JPS63239300A - プラスミノゲンの製造方法 - Google Patents
プラスミノゲンの製造方法Info
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- JPS63239300A JPS63239300A JP7185887A JP7185887A JPS63239300A JP S63239300 A JPS63239300 A JP S63239300A JP 7185887 A JP7185887 A JP 7185887A JP 7185887 A JP7185887 A JP 7185887A JP S63239300 A JPS63239300 A JP S63239300A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は人血漿由来のプラスミンを含まないプラスミノ
ゲンの製造方法に関する。
ゲンの製造方法に関する。
プラスミノゲンは、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ
等によって活性化されてプラスミンとなり、これがフィ
ブリンを分解して線溶現象を生起するので、ウロキナー
ゼやストレプトキナーゼともに血栓症の治療のほか広く
臨床応用が可能な医薬品として注目されている。
等によって活性化されてプラスミンとなり、これがフィ
ブリンを分解して線溶現象を生起するので、ウロキナー
ゼやストレプトキナーゼともに血栓症の治療のほか広く
臨床応用が可能な医薬品として注目されている。
しかしながら、プラスミンを含有するプラスミノゲンは
上記分解により早期に失活すーるので、保存性の劣るも
のであった。
上記分解により早期に失活すーるので、保存性の劣るも
のであった。
プラスミノゲンのリジン・アガロースを用いての精製法
はすでに確立された方法（Ｓｃｉｅｎｃｅ．第１７０巻
，第１０９５頁，１９７０年参照）であるが、コーンの
分画■を原料として用いｔこ場合に得られるプラスミノ
ダン中には約５〜１０％のプラスミンが混在しており、
長期保存により活性を低下させるものであった。
はすでに確立された方法（Ｓｃｉｅｎｃｅ．第１７０巻
，第１０９５頁，１９７０年参照）であるが、コーンの
分画■を原料として用いｔこ場合に得られるプラスミノ
ダン中には約５〜１０％のプラスミンが混在しており、
長期保存により活性を低下させるものであった。
そこで本発明者らは、プラスミノゲンを含有する水溶液
からプラスミンを完全に除去する方法を種々検討し、吸
着・除去剤としてアプロチニン・アガロースを選択する
ことにより本発明を完成しな。
からプラスミンを完全に除去する方法を種々検討し、吸
着・除去剤としてアプロチニン・アガロースを選択する
ことにより本発明を完成しな。
本発明は、アプロチニン・アガロースを用いて粗製プラ
スミノケン中に含有するプラスミンを選択的に吸着除去
し、長期保存によっても失活のないプラスミノゲンを製
造する方法からなる。
スミノケン中に含有するプラスミンを選択的に吸着除去
し、長期保存によっても失活のないプラスミノゲンを製
造する方法からなる。
本発明のプラスミノゲンは夾雑物としてプラスミンを５
〜１０％程度含むものであれば特に限定されない。この
ようなプラスミノゲンとしては血漿由来のものが挙げら
れ、具体的にはコーンの第■＋■あるいは第■両分など
が例示される。
〜１０％程度含むものであれば特に限定されない。この
ようなプラスミノゲンとしては血漿由来のものが挙げら
れ、具体的にはコーンの第■＋■あるいは第■両分など
が例示される。
プラスミノゲンの濃度としては、１００〜１０００単位
／−程度が例示される。
／−程度が例示される。
また、アプロチニン・アガロースはアプロチニ′ ン
をアガロースに固定化したものである。アガロースとし
てはセファロース４Ｂ（商品名）などが用いられる。ま
た、アプロチニンとしては、比活性１０００〜１０００
０ ＫＩＥ／ｗ＠程度のものが用いられる。固定化方法
自体は公知であり、特に限定されるものではない。
をアガロースに固定化したものである。アガロースとし
