JPS63240796A - 脱アセチル化清澄複合多糖ｓ−６０ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 複合多糖類はある微生物によって生成されることが知ら
れている。親水性コロイドとしてまたその粘性と流動学
的性質によりこの複合多糖類の作用のいくつかが水性の
系における濃化剤として使われてきた。

科学技術の他の分野に関し、濃化、懸濁およびまたは安
定剤として有用な性質を有する新しい複合多糖類を発見
する目的の研究が継峨さまた。これらの目的の性質を有
する新しい榎付多糖を与えることが不発明の目的でめる
。この新規化合物の製造法を与えることも目的でめる。

ざらＩＣ濃化またｒ′ｉ懸濁または安定剤としてこの新
規複合多糖を含む処方の提供も目的である。またさらに
本発明の目的は本発明の続く記述から明確になるであろ
う。

本発明は選ばれた炭素源上で細ｄの作用に工り生産さ几
る新規複合多糖に関する。また本開明は制御さｎｆｃ粂
汗下で選ばれた炭素源と培養培地成分で−ｍを培養する
ことに工り複音多糖を製造する新規な方法に関する。本
発明の媛曾多ｍは玉に炭水化＃残基と少量の蛋白質を含
む高分子盾の多糖でるる。時々これは「ガム（ｇ％惰〕
」と呼ばれるが複合多糖という術腑がエリ正確で＝ｍで
あると考えら几る。本発明の以下の記述ＶＣおいて、該
化合物は時にエリ複音多糖６０または５−６０と呼ぶこ
とにする。

この新規化合物は広範ｅＵＶｃわたる分燻学的研究に基
き、今までに未記載の微生物で無砧名のシュードモナス
属の菌（襲％外αｍａｄ　Ｐｚａｘｄｏ−惧ｏ＊ａｚ　
ｚｐｇｃｉｇｚ　）にエリ適当な栄誉培地で醗酵するこ
とにエリ製造することができる。該複合多糖を製造する
時に使用するこの微生物の拘束を受けない（ｓｎｒａｚ
ｔｒｉａｔｇｄ）　　水入を託が１９７８年１１Ａ２１
日にアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（
ＡｍａｒｉａａｎＴｙｐｅ　Ｃｕｌｔ％ｒｅ　Ｃｏ１Ｌ
ａａｔｉｏｓ　）に工す受は入れ全号ＡＴＣＣ３Ｌ４６
１で行なわれた。

シュードモナス（ＰＩ−％ｄｏｍＯ％ａｔ）属の種々の
分類の手がかり及びシュードモナス（ＰＩ−％ｄｏ−ｔ
ｎｏｎａｚ　）　１４の培養の記述ｄ　Ｂａｒｇａｙ’
ｚ　Ｍａｘｖ＋ａｌ〔ブリード（Ｂｒａｎｄ　）ら、（
１９５７）　］の７７版びＢｇｒｇａｙ’ｚ　Ｍａｎｕ
ａｌ　（ドウドロフら＜Ｄｏｓｄｏｒｏｆｆ）ら、（１
９７４）　］の８版、また他の学派による種々の出版物
；ヒユー（Ｈ％ｑん）とギラルゲイ（Ｇｉｌａｒｄｉ）
　、１９７４、シュードモナス（ｐｚｇｘｄｏ−ｔｎｏ
ｓａｚ）、臨床微生物便覧（ＭａｓｓａＬ　ｏ７　Ｃｌ
ｉｓｉａａｌＭｉｃｒＣ１１ｓｉａａ１　）、２版、レ
ンネット（Ｌｇｎｎａｔｔｍ）ら綿、２５０−２６９ペ
ージ、アメリカ微生物学資、ワシントン八Ｃ０−ウェー
バ−（ｊ−α−ｕｇｒ　）ら、１９７２、診らしい病原
性グラム歯性細岩の同定（Ｉｄｇ％ｔｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　ＵｎｕｓｕａｌＰａｔｈｏｇｔｎｉｃ　　Ｇ
ｒａｍ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ　　Ｂａｃｔｅｒｉａ　）ｓ
イー０オー・千ング（Ａ’、　０．、Ｋｉ　ｎσ〕、疾
吠割御のためのセンター（Ｃａｓｔｅｒ　ｆａｒ　Ｄｉ
ｚａａｚａ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　）、アトランタ；イイズ
カ（Ｉｉｚｓｋａ）ら、１９６３、シュードモナス属の
分類の試み（Ａｔｔｅｍｐｔ　ＯｆＧｒｏｘｐｉｓｇ　
ｔｈｅ　Ｇａ＋％ｓｚ　Ｐｚｇｓｄｏｍｏｎａｚ　）、
Ｊ、Ｇｇｎ。

Ａｐｐｌ、ＭｉｃｒｏｈｉｏＬｏｇｇ　　９　：　７３
−８２：ヘンドリツク（Ｈｇｎｄｒｉａ）ら、１９６６
　、微生物学者のための同定方法（Ｉｄａｓｔｉｆｉａ
ａｔｉｏｎ　Ｍａｔんｏｄｚ　ｆａｒＭｉ　ｃ　ｒ　ｏ
ハａＬｏσ１ｚｔｚ）、Ａの部ＣＰａｒｔ　Ａ　）、ギ
ブス（Ｇｉｂｂｚ）ら編、１−７ページ、アカデミツク
・プレス（Ａａａｄａｍｉａ　Ｐｒａｔｅ）、ニューヨ
ークに見られる。

これらの手がかりと記述からＡｒＣＣ３１４６１のそれ
と同様の形態学的及び培養上の特徴を有するシュードモ
ナス（ＰＩ−％ｄａ惧ｏ＊ａｔ）種を捜した。以下の考
察は新しいソニートモナス（Ｐ＃ｚｄｏ虞Ｏ外αＩ）檀
の−Ｒ属に必要かつ正当化するものである。

