JPS6338164A - 抗体タンパクの固定化方法 - Google Patents
抗体タンパクの固定化方法Info
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- JPS6338164A JPS6338164A JP18201586A JP18201586A JPS6338164A JP S6338164 A JPS6338164 A JP S6338164A JP 18201586 A JP18201586 A JP 18201586A JP 18201586 A JP18201586 A JP 18201586A JP S6338164 A JPS6338164 A JP S6338164A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は抗体タンパクの固定化方法に関する。
更に詳しくは、水溶性抗体タンパクを、その抗原−抗体
反応活性を完全に保持しながら固体基板上に該タンパク
を高密度に固定化する方法に関する。
反応活性を完全に保持しながら固体基板上に該タンパク
を高密度に固定化する方法に関する。
〈背景及び従来技術〉
抗体タンパクの抗原−抗体反応を利用した診断技術に於
て、抗体タンパクを固体基板上に固定化する方法がこれ
まで数多く提案されてきた。これらの内、あるものは、
抗体タンパクのアミノ基又はカルボキシル基と反応又は
吸着結合できる官能基を有する固体表面に固定化するも
のであるが、この場合、固定化のための反応条件の設定
によっては、抗体タンパクの変性や、非特異的反応によ
る活性部位の失活が起りやすいという問題点があった。
て、抗体タンパクを固体基板上に固定化する方法がこれ
まで数多く提案されてきた。これらの内、あるものは、
抗体タンパクのアミノ基又はカルボキシル基と反応又は
吸着結合できる官能基を有する固体表面に固定化するも
のであるが、この場合、固定化のための反応条件の設定
によっては、抗体タンパクの変性や、非特異的反応によ
る活性部位の失活が起りやすいという問題点があった。
また、親水性ゲルの中に抗体タンパクを抱き込ませて、
固体基板上に固定化する方法も可能性のある方法である
が、この場合、抗原タンパクがゲル中の抗体タンパクに
接近でき難くなり、抗原抗体反応を利用した診断材料と
しての感度低下を招き易い。こうした方法に対して近年
、水面上に脂質膜を展開し、これに水中から水溶性酵素
（例、カタラーＬ、フエリヂン、ヘミグロビン。
固体基板上に固定化する方法も可能性のある方法である
が、この場合、抗原タンパクがゲル中の抗体タンパクに
接近でき難くなり、抗原抗体反応を利用した診断材料と
しての感度低下を招き易い。こうした方法に対して近年
、水面上に脂質膜を展開し、これに水中から水溶性酵素
（例、カタラーＬ、フエリヂン、ヘミグロビン。
グルコースオキシダーゼ、ｅｔｃ、）や抗体タンパク［
免疫グ「ＪプリンＧ （ＩｇＧ）、 ＩｇＥ、 ｅｔｃ
ｌを成心固定化する試みが報吉されている［バイオキミ
カ・エト・バイオフイジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
Ｂｉｏ−ｐｈｙｓ、八ｃｔａ、） ２２５ｆｆ、 ３
８２ （１９７１）ヤジャーナル・オブ・セルラー・バ
イオケミストリー（Ｊ、 Ｃｅ１ｌ。
免疫グ「ＪプリンＧ （ＩｇＧ）、 ＩｇＥ、 ｅｔｃ
ｌを成心固定化する試みが報吉されている［バイオキミ
カ・エト・バイオフイジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
Ｂｉｏ−ｐｈｙｓ、八ｃｔａ、） ２２５ｆｆ、 ３
８２ （１９７１）ヤジャーナル・オブ・セルラー・バ
イオケミストリー（Ｊ、 Ｃｅ１ｌ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、） ２９．２３９ （１９８５）等参
照］。
照］。
これらは確かにタンパクを、その活性を保持したまま固
定化する優れた方法であるが、この方法に於て従来用い
られてきた脂質膜は、ステアリン酸、アラキン酸及びジ
パルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ＞等の如
く、水に対して可溶性（少くとも、１μｇ／ｌに水の溶
解度）のもの、又は水中で二分子膜ベシクルを形成しや
すいもの（ＤＰＰＣ等）でおった。従って、水面上で該
膜に吸着された抗体タンパクは、時間が経つにつれ、脂
質膜と共に再び水中に再溶解したり、一旦固体基板−Ｌ
に累積した後でも抗原水溶液に浸漬した際、脱離しゃ寸
