酸、オレイン酸、リノー
ル酸等（これらも、アラキドン酸のエステル化に際して
エステル化される）から容易に分離することができる。

例えば、アラキドン酸のメチルエステルを得るには、前
記の抽出脂質を無水メタノール−塩酸５％〜１０％、Ｂ
Ｐ。

−メタノール１０％〜５０％等により、室温にて１〜２
４時間処理するのが好ましい。

前記の処理液からアラキドン酸メチルエステルを回収す
るにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶剤で
抽出するのが好ましい。次に、この抽出液を無水硫酸ナ
トリウム等により乾燥し、有機溶媒を好ましくは減圧下
で留去することにより主として脂肪酸エステルから成る
混合物が得ら　　　　−れる。この混合物中には、目的
とするアラキドン酸メチルエステルの他に、バルミチン
酸メチルエステル、ステアリン酸メチルエステル、オレ
イン酸メチルエステル等が含まれている。これらの脂肪
酸メチルエステ混合物からアラキドン酸メチルエステル
を単離するには、カラムクロマトグラフィー、低温結晶
化法、尿素包接体法等を、単独で、又は組み合わせて使
用することができる。

こうして単離されたアラキドン酸メチルからアラキドン
酸を得るには、アルカリで加水分解した後、エーテル、
酢酸エチル等の有機溶媒で抽出すればよい。

また、アラキドン酸をそのメチルエステルを経ないで採
取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば５
％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した後
、この分解液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されてい
る方法により抽出・精製することができる。

次に、実施例により、この発明をさらに具体的に説明す
る。

ス１側１ニゲルコース５％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．３
％及び麦芽エキス０．３％を含む培地（ｐｔ１６．０）
５０−を５００　ｍ！容坂ロフラスコに入れ、１２０℃
で２０分間殺菌した。モルティエレラ・エロンガタＳＡ
Ｍ　０２１９　（Ｆ［！ＲＭ　ＢＰ−１２３９）　　１
白金耳を接種し、レシプロシェーカー（１１０ｒｐｍ）
により２８℃で５日間振盪培養した。培養後、濾過にて
菌体を回収し、十分水洗した後、凍結乾燥した。これに
より、１．３ｇの乾燥菌体を得た。この菌体より、クロ
ロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いるＢｌ
ｉｇｈ　＆　Ｄｙｅｒの抽出法によって総脂質を抽出し
たところ、３２０■の脂質が得られた。この脂質を無水
メタノール−塩酸（９５：５）を用いて２０℃にて３時
間処理してアラキドン酸のメチルエステル化を行なった
。これをエーテルで抽出して２００■の脂肪酸メチルを
得た。この脂肪酸メチルの組成はガスクロマトグラフィ
ーによる分析で、パルミチン酸メチル９％、ステアリン
酸メチル２％、オレイン酸メチル３２％、リノール酸メ
チル９％、γ−リルン酸メチル１０％、アラキドン酸メ
チル２１％、その他１７％であることが認められた。

この混合脂肪酸メチルをカラムクロマトグラフィーによ
って分離し、アラキドン酸メチル画分を分取し、ロータ
リーエバポレーターによって溶媒を留去した結果、２５
■の精製されたアラキドン酸メチルを得た。本標品と市
販のアラキドン酸メチル標準サンプルについて、ガスク
ロマトグラフィー分析、高速液体クロマトグラフィー分
析及び質量分析によって比較を行なったところ、両者は
、いずれの分析においても一致した。精製前及び精製後
の「アラキドン酸メチル」量は培地当り、それぞれ０．
８４■／ｄ、　０．５０■／ｍ！、乾燥菌体当り、それ
ぞれ３２■／ｇ、１９■／ｇであった。

大施皿ｌ実施例１と同じ組成の培地５１を１５ｊ２ジャーファー
メンタ−に仕込み、１２０℃で４０分間殺菌後、モルテ
ィエレラ・エロンガタＳＡＭ　Ｏ２１９（ＦＥＲＭＢＰ
−１２３９）の前培養液２００ｍ１を接種した。３０℃
、通気量０．５ｖ、ｖ、ｍ、で３日間通気攪拌培養を行
ない、得られた湿菌体３６０ｇ　（乾燥重量１１０ｇ）
について、実施例１と同様に抽出、加水分解、メチルエ
ステル化を行なったところ、総脂質２９ｇ、混合脂肪酸
メチル１８ｇを得た。このものの組成は、パルミチン酸
メチル８％、ステアリン酸メチル１％、オレイン酸メチ
ル２９％、リノール酸メチル１２％、γ−リルン酸メチ
ル１１％、アラキドン酸メチル２２％、その他１７％で
あることが認められた。アラキドン酸メチルの生成量は
培地当り、０．７９ｇ／ｆｆｉ、乾燥菌体当り３６■／
ｇであった。

又、培養終了後、濾過によって得られた培養濾液４．３
５０−を乾燥後、実施例１と同様に抽出、加水分解、メ
チルエステル化を行なったところ、２５％のアラキドン
酸メチルを含む混合脂肪酸メチル１５６■を得た。

実施■ユモルティエレラ　エキシクアＭｏｒｔ堕ｒｅｌｌａ」麩
■ａ、　ＩＦＯ８５７１）、及びモルティエレラ　ヒグ
ロフィラＭｏｒｔ力犯状捷］Ｂμ面辻ハ、　ＩＦＯ５９
４１）について実施例１と同様な操作を行なったところ
、それぞれ７２■、９５■の脂肪酸メチルを得た。