１　細胞形態の特徴 単細胞、直線またはしばしば曲がった棒状、一般的に０
．６−０．８　Ｘ　　２．０−３．０μｍ１シばしば先
細になった端、培養期間を長くすると工り大さくエリ長
（（０，８−１，０に〉３μ喝〕なり、奇形ａ＠及び多
形性が、特に炭水化物の制限量の培地上で現われる。反
対に、炭水化物金言んだ培地上で生茸する時には細胞は
むしろ一定の桿菌状を保つが、培養が長くなると再び大
部分の細＠は大きくなり多形性が現われる。ダラム虐性
、莢膜を有せず、ポリ−β−ヒドロキシ酪酸とポリホス
フェートの顆粒が特に窒素欠損培地上でのｆ＠養で見ら
れる。極多毛性の鞭毛着性状態による運動性が、つまり
１〜４本の鞭毛がある一万の端ＶＣｉ毛及び時には端に
近い（Ｓ％ｂｐｏＬａ’ｗ）所から着生していることＶ
Ｃ工り、見られる。

２　コロニー形態の特徴 肉汁寒天（昏％ｔ６−％ｔασａｒ）平板上では、小（
直径０．８−１．１　ｍ　）及び犬（直径３．２−３．
５瞠）のコロニーが現わ几る。コロニーは黄色カロチノ
イド色素金石し、平滑、円形、凸円状からクッション状
である。大きなコロニーはしばしば同心円状のしわを有
する。コロニーの表面は硬く非粘着性の組成で白雀耳で
押すとコロニー全体が除かれる。ＹＭ寒大平板上では、
比較的大きい（直径１６−７　＋ｗ　）、黄色、円形、
平滑、粘質性、凸円状のただ一種類のコロニーが現われ
る。粘質性で弾力のある膜がコロニーの表面上に形成さ
れ、コロニーの表面の膜全体を除くことができる。二次
生首が最初のコロニーの周縁にできる。これらのコロニ
ーの色は周縁エリも中心の万が工り暗黄色であり、同心
円状の色素形成が見らする。細胞内黄色カロチノイド色
素に加えて、拡散性褐色色素が培養期間を長くすると自
動酸化の結果として４ｖｔ″Ｌる。このＪｉｌ！象は肉
汁寒天（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ａｇａｒ）上でエリ容易に
認められる。螢光性色素に生産されなかった。

３　生理学的及び生化学的特徴 ５−６０菌株の生育範囲は約２０℃から４１℃までであ
る。４℃では生育は起きない。

３．０％ＮａＣＬ　ｄ生Ｗを阻止するのに充分であり、
菌株はｐＩＩが５と１１の間で生育が可能である。

はとんどすべての炭水化物から嘴が生成しガスは発生し
ないが、ポリアルコールからは生成しない。ウレアーゼ
は生産される。ＭＲ。

〆Ｐ、及びインドールテストはすべて原性である。アル
ギニン、ジヒドロラーゼ、リジンとオルニチンデカルボ
キシラーゼは生殖されない。リドマス・ミルクでは酸の
生成及び還元が起こる。脂肪分解性卵黄反応（ｌｉｐｏ
Ｌｙｔｉａｅｇｇ　ｙｏｌｋ　ｒｇａｃｔｉｏｎ）は堪
性である。ゼラチンを弱く加水分解するが、カゼイン、
７１ｉ粉、アルギン酸、ペクチン、セ゛ルロース、キチ
ン、ＤＮＡを加水分解しない。

４　抗生物質に対する感受性 菌株はカナマイシン、ネ万マイシン１クロールテトラサ
イクリン、エリスロマイシンに非常に感受性があり、ス
トレプトマイシンとペニシリンにはない。

５　栄養上の特徴 Ｍ機物性の生長因子は必要ではないし、アンモニウム塩
は単一の窒素源として要求を満たす。少なくとも３５の
有機化会物、すなわちローリボース、殿粉、２−ケトグ
ルコネート、ムケート（ｍｓａａｔε）以外の大部分の
炭水化物が利用された。さらにアセテート、カプロエー
ト、カブリレート、ベンゾエ−ト、スクシネート、アゼ
レート、Ｌ−マレエート、ＤＬ−β−ヒドロキシブチレ
ート、ピルグエート、エタノール、５−プロパツール、
ｐ−ヒドロキシベンゾエート、フェニルアセテート、Ｌ
−α−アラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−ロイシン、ＤＬ
−インロイシン、Ｌ−アスパルテート、Ｌ−グルタメー
ト、Ｌ−チロシンが利用された。

６　　ＤＮＡのＧＣＣ載 量ＮＡの評価はモル囁で〜６８（７”ｍ工０）という結
果［なった。

オキシダーゼ：Ｋｏｖａａ”ｚ　　　　刊（支）　　加
水分解能：Ｐａｔｋｏｔｇａｈ　　＋ｌｆｊ　　　　ゼ
ラチン　　　　　＋（２）カタラーゼ　　　　　　　　
　　＋　　　　カゼイン　　　　　−ＯＦ子スト；酸化
　　　　　　　＋　　　　殿粉　　　　　　　−グルコ
ースか２ガスの生成　　　　　　　　　ペクチン　　　
　　　一硫化水素の生成二ＴＳＩ　　　　　　　　　ア
ルギン酸シスチンから　＋　　　　　でルロース　　　
　　−ペプトンからアンモニアの生成　　　十　　　　
　干チン　　　　　　　−β−ガラクトシダーゼＣ０Ｒ
ＰＧ）　　　＋＜ＡＰＩ＞　　ＤＮＡ　　　　　　　　
　−アルギニン　ジヒドロラーゼ　　　　−　　　　　
エスクリン　　　　　　＋（ｇｚｃｓｃｔｉｎ） リジン　デカルボキシラーゼ　　　　　　　　　諸層地
上での生育オルニチン　デ力ルポキシラーピ　　−ＥＭ
Ｂ９ｊ天　　　　　−トリプトファン　デアミナーゼ　
　　−　　　　　　Ｍａｃ、ｃｏｎＫａｙ寒天　−フェ
ニルアラニンデアミナーぜ　　−ＳＳ摩天ウレアーゼ　
　　　　　　　　＋１Ｊ：　　　　マンニトール−［大
　−インドール　　　　　　　　　　　　　　ＴＣＢＳ
課大　　　−ＭＲテスト　　　　　　　　　　　　　　
　　　　Ｔｉｎｚｄａｌ＊ｄｌＪｊ−チルノー波Ｖｐテ
スト　　　　　　　　　　　　　　血液寒天　　　　　
十硝ｆｌＩ１３Ｉの還元　　　　　　　　　　　　　　
ｐｔａｗｄｏｚａｌｌｌＦＣ−亜硝酸塩の還元　　　　
　　　　　　　色素生成：脱窒反応　　　　　　　　　
　　　　　　ＫｉｓｇＡ培地　　　−“・−固定　　　
　　　　　　　　　　　　ＫｉｎｇＢ培地　　　−Ｂｓ
ｒｋ培暇ｄη遭　　　　　＋　　　染色性二トロゲナー
蛤舌注　　　　　　　　　　　　　コンゴ・レッド　　
　−ホスファターゼ　　　　　　　＋ 溶血反応（羊血）　　　　　　− リドマス−ミルク：酸物ム還元 ３−ケトラクトース金主　　　　　　−６０℃、３０分
り片目芋　　　　　　　　−ｆＳＩ：斜面培養　　　　
　色変化なし１１ｉｖｉ層培ｇ　（ｔｋ　ｔ　ｔ　）　
　色灯ハしガス　　　　　　　　− 卵黄反応　　　　　　　　　　− 培養条件： 複合多糖５−６０は無命名のシュードモナス（Ｐｚａｕ
ｄｏｍｏｎａｚ）種の微生物の接種による制御された粂
件下で適当な水性栄養培地の好気４誉中に生産さｎる。