いという問題点を有していた。
定化する優れた方法であるが、この方法に於て従来用い
られてきた脂質膜は、ステアリン酸、アラキン酸及びジ
パルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ＞等の如
く、水に対して可溶性（少くとも、１μｇ／ｌに水の溶
解度）のもの、又は水中で二分子膜ベシクルを形成しや
すいもの（ＤＰＰＣ等）でおった。従って、水面上で該
膜に吸着された抗体タンパクは、時間が経つにつれ、脂
質膜と共に再び水中に再溶解したり、一旦固体基板−Ｌ
に累積した後でも抗原水溶液に浸漬した際、脱離しゃ寸
いという問題点を有していた。
〈発明の目的〉
本発明者らは、かかる従来技術の欠点を克服し、高い抗
原−抗体反応活性の保持率と、高密度な抗体タンパクの
固定化を可能にすべく鋭意検討の結果、本発明に到達し
たものである。
原−抗体反応活性の保持率と、高密度な抗体タンパクの
固定化を可能にすべく鋭意検討の結果、本発明に到達し
たものである。
〈発明の開示〉
すなわら本発明は、水相面上に展開された水不溶性ポリ
（オレフィン−無水マレイン酸）単分子膜に当該水相中
に溶解した水溶性抗体タンパクを接触させることにより
当該水相界面で抗体タンパク−単分子膜複合体を形成さ
せ、それを固体基板上に積層することを特徴とする抗体
タンパクの固定化方法であり、就中、当該ポリ（オレフ
ィン−無水マレイン酸）がポリ（オクタデセン−無水マ
レイン酸）である上記抗体タンパクの固定化方法である
。
（オレフィン−無水マレイン酸）単分子膜に当該水相中
に溶解した水溶性抗体タンパクを接触させることにより
当該水相界面で抗体タンパク−単分子膜複合体を形成さ
せ、それを固体基板上に積層することを特徴とする抗体
タンパクの固定化方法であり、就中、当該ポリ（オレフ
ィン−無水マレイン酸）がポリ（オクタデセン−無水マ
レイン酸）である上記抗体タンパクの固定化方法である
。
本発明でいう抗体タンパクとは、抗原−抗体反応を起し
うる水溶性タンパクの総称であり、その分子中に抗原認
識部位（Ｆａｂと略）と疎水性末端部位（ＦＣと略）を
有している。
うる水溶性タンパクの総称であり、その分子中に抗原認
識部位（Ｆａｂと略）と疎水性末端部位（ＦＣと略）を
有している。
かかる抗体タンパクの具体例としては、免疫グロブリン
Ｇ（ＩＣＩＧと略称） 、 Ｉ（ＪＥ 、 Ｉ（Ｊ）ｆ
及びこれらの抗体、絨毛性性腺刺激ホルモン（）−Ｉ
ＣＧ ＞抗体、ガン胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体等があげ
られる。
Ｇ（ＩＣＩＧと略称） 、 Ｉ（ＪＥ 、 Ｉ（Ｊ）ｆ
及びこれらの抗体、絨毛性性腺刺激ホルモン（）−Ｉ
ＣＧ ＞抗体、ガン胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体等があげ
られる。
これらの抗体タンパクの固定化に市たっては、Ｆａｂ部
分を変性しないようにすることが肝要であるが、前述の
如〈従来の化学反応による固定化の場合Ｆａｂ部分も反
応に関与して抗体タンパクの活性低下を１Ｇいていた。
分を変性しないようにすることが肝要であるが、前述の
如〈従来の化学反応による固定化の場合Ｆａｂ部分も反
応に関与して抗体タンパクの活性低下を１Ｇいていた。
本発明においては抗体タンパクは、後述のポリ（オレフ
ィン−無水マレイン酸）単分子膜の酸無水物基（これは
水面下に規則的に並んでいるものと考えられる）に水中
からアミン基を介して、例えば反応等による固定化を起
すものと考えられ、従来の化学反応固定法に比べ位置特
異的に固定化が進行する。また、該単分子膜の圧縮圧力
の制御により、膜中にとりこまれる抗体タンパク量の制
御も容易に行える。また、そのような抗体タンパクは色
素やケイ光ラベル化剤又は酵素等で修Ｓｔノだ後に本発
明に用いることもてきる。
ィン−無水マレイン酸）単分子膜の酸無水物基（これは
水面下に規則的に並んでいるものと考えられる）に水中
からアミン基を介して、例えば反応等による固定化を起
すものと考えられ、従来の化学反応固定法に比べ位置特
異的に固定化が進行する。また、該単分子膜の圧縮圧力
の制御により、膜中にとりこまれる抗体タンパク量の制
御も容易に行える。また、そのような抗体タンパクは色
素やケイ光ラベル化剤又は酵素等で修Ｓｔノだ後に本発
明に用いることもてきる。
上記の抗体タンパクを固定化するための単分子−膜とし
ては、水不溶性でかつ単分子膜を形成しうる下記のくり
返し中位を有するポリ（オレフィン−無水マレイン酸）
が用いられる。
ては、水不溶性でかつ単分子膜を形成しうる下記のくり
