JPS63271160A - 糞便試料のイムノアツセイの組成物および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、糞便試料（ｆｅｃａｌ　　ｓａｍｐｌｅ）を
分析するための改良された方法に関する。とくに、本発
明は、イムノアッセイのために糞便試料を調製する方法
、調製された糞便試料組成物、および糞便試料中の被検
体（ａｎａｌｙｔｅ）の存在および量を決定するための
固相イムノアッセイに関する。

便（ｓｔｏｏｌ）または糞便の試料は、種々の病気の診
断において、寄生体、脂肪、オカルト血液、ウィルス、
バクテリアおよび他の有機体および化学物質の存在につ
いて日常的に試験されている。

通常、便を集め、正常な容器に入れ、そして試験のｔ；
めに処理する。

便の収集は、通常、健康な組織を冒さず、そして小児化
または老人医学の患者の試験、臨床的場所から離れた試
験、頻繁な反復試験、そして消化管中に見出されるよう
な被検体の存在の決定において理論的に理想的である。

便は、また、検査の間にスワブまたは指幅で集め、そし
て試験表面上に直接適用することができる。顕微鏡検査
またはオカルト血液の試験のために、試料を試験表面上
に直接広げることができる。他の試験、例えば、脂肪の
試験のために、便を液体媒質、例えば、水の中に懸濁さ
せることができる。

伝統的な試料の検査は、複雑な化学的または微生物学的
な手順を使用してきている。イムノアッセイ法は急速に
これらの手順に取って代わりつつある。イムノアッセイ
技術は、高度に感度があり、かつ非常に少ない試料を必
要とするだけである。

固相技術、例えば、ラテックス凝集比濁法および酵素イ
ムノアッセイは、家庭において、病院または他の試験場
所において、高度に訓練した実験室の技術者または高価
な計器を必要としないで、実施できるような簡素化され
た段階まで発展してきている。こうして、固相イムノア
ッセイ手順を便試料の分析に応用することは高度に望ま
しい。

イムノアッセイ技術の糞便に分析への応用は、いくつか
の理由で困難であることが明らかにされた。便の取扱い
は不快であり、生物学的に危険であり、そして便を処理
するための衛生的な無害の手順は不便であり、そしてし
ばしば複雑であることが明らかにされた。便試料中の被
検体はしばしば不安定である。試料の秤量、抽出および
遠心、および貯蔵は、適当な装置および熟練した技術者
を装備した臨床実験室以外において困難である。

便の構成成分は固相イムノアッセイを妨害することが知
られている。固相へ固定化された免疫反応成分は、便の
構成成分によって脱着される。非特異的反応が起こる。

便中の被検体をｅｔ定するためのイムノアッセイ技術の
商業的使用を増加するために、ある数の問題を解決しな
くてはならない。便中の被検体の不安定性、便の構成成
分からの妨害、便の広範な取扱いの必要性、装置の汚染
、および器具使用の必要性は最小にしなくてはならない
。広範な装置および計器の使用を回避する簡単な調製工
程は、イムノアッセイ試験手順を、病院および臨床実験
室の環境の外側の場所に拡張することが要求される。

水または緩衝液中の１０および２５重量％の便の濃度の
懸濁液の調製を包含するアッセイ手順は、ベラコツト（
Ｖ　ｅｌ　１ａｃｏｔｔ）ら、ザ・ランセット（Ｔｈｅ
　　Ｌａｎｃｅｔ、　）　、ｐｉ　８　（１９８１年１
月３日）およびジルクネン（Ｊ　１ｌｋｕｎｅｎ）ら、
スカシ２４５　（１９８５）に記載された。これらを遠
心し、そして滅菌濾過して試験試料を得た。

免疫反応成分の脱着は、試料を加熱処理するか、あるい
は５容量％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する
５０容量％の胎児仔ウシ血清または酸−蛋白質緩衝液を
試験試料と混合することによって減少されてきた。

非特異性の問題は、還元剤の存在下に試料を加熱処理す
ることによって克服された。

現在の便取扱い手順は、便試料をきれいな容器の中に貯
蔵および移送し、そして試料を低温に維持することによ
って被検体の劣化を減少することを包含する。不均一性
の問題は、全試料の懸濁液を形成するか、あるいはいく
つかの試料をアッセイすることによって解決される；次
いで、懸濁液を遠心、濾過、抽出および滅菌によって処
理する。

便中のヘモグロビンンを測定するための現在の技術は、
問題を簡素化する。ヘモグロビンンを測定するための広
く表面されｔ；いる半定量的手順は、ファイアク（ｑｕ
ａｉａｃ）樹脂紙を使用し、この上で便を過酸化水素と
反応させる。ヘモグロビンンとファイアク樹脂との反応
は青色を形成し、その強度は試料中のヘモグロビンンの
量の関数である。

この方法は、飼料中の動物血液から誘導されたヘモグロ
ビンンとヒトヘモグロビンンとを区別しない。この方法
はヘモグロビンンークアイアク樹脂の反応を妨害する化
学的および生化学的妨害から誘導される変動、および紙
および便の水分の変動にさらされるので、それは真に定
量的ではない。

米国特許第４．３７８．９７１号に記載されている便中
のヘモグロビンを測定する定量的方法は、少量の試料を
還元性媒質中で加熱することかがなる。他の汚染性蛍光
化合物を含まないポリフィリンを、混合物から抽出する
。この手順は、便中のヘモグロビンの非常に感度のある
定量的測定を提供する。しかじかながら、それは広範な
取扱いを必要とし、ヒトヘモグロビンと動物ヘモグロビ
ンとを区別せず、そして迅速に実施することができない
。

Ｃ１ｎ、　Ｐａｔｈ、　）　６９　：　３４２−３４６
　（１９７７）に記載されているラジオイムノディフュ
ージョン（ＲＩ　Ｄ）手順は、既知のヘモグロビン濃度
のカリブレーター（ｃａｌ　１ｂｒａｔｏｒ）と−緒に
ヒトヘモグロビンに対する抗体を使用する。ディスクを
濾紙から打抜き、便試料をディスクに適用し、そしてこ
のディスクをＲＩＤ板上に配置する。カリブレーターを
含浸したディスクと、それを、２４時間反応させる。こ
の試験は８ｍｇの便中の０．３ｍｇのヘモグロビンの検
出限界を有する。それは−夜のインキュベーションを必
要とする。濾紙の使用は感度を限定する。なぜなら、濾
紙上に配置されたヘモグロビンのすべては抗体−抗体反
応に利用されえないからである。不可逆的な蛋白質の吸
収は、濾紙上に配置されたヘモグロビンの５〜ｌＯ％程
度に少なくを解放・させうる。

米国特許！４，５８２，８１１号は、試料中のヘモグロ
ビンを紙中に含浸された抗体と結合させ、次いでこの生
成物を基質と反応させて、ヘモグロビンの偽ペリオキシ
ダーゼ（ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）活性を測
定することを含む手順を記載している。