培地は炭素、窒素、無機塩源を含む通常の培地である。

一般的に、炭水化物（例えば、グルコース、フルクトー
ス、マルトース、砂糖、千シロース、マンニトールなど
）は栄″＃培地における同化性炭素源と輝て単独あるい
は組み曾せて便うことができる。培地中に使われる炭素
源または炭素源類の正確なｔは一部分培地の他の成分に
Ｌるが、一般的に炭水化物のｌｉｔは晋通培地重ｔあた
り約２％と４％の間で変化する。これらの炭素源は個々
に、またはいくつかの炭素源類を組み合せて培地１ｃｔ
ｆｆｉ用できる。

一般に、凝白ば性の多くの吻質が培養工程中ＶＣおける
窒素源として便うことができる。適当な窒素源は、例え
ば、酵母加水分解物、生酵母、犬豆紛、（Ｊ８夾彷、カ
ゼイン別水分解物、コーンスチープリカー、蒸留酒残渣
の町爵性粉、トマトペーストなどを含む。窒素源は、単
独でまたｒ！組み合せて、水性培地の重−１−め之り約
０．０５％から０．２％までの範囲の量で使われる。

培書培地に加えることができる栄＃無機塩ｆＡｒｉナト
リウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、リン酸
、覚醒、塩素、炭酸などのイオンになり得る通常の１類
である。コバルト、マンガン、鉄、マグネシウムのよう
な痕跡金属もまた含ま几る。

夾施例に述べる培地は使用可能な広範囲の培地の一例に
すぎず、これに限定されるものではないことに留意され
たい。

培養は約２５℃から３５℃までの間の温度範囲で行うが
、最適の結果を得るには、約２８℃から３２℃までの温
度で培養を行うことが好適である。シュードモナスＣＰ
ｚｇｓｃｄｏｍｏ、ｎａｔ　）刃の生育及び多＄１５−
６０の生産のだめの栄養培地の、Ｈは約６から８まで変
えることができる。

新名糖５−６０は表面及び液中培養で生産されるが、液
中培養を行う方が好適である。

小規模の培養は菌を適当な栄養培地に接種、生産培地に
移した後、約３０℃の一足温度、シェーカー上で数日間
培養を行うことに工り便利に行なわれる。

培養は橿艷の生育が培地の入った載置フラスコで始めら
れ、１ないしそれ以上の段階を経る。洩歯生育用の栄養
培地は炭素及び窒素源の適当な組み合せたものである。

５ｉ−のフラスコは約３０℃の一定温度で、１〜２日間
または満足な生育が得られるまでＳ盪し、得られた増殖
の一部を第二段の種または生産用培地に４檀することに
使われる。必要とするなら中間段階の橿用フラスコを要
するに同様な方法にエリ増殖させる。すなわち、直前の
段階の慣用フラスコの内容物の一部が生産培地に接種す
ることに便われる。接種したフラスコは一定温度で数日
間振盪し、培養期の最後ｉＣ７５スコの内容物をイツブ
ロビルアルコールの＝５な適当なアルコールで沈殿させ
ることにＬす回収する。

大きな規模の時には、攪拌器及び培養培地を通気する手
段（ｉ−備え九適当なタンクで培養を行うことが好適で
るる。この方法によると、栄養培地はタンク内で作り約
１２ＩＣまでの温度に加熱滅菌する。冷却後、滅菌した
培地に生産培地に前に生育させたａｌを接種し、培養を
栄養培地を攪拌及びまたは通気しながら及び約３０℃の
＠寂に保ちながら、例えば２日から４日間の培養期間で
行う。この５−６０を生産する方法は特に大業の製造に
適している。

生産物はイソプロパツールのような適当なアルコールで
沈殿させることにＬす）＠喪培地から回収する。

無命名のシュードモナスＣＰ１．％ｄａｔｎｏ％ａＩ）
　１に工す生産さ几る複合多糖はお工そ王に炭水化物、
Ｏ−グリコシド結合したエステルのアセチル基が３−４
．５％、蛋白質１０−１５憾からなる。

多８Ｉｓ−ｅｏの炭水化物部分はウロン酸（〜１２９６
ガムｍｔＫ、対し）と中性糖のグルコースとラムノース
を含む。ラムノースとグルコースのおＬそのモル比ｒｉ
１．５対ｌでろる。