これらの脂肪酸メチル中に含まれるアラキドン酸メチル
を単離・精製したところ、それぞれ１２■、及び２０■
であった。

μｌ性グルコース２％、酵母エキス１％、Ｔｗｅｅｎ　２００
．２％、及び種々の炭化水素、脂肪ｉナトリウム、又は
油脂０．５％を含む培地（ｐ■６．０）　２０　ａｌｌ
を１００−容マイヤーに入れ、１２０℃で２０分間殺菌
した。

モルティエレラ・エロンガタＳＡＭ　０２１９　（ＦＥ
ＲＭ　ＢＰ−１２３９）　　１白金耳を接種し、ロータ
リーシェーカー　（２０Ｏｒｐｍ）により２８℃で５日
間培養した。得られた菌体について、実施例１と同様に
抽出、加水分解、及びメチルエステル化を行なった。培
地に添加した種々の炭化水素、脂肪酸ナトリウム、及び
油脂それぞれについて、得られた乾燥菌体重量、総脂質
量、総脂肪酸メチル量、アラキドン酸メチル含量、及び
培地当りのアラキドン酸メチル生成量は下表のようにな
った。

標準培地に炭化水素、脂肪酸、油脂類などを添加するこ
とにより、対照無添加区よりも、アラキドン酸生成量は
１０〜８０％上昇した。

遺１１例」− グルコース２％、及び酵母エキス１％を含む培地（、ｐ
Ｈ６，０）　２０−を１００−容マイヤーに入れ、１２
０℃で２０分間殺菌した。モルティエレラ・エロンガタ
ＳＡＭ　０２１９　（ＦＥＲＭ　ＢＰ−１２３９）　１
白金耳を接種し、ロータリーシェーカー（２０Ｏｒｐｍ
）により２８℃で４日間培養後、種々の脂肪酸ナトリウ
ム又は油脂１００■を１２０℃で１５分間殺菌後、添加
し、さらに同様にして２日間培養した。得られた菌体に
ついて、実施例１と同様に抽出、加水分解、及びメチル
エステル化を行なった。培地に添加した種々の、脂肪酸
ナトリウム、及び油脂それぞれについて、得られた乾燥
菌体当り、及び培地当りのアラキドン酸メチル生成量は
下表のようになった。

どを添加することにより、対照無添加区よりも、アラキ
ドン酸生成量は１０〜６０％上昇した。

手続補正書（自発）昭和６２年６月７３日特許庁長官　黒　１）明　雄　殿１、事件の表示昭和６２年特言ｙ願第０１５９２０号２、発明の名称　　、　　　　　　。

アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法（新名
称）３、補正をする者事件との関係　　特許出願人名称　（１９０）サントリー株式会社４、代理人住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号引　
補正〕２５り雫７１１１’ｑる語間の数１６、補正の対
象ｆｉ＋　　明細書の「発明の名称」の欄（２）　　明細
書の「特許請求の範囲」の欄（３）明細書の「発明の詳
細な説明」の欄７、補正の内容＋１１　　明細書の発明の名称の欄を「アラキドンｍ１
（２、特許請求の範囲を別紙の通りに補正する。

（３）■　明細書第１頁第１８行目、及び第３頁第２行
目「アラキドン酸」を「アラキドン酸及びこれを含有す
る脂質」に補正する。

■　同第３頁第１０行目「製造方法」をｒ製造方法；及
びモルティエレラ属に属しアラキドン酸生産能を有する
微生物を培養してアラキドン酸を含有する脂質を　　　
　　、　　　　　　採取することを特徴とするアラキド
ン酸を含有する脂質の製造方法」に補正する。

９、添付書類の目録特許請求の範囲　　　　　　　　　　１通２、特許請求
の範囲１、　モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属に
属しアラキドン酸生産能を有する微生物を培養してアラ
キドン酸、又はアラキドン酸を含有する脂質を生成せし
め、そしてアラキドン酸を採取することを特徴とするア
ラキドン酸の製造方法。

２、培養開始前の培地に炭化水素、脂肪酸もしくは脂肪
酸塩、または油脂を添加することを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の方法。

３、培養中の培養液に脂肪酸もしくは脂肪酸塩、または
油脂を添加することを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の方法。

４、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌ　ｌａ）属に
属しアラキドン酸生産能を有する微生物を培養してアラ
キドン酸を含有する脂質を　　　　　、−Ｍ＝採取する
ことを特徴とするアラキドン酸を含有する脂質の製造方
法。

５、培養開始前の培地に炭化水素、脂肪酸もしくは脂肪
酸塩、または油脂を添加することを特徴とする特許請求
の範囲第４項記載の方法。

６、培養中の培養液に脂肪酸もしくは脂肪酸塩、または
油脂を添加することを特徴とする特許請求の範囲第４項
記載の方法。

Claims

【特許請求の範囲】１、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属に属
しアラキドン酸生産能を有する微生物を培養してアラキ
ドン酸、又はアラキドン酸を含有する脂質を生成せしめ
、そしてアラキドン酸を採取することを特徴とするアラ
キドン酸の製造方法。２、培養開始前の培地に炭化水素、脂肪酸もしくは脂肪
酸塩、または油脂を添加することを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の方法。３、培養中の培養液に脂肪酸もしくは脂肪酸塩、または
油脂を添加することを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の方法。