米国特許第４．４２７．７６９号は、ファイアク樹脂被
覆紙に適用したヘモグロビンを抽出し、そしてそれをサ
ンドイッチイムノアッセイ技術で測定することを含む免
疫学的方法を記載している。

キム（Ｋｉｍ）ら、Ｃ１ｔｎ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔａ
、　　ｌ　５２：　１７５　（１９８５）は、なおほか
のサンドイッチのアプローチを記載しており、ここでガ
ラス繊維のフィルターに適用した便試料をゲル上に配置
し、そして２〜４時間インキュベーションする。

ヘモグロビンは、可視帯の存在または不存在に基づいて
、便１ｇにつき０．２ｍｇのヘモグロビンの限界まで定
量的に決定される。

前述の手順は、便試料を試験系に直接移すことを必要と
する。ヘモグロビンの試料かか試験系への移送はほんの
部分的である。便の構成成分によって引き起こされる望
ましくない反応を試薬でコントロールすることは、便の
構成成分が試料全体に均一に分布しているので困難であ
る。これらの手順の大部分は、よく装備された実験室お
よび訓練された技術者を必要とする。

アダムス（Ａ　ｄａｍｓ）およびライマン（Ｌ　ｙｍａ
ｎ）、Ａｎｎ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｌａｂｓ、　Ｓｃｉ、　
４　：　３４３　（１９７４）は、Ｉｇの便を１００ｍ
１の緩衝液中に配合し、そしてこの懸濁液を濾過するこ
とを含むラテックス凝集試験を記載している。この試験
はヘモグロビンを便の１ｇにつき１０ｍ１の血液のレベ
ルまで検出できる。

ベラコツト（Ｖ　ｅｌｌａｃｏｔｔ）ら、ザ・ランセッ
ト（Ｔｈｅ　　Ｌａｎｃｅｌ　）、１　：Ｉ８　（１９
８１）は、水中の便の２０％懸濁液を試験試料として使
用する蛍光イムノアッセイ法を記載している。この試料
を超音波処理し、そして遠心した後試験する。

日本特許用！６０１７３４７１号（Ｄ　ｉａｌｏｇＤｅ
ｒｗｅｎｔ　　Ｗｏｒｌｄ　　Ｐａｔｅｎｔ　　Ａｃｃ
、　　Ｎｏ、　８５−２５９８０６／４２）は、被検体
を含有する試料を多孔質物質へ適用することを記載して
いる。

この多孔質物質は、被検体と結合する抗体を取り付けた
坦体を含有する。この試料を洗浄し、そしてそれ以上の
試薬と接触させて分光学的特性の変化を発生させる。

欧州特許出願７０３６６号（Ｄ　ｉａｌｏｇ　　Ｄ　ｅ
ｒｖｅｎｔＷｏｒｌｄ　　Ｐａｔｅｎｔ　　Ａｃｃ、　
Ｎｏ、　８３　１２６１２に１０６）は、被検体に対す
る抗体をその上に固定化したビーズおよびペルオキシダ
ーゼ標識第２抗体を使用して、便試料中のヘモグロビン
、アルブミンまたはグロブリンを決定するイムノペルオ
キシダーゼサンドイッチ試験法を記載している。

糞便試料組成物を調製する本発明の方法は、水性糞便試
験溶液中の１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の
便試料の分散液を形成することからなる。水性糞便試験
溶液は、防腐剤および内因性妨害減少剤を含有して、試
験試料成分をアッセイ関連劣化に対して保護しかつアッ
セイを妨害から保護する。本発明の水性糞便試験溶液は
、少なくとも１種の便安定剤または少なくとも１種の被
検体安定剤を含有する。水性糞便試験溶液は、また、イ
ムノアッセイを促進する因子（ａｇｅｎｔ）、例えば、
イムノアッセイを妨害する内因性酵素の少なくとも１種
の阻害剤および非特異的結合を減少するｌまたは２種以
上の非免疫動物蛋白質またはポリアミノ酸ポリマーを含
有する。分散液中の糞便の固体を沈降させて、糞便の固
体を実質的に含有しない清浄化された液相を形成する。

清浄化されだ液相を取り出して、糞便の固体を含有しな
い試験試料を得る。

好ましい便安定剤は、緩衝剤、および抗微生物剤、例え
ば、抗バクテリア剤（ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｇ
ｅｎｔ）および／または抗菌剤（ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉ
ｃ　　ａｇｅｎｔ）を包含する。好ましい被検体保護剤
は、蛋白質加水分解酵素、還元性酵素および／または酸
化性酵素の阻害剤を包含する。アルカリ性ホスファター
ゼ酵素の標識を使用するイムノアッセイのため、好まし
い内因性酵素阻害剤は、内因性アルカリ性ホスファター
ゼの活性を阻害し、ホルムアルデヒドまたは同等に有効
な酵素阻害剤である。

便試料は好ましくは新しく収集するか、あるいは収集直
後に一２０℃以下の温度に冷却されている。次いで、凍
結された便を、水性糞便試験溶液中に分散する直前に、
好ましくは２〜６℃の範囲内の温度に上昇させる。

糞便試料中の被検体を決定する本発明の固相イムノアッ
セイ法は、抗被検体が付着している固体の支持体と清浄
化した液相を十分な時間接触させて、抗体を被検体と接
合させ、そして不溶性支持体に付着するヘモグロビンを
決定することからなる。この方法に従いヒト便の試料中
のヒトヘモグロビンを決定するため、水性糞便試験溶液
は、好ましくは、阻害量のプロイテナーゼ阻害剤、０゜
０２〜０．５重量％のホルムアルデヒドおよび０゜０１
〜１０重量％の非免疫動物蛋白質を含有する。

本発明の目的は、簡単、迅速であり、そして家庭または
他の実験室以外の場所において、技術的に熟練していな
い人によって簡単な安価な源を用いて実施することので
きる、固相イムノアッセイのための便試料を調製する、
改良された手順を提供することである。本発明の他の目
的は、固相イムノアッセイ手順に対する妨害を減少させ
る、便試料組成物を調製する手順を提供することである
。

本発明のさらに他の目的は、便試料のオカルト血液を試
験する改良されたイムノアッセイを提゛供することであ
る。

本発明は、免疫学的技術を使用して分析のための糞便ま
たは便の試料を調製する方法である。この手順は、以後
、便試料中のヒトヘモグロビンを決定するためのイムノ
アッセイ手順に関連して説明するが、これは例示であり
、本発明を限定しない。後述する試料の調製手順は、イ
ムノアッセイ法によって他の側枝検体を決定するための
便試料の調製に同等に適し、そしてこのような応用のす
べてのだめのこの手順の使用は本発明の範囲内に包含さ
れることを意図する。