４．５悌の７セチル含ｔＦｉＢ−６０樹ｄ旨の０．１％
水性溶液をアルカリ性ヒドロ半ジルアミン試薬と処理し
、続いて酸性塩化第２鉄試薬で処理することにＬり決定
した〔ニス・ヘストリン（Ｓ、＃ｇＩｔｒｊｓ）（１９
４９）　７．　Ｂｉａｌ、ｅｈｇｎｓ−１８０，２４９
−２６１１゜ 多＠Ｓ　−６０の中性糖は以下の工うに決定Ｌｔ、生成
物１０　ｑ　ｔ　２Ｎｄ、５０４１０　ｗｌＶｃ爵解し
、混会物を１ｏｆ３℃４時間加熱する。得られる浴液を
冷却し水酸化バリウムで中和後固体二酸化炭素でｐｆｆ
を５−６とする。得られる硫酸バリウムの沈殿を遠心分
離ＶＣより除き上溝を減ＥＥ丁でシロップ状になるまで
＃縮する。

加水分解物の糖は３重量僑０Ｖ−２２５を保持したガス
クロームＱ　８０／１００　　メツシュを２１０℃で使
いヒュレットーパツカード５７５０型クロマトグラフ（
ＨａｖＬａｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　Ｍｏｄｅ１５７５０
　ｃｈｒｏｍａｔｒｇｒａｐｈ）でそれらのフルトノニ
トリル酊酸エステル誘導体をガスクロマトグラフを行う
ことにエリ試験的に固定する。塘は真の標準品と比較す
ることにエリ同定・定電する〔ジエー・ケー・ベアード
（／、尺ＢｅＬ□ｒｒＬ）、エム・ジエー・ホルロイド
（Ｍ、Ｊ、ＨｏＬｒｏｙｄａ）、ディー−シー・エルウ
ッド（ＱＣｌＨ：ｌ　ｌｖ＠ｏｄ）（１９７３）Ｃａｒ
ｂｏｈｙｄｒ、Ｒｇｚ、２７．４６４−４６７　１　。

多糖の種々の中性糖はまたピリジン：酢酸エチル：水（
２：５：５）の上ｍｅ溶媒とするホワットマン１番ｆｈ
ａｔ惰ａ％彪）クロマトグラフ用１紙による下降法ペー
パークロマトグラフを用いることにエリ′４徴づけられ
た。クロマトグラフは硝酸−に浸漬及びフタル唯一！ニ
リン噴霧試薬にＬり染色した。構成糖は楯の標準品と同
時クロマトグラフィーを行うことにエリ及びフタル酸−
アニリン試婆との特異的呈色反応にエリ固定した。

多糖のウロン酸含ｔは２つの異なった方法にエリ決定し
た。ろる方法では試料を１９％塩酸で脱炭酸し遊離した
二酸化炭素ｔｌ−ｌ−水準水酸化ナトリウム捉し逆滴定
に工り〔ビー・エルΦブラウニング（ｊ３．　Ｌ、　Ｂ
ｒａｗｓｉｓｇ）（１９６７）Ｍａｔｈｏｄｚ　ｏｆ　
ｌｌ’ｏｏｄ　Ｃｋａｍｉｚｔｒｙ　ＩＩ　、６３２−
６３３　〕及びカルバゾール比色法にエリ〔ティー・ビ
ター　（ｒ、Ｂｉｔｔｅｒ）、エッチ−エム・ムアー（
５゜ＩＬＭｓｉｒ）　（１９６２）　Ａｎａｌ、　Ｂｉ
ｏａｈａｍ、４．３３０−３３４　’：１決定した。

ｅ紙電気泳Ｗｈは上述の中和した酸万口水分解物にある
ウロン酸の分離及び試験的同定に用いた。この分解物の
一定量及び既矧のウロン酸標準品をカマグ（Ｃａｍ４ｇ
）成気泳鯛用ｆｉ祇６０−０１１番にのせ、眠気泳動を
カマグ（Ｃａ１６ｇ）モデルＬＩＶＥ”ｆｔ気泳動襞Ｏ
１を用いて４２．７緩衝液中礼θ時間行なった。クロマ
トグラムを風乾し硝酸銀浸漬試薬で染色し分離したウロ
ン酸の位置を求めた。２つの大＠な及び１つの小さなス
ポットが見られた。大きなスポットの１つはグルクロン
酸（ＲＧ、６Ａ−１，Ｏ）と同様の移動度で動きもう一
方の大きなスポット（／？Ｇ、　、Ａ−０，８５３及び
小さなスポット＜ＲＧｊ６Ａ−０，７３）はエリ小さな
移動度でめった。

こ几らと同一条件下での既知ウロン酸の相対移動度は以
下の通りである： む グルクロン酸　　　　　１．０ マンニュロンｄ　　　　　０．９６ ガラクツロン酸　　　　０．６５ グルロン酸　　　　　　０．６３ 自然の５−６０の赤外吸収スペクトルはＫＢｒ＠剤法で
刑法物質について行なった。複会多糖は水酸基、メチレ
ン基、カルボニル基、カルボン酸塩ヲ示す３４００ｃｒ
Ｒ，２９５０ｍ　　、１７４０α−１，１６２０ｍ−１
にピークを示した。順化メチレン染料を受けつけず、冥
質的にＮ、Ｎ−ジメチルホルム７ミドに不溶、ＤＭＳＯ
またはホルムアミドに可溶でるる。

５−６０の試料は以下の元素分析値を示す二Ｎ−２．０
０憾、Ｃ−４２，６２暢、Ｈ−５，８０壬。

多糖５−６０は水に低濃度で浴解し九時に水性溶液に粘
度を与えるうこの事、４ｊＪ所に対する感受性及び全体
の流動学的性質のため、これは水性の系における横比、
懸濁及び安定剤として、例えばｄ＆物工栗の捺染用糊、
または低流動水性除草剤組成物、サラダドレッシング、
積厚プディング、粘着剤組成物処方用の添加剤として有
用である。加熱及び冷却後、これは弱い弾力のあるゲル
を形成する。

脱アでチル、非ｆＲ澄５−６０ 乾燥高分子または培Ｉｌ液金高ｐＨ（例えば、炭酸ナト
リウムまたは水酸化ナトリウムを用いて−１０にする）
で９０−１００℃のＱ［に１０分から４５分間加熱する
と脱アセチル化が各易に起こる。得られる脱アでチル多
糖５−６０に堅い・側力のないまたはもろいゲルを形成
し、工業的及び食品関係における多くの応用に有用であ
る。脱アセチル５−６０の組成は主に炭水化物、蛋白質
〜１７チ、アセチル〜’０４でろる。炭水化物部分ｔ’
ｉ〜１３壬のウロン酸、お工そのモル比が１．５：１の
中性糖ラムノースとグルコースから成る。

