JPS63239234A

JPS63239234A - ワクチン製剤

Info

Publication number: JPS63239234A
Application number: JP628688A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Shiraishi; 白石　広行; Riyouichi Shirochi; 白地　良一; Nakao Ishida; 石田　名香雄; Satoru Funakoshi; 船越　哲
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1988-01-14
Filing date: 1988-01-14
Publication date: 1988-10-05

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は肝炎ワクチン製剤に川する。

Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）はヒトの血清肝炎を起すウ
ィルスとして知られ、輸血を要する患者や臨床検査、血
漿製剤に従事する者にしばしば感染し、誠にやっかいな
問題を引き起す。今日ＨＢＶはコア抗原（Ｈ１３ＣＡ　
Ｑ　）と表面抗原（ＨＢＳＡｇ）及びｅ抗原とから成り
立ちコアの中にＤＮＡポリメラーぜを持つ直径約４Ｑｎ
ｍの大型粒子であることが知られておる（　Ｗ　ＨＯテ
クニカルリポートシリーズナンバー５７０、パイラルへ
パテイテイス（Ｗ　ＨＯＴｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｒｅｐｏ
ｒｔＳｅｒｉｅｓ　　ｋ５７０．　ｖｉｒａｌ　ｈｅｐ
ａｔｉｔｉｓ　）　１　９　７５〕、又アンチ−ＨＢｓ
　（八ｎｔｉ−ｌ−Ｉ　Ｂ　Ｓ　）がコノＨＢＶの感染
を予防し得ることも既に明らかにされている。

従来ＨＢＳＡＱは、これを含む血漿又は血漿画分を密度
勾配超遠心分離法によって、密度１．２０−１．２３の
分画を得る方法（Ｊ、　Ｌ、グリシ、ｐ、　ｖ、ホラン
ド及びＲ，１１，パーセル（Ｊ。

Ｌ、　Ｇｅｒｉｎ、　Ｐ、　Ｖ、　１ｌｏｌｌａｎｄ　
ａｎｄ　Ｒ，ｌｌ’、　Ｐｕｒｃｃｌｌ　）　：ジャー
ナル　オブ　バイロロジイ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒＶｉ
ｒｏｌｏｇｙ）第７巻、第５６９−５７６ページ（１９
７１年）及びＮ、スケノ、Ｒ，シラチ、Ｊ、ヤマグチ及
びＮ、イシダ（Ｎ、　５ｕｋｅｎｏ、　Ｒ。

５ｈｉｒａｃｈｉ、　Ｊ、　Ｙａｍａｇｕｃｈｉ　ａｎ
ｄ　Ｎ、　ｌ５ｈｉｄａ）　　：同誌、第９巻、第１８
２−１８３ページ（１９７２年）〕によって比較的純粋
に得られていた。

更に新しくはアフィニティークロマトグラフィー法が提
案されている（白石仏性、石田名香雄、助野典ｆａ：日
本ウィルス学会抄録昭和４８年１１月４．５．６日発表
、東京において）。この方法の概要は次の通りである。

精製ＨＢＳＡＧを動物、例えば山羊に免疫して得た山羊
抗ＨＢｓ血清にＨＢｓＡｑを含まないヒトの血清を加え
て混在するヒト血清成分に対する抗体を吸収沈澱させ、
上清をｌ／を酸アンしニウム沈澱分画法によってγ−グ
ロブリン抗ＨＢｓ（ａｎｔｉＨＢｓ）を得る。臭化シア
ンで活性化したセフ７０−ス−４８（Ｓｅｐｈａｒｏｓ
ｅ−４Ｂ）とこのａｎ目ＨＢｓとをカップリングさせ、
この生成物のカラムを準備する。トＩＢｓ／ｌを含むヒ
ト血漿、又はこれから常法によって分画されたα−及び
β−グロブリン画分を０．０１Ｍリン酸緩衝液に懸濁し
、遠心分離し、得られる上清について上記のカラムを用
いてクロマトグラフィーを行う。カラムに結合したＨＢ
ＳＡＧを０．４Ｍ−グリシン−ＨＣｊ！　（１１Ｈ２，
５＞！衝液で溶出し、溶出液を０．０１Ｍリン酸緩衝液
に対して透析し、ＨＢＳＡＱ溶液を得る。この溶液を、
前記のカラムと同様に、但し、山羊抗ＨＢｓ血清を用い
る代りに、動物、例えば馬に免疫して得た周波ヒト血漿
血清を用いる以外は同様にｖＡ製したカラムを用いてク
ロマトグラフィーにかけ、微量に混在する血漿成分をカ
ラムにとどめ精製１−Ｉ　Ｂ　ＳΔＱ溶液を通過部分と
して集める。

ＨＢ　Ｓ　Ａ　Ｑを構成するサブユニットについては、
Ｈ８５Ａａをドデシル硫酸ナトリウムおよび２−メルカ
ブトエタノールの存在下加熱し、ゲル濾過分析によって
見い出されるペプチドを検索し、サブユニットは種々の
分子量のポリペプチドを含むことが多くの報告者によっ
て報告されている。すなわち、グリシ（前出）はＨＢｓ
Ａａは、分子量２６．０００．３２．０００及び４０，
０００のポリペプチドからなることを報告している。そ
の外、それが、２５，０００及び３２．０００の分子量
のポリペプチド（Ｇ、Ｎ、ビャス、［、■、ウィリアム
ス、ＧＧＢクラウス及びＨ，Ｅ、ボンド（Ｇ。