てはセファロース４Ｂ（商品名）などが用いられる。ま
た、アプロチニンとしては、比活性１０００〜１０００
０ ＫＩＥ／ｗ＠程度のものが用いられる。固定化方法
自体は公知であり、特に限定されるものではない。
本発明の処理方法はパッチ法、カラム法のいずれを用い
てもよい。平衡溶媒および吸着溶媒としては、ＰＨ６〜
８（好ましくはｐＨ７〜７．５）の緩衝液（例えばリン
酸緩ｆｒ液など）が用いられる。
てもよい。平衡溶媒および吸着溶媒としては、ＰＨ６〜
８（好ましくはｐＨ７〜７．５）の緩衝液（例えばリン
酸緩ｆｒ液など）が用いられる。
また、塩化ナトリウムなどを添加しておくことも可能で
ある。上記条件下、プラスミンはゲルに吸着し、プラス
ミノゲンは吸着せず、故にプラスミノゲンのみを回収す
ることができる。
ある。上記条件下、プラスミンはゲルに吸着し、プラス
ミノゲンは吸着せず、故にプラスミノゲンのみを回収す
ることができる。
アプロチニン・アガロースとの接触処理を行ったプラス
ミノゲンの水溶液はその後常法の手段により無菌バルク
あるいは凍結乾燥品として提供される。
ミノゲンの水溶液はその後常法の手段により無菌バルク
あるいは凍結乾燥品として提供される。
アプロチニン・アガロースはプラスミノゲン溶液中に混
在するプラスミンを選択的に吸着除去し、このことによ
ってブラスミノンをほとんど含まないプラスミノゲンを
製造することが可能になる。
在するプラスミンを選択的に吸着除去し、このことによ
ってブラスミノンをほとんど含まないプラスミノゲンを
製造することが可能になる。
実施例（１）
アプロチニン・セファローズのプラスミン結合能の一例
を示せば第１表の通りとなる。
を示せば第１表の通りとなる。
この表は１０％のプラスミンを含有するプラスミノゲン
溶液をアプロチニン・セファローズゲルを用いたアフィ
ニティクロマトグラフィー処理した結果を示す。
溶液をアプロチニン・セファローズゲルを用いたアフィ
ニティクロマトグラフィー処理した結果を示す。
（以下余白）
−この表からも解るように添加したプラスミノゲン溶液
には１０％のプラスミンが混在しているが、その含有率
がアプロチニン・セファローズによる特異吸着により減
少している。そしてこの時の上清のプラスミンの活性は
ほとんど減少していなかった。
には１０％のプラスミンが混在しているが、その含有率
がアプロチニン・セファローズによる特異吸着により減
少している。そしてこの時の上清のプラスミンの活性は
ほとんど減少していなかった。
このようにアプロチニン・セファローズはプラスミン溶
液からプラスミンの活性を低下させる乙となくプラスミ
ンを吸着除去できる。このプラスミンの吸着除去効果は
第１表に示すようにプラスミン溶液に対するアプロチニ
ン・セファローズゲルの量が増えるほど増加するが、作
業性と経済性の面から、上清中のプラスミンの含有率が
０．５５％（第１表＆４）になる条件が望ましい。また
、プラスミノゲン溶液をアプロチニン°セファローズに
接触させる方式は、バッチ式又はカラムクロマトグラフ
ィ処理を行う連続式の両者が可能であるが、第１表から
容易に推定されるように連続式を採用することにより例
えばアプロチニン・セファローズゲル２００ｇを用いて
１０％のプラスミンが混在するプラスミノゲン溶液の５
００，０００ＣＵ分を一度に処理することが可能となる
ので一段と生産性が向上する。
液からプラスミンの活性を低下させる乙となくプラスミ
ンを吸着除去できる。このプラスミンの吸着除去効果は
第１表に示すようにプラスミン溶液に対するアプロチニ
ン・セファローズゲルの量が増えるほど増加するが、作
業性と経済性の面から、上清中のプラスミンの含有率が
０．５５％（第１表＆４）になる条件が望ましい。また
、プラスミノゲン溶液をアプロチニン°セファローズに
接触させる方式は、バッチ式又はカラムクロマトグラフ
ィ処理を行う連続式の両者が可能であるが、第１表から
容易に推定されるように連続式を採用することにより例
えばアプロチニン・セファローズゲル２００ｇを用いて
１０％のプラスミンが混在するプラスミノゲン溶液の５