脱アセチル化樹脂のめる使用法ｒｉ堅くもろいゲルなの
で型をつくる及び堅い構造物として便りことができるこ
とから、香料のＬうな適当なＩ＠液と処理した後、室内
防臭剤、または空気清浄剤などに応用を見いだす。脱７
セチル鋪脂はまたゲルー気原動において、電子演倣硯使
用時のミクロトーム用のゲル化剤にも使われる。自然の
及び脱アセチル樹脂はまた放射線学におけるバリウム、
菓子類の＠濁剤として、及び工具作り、歯科学、犯罪学
における型どり物質としても使われる。

ＫＨｒ婉刑法で乾燥物質で測定した脱アπチル５−６０
の赤外吸収スペクトルは３４００ｃｍ−’、２９５０ｃ
ｒｎ、　１７４０ｃＩｎ、１６５０ｍ−、１６１０ｍ−
’にピークを示した。

説アじチル５−６０の試料は以下の元素分析値？示す：
　Ｎ　−２，６７％、Ｃ−４１，８９係、＃−６．０７
憾。

脱アＺチル、清ＭＳ−６０ ｔ＃市、脱アセチル５−６０の組成は以下に示すとおり
である二〜２チ蛋白質、Ｏ嘔アセチル、及び炭水化物、
後者は〜２２悌のウロン酸とお工そのモル比が１．５：
１の中性糖ラムノースとグルコースから成る。

ＫＢ　ｒ　ｇ刑法で乾燥物質で叩定した清蛭、脱アセチ
ル５−６０の赤外吸収スペクトルは３４００ｃｙ−，２
９５０ｍ　　、　１６００ｍ’にピークを示した。脱ア
セチル、清５７５−６０の試料は以下の元素分析値を示
す：Ｎ−０．４２憾、Ｃ−３６，８５憾、Ｈ−５，６２
憾。試料は次の比旋光度を示す。

〔α〕諦−−４５゜ 睨ア甘チルｒ装置樹脂は広範囲の培養基を便用する櫨々
の臨床または非臨床倣生吻のための、微生物学での培養
基における寒天代用品として特に有用でるる。寒天に置
き換えるために必要な脱アセチル清澄樹脂の＠度は使用
する培地によるが、約０．５から約１．２５％亀（容ｔ
あたりの重量比）の範囲内である。

憾生物の生育の特徴は標準の寒天ｆ：基にした培地のそ
れと全く同様でめる。

以Ｆの詳細な実施例は本発明の代表的な面を説明したも
のでるる。

実施例１ 複合条ａｉＳ−６０生産用の培養工程 Ａ　継代培養 無命名のシュードモナス＜Ｐｅｇ％ｄｏｔｎｏｎａｚ）
菌、ＡＴＣＣ３１４６１ｕＮＡ　１　タハＹＭ　寒天上
’ｔ’非常ＫＬ〈生育するから、日常、これらを継代培
養用に使用する。培養温式け３０℃である。微生物は黄
橙色のカロチノイド色素と褐色の町弓性色＊ｔ−２−５
日間のｊ＠責で生推する。

Ｂ　植刃の製造 フラスコの種菌は３０’Ｃで培養したＹＭ培地で作られ
る。新しい平板培養のｄを接種した時、ＹＭ培地の培養
は２４時間までに良い生育と樹脂の形成を与える。

種培養容器として１ガロン発酵槽を用いる発酵用橿培＊
は最終の発酵槽の培地と同じものである。

Ｃ最終の発酵槽用培地 ４１旨のナトリウム−とカリウム−塩型は異なった培地
で作られる：それらは共に以Ｆに述べる。微生物は一定
のＫを要求しこれをナトリウム型培養培地に加えねばな
らない。

（３％デキストロースも使うことができる。

ナトリウム１　　　　カリウム塩 ３．０繋グルコース　　　　　３．０僑グルコース０．
０１憾Ｍｇ５Ｏ，＠７１１，０　　　０．０１嘔ｘｇｓ
ｏ４．７Ｈｔ００．０９憾Ｎｆｌ、ＮＯ，０，０９４Ｎ
Ｈ，ＮＯ。

０．０５％ブロモソイ　　　　　　　　ｏ、ｏｓｓブロ
モソイＣＰｒｏｔｎｏｚｏｙ）（ＰｒｏｍｏＩｏｙ） （大豆蛋白濃縮物） １　ｖｔ／ｌ　ＨｏＬ−塩類　　　　１　ｒＬｔ／　Ｌ
　ＨｏＬｇ　４ｇ１　ｐｐｍ　Ｆｇ＋＋ｌ　ｐｐｍ　Ｆ
ｊ＋０．０５％Ｎａ　ｔ　ＨＰＯａ　　　　　Ｏ−０５
％に、ｔｌｐｏ。

１０　ｐｐｍ　ｆ” ｐＨ７！ＩＪ＠　−Ｎａ　ＯＨｐＨＨ＋御−ＫＯｆ！Ｈ
ｏ　Ｌ、塩類は酒石酸、モリブデン酸マグネシウム、Ｃ
ｏｃｌ、　、　ＺｎＣＬｔ％Ｃ＊Ｃ１，、ホウ酸、４化
マンガン、億酸第１鉄を含むイ夏跡元素のＩｌ液である
。

低カルシウム生成物を目的とする時、上記の培地のいず
れかも脱イオン水で使用する。

培養は５０時間で完了し：培養液の粘度は通常５０００
−８０００＋ｐＩである。

Ｄ　回収 生成物のゲル化する性質のために良好な繊維形成は普通
自然放置の沈殿では起さない。

しかし、９０−９５℃でｌｏ−１５分間の低温殺媚にエ
リ（この間に４培養液は刀ロ熱−著しく薄くなる）、優
秀な繊維が培養液の容置の２倍量の９９％イソプロパツ
ールを用いて冷却することなく培養液からの沈殿に工り
得ら几ることがわかった。刹ｑ？１１．５％の平均収率
が２０１と７０１の発ｒｎ槽でグルコース３悌に工り得
られる。