一般に、本発明の方法は、イムノアッセイにおいて改良
された結果を提供する安定化された便試料溶液を提供す
る。便を水性糞便試験溶液中に１０重量％以下の濃度で
懸濁させる。糞便試験溶液は、便を安定化しかつ被検体
を劣化から保護する因子を含有する。この溶液は、また
、好ましくは、イムノアッセイ妨害の内因性源を減少す
る因子、および非特異的結合を減少する蛋白質を含有す
る。

夏懸濁液から清浄化した液体は、高度に精確なイムノア
ッセイの決定のために十分な被検体を含有する。便およ
び被検体は低いレベルに希釈されるので、保−機能およ
び阻声機能は、試薬がイムノアッセイを有意に妨害しな
いように低い濃度の試薬で達成できることを、われわれ
は発見した。本発明より以前において、化学的または生
化学的な試薬を使用する有効な便の安定化および被検体
の保護は、イムノアッセイ法と非適合性であった。

要求される最高の試薬濃度は、イムノアッセイを大きく
妨害した。したがって、高価な、時間を消費する非試薬
の精製および安定化の技術が、イムノアッセイ分析のた
めの糞便試料の調製に必要であることがわかった。

イムノアッセイ試験のための糞便試料の組成物を調製す
る本発明の方法は、水性糞便試験溶液中の１〜ＩＯ重量
％、好ましくは１〜５重量％の便試料の分散液を形成す
る第１工程を包含する。本発明の水性糞便試験溶液は、
少なくとも１種の便安定剤およυ／または少なくとも１
種の被検体安定剤を含有する。水性糞便試験溶液は、ま
た、好ましくは、イムノアッセイを促進する因子、例え
ば、イムノアッセイを妨害しうる内因性酵素の阻害剤の
少なくとも１種および非特異的結合を減少するための非
免疫動物蛋白質またはポリアミノ酸ポリマーの１または
２種以上を含有する。

便を安定化するため、水性糞便試験溶液は緩衝剤および
／または抗微生物剤を含有する。水性糞便試験溶液は、
便の安定性を増加するように選択されたｐＨに緩衝化す
ることができる。ヘモグロビンのイムノアッセイのため
には、ｐＨ７−０〜８．０を有する緩衝液は望ましい。

緩衝化剤が後のアッセイ手順およびアッセイ試薬を妨害
しない場合、それらの緩衝液剤を使用して水性糞便試験
溶液を調製することができる。適当な緩衝液の１つの例
は、標準のリシ酸塩緩衝化食塩水（ｓａｌｔｎｅ）　、
ｐＨ７，２＝７．６、好ましくは約７．４である。

便安定剤は、試料中の微生物の生長を阻害するが、イム
ノアッセイを妨害しない殺生物剤または生物抑制剤を含
むことができる。後のアッセイ手順およびアッセイ試薬
を妨害しない、普通の殺生物剤および生物抑制剤を使用
できる。適当な殺生物剤の例は、抗生物質、例えば、ペ
ニシリンまたはストレプトマイシン、および抗菌剤、例
えば、ファンジゾーン（［ｕｎｇｉｚｏｎｅ）である。

これらの抗菌剤を含有する商用緩衝液は、ギブコ・カン
パニー（Ｇｉｂｃｏ　　Ｃｏ、　、　Ｎｅｗ　　Ｙｏｒ
ｋ、　ＮＹ）から入手可能である。抗生物質および抗菌
剤の濃度は、選択する試薬の活性に基づいて調節する。

一般に、レベルは微生物の再生を抑制するために十分で
あり、好ましくは微生物の大部分を殺すために十分であ
る。

とくに蛋白質の被検体について、被検体の安定剤または
保護剤は、被検体に影響を及ぼすであろう酵素活性の阻
害剤であることができる。蛋白質加水分解酵素、還元性
酵素および酸化性酵素の阻害剤は有用である。蛋白質加
水分解酵素、還元性酵素および酸化性酵素の活性の阻害
剤は、後のアッセイ手順およびアッセイ試薬を妨害しな
い場合、水性糞便試験溶液の調製に使用できる。適当な
蛋白質加水分解活性の感染剤の例は、フェニルメチルス
ルホニルフルオライ）’　（ＰＭＳＦ）　、ペア’スタ
チンＡ１ベスタチン（Ｂ　ｅｓｔａｔｉｎ）　、および
キモスタチン［シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉｇ
ｍａ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃｏ、　）　］を包含す
る。適当な商品は、蛋白質加水分解活性の阻害剤のアプ
ロチニン、クラウド（Ｋｒａｕｔ）　、Ｈ，ら、Ｚ、Ｐ
ｈ５ｉｏ１．　Ｃｈｅｍ、　　１９８　：　９７−１０
１　（１９３０）に記載されているウシ肺の誘導体であ
る。蛋白質加水分解活性阻害剤は、蛋白質加水分解活性
の主要な比率を阻害するために十分な濃度で存在する。

アプロチニンは、糞便試験溶液の１リツトルにつきｉｏ
、ｏｏｏ〜３０．０００力リクレイン不活性化単位の濃
度で存在できる。

水性糞便試験溶液は、また、好ましくは、使用する特定
のイムノアッセイ手順を妨害しうる酵素活性を阻害また
は不活性化する試薬を含有する。

とくにイムノアッセイがアルカリ性ホスファターゼ標識
試薬を使用するとき、試料中に自然に存在する内因性ア
ルカリ性ホスファターゼは実質的の妨害を示す。試料中
のアルカリ性ホスファターゼのレベルが他の試薬によっ
て適切に抑制されない場合、好ましい試験系は試料中の
アルカリ性ホスファターゼの阻害剤としてホルムアルデ
ヒドを使用する。他の酵素阻害剤は、金属キレート剤、
重金属イオン、ある種のアミノ酸、例えば、チロシンお
よびフェニルアラニン、および高い濃度の亜鉛または無
機リン酸塩を包含する。普通の酵素阻害剤は、後のアッ
セイ手順およびとくにイムノアッセイ手順において使用
する酵素反応を妨害しない場合、水性糞便試験溶液の調
製に使用できる。酵素阻害剤または脱活性化剤のレベル
は、試料に要求される阻害剤のレベルを達成するために
十分であるように選択される。一般の便試料について、
アルカリ性ホスファターゼ阻害剤、例えば、ホルムアル
デヒドを０．０１〜０．５重量％、好ましくは０．０１
〜０．２重量％の濃度で使用できる。