００，０００ＣＵ分を一度に処理することが可能となる
ので一段と生産性が向上する。
実施例（２）
アプロチニン・セファローズゲルの調整；アプロチニン
Ｉｇ（福田勘産業■製アプロチニン゛オークラ°’
（６，５００ＫＩＥ／ｍｇ）使用）を２４＋ｎｌのバッ
フ７−Ａ （ｏ、ＩＭ ＮａＨＣｏ。
Ｉｇ（福田勘産業■製アプロチニン゛オークラ°’
（６，５００ＫＩＥ／ｍｇ）使用）を２４＋ｎｌのバッ
フ７−Ａ （ｏ、ＩＭ ＮａＨＣｏ。
０．５Ｍ ＮａＣ１，ｐＨ８，３）に溶解し、バッフ
ァーＡを外液として４℃で一晩透析した。１１のセファ
ローズ（ファルマシア社製セファローズ４Ｂ使用）をグ
ラスフィルター上で、３Ｉの蒸留水と２４のバッファー
Ａとで順次洗浄後、セファローズゲルを２１のバッファ
ーＡに懸濁し８Ｎ−水酸化すトリウム溶液でｐＨを１１
〜１１．５に調節した。その後この懸濁液をスターラー
で静′ かに攪拌しながら室温下で５０ｇのＣＮＢ
ｒを一度に加え、１５分間８Ｎ−水酸化ナトリウム溶液
でｐＨを１１〜１１．５に維持した。次いで、懸Ｉｙ４
液を素早く大型グラスフィルターに移し２１のバッファ
ーＡで洗７Ｐ シた後、活性化セファローズゲルを１１
のバッファーＡ中に再度＋！！ｍしそのうちの２００ｍ
１に透析後のアプロチニン溶液を加えて４℃で一晩静か
に攪拌してアプロチニン・セファローズゲルを得た。
ァーＡを外液として４℃で一晩透析した。１１のセファ
ローズ（ファルマシア社製セファローズ４Ｂ使用）をグ
ラスフィルター上で、３Ｉの蒸留水と２４のバッファー
Ａとで順次洗浄後、セファローズゲルを２１のバッファ
ーＡに懸濁し８Ｎ−水酸化すトリウム溶液でｐＨを１１
〜１１．５に調節した。その後この懸濁液をスターラー
で静′ かに攪拌しながら室温下で５０ｇのＣＮＢ
ｒを一度に加え、１５分間８Ｎ−水酸化ナトリウム溶液
でｐＨを１１〜１１．５に維持した。次いで、懸Ｉｙ４
液を素早く大型グラスフィルターに移し２１のバッファ
ーＡで洗７Ｐ シた後、活性化セファローズゲルを１１
のバッファーＡ中に再度＋！！ｍしそのうちの２００ｍ
１に透析後のアプロチニン溶液を加えて４℃で一晩静か
に攪拌してアプロチニン・セファローズゲルを得た。
このアプロチニン・セファローズゲルはその後バッファ
ーＡで洗浄後０．ＩＭｌ、ｌＪスス−酸溶液、ｐＨ７，
２，０，１％三窒化すトリウム溶液中に懸濁されて使用
時まで４℃で保存した。
ーＡで洗浄後０．ＩＭｌ、ｌＪスス−酸溶液、ｐＨ７，
２，０，１％三窒化すトリウム溶液中に懸濁されて使用
時まで４℃で保存した。
実施例（３）
融解しｔコ凍結保存プラスミノゲン３，５００ｍｊ’（
９８ＣＵ／ｄ、計３４３，０ＯＯＣＵ）に適宜の安定剤
を添加するとともに、６Ｎ−塩酸溶液でｐ）［７，２±
０．１に調節した溶解液３，５００−を調製した。この
ものを常法通りａ縮濾過して濃縮濾過後肢７２０−を得
た。上記濃縮にはアミコン社製本ローフアイバー（Ｔｙ
ｐｅ ＨＩ Ｐ １０−８）を用いた。その後この１
１１ｗ１濾過後液を上記したアプロチニン・セファロー
ズゲルを充填したカラムと接触、展開させ、プラスミン
を吸着除去し、通過してくるプラスミノゲンを含有する
水溶液８５０ｍｊを回収した。このときのカラムクロマ
トグラフィーの条件＋！、６出バッファー：５０Ｍリン
酸、０．４５％食塩、ｐＨ７，２、カラム洗浄バッファ
ー：５００ｍＭグリシン−塩酸、６ＱＯｍＭ食塩、ｐ）
１３，５、溶出量：５０ｍｊ／９ｍ１ｎ／フラクレヨン
、ゲル量：約２００ｍｊで行った。
９８ＣＵ／ｄ、計３４３，０ＯＯＣＵ）に適宜の安定剤
を添加するとともに、６Ｎ−塩酸溶液でｐ）［７，２±
０．１に調節した溶解液３，５００−を調製した。この
ものを常法通りａ縮濾過して濃縮濾過後肢７２０−を得
た。上記濃縮にはアミコン社製本ローフアイバー（Ｔｙ
ｐｅ ＨＩ Ｐ １０−８）を用いた。その後この１
１１ｗ１濾過後液を上記したアプロチニン・セファロー
ズゲルを充填したカラムと接触、展開させ、プラスミン
を吸着除去し、通過してくるプラスミノゲンを含有する
水溶液８５０ｍｊを回収した。このときのカラムクロマ
トグラフィーの条件＋！、６出バッファー：５０Ｍリン