Ｅ　乾燥 生成物を回収し５０−５５℃で１時間までに強制通気式
トレイドライヤーで乾燥する。

Ｆ　生成物の品質 ＋ に塩の１１粘度は通常３０００ａｐｌの範ｄ内にあり、
低カルシウムナトリウム塩のものでは約７０００ｏｐｚ
である。

実施例２ 複合条＠Ｓ　−６０の脱７セチル化とｆ＃ａｔ化すべて
の使用法において必ずしも必要ではないが樹脂のｆ＃酢
化は樹脂を寒天の代用品として使用するときには価値が
ある。清だ化は脱７ｔチルの前（自然のままの状態）ま
たは後でも行うことができる。脱アセチル化は熱アルカ
リを用い清澄化は熱い状悪で行われるから、２つの方法
は容易に便利［結会される。

脱アセチル化と清討化は共に培養液”または乾燥高分子
のいずれでも行うことができる。脱アセチル化では、培
養液を便用するならば１、ＨをＫＯＪＩで１０に合わせ
浴液を９０℃で１５分間加熱、希Ｈ，５０４でＰｆＩを
７とし、ＣαＣ４を０．２嗟濃度になる工うに加え冷却
する。堅くもろいゲルが得られる。

脱アセチル化と清澄化の両方法における一般的方法は以
下に示す： 、ｔＪ＠養液または刹８旨の２悌浴液を９０℃に加熱す
る。

Ｂ、ｐｌＩをＫＯＪＩで１０にする。

Ｃ０培養液または＠液の温度を１５分閣９〇−９５℃に
保つ。

Ｄ、、Ｈ′ｌｚｒ：希ｔｔｃｔまたはｉｔ、ｓｏ、で６
−８とする。

ｇ、　　１０ｆ／ｌのスーパーエイト（Ｓ塾Ｐ６ｒＡｉ
ｄ）を−過する物質に加える。

Ｆ、　この物質を１３６−の面積をもつフィルタ一部分
を用いて約６１１ｍのスーパーエイド、（Ｓｓｂ　Ｐ　
＃　ｒ　Ａｉ　ｄ　）の層と約２０−３０　ｐｓｉの圧
力で圧力フィルタ一部分（予備加熱）を通してｅ遇する
。

Ｇ、ｆ液は、ゲル化を防ぐためにただちにイソプロパツ
ールで沈殿させ繊維を１時間またはそれ工り少ない時間
で５０℃で乾燥する。

脱アセチル化が不必要の時は、上述の方法に４を上げる
こと以外はそのまま従う：９０℃に保ち、浴液をただち
にｆ過し、回収する。

清面化はいつもカリウム塩減で行われる；ＫＣｔは必要
なら前に作った生成物の溶液に加えることができる。

実施例３ ４ＩＬ会多糖５−６０のゲルの特徴 自然のままのｔ！Ｉ脂及び脱アセチルｍ　Ｉｆｆのに型
とＣｅＬ　　型の両方の型で、カラゲニン及び寒天と比
較したデータｔ−ｍ果したものを下に示す：型　　　　
　　ゲノば性質　　融点　　　固化点　　ヒステリシス
自然の５−６０　　　非常に弾性　６５−７０℃　　６
５−７０℃　　なし脱アセチルＳ−６０ Ｋ　ゲル　　　　　堅い　　　　９０℃　　　３１−４
６℃　　４５−６０℃Ｃａ　　ゲル　　　　堅　い　　
　　９０℃　　　４５−５０℃　　４５−５０℃カッパ
・カラゲニン　　堅い　　４０−９５℃　　２５−７５
℃　　１５−２０℃寒天★　　　　　　堅い　　６０−
９７℃　　３２−３９℃　　　６０℃★　バクテリオロ
ジカルグレードのものニゲル化温度３３°−３９℃の範
囲、融点最低７０℃（Ｍ７ｈｉｚｔ　ｌ　ｇｒ”ｚ　＠
Ｉ’ｄ％ｚｔｒｉａＬ　Ｇｓｔｘｚ　’）最低ゲル濃度 カッパーカラゲニン　　　　　　　　　　０．３％寒天
　　　　　　　０．０４１ 脱アセチルＳ−６０（カルシウムゲル）　　　　　０．
０５４すべてのいろいろの塁のゲルの固化及び融けるた
めの広い範囲の温度があることで上述の工うに留意され
たい。寒天では、変化は王ｖｃｓ４の型にエリカッパ・
カラゲニンではカリウムイオン濃度がゲルの特徴を決定
する。

脱アセチル５−６０のゲルは主に脱アセチル化の程度に
工り特徴づけられる。はんの少し脱アセチル化するとゲ
ルはエリ高い温度で同一まり、エリ弾性がある：実際、
弾力のあるものから堅いもの１で広い範囲のゲルの型が
脱アセチル化の程度にエリｏＴ能である。ゲルは、主に
固化点と融点の間の大きなヒステリシスがあることから
、カッパ・カラゲニンエリも寒天にエリ類似している。

それらＦｉ溶かすことがむずかしく、ゲル−プルの変化
を観察することがむずかしいことを強調しておく。−万
、ゲル化の始まりから固いゲルに鋭く数置でゲルが固化
することからゲル化点は容易に定義できる。

実施例４ 脱アセチル非清泄Ｓ−６０ Ｓ　−６０培養ＫＬｔ９０℃１ｃａｏ熱しｐ＃ｉ２５憾
ＫＯＨの添加で１０とする。温度金１５分間維持し、さ
らに＃　ＨＣｌで中和する。この培養液を＠酵槽から流
出させ、熱いうちＶＣ２倍量の９９％ＩＰＡで回収する
。睨アセチル５−６０の繊維をあつめ、５５℃でＩＱ間
強制通気式トレイドライヤーで乾燥し、紛にひく。

実施例５ 脱アπチル５−６０の清猷化 実施例４で製造した脱７ｔチル複合多糖Ｓ−６０（ｉ−
ライトニ”）　（Ｌｉｇｈｔｎｉｎ）混合器で１時間脱
イオン水中１％濃度に再構成し５００まで加熱しＡｒｔ
ｉ−Ｂａｒｉｎｋｏ　　で混合する。溶液は温度を４０
℃以上に保ちながらＳｏｒｗａＬＩ　ＲＣ２−Ｂ冷凍遠
心機で２０分間１０．　ｏｏｏＬＰ、　Ａｆ。