非特異的結合の抑制剤は、好ましくは糞便試験溶液中に
存在する。適当な非特異的結合の抑制剤は、後のアッセ
イ手順を妨害せずそしてとくにイムノアッセイ手順にお
ける蛋白質測定を妨害しない、非免疫水溶性動物蛋白質
およびポリアミノ酸である。適当な動物蛋白質は、次の
ものを包含する：ウシ血清アルブミン（ｉ３ｓＡ）、ヒ
ト血清アルブミン（Ｈ５Ａ）、ウサギ血清アルブミン（
Ｒ３Ａ）、ヤギ血清アルブミン（ＧＳＡ）、ヒツジ血清
アルブミン（ＳＨＡ）、およびウマ血清アルブミン（Ｈ
Ｏ５Ａ）、例えば、前述の動物の血清ガンマアルブミン
および他の動物蛋白質、例えば、オパルブミン、フイブ
リノゲン、トロンビン、トランスフェリン、糖蛋白質な
ど。適当な水溶性アミノ酸ポリマーは、ポリリジン、ポ
リグルタミン　、酸、ポリアラニン、ポリヒスチジン、
ポリメチオニン、ポリプロリンなどを包含する。非特異
的結合が問題を生ずるアッセイについて、非特異的結合
阻害剤の濃度は０．１〜１．０重量％、好ましくは１〜
５重量％である。

防腐剤を添加した水性糞便試験溶液は、また、保護機能
を提供する、他の保護剤、例えば、蛋白質、炭水化物、
塩類などを含有する。

試料中の微生物および化学的変化は、試料を得た直後に
、抑制し、好ましくは完全に阻止すべきである。便は、
得た直後に、水性糞便試験溶液中に分散させることが好
ましく、ここで緩衝液中の防腐剤および他の試薬は試料
を安定化するであろう。試験前に便を貯蔵まＩ；は輸送
する場合、便は得た直後に一２０℃以下の温度に急速に
凍結して、化学的および微生物的変化を防止すべきであ
り、そして試料を水性糞便試験溶液中に分散するまで、
試料をこの温度に維持すべきである。分散直前に、凍結
した試料の温度を２〜６℃の範囲内に上昇させる。

次いで、分散液中の糞便の固体を沈降させて、糞便の固
体を実質的に含有しない液相を形成し、そして清浄化し
だ液相を取り出し、糞便の固体を実質的に含有しない試
験試料を得る。

第１図は、本発明に従う便試料を処理するために適当な
、開いたバイアルおよびスパチュラの組み合わせを示し
、そして第２図はその断面図である。容器２は透明な有
機ポリマーまたはガラスから作られた本体４を有し、そ
の外表面上に液面または体積の目盛線６を有する。本体
の底は円錐形の固体の受器８が形成されており、受器８
は本体４を軸方向に直立した位置に維持する円筒形スタ
ンドＩＯ内に囲まれている。キャップ１２はねじ込まれ
て、本体のねじ山１４と密閉したねじ込みかみ合いを形
成する。平らな端１８を有するスパチュラ−撹拌装置１
６は、キャップ１２に取り付けられており、本体４によ
って形成された分散および沈降キャビティ２０の中に下
方に延びている。

スパチュラまたは試料用スプーン１６は、選択した量の
便を取り、そしてそれをバイアル２中の選択した体積の
液体２２の中に分散するような形状寸法を有する。この
懸濁液を沈降させ、そして固体を円錐形の底８に集め、
容器の上部に清浄化した液体を残す。この容器は、定量
的イムノアッセイのための便の希釈物を調製するために
適する。

それ以上の希釈物は、清浄化した液体をバイアルから糞
便の試験溶液または他の適当な水性糞便試験媒質の他の
容器へ移すことによってつくることができる。競合イム
ノアッセイのため、糞便試験溶液または希釈媒質を使用
して所望の希釈物を得ることができる。サンドイッチイ
ムノアッセイのため、糞便試験溶液または希釈媒質は、
被検体の決定のために必要な、適当な還元剤を含有でき
る。

第１図および第２図に示すタイプの容器は、また、糞便
試験溶液中に分散した便試料の貯蔵および輸送のために
適する。阻害緩衝液中の希釈では、臭いを最小にし、そ
して試料の外観の不都合さを少なくする。しかしながら
、好ましい方法において、新鮮な試料を、清浄化および
試験のため、容器内の液体媒質中に移す。

驚くべきことには、本発明の試料調製手順は、糞便試験
溶液中に適当な試薬阻害剤を使用して実施するとき、先
行技術の方法よりもはるかにいっそう効率的にかつ複雑
な、長たらしい、労力を要する手順を用いないで、妨害
活性を減少させる。

緩衝溶液中の試料の分散は、試薬による均一かつ迅速な
阻害および保護の作用を可能とする。引続くイムノアッ
セイにおける便の構成成分の潜在的な有害作用の阻止は
、先行技術の手順を用いた場合よりも、いっそう効率的
かつ完全である。

本発明によるヒト便試料中の被検体の決定のための固相
イムノアッセイは、清浄化した液体試験試料を、抗被検
体抗体が付着（ａｄｈｅｒｅ）　した固体の支持体と、
十分な時間接触させて、抗体を被検体と接合させ、そし
て不溶性支持体に付着する被検体を決定する工程を含む
。水性緩衝溶液の阻害剤および試薬の選択は、実施する
イムノアッセイを促進するように選択する。ラテックス
凝集比濁イムノアッセイ、競合イムノアッセイおよびサ
ンドイッチイムノアッセイを包含する広範な種類の固相
イムノアッセイ手順を、本発明に従って調製した試料を
使用して実施できる。これらの手順は、広範な種類の物
理的に検出可能な標識で、あるいはそれ以上の反応で物
理的に検出可能な標識を生成する活性標識、例えば、酵
素または酵素基質で、標識した抗体または試薬被検体を
使用できる。

例えば、清浄化した液体は、抗（ヒトヘングロビン）抗
体を用いて、試料中のヒトヘモグロビンを決定するため
に使用できる。この手順のため、糞便試験溶液は、好ま
しくは、便安定剤として、緩衝剤および抗微生物剤；お
よび被検体保護剤として、蛋白質加水分解酵素阻害剤を
含有する。ホスファターゼ標識試薬を使用するイムノア
ッセイのため、水性糞便試験溶液は、好ましくは、また
、還元剤および非特異的結合抑制剤を含有する。このア
ッセイのための水性糞便試験溶液は、好ましくは、７．
０〜８．０のｐＨに緩衝化し、そして殺生物量の抗微生
物剤、阻害量のグロイテナーゼ阻害、０．０２〜０．５
重量％、最適には０．０２〜０．１重量％のホルムアル
デヒド、および１〜１０重量％の動物アルブミンを含有
する。

本発明を、次の特定の非制限的実施例によって、さらに
説明する。特記しないかぎり、温度はセ氏であり、そし
て百分率は重量％である。ここにおいて構成的に実施さ
れる実施例は現在の時制で記載し、そして前もって実施
した実験室の実験を表わす実施例は過去の時制で記載す
る。