返し中位を有するポリ（オレフィン−無水マレイン酸）
が用いられる。
♂
（但し、式中Ｒは炭素原子数８〜２０の炭化水素基を表
わし、ｎは２〜１０．０００の整数を表わす）前記の共
重合体は、ベンビンやクロロホルム等の有機溶媒に溶解
させ、０．５〜１．５ミリモル／りの溶液となしたのら
、これを蒸溜水又は多価金属塩（例えば、塩化バリウム
、塩化カドミウム、塩化アルミニウム）を含む、ｐＨ６
，５〜７．５の水溶液表面上に展開覆ることにより、単
分子膜となしうる。次いで、該単分子膜を、その表面圧
りか１〜３ｏｍＮ（ミリＮ）／ｍになるように圧、縮し
たのち、そのままの圧縮条件で膜面下の水相に前記の抗
体タンパクを注入する。所定時間（通常、３０分〜１時
間）、該免疫タンパクと水面上の単分子膜とを接触させ
てあくことにより、タンパクと該単分子膜との複合化が
完了する。この時点で抗体タンパクとポリマー単分子膜
との複合体膜を、表面圧力３０〜５０ｍＮ／ｍにて再び
圧縮したのち、固体基板上にラングミュア・プロジェッ
ト法又は水平付着法（詳細は新実験化学講座第１８巻第
４３９頁参照）により一層又は複数層積層する。
わし、ｎは２〜１０．０００の整数を表わす）前記の共
重合体は、ベンビンやクロロホルム等の有機溶媒に溶解
させ、０．５〜１．５ミリモル／りの溶液となしたのら
、これを蒸溜水又は多価金属塩（例えば、塩化バリウム
、塩化カドミウム、塩化アルミニウム）を含む、ｐＨ６
，５〜７．５の水溶液表面上に展開覆ることにより、単
分子膜となしうる。次いで、該単分子膜を、その表面圧
りか１〜３ｏｍＮ（ミリＮ）／ｍになるように圧、縮し
たのち、そのままの圧縮条件で膜面下の水相に前記の抗
体タンパクを注入する。所定時間（通常、３０分〜１時
間）、該免疫タンパクと水面上の単分子膜とを接触させ
てあくことにより、タンパクと該単分子膜との複合化が
完了する。この時点で抗体タンパクとポリマー単分子膜
との複合体膜を、表面圧力３０〜５０ｍＮ／ｍにて再び
圧縮したのち、固体基板上にラングミュア・プロジェッ
ト法又は水平付着法（詳細は新実験化学講座第１８巻第
４３９頁参照）により一層又は複数層積層する。
その際の抗体タンパクの固体基板上への固定化量は、積
層時の水面展開膜の基板への転移比及びＵｖ−吸収スペ
クトル強度より算出される。
層時の水面展開膜の基板への転移比及びＵｖ−吸収スペ
クトル強度より算出される。
かくして得られた基板上の複合体は、抗体タンパクの抗
原−抗体反応活性を酵素免疫診断法（ＥＩＡ）により求
めた結果、すぐれた活性を示すものであった。
原−抗体反応活性を酵素免疫診断法（ＥＩＡ）により求
めた結果、すぐれた活性を示すものであった。
以下、実施例により本発明を更に詳しく説明する。
実施例１
ポリ（オフタデセン−１−無水マレイン酸）（以下［Ｐ
Ａ−１８］と略す＞４ｍ（Ｊを２５ｄの蒸沼クロロホル
ムに溶解し、５６２ ｃｍ２の水槽表面積を有する表面
圧−面積曲線（以下π−八凹曲線略す）測定用水槽に張
った塩化バリウム３Ｘ１０−５Ｍ、炭酸水素カリウム４
Ｘ １０−４ Ｍの混合水溶液上に、ウルトラマイク
ロピペットを用いて、上記溶液２５０μｍを徐々に滴下
した。それぞれ１ 、１０．２０又は３０ｍＮ／ｍの表
面圧まで仕切板を移動させることにより圧縮した後、水
流からヒトＩｇＧ水溶液を濃度０、Ｏ２ｍＭｄになるま
で注入するという四種の実験を行った。１時間静置した
処、いずれの場合も表面圧の増加が認められ（表−１参
照）、ヒト卸Ｇの吸着が示唆された。
Ａ−１８］と略す＞４ｍ（Ｊを２５ｄの蒸沼クロロホル
ムに溶解し、５６２ ｃｍ２の水槽表面積を有する表面
圧−面積曲線（以下π−八凹曲線略す）測定用水槽に張
った塩化バリウム３Ｘ１０−５Ｍ、炭酸水素カリウム４
Ｘ １０−４ Ｍの混合水溶液上に、ウルトラマイク
ロピペットを用いて、上記溶液２５０μｍを徐々に滴下
した。それぞれ１ 、１０．２０又は３０ｍＮ／ｍの表
面圧まで仕切板を移動させることにより圧縮した後、水
流からヒトＩｇＧ水溶液を濃度０、Ｏ２ｍＭｄになるま
で注入するという四種の実験を行った。１時間静置した
処、いずれの場合も表面圧の増加が認められ（表−１参
照）、ヒト卸Ｇの吸着が示唆された。
表−１
実施例２
実施例１と同様にして水面上に展開したＰＡ−１８を３
０ｍＮ／ｍの表面圧下で圧縮しながら水中からヒトＩｇ
Ｇ水溶液を１２度０．１ｍ（Ｊ／厩になるように注入し
た後、１時間静置した。この水面展開膜を疎水化処理（
シランカップリング処理）を施した石英板上に水平付着
法によって１層転写した。
０ｍＮ／ｍの表面圧下で圧縮しながら水中からヒトＩｇ
Ｇ水溶液を１２度０．１ｍ（Ｊ／厩になるように注入し