（ＧＳＡヘッド（ｈｅａｄ））で遠心する。上清をデカ
ントしてとり次に穴が５＃、３μ、１．２７！、０．８
ｐ（Ｄゲル？　：／　＜Ｇａ　１ｍａｍ　）１８１　Ａ
ＮＨｙｄｒｏ　ｐｋ　ｉ　Ｊ　ｉ　ａＡａｒｏｐｏｒ膜
（２９３ａ＋）ｔ−通してｆ遇する。ｆ液を約３−４倍
量の９９悌イソプロパツールに加え、轍ｆａ金おつめ、
簡単に強制通気式トレイドライ？−で５５℃で乾熾し、
紛にひく。

生成物は本発明の脱アセチル清澄５−６０樹１旨である
。

実施例６ 脱アセチル清澄５−６０を用いて寒天との置換いくつか
の異なった培地が以下に示す通りに作られる： 肉汁寒天 （Ａ　　ｏ、ｓ％　肉汁ブロース（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　
　Ｂｒｏｔｈ）（Ｄｉｆａｏ）１．５Ｓｆｆ大（Ｄｉｆ
ｃｏ） （ａ　　　０．８％　肉汁ブトス（Ｎｓｔｒｉａｎｔ　
　１Ｊ７ｏｔｈ）（Ｄｉｆｏｏ）０．２悌　ＫＣｔ ０．９悌　Ｓ−６０ （４２，７５％　　トリブチコース　ソイ　ブロース（
ＴｒｙｐｔｉｃｏｚｍＳｏｙ　　Ｂｒｏｔｈ）（ＢＢＬ
） １、５１　　寒天（Ｄｉｆａａ） （／ｌ？）２．７５４　　トリブチコース　ソイ　ブロ
ース（ＴｒｙｐｔｉｅｏｚｇＳｏｌ　　Ｂｒｏｔｈ）（
ＢＢＬ） ０．２１　　　ＫＣＬ Ｏ，９４５−６０ ポテト　デキストロース寒天 （Ａ２．４１６　　　ポテトデキストロースブロース（
Ｄｉｆｅｏ）！、鍾寒天 （υ　　２．４慢　　　ポテト　デキストロース　ブロ
ース（Ｄｉｆｅｏ）０．２％　　ＫＣｌ ０、９％　　Ｓ５−６ ０Ｙ寒天 （Ａ　　２．１％　　ＹＭブロース＜１）ｉｆａｏ）１
．５％　寒天（Ｄｉｆｅｏ） （ａ　　２．１４　　　ＹＭブロース（Ｄｉｆｃ、ｏ）
０．２憾　　ＫＣｔ ０．９憾　　５−６０ 寒天 （Ａ　　３．７４　８ＨＩブロース（Ｄｉｆｅｏ）１．
５％　寒天 （７１３，７％　　８ＨＩブロース＜Ｄｉｆａｏ）０．
２憾　ＫＣｔ ０．９％　５−６０ パーク（Ｂａｒｋ’ｓ　）寒天 ′）（ω １、５％　　　　　　寒天（Ｄｉ　ｆｅｏ）　　　　　
　ｃ＋、　２％ＫＣｌ０．９１５−６０ 脱イオン？すべての培地Ｖｃｆった。成分を一緒にして
（パーク（Ｈｓｒｋ”ｚ）　’ｔ”除＜３１２１℃、１
５ｐＩｉ　”ｔ”１５−２０分オートクレープヲ行い５
５℃に冷却、［Ｉｉｇしたペトリ皿に注いだ。

パーク（Ｂ％ｒｋ’ｚ　）の成分はグルコースヲ除いて
一緒にし、別々にオートクレーブ全行い、オートクレー
ブ後培地に加える。これらの培養養プレートが固化した
ら戚耐を慣査するために室温で２４時間培養した後、そ
れらに以下の１４菌株ですじを引いて接種した： アグｏｖイｔ＝、ｒ、　　ラモサス（Ａｇｒｏｍｙａａ
ｚ　　ｒａｍｏｚｕｚ）／ｆＴＣＣ２！Ａ７３アース口
バクター　グロビホルミス（Ａｒｔｋｒｏｂａｏｔｇｒ
ｇｌｏｂｉｆｏ慣ｉｔ）　Ａ７’Ｃ（：’８０１０オー
レオバシデイウム　プルランス（Ａ＊ｒａｏｈａｚｉ’
ｄｉｕｔｎｐｕｌｌｕ、１ａｎｚ）ＮＲＲＬ　　ＹＢ−
３８６１アゾトバクタ−インディカス（Ａｚｏｔｏｂａ
ａｔｇｒ　　１ｎｄｉｃｓｚ）ｔａｒ　　ミクソゲネス
（ｍｙｘｏｇｇｎｇｚ）Ｓ−７菌株ＡＴＣＣ２１４２３
アゾトバクタ−ビネランデイ（Ａｚｏｔｏｂａｅｒｔａ
ｒ　Ｖｉｎａｌ鱈ｄｉｉ）ＡＴＣＣ９０４７ ベイジエリンキア　ラクテイコゲネス（Ｂａｉｊａｒｉ
ｋｋｉα１ａａｔｉａｏ（Ｈ％ａｘ）ＡＴＣ０１９３６
１エルヴイニア　力ルトボラ（Ｅｒｗｉｓｉａ　　ａａ
ｒｔｏｖｔｔｒａ）ＡＴＣＣ８０６１エシエリヒア　コ
リ（Ｅｚａｈｇｒｉｃｋｉａ　　ａｏＬｉ）ＪＩＧ−４
７菌株クレブジーラ　ニューモ＝（Ｋｌａｈｚｉｇｌｌ
ａ　　ｐｓａｓｖＫａｓｉａａ）Ｓ−５３歯株 ノカルディア　サルモニカラ−（Ｎｏｅａｒｄｉａ　　
ｚａ１ｍａ＊１ａｏｌｏｒ）ＡＴ（１’ｃ２１２４３　
　５−６０ ストレプトコツカス　ファエカリス（Ｓｉｒｍｐｔａａ
ｏａａ塾ｚｆａａａａｌｉｚ） トリコデルマ　ロングブラキアタム（Ｔｒｉａｋｏｄｍ
ｒｍａＬｏｎｇｂｒａｅｈｉａｔｓｔｎ）ＡＴＣＣ１３
６３１ズーグロエア　ラミゲラＣＺｏｏｇｌｏｍｇ　ｒ
ａｍｉｇａｒａ）　ＡｒＣＣ２５９３５プレートを３０
℃で３−５日間培養し生育を調べた。５−６０で作った
培地上にすべて・看株について良い生育が得られ寒天の
代わり５−６０で作った培地と寒天のものはコロニーの
形態ではＣ′！とんと差はなかった。これらの結果は５
−６０が微生物学の培地における寒天の優秀な代用にな
ることを示している。