実施例１ 糞便のオカルト血液Ｑイムノアッセイ ヤギを、標準手順によって、精製したヒトヘモグロビン
のパリアンス（Ｖ　ａｒｉａｎｃｅ）　Ａ　［アイソラ
ブ（Ｉｓｏｌａｂ）ＰＨ１００、オハイオ州アクロン］
で免疫化する。ヤギからのブリード（ｂｌｅｅｄｓ）を
ヒトヘモグロビンに対して、ヘモグロビンに対する抗体
が確認されるまで、試験する。ポリスチレンのマクロビ
ーズ（６〜８　ｍｍ）をグリシン−食塩水（ｓａｌｉｎ
ｅ）緩衝液、ｐＨ８，２、中に希釈した抗血清中に懸濁
させて、ヤギ抗（ヒトヘングロビン）抗体の被膜を形成
する。

透析した仔つシ腸アルカリ性ホスファターゼをグルタル
アルデヒドの存在下にヘモグロビンと混合シて、ヘモグ
ロビン−アルカリ性ホスファターゼ接合体を形成する。

この反応生成物を、セファシル（ＳＥＰＨＡＣＹＬ）Ｓ
−３００カラム［７アーマシア（Ｐ　ｈａｒｍａｃｉａ
）　］で精製し、ＭｇＣ１５を含有するトリス緩衝液で
溶離する。

緩衝液化した水性糞便試験溶液は、０．１重量％のアジ
化ナトリウム、１重量％のウシ血清アルブミン、ＩＯ，
ｏｏｏｕＬのアプロチニン［トラシロール（ＴＲＡＳＹ
ＬｏＬ）、モベイ・ケミカル（Ｍｏｂａｙ　　Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ）　、ニューヨーク州ニューヨーク］および６
９４マイクロリツトル／リツトルのホルムアルデヒドを
含有する。０．０２モルのリン酸塩緩衝化食塩水（ｓａ
ｌｉｎｅ）　％　ｐＨ７。

４、である。

便試料（Ｉｇ）を３０ｍ１の前記糞便試験溶液中に分散
させる。

ヘモグロビンのカリブレイク−（ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ
）対照を、前記糞便試験溶液中にヒトヘモグロビンを所
望濃度で溶解することによって調製する。

酵素基質のｐ−ニトロフェニルホスフェート［シグマ（
ＳＩＧＭＡ）１０４ホスフアターゼ基質錠剤、シグマ・
ケミカル・カンパニー、ミゾリー州セントルイス］を、
０．０５モルのＮａＨＣＯ２，０．０５モルのＮａＣ１
および０．１ミリモルのＮｇＣｌ、を含有する緩衝液中
に溶解する。錠剤は完全に溶解するに違ない。

アッセイ手順 １１　すべでのアッセイ試薬および試料を室温に平衡化
する。

２、　各カリプレイター、対照および試料についての反
復実験において試験管を標識する。

３、　カリブレイク−１対照および清浄化した便試料の
溶液の各々の５０マイクロリツトルをピペットで各試験
管の底に入れる。体積はｌＯ〜１００マイクロリットル
の範囲から選択することができる。

４、　１ｍｌの緩衝溶液を各試験管にピペットで入れ、
管を振盪して混合する。

５、　必要な数のビーズを吸収紙の上に配置し、そして
１つのビーズを容管の中に落下させる。振盪してビーズ
および液体を混合する。

６、　すべての管を室温で３０分間インキュベーション
する。各インキュベーションの間、管を３〜４回規則的
な間隔で十分な力で振盪して、ビーズを管の底から持上
げる。

７、　液体をすべての管からデカンテーションまたは吸
引する。各ビーズを５ｍｌの蒸留水で室温において洗浄
する。液体をすべての管からデカンテーションまたは吸
引する。

８、　洗浄工程（７）をさらに２回反復し、そして最後
の洗浄後、すべの残留水をアスピレータ−によって、あ
るいは管を吸収紙の上で倒立させることによって、除去
する。

９、２００マイクロリツトルの調製したヘモグロビン−
アルカリ性ホスファターゼ接合体溶液をすべての管に添
加し、そしてすべての管を室温で３０分間インキュベー
ションする。管３〜４回規則的な間隔でインキュベーシ
ョンの間に振盪させる。容管についてのインキュベーシ
ョン時間は同一でなくてはならない。これは、すべての
試薬をすべての管の中に同一順序で中断なくかつ同一の
経過時間で、ピペットで入れることによって達成できる
。

ＩＯｌ　　各ビーズを５ｍｌの蒸留水で室温において洗
浄する。液体を容管からデカンテーションまたは吸引す
る。

１１、　　洗浄工程（１０）をさらに２回反復する。最
後の洗浄後、すべの残留水をアスピレータ−によって、
あるいは管を吸収紙の上で倒立させることによって、除
去する。

１２、２００マイクロリツトルの酵素基質溶液を容管の
中に小出しし、モして容管を位板の中で室温において３
０分間インキュベーションする。管を３〜４回規則的な
間隔でインキュベーションの間に振盪する。インキュベ
ーション時間は容管について同一でなくてはならない。

工程（９）におけるピペッティング手順は、これを達成
するために示唆される。

１３、４０５ｎｍにおける吸収を読む。

平均の吸収を、カリブレーター、対照および試料につい
て計算する。カリブレーターから得られたデータを半対
数グラフ紙にプロットし、吸収をＹ軸にプロットし、そ
してヘモグロビンの濃度をＸ軸にプロットする。最良に
適合する細線を点に沿って引いて、検量線を作成する。

試料の吸収をこの検量線に適用して、試料の濃度を決定
する。

−ヒの手順をカリブレーク一対照系列を用いて実施する
：陽性の対照はヒトヘモグロビンを緩衝溶液中に混合す
ることによって形成し、そして陰性の対照はウサギヘモ
グロビンを緩衝溶液中に混合することによって形成する
。結果を表Ａに要約す表Ａ Ａ　　　　　０１，５２６ １，５６９１，５４７ Ｂ　　　　　ｌ　　　　１．４２０ １．４００　　　１．４１０ ｃ　　　　　５　　　０．９４５ １．００６　　　０．９７６ Ｄ　　　　　２！＞　　　　０．３８１０．４１０　　
　０．３９５ Ｅ　　　　　５０　　　０．３３０ （Ｌ３１５　　　０．３２２ 陽性の対照　５　　　　１．０３４ １．０４９　　　　　１．０４１ 陰性の対照　０．２　　　１．５５８ １４２２　　　１．５００ ｍｇヘモグロビン／ｇ便 マイクログラム／ｍｌヘモグロビン×３０便の重量（ｍ
ｇ） 実施例２ アルカリ性ホスファターゼ阻害剤 内因性アルカリ性ホスファターゼに対する阻害剤を添加
しない８つの便懸濁液を、実施例１に記載する手順に従
って試験した。同一試料を糞便試験溶液中に種々の濃度
で懸濁し、そして実施例１の手順に従って試験した。ヒ
トヘモグロビンを含有しないカリブレーターを、また、
試験した。得られた結果を表Ｂに示す。