た後、１時間静置した。この水面展開膜を疎水化処理（
シランカップリング処理）を施した石英板上に水平付着
法によって１層転写した。
次いで、この転写膜にベルオキシターゼｆｆ！識抗ヒト
ＩＩＧ抗体（２０μｍ／ｒｎｌｌ＞液を作用させた後、
オルトフェニレンジアミン−過酸化水素混合溶液中に浸
漬した処、呈色（褐色）が認められ、転写膜中のヒトＩ
（ＩＧの抗原活性が保持されていることがわかった。
ＩＩＧ抗体（２０μｍ／ｒｎｌｌ＞液を作用させた後、
オルトフェニレンジアミン−過酸化水素混合溶液中に浸
漬した処、呈色（褐色）が認められ、転写膜中のヒトＩ
（ＩＧの抗原活性が保持されていることがわかった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、水相面上に展開された水不溶性ポリ（オレフィン−
無水マレイン酸）単分子膜に当該水相中に溶解した水溶
性抗体タンパクを接触させることにより当該水相界面で
抗体タンパク−単分子膜複合体を形成させ、それを固体
基板上に積層することを特徴とする抗体タンパクの固定
化方法。 ２、当該ポリ（オレフィン−無水マレイン酸）がポリ（
オクタデセン−無水マレイン酸〉である特許請求の範囲
第１項記載の抗体タンパクの固定化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18201586A JPS6338164A (ja) | 1986-08-04 | 1986-08-04 | 抗体タンパクの固定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18201586A JPS6338164A (ja) | 1986-08-04 | 1986-08-04 | 抗体タンパクの固定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6338164A true JPS6338164A (ja) | 1988-02-18 |
| JPH0473749B2 JPH0473749B2 (ja) | 1992-11-24 |
Family
ID=16110843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18201586A Granted JPS6338164A (ja) | 1986-08-04 | 1986-08-04 | 抗体タンパクの固定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6338164A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007225574A (ja) * | 2006-02-27 | 2007-09-06 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 固相担体の製造方法 |
| JP2009522547A (ja) * | 2005-12-29 | 2009-06-11 | コーニング インコーポレイテッド | 検体アッセイのための支持体及びその製造方法及び使用方法 |
-
1986
- 1986-08-04 JP JP18201586A patent/JPS6338164A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009522547A (ja) * | 2005-12-29 | 2009-06-11 | コーニング インコーポレイテッド | 検体アッセイのための支持体及びその製造方法及び使用方法 |
| JP4903224B2 (ja) * | 2005-12-29 | 2012-03-28 | コーニング インコーポレイテッド | 検体アッセイのための支持体及びその製造方法及び使用方法 |
| JP2007225574A (ja) * | 2006-02-27 | 2007-09-06 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 固相担体の製造方法 |
| JP4706502B2 (ja) * | 2006-02-27 | 2011-06-22 | 住友ベークライト株式会社 | 固相担体の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0473749B2 (ja) | 1992-11-24 |
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