Ｂ１１１培地とＴＳＡｆｔ除く、５−６０を含むすべて
の培地のゲル化点は４２℃であった。

Ｂ１１１ｌｉ天とＴＥＡのゲル化点は５２℃でめった。

寒天は典型的に４２−４４℃でゲル化する。

実施例７ 脱アでチル５−６０を用いた成型香料ゲルの製造 （３）　１．５０％　　多＠Ｓ　−６００，７５憾　　
炭酸ナトリウム ０、０２５％　　ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル３．０
０％　　バラのかおり ４．００憾　　インプロパツール ２．００チ　　エチレングリコール ８８．５０憾水 自然のままの多糖５−６０を炭酸ナトリウムと防腐剤と
混合し７０℃で水Ｖｃ爵解する。

＠液はさらに９０℃に加熱しその温度で１０分間保ち多
糖を脱７セチルする。６０℃に冷却後、溶媒に分散させ
た香料を加え混合物を通常の空気清浄剤のプラスチック
の成型に入れる。混合物が３８℃に冷えたらゲル化が起
こり芳香を発散する性質を持つ堅い独立したゲルを得る
。

（Ｉ３）乾燥脱アセチル多糖５−６０を培′＃液から希
水酸化ナトリウムでｐｆｆｆ、１０．０とし９０℃ＶＣ
ｌ５分間加熱することＪ：り作る。浴液全希塩酸で、Ｈ
７，０に中和し２倍電のインプロパツールで沈殿させ、
乾燥、粉にひく。固体の空気清浄剤ゲルは以ドの方法で
脱アセチル生成物から作らする：脱７セチル多糖Ｓ−６
０３．０２を塩化カリウム１．５２及びｐ−ヒドロキシ
安息香酸メチル防腐剤０．１５ｆと混会し水Ｌ７Ｔｔｔ
を加える。浴液を９００にＵｎ熱して溶解し６０℃に冷
却後、はっが油の香料６．０１、イソプロパツール８．
ｏ２、エチレング＋Ｊコ−／１，４．Ｏｆの混合物を刀
口える。溶８！をプラスチックの型に入ｒＬ室温まで冷
却する。

香りの強いはっかの香りをもった強力な堅いゲルが形成
される。ゲルは簡単に変形できたわむことなくその形を
保持する。

本発明の態様を要約すると以下の様である。

１．　１０−１５％蛋白質、３−４．５％アセチル及び
主として炭水化物を含み、炭水化物部分が−１２％のウ
ロン酸、モル比がおよそ１．５＋１であるラムノースと
グルコースからなる複合多糖５−６０であって、該多糖
か塩化メチレン染料と不相溶性であり、実質的にＮ、Ｎ
−ジメチルホルムアミドに不溶でかっＤＭＳＯまたはホ
ルムアミドに可溶であり、３４００ｃｍ−’、２９５０
ｃｍ−’、１７４０ｃｍ−’、　　１６２０ｃｍ−”の
ピークによって特徴づけられる赤外吸収スペクトルを有
することを特徴とする前記複合多糖５−６０゜ ２、無命名のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）属微生物、ｈＴｃｃ　３１４６１を炭素源、カリウム
イオン源、窒素源、痕跡無機元素、水を含む醗酵培地て
２８−３２℃、ｐＨ６−８において４０−６０時間培養
し、適当な低級アルコールによる沈殿法によりガムを回
収することから成る第１項記載の複合多糖５−６０の製
法。

３、窒素源をコーン・スチープ・リカー、アルコールを
イソプロパツールとする第２項記載の製法。

４、ｓ命名のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）菌、　ＡＴＣ（：　：１１４６１の凍結乾燥培養物。

５、１７％蛋白質、アセチル含量０％で、炭水化物部分
が１３％のウロン酸とおよそのモル比が１．５：１であ
る中性糖ラムノースとグルコースから成る炭水化物を含
む脱アセチル化非清澄複合多糖５−６０゜ ６．２％蛋白質、アセチル含量が０％で、炭水化物部分
がウロン酸２２％、およそのモル比が１．５：ｌである
中性糖ラムノースとグルコースから成る炭水化物を含む
脱アセチル化清澄複合多糖５−６０゜ ７、複合多糖５−６０の１−５％水性溶液をｐｔ＋約１
０．９０−１００℃の温度で１０分から４５分加熱し、
それにより生成する生成物を回収することからなる第５
項記載の化合物の製法。

８、約０．５−５％の脱アセチル化複合多糖５−６０と
栄養物から成る微生物学的培養基。

９、脱アセチル化５−６０が清澄したものである第８項
記載の培養基。

ＩＯ０約０．１−５％の脱アセチル化複合多糖５−６０
、水及び低級アルカノールから成る香料ゲル組成物。

出願人　メルク　エンド　カムバニー インコーボレーテッド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、２％蛋白質、アセチル含量が０％で、 炭水化物部分がウロン酸２２％、およその モル比が１．５：１である中性糖ラムノー スとグルコースから成る炭水化物を含む脱 アセチル化清澄複合多糖Ｓ−６０。 ２、約０．５−５％の脱アセチル化複合多糖Ｓ−６０と
   栄養物から成る微生物学的培養 基。 ３、脱アセチル化Ｓ−６０が清澄したものである特許請
   求の範囲第２項記載の培養基。