光学濃度（０．Ｄ、）の比 試料懸濁液の０．Ｄ。

カリブレーターのＯ，Ｄ。

表Ｂ Ｏ，Ｄ、比 便試料　０％ＣＨ，０４％ＣＨ，０１％ＣＨ２Ｏ０．５
％ＣＨ，０１２，７，７２，９３２，０ ２２，６，７６，８６１，６ ３１，８，４３，６０１，０ ４１，３，５２，７３０．８ ５０．９’、４７　　　．４９　　　０．９６　　　１
．３　　．４６　　．７４　　　０．９７　　　０．８
　　．５２　　．６６　　　０．９８　　　２．２　　
．５４　　．９４　　　１．０１．０の０．Ｄ、比は、
最適な阻害を表わす。

データが立証するように、最適な阻害は１．０重量％以
下のホルムアルデヒド濃度で大抵の試料で達成され、そ
していくつかの試料において、最適な阻害は０．５重量
％のホルムアルデヒド濃度において達成された。

実施例３ 被検体の安定化 この実施例は、ヘモグロビンは未希釈の便中で不安定で
あること、未希釈の便への安定剤の添加は安定化の努力
として無効であること、そして糞便試験溶液中に本発明
に従い希釈した便は室温において安定化できることを立
証する。

手順Ａ：３００マイクログラムのヒトヘモグロビンを０
．１ｇの未希釈の便に添加し、そしてこの混合物を１０
分間室温において放置した。次いで、便を３０ｍ１の糞
便試験溶液中に懸濁し、そしてヘモグロビンの濃度を実
施例１の手順に従い測定した。２．６マイクログラム／
ｍｌのヘモグロビンの平均の測定濃度が見出され、これ
に比較して期待した値は１０マイクログラム／ｍｌであ
った。

手順Ｂ：手順Ａを反復したが、ただし２０マイクロリツ
トルのアプロチニン安定剤を、３００マイクログラムの
ヘモグロビンと同時に未希釈の便に添加した。ヘモグロ
ビンの平均の測定濃度は、期待した値のｌＯマイクログ
ラム／ｍｌに比較して、０．１６マイクログラム／ｍｌ
であることが見出された。この事実が立証するように、
安定剤は、未希釈の便に添加するとき、ヘモグロビンの
保護のために有効ではなかった。

手順Ｃ：手順Ｂを反復したが、ただしヘモグロビンの添
加前に、アプロチニンを含有する糞便試験溶液中に３　
、３３ｍｇ／ｍｌの便を懸濁させた。ヘモグロビンの平
均の測定された濃度はｌＯマイクログラム／ｍｌであり
、期待した濃度であった。この事実が立証するように、
本発明に従い便試料を希釈することによって、ヘモグロ
ビンの有効な安定化を達成できる。

実施例４ ヘモグロビンの回収 この実施例は、濾紙表面に適用したヘモグロビンの主要
比率は回収できないが、これと対照的に希薄な懸濁液に
おいて回収レベルは高いことを明らかにする。

便の５００ｍｇの試料を、実施例１に記載する糞り試験
溶液の１．、　Ｏｍｌと混合した。この試料の均一の混
合した部分を濾紙膜上に配置した。この試料の重量を、
試料の適用の前および後に、膜を秤量することによって
決定した。次いで、膜をｌ。

Ｑｍｌの糞便試験溶液中に入れ、そして１５〜１８０分
間放置した。この緩衝液の試料を実施例１の手順に従っ
てアッセイした。この手順を反復したが、ただし試料は
糞便試験液体に直接添加した。

ヘモグロビンの回収を表Ｃに示す： 衆旦 １５　　　　　２．４　　　　　　　７０．８３０　　
　　　３．６　　　　　　　５９．２６０　　　　　２
．３　　　　　　１０７．７１２０　　　　　２．４　
　　　　　１０１．２１８０　　　　　２．８　　　　
　　　３３．１試料を糞便試験溶液中に直接入れたとき
、実質的により高いヘモグロビンの回収が得られた。

実施例５ 便の希釈 添加したヘモグロビンの回収 この実施例は、実施例１に記載する糞便試験溶液中に便
を希釈することによって、ヘモグロビンの回収の増大が
達成されることを立証する。糞便試験溶液中に２５重量
％の便および７５マイクログラム／ｍｌのヘモグロビン
を含有する便の試料、および懸濁液を糞便試験溶液中に
１系列の希釈で希釈した。希釈した溶液のヘモグロビン
濃度を実施例１に従い測定し、回収に有効なヘモグロビ
ンの理論量と比較した、ヘモグロビンの百分率を決定し
た。結果を表りに示す： 表ｐ 希釈、（ｖ／ｖ）　　　　測定したヘモグロビン、％な
し　　　　　　　　　　　３７．３ １：２　　　　　　　　　　６１．３ ！：４　　　　　　　　　　６８．４ １：８　　　　　　　　　１００ １：１６　　　　　　　　１００ １：３２　　　　　　　　　　　１００データが示すよ
うに、回収は濃側懸濁液におい劣り、そして便を３重量
％以下の濃度に希釈したとき、回収はより高い。

実施例６ 便の希釈 添加したヘモグロビンの回収 この実施例は、ｌＯマイクログラム／ｍｌのヘモグロビ
ンと混合した便を実施例１の糞便試験溶液中に３重量％
および１０重量％の便の濃度に希釈することによって、
ヘモグロビンの回収が比較的増加することを立証する。

ヘモグロビンは実施例１の手順に従って測定した。結果
を表Ｅに示す。

衆旦 回収、マイクログラム／ｒａＱ 便試料　　　　　３％の便　　　１０％の便１　　　　
　１１、・８５　　　　９．１２　　　　　　１１．８
６　　　１１．３３　　　　　　　　１１．４０　　　
　　　８．３４　　　　　　　　１０．３　　　　　　
１１．８５　　　　　　　　１２．９　　　　　　　　
８．１６　　　　　　　　　　９．９　　　　　　１０
．４７　　　　　　　　１０．７　　　　　　　９．４
８　　　　　　　　１０．７　　　　　　１０．０９　
　　　　　　　１１．５　　　　　　１１．４１０　　
　　　　　　１２．１　　　　　　　９．０１１　　　
　　　　　　９．９　　　　　　１３．８１２　　　　
　　　　　９．１　　　　　　　５．４このデータが示
すように、ヘモ、グロビンの回収の減少は側修に変動し
、そして一般に、１０％の便の希釈は３％への低い希釈
よりもヘモグロビンの回収を低くした。

実施例７ 便の希釈 内因性ヘモグロビンの回収 この実施例は、内因性ヘモグロビンを含有する試料を実
施例１の糞便試験溶液中に３重量％および１０重量％の
便の濃度に希釈することによって、内因性ヘモグロビン
の回収が比較的増加することを立証する。ヘモグロビン
は実施例１の手順に従って測定した。測定した比は次の
式で計算した：結果を表Ｆに示す。