酸、０．４５％食塩、ｐＨ７，２、カラム洗浄バッファ
ー：５００ｍＭグリシン−塩酸、６ＱＯｍＭ食塩、ｐ）
１３，５、溶出量：５０ｍｊ／９ｍ１ｎ／フラクレヨン
、ゲル量：約２００ｍｊで行った。
このものはその後除菌濾過して無菌バルク８４０−を得
た。
た。
このときの各工程におけるプラスミノゲンの活性とプラ
スミン含量との関係を第２表に示した。
スミン含量との関係を第２表に示した。
（以下余白）
この第２表から明らかなように、プラスミノゲン溶解液
中にはプラスミンが２．４％含まれていたが、アプロチ
ニン・セファローズカラムを通過した溶出液にはプラス
ミンの含有は認められなかった。このことによってアプ
ロチニン・セファローズカラムの使用によってプラスミ
ンの混在しないプラスミノゲン製剤の製造が可能である
ことが理解できる。
中にはプラスミンが２．４％含まれていたが、アプロチ
ニン・セファローズカラムを通過した溶出液にはプラス
ミンの含有は認められなかった。このことによってアプ
ロチニン・セファローズカラムの使用によってプラスミ
ンの混在しないプラスミノゲン製剤の製造が可能である
ことが理解できる。
この実施例（３）によって得た無菌バルクを３年間凍結
保存したが、その活性低下は３％弱と小さく保存安定性
が良好であった。
保存したが、その活性低下は３％弱と小さく保存安定性
が良好であった。
実施例（４）
融解しｔ′、凍結保存プラスミン９，０ＱＱ−に７９Ｃ
Ｕ／ｍｔＩ、計７０９，０ＯＯＣＵ）に適宜の安定剤を
添加するとともに、６Ｎ−塩酸溶液でｐＨ７，２±０．
１に調節した溶解液９，０００−を調製した。このもの
を実施例（３）と同様の方法で濃縮濾過して濃縮濾過浸
液９５０−を得た。その後このａｍｍ通過後液実施例（
３）と同一条件で上記したアプロチニン・セファローズ
ゲルと接触、展開させ、プラスミンを吸着除去し、通過
してくるプラスミノゲンを含有する水溶液１，２２０−
を回収した。
Ｕ／ｍｔＩ、計７０９，０ＯＯＣＵ）に適宜の安定剤を
添加するとともに、６Ｎ−塩酸溶液でｐＨ７，２±０．
１に調節した溶解液９，０００−を調製した。このもの
を実施例（３）と同様の方法で濃縮濾過して濃縮濾過浸
液９５０−を得た。その後このａｍｍ通過後液実施例（
３）と同一条件で上記したアプロチニン・セファローズ
ゲルと接触、展開させ、プラスミンを吸着除去し、通過
してくるプラスミノゲンを含有する水溶液１，２２０−
を回収した。
次いで、このものは清澄ｉ！１−過した後、凍結乾燥し
て凍結乾燥品を得た。
て凍結乾燥品を得た。
このときの各工程におけるプラスミノゲンの活性とプラ
スミン含量との関係を第３表に示した。
スミン含量との関係を第３表に示した。
（以下余白）
この第３表から明らかなように、プラスミノゲン溶解液
中にはプラスミンが２．７％含まれていたが、アプロチ
ニン・セファローズカラムを通過した溶出液にはプラス
、ミンの含有が認められなかった。以後の工程において
もプラスミンの含有は認められず、最終の凍結乾燥品の
保存安定性は良好であった。
中にはプラスミンが２．７％含まれていたが、アプロチ
ニン・セファローズカラムを通過した溶出液にはプラス
、ミンの含有が認められなかった。以後の工程において
もプラスミンの含有は認められず、最終の凍結乾燥品の
保存安定性は良好であった。
以上述べたように、本発明の方法は少ないゲル量で大量
のプラスミノゲン溶液を処理することができるので産業
上効率が良く、さらにプラスミンをほとんど含有しない
プラスミ、ノゲンを確実に提供し得るものである。耐し
て、保存安定性にも浸れた高品質の試薬、医薬品の生産
の達成が可能となる。
のプラスミノゲン溶液を処理することができるので産業
上効率が良く、さらにプラスミンをほとんど含有しない
プラスミ、ノゲンを確実に提供し得るものである。耐し
て、保存安定性にも浸れた高品質の試薬、医薬品の生産
の達成が可能となる。
特許出願人 株式会社 ミドリ十字
代理人 弁理士 佐 藤 英 昭
手続補正書（帥）
昭和６汗１２り ９日
Claims (1)
- プラスミンを含有するプラスミノゲン水溶液をアプロチ
ニン・アガロースに接触させて、含有するプラスミンを