表Ｆ 回収、マイクログラム／ＩＩＩＱ 便試料　３％の便　１０％の便　測定した比１　　　　
９．３　　１８．０　　　６４．３２　　　　９．５　
　１８．７　　　６５−７３　　　１１．４　　　９．
８　　　２８．７４　　　　９．２　　　５．４　　　
１９．にの実施例が、再び、示すように、ヘモグロビン
の回収は便試料を希釈することによって増加し、そして
内因性ヘモグロビンを用いて得られた結果はヘモグロビ
ンを試料に添加した試料とよく相関関係をもつ。

実施例８ 酵素阻害剤 内因性ヘモグロビンの測定 １０．０００ｕ／Ｌのアプロチニンおよび０．０２６重
量％のホルムアルデヒド、阻害剤濃度Ａ１を含有する実
施例１の糞便試験溶液中に、実施例７において使用した
便試料の一部分を３重量％および１０重量％の濃度に希
釈した。３０．０００ｕ／Ｌのアプロチニンおよび０．
０７８重量％のホルムアルデヒド、阻害剤濃度Ｂ１両者
の酵素阻害剤の前者の濃度の３倍、を含有する実施例１
の糞便試験溶液中に、実施例７において使用した便試料
の一部分の他の組を３重量％および１０重量％の濃度に
希釈した。次いで、すべての試料のヘモグロビン濃度を
実施例１の手順に従って測定し、そして各阻害剤濃度を
もつ各試料についてヘモグロビン濃度の測定した比を実
施例７における式に従って計算した。結果を表Ｇに示す
。

表ｐ ヘモグロビンの回収 便試料　　測定した比　　測定した比 阻害剤濃度、Ａ　阻害剤濃度、Ｂ １　　　　６４．３　　　　　９６．３２　　　　６５
．７　　　　　７１．０３　　　　２８．７　　　　　
３０．２４　　　　１９．６　　　　　２４．０この実
施例が示すように、便懸濁液の濃度がより高いとき経験
するヘモグロビンの回収および測定における損失は、阻
害剤濃度を増加することによって部分的に補償すること
とができる。しか゛しながら、より高い阻害剤濃度はヘ
モグロビンの値の測定を妨害し、そして応答曲線を平担
化する。

より希薄な懸濁液を使用することによって、よりすぐれ
た回収および測定はより少ない量の阻害剤でなすことが
でき、アッセイへの阻害剤の妨害は実質的に減少する。

実施例９ ”Ｃｒイソ標識赤血球との相関関係 血液損失試験の一部として＠　ｌ　Ｃｒイソ標識（１ｓ
ｏｌａｂｅｌｅｄ）赤血球を摂取した１６３人の患者か
ら、便試料を得た。ｓ′Ｃ「の測定は絶対的方法であり
、そしてこの方法は便中のへモグロビンアッセイの精度
を決定するための参照として使用する。

便中のヘモグロビンを、また、実施例１の手順に従い、
糞便試験溶液中の便の０．１８重量％および６．６重量
％の濃度で測定した。本発明の方法を使用して得られた
結果［イムノカルト（Ｉ　ＭＭＵＮＯＣＵＬＴ■）試験
］を、便中のＩ　Ｉ（、のガイガーカウンター測定によ
って決定した血液の損失と相関関係づける。次の相関関
係が、２つのアッセイの間で確立された： Ｉ−（０．７２ｘＣ）＋０．０７ ここで、 ■は本発明の方法による血液の損失のｍｌであり、そし
て ＣはＩ　Ｉ　Ｃｒ測定による血液の損失のｍｌである。

回帰係数は０．８４であった。これにより、本発明の方
法と参照法との間の許容されうる定量的関係が立証され
た。

実施例１Ｏ 半定量的方法 ■系列の便試料の１重量部を、実施例１に記載する糞便
試験液体の１０重量部中に懸濁した。清浄化した懸濁液
の１０マイクロリツトル（μｌ）および５０マイクロリ
ツトル（μｍ）を、実施例１の手順、イムノカルト（Ｉ
ＭＭＵＮＯＣＣＵＬＴ■）試験、によって測定した。試
料は、また、ヘモカルト（ＨＥＭＯＣＣＵＬＴ■）試験
によって、ヘモグロビンの定量的推定のために測定した
。

結果を比較して表Ｈに示す。

表Ｈ イムノカルト試験、ｕｇｌｍＱ 便試料へモカルト試験　１０ｕｌ　　５０ｕｌ　　比１
　　　３＋　　　　　　　４．１　　２２．５　　５．
５２　　　２＋　　　　　　　４．４　　２１．０　　
４．７３　　　４＋　　　　　　６５．２　２０３．０
　　３．１４　　　　　　３＋　　　　　　　　　　　
　１７．０　　　　２３．７　　　　１．４５’　　　
　　１＋　　　　　　　　　　　０．１　　　　０．１
　　　　１．０６　　　　１＋　　　　　　　　　　０
．１　　　　１．３　　１３．０７　　　−ｖａ　　　
　　　Ｏ，７５０．７２１，０８−ｖｅ　　　　　　　
　　１．０１　　　０．９７　　１〜０９　　　　−ｖ
ｅ　　　　　　　　　Ｏ，０５０．０５１，０１０−ｖ
ｅ　　　　　　　　　Ｏ，４７２，４７４，５１１〜ｖ
ｅ　　　　　　　　　１．０８　　　１．２８　　１．
２１２　　　　−ｖｅ　　　　　　　　　１．８９　　
　１〜４６　　０−８１３　　　　−ｖｅ　　　　　　
　　　１．３８　　　２．２９　　１．７１４　　　、
　　−ｖｅ　　　　　　　　　１．９１　　　１〜２９
　　０．７１５　　　　−ｖｅ　　　　　　　　　Ｏ，
２６０．０２０．１１６−ｖｅ　　　　　　　　　Ｏ，
２００．０８０．４１７±　　　　　　　　０．０１　
　　０．４２　４２．０表Ｈにおける結果を比較すると
理解できるように、ｌＯμ１１５０μｌの絶対値の比は
＋ｖｅヘモカルト（ＨＥＭＯＣＣＵＬＴ）試験の試料に
ついて高い。ある試料において、前記値は低く、そして
比は、また、低く、真の−ｖｅ試料を示している。

他の試料において、前記値は高く、多少の血液の損失を
もつ真の境界線の患者を示している。比較すると明らか
なように、イムノカルト（Ｉ　ＭＭＵＮＯＣＣＵＬＴ）
試験が明瞭に陽性の血液の損失を与えるとき、ヘモカル
ト（ＨＥＭＯＣＣＵＬＴ）試験は低いヘモグロビンの試
料について−ｖｅまたは出値を示すことがある。イムノ
カルト（Ｉ　ＭＭＵＮＯＣＣＵＬＴ）およびヘモカルト
（ＨＥＭＯＣＣＵＬＴ）は登録商標である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の方法における使用に適した試料調製
用バイアルの図面である。 第２図は、第１図の試料調製用バイアルの断面図である
。 ２　容器 ４　本体 ６　目盛線 ８　円錐形固体受器 １０　円筒形スタンド １２　キャップ １４　本体のねじ山 １６　スパチュラ−撹拌装置、試料用スプーン１８　平
らな端 ２０　分散および沈降キャビティ ２２　液体 ボレーテツド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、工程 ａ）少なくとも１種の便安定剤または少なくとも１種の
   被検体保護剤を含有する水性糞便試験溶液中の１〜１０
   重量％の便試料の分散液を形成し、 ｂ）糞便の固体を前記分散液中において沈降させて、糞
   便の固体を実質的に含有しない液相を形成し、そして ｃ）前記液相を取り出して実質的に糞便の固体を含有し
   ない試験試料を得る、 を含んでなることを特徴とするイムノアッセイ試験のた
   めの糞便試料組成物を調製する方法。 ２、便安定剤は、緩衝剤、微生物の生長を抑制するため
   の殺生物化合物または生物抑制化合物、あるいはそれら
   の混合物である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、殺生物化合物または生物抑制化合物は、微生物の生
   長を抑制するために十分な濃度の抗生物質または抗菌剤
   である特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４、水性糞便試験溶液は、緩衝剤、抗生物質および抗菌
   剤を含有する特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、水性糞便試験試料は被検体保護剤を含有する特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ６、被検体保護剤は、蛋白質加水分解酵素、還元性酵素
   または酸化性酵素の阻害剤である特許請求の範囲第１項
   記載の方法。 ７、被検体保護剤は１０，０００〜３０，０００ｕ／Ｌ
   の蛋白質加水分解酵素の阻害剤である特許請求の範囲第
   ６項記載の方法。 ８、水性糞便試験媒質は、イムノアッセイを妨害する酵
   素の阻害剤または非特異的結合の抑制剤を含有する特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 ９、水性糞便試験媒質は、０．０１〜０．５重量％のホ
   ルムアルデヒドおよび非特異的結合を抑制するために十
   分な量の非免疫動物蛋白質を含有する特許請求の範囲第
   ８項記載の方法。 １０、便試料は新しく集められたものである特許請求の
   範囲第１項記載の方法。 １１、水性糞便試験溶液中に分散した便試料は、便試料
   を新鮮な間に−２０℃以下の温度に低下させ、そして試
   料の調製まで−２０℃以下の温度に便試料を維持するこ
   とによって保存されたものであり、そして試験試料の調
   製は便試料を２〜６℃の温度まで上昇させ、そして便試
   料を水性糞便試験溶液中に分散させることからなる特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 １２、特許請求の範囲第１項記載の方法によって調製さ
   れた糞便試料組成物。 １３、工程 ａ）少なくとも１種の便安定剤または少なくとも１種の
   被検体保護剤を含有する水性糞便試験溶液中の１〜１０
   重量％の便試料の分散液を形成し、 ｂ）糞便の固体を前記分散液中において沈降させて、糞
   便の固体を実質的に含有しない液相を形成し、 ｃ）前記液相を取り出して実質的に糞便の固体を含有し
   ない試験試料を形成し、 ｄ）前記液体の試験試料を、抗被検体抗体が付着してい
   る固体の支持体と、十分な時間接触させて、前記抗体を
   被検体と接合させ、そして ｅ）前記不溶性支持体に付着する被検体を決定する、 を含んでなることを特徴とするヒト便試料中の被検体を
   決定する固相イムノアッセイ法。 １４、便安定剤は、緩衝剤、微生物の生長を抑制するた
   めの殺虫物化合物または生物抑制化合物、あるいはそれ
   らの混合物である特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １５、殺虫物化合物または生物抑制化合物は、微生物の
   生長を抑制するために十分な濃度の抗生物質または抗菌
   剤である特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １６、水性糞便試験溶液は、緩衝剤、抗生物質および抗
   菌剤を含有する特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １７、水性糞便試験溶液は被検体保護剤を含有する特許
   請求の範囲第１３項記載の方法。 １８、被検体保護剤は、蛋白質加水分解酵素、還元性酵
   素または酸化性酵素の阻害剤である特許請求の範囲第１
   ７項記載の方法。 １９、被検体保護剤は１０，０００〜３０，０００ｕ／
   Ｌの蛋白質加水分解酵素の阻害剤である特許請求の範囲
   １８項記載の方法。 ２０、水性糞便試験媒質は、イムノアッセイを妨害する
   酵素の阻害剤または非特異的結合の抑制剤を含有する特
   許請求の範囲第１３項記載の方法。 ２１、水性糞便試験媒質は、０．０１〜０．５重量％の
   ホルムアルデヒドおよび非特異的結合を抑制するために
   十分な量の非免疫動物蛋白質を含有する特許請求の範囲
   第２０項記載の方法。 ２２、便試料は新しく集められたものである特許請求の
   範囲第１３項記載の方法。 ２３、水性糞便試験溶液中に分散した便試料は、便試料
   を新鮮な間に−２０℃以下の温度に低下させ、そして試
   料の調製まで−２０℃以下の温度に便試料を維持するこ
   とによって保存されたものであり、そして試験試料の調
   製は便試料を２〜６℃の温度まで上昇させ、そして便試
   料を水性糞便試験溶液中に分散させることからなる特許
   請求の範囲第１３項記載の方法。 ２４、被検体はヘモグロビンンであり、便安定剤は緩衝
   剤および殺生物剤であり、そして抗被検体抗体は抗（ヒ
   トヘモグロビンン）抗体である特許請求の範囲第１３項
   記載の方法。 ２５、水性糞便試験溶液、緩衝剤、微生物の生長を阻害
   するための殺虫物化合物または生物抑制化合物、および
   還元剤を含有する特許請求の範囲第２４項記載の方法。 ２６、水性糞便試験溶液は、微生物の生長を阻害するた
   めに十分な量の抗微生物剤、阻害量のプロイテナーゼ阻
   害剤、０．０２〜０．５重量％のホルムアルデヒドおよ
   び０．０１〜１０重量％の動物アルブミンを含有する特
   許請求の範囲第２５項記載の固相イムノアッセイ法。 ２７、便試料は新しく集められたものである特許請求の
   範囲第２４項記載の方法。 ２８、水性糞便試験溶液中に分散した便試料は、便試料
   を新鮮な間に−２０℃以下の温度に低下させ、そして試
   料の調製まで−２０℃以下の温度に便試料を維持するこ
   とによって保存されたものであり、そして試験試料の調
   製は便試料を２〜６℃の温度まで上昇させ、そして便試
   料を水性糞便試験溶液中に分散させることからなる特許
   請求の範囲第２４項記載の方法。