ほぼ完全に吸着除去し、プラスミンをほとんど含まない
プラスミノゲンを製造する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62071858A JPH0768274B2 (ja) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | プラスミノゲンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62071858A JPH0768274B2 (ja) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | プラスミノゲンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63239300A true JPS63239300A (ja) | 1988-10-05 |
| JPH0768274B2 JPH0768274B2 (ja) | 1995-07-26 |
Family
ID=13472643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62071858A Expired - Lifetime JPH0768274B2 (ja) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | プラスミノゲンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0768274B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006160731A (ja) * | 2004-11-11 | 2006-06-22 | Kuraray Medical Inc | 血液成分回収装置 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5427365B2 (ja) * | 2008-03-31 | 2014-02-26 | 株式会社クラレ | 液体成分回収装置およびこれを用いた体液成分回収方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5462312A (en) * | 1977-10-28 | 1979-05-19 | Tokyo Zouki Kagaku Kk | Purifying of kariclein |
| JPS58500610A (ja) * | 1981-04-30 | 1983-04-21 | シヨアイ・ソシエテ・アノニム | アプロチニン−プラスミン錯体からなる新規な医薬，及びその新規な錯体の製造方法 |
-
1987
- 1987-03-27 JP JP62071858A patent/JPH0768274B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5462312A (en) * | 1977-10-28 | 1979-05-19 | Tokyo Zouki Kagaku Kk | Purifying of kariclein |
| JPS58500610A (ja) * | 1981-04-30 | 1983-04-21 | シヨアイ・ソシエテ・アノニム | アプロチニン−プラスミン錯体からなる新規な医薬，及びその新規な錯体の製造方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006160731A (ja) * | 2004-11-11 | 2006-06-22 | Kuraray Medical Inc | 血液成分回収装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0768274B2 (ja) | 1995-07-26 |
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