Ｎ、　Ｖｙａｓ、　Ｅ、　Ｗ、　ＷｉｌｌｉａｌＳ、　
ＧＧＢ　　にＩａｕｓ　ａｎｄ　ＩＩ。

Ｅ、　Ｂｏｎｄ　）　：　Ｉｆジャーナル　オブ　イム
ノロシイ（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｌｍｕｎ
ｏｌｏｏｙ　）第１０８巻、第１１１４−１１１８ペー
ジ（１９７２年）〕、３９．０００．３２，０００，２
７．０００及び２２．０００のポリペプチド並びに微量
の１６，０００及びｉｏ、ｏｏｏのもの（Ｇ、　Ｒ、ド
レスマン、Ｆ、　Ｂ、ホリンガー、Ｊ、　Ｋ、スリアノ
、１１．ｓ、フジ才力、Ｊ、　Ｐ、ブルンシュウツヒ及
びＪ、　Ｌ、メルニク（Ｇ、　Ｒ，Ｄｒｅｓｓｍａｎｎ
、　Ｆ、　Ｂ、　１ｌｏｌｌｉｎｏｅｒ、Ｊ、　Ｒ。

５ｕｒｉａｎｏ、　Ｒ，Ｓ、　Ｆｕｊｉｏｋａ、　Ｊ、
　Ｐ、　Ｂｒｕｎｓｃｈｗｉｇ　ａｎｄＪ、　Ｌ、　Ｈ
ｅ１ｎｉｋ）　：ジャーナル　オブ　パイロ［１シイ、
第１０巻、第４６９−４７６ページ（１９７２年）〕及
び分子ｔ！１ｉｏｏ、ｏｏｏのポリペプチドを主成分と
し、６５，０００，３６．０００及び２０，０００のも
の（Ｃ，Ｒ，ハワード及びＡ。

Ｊ、ラッカーマン（Ｃ，Ｒ，ｔｌｏｗａｒｄ　ａｎｄ　
Ａ、　Ｊ。

丁ｕｃｋｅｒｍａｎ　）　：ヘバタイテイス　メモラン
ダ（ｔｌｃｐａｔｉｔｉｓ　　Ｍｅｍｏｒａｎｄａ　　
　）　　　、　　ト１−５７６　　、　１９７３年１０
月、Ｕ、Ｓ、Ａ、）のサブユニットから構成されること
が報告されている。又Ｎ、スケノ、Ｓ。

アイカワ及びＮ、イシダ（Ｎ、　５ｕｋｅｎｏ、　Ｓ、
　Ａｉｋａｗａａｎｄ　Ｎ、　　ｌ５ｈｉｄａ　）　　
：同誌、Ｈ−２９２，１９７２年４月、υ、Ｓ、Ａ、’
）は、Ｉ−Ｉ　Ｂ　ｓ　Ａ　ａを尿素の存在においてド
デシル硫酸す（・リウムによって切断するドデシル硫酸
ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動簡易分子
（至）分析法〔コロウィック−カブラン（Ｃｏｌｏｗｉ
ｃｋ　−Ｋａｐｌａｎ　）　：メソード　インエンチモ
ロジイ（Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）
第２６巻、第３ページ（１９７２年）〕によってそれが
分子量２５，０００．２８．０００及び３３．０００の
ポリペプチドのサブユニットからなることを報告してい
る。

このようなＨＢＳＡｇのサブユニットの探索は、そのサ
ブユニツ１−と抗原性の関係を明らかにし、より抗原性
の特異部位を取り出すεとを目的としており、ひいては
効率的なワクチン、試薬の原料としての利用、Ｈ８Ｓ　
Ａ　Ｑの抗原基の研究への利用を図ろうとするものであ
る。

本発明の共同研究者等も先に、このＨＢ　Ｓ　Ａ　Ｑの
抗原性をもつサブユニットの回収法として、ＨＢｓＡｑ
を脱すビド化（ｄｅｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）することの
できるある種の界面活性剤の存在下で加熱処理すること
によって、）（ＢＳＡＱとしての抗原性を保持した分子
量約５５．０００の単一のポリペブタイドのみのサブユ
ニットからなる大きさが約１１８−２０ｎの均一な球形
粒子（ＨａＡｇ５５）に変換することができることをｔ７１
示している（特開昭５Ｏ−１６０４２０）。

本発明者らはまたＨＢｓＡｇの抗原性を持つ粒子の回収
法として新たな方法を発明し、その方法によって新規性
状を有する、すなわち等電点ｐＨ５，５−６，５、分子
量２−４百万、比重１．８０〜１．２４、直径１８０〜
２２０への球形粒子の高い抗原性を保持した均一な変性
１−Ｉ　Ｂ　Ｓ　Ａ　Ｃ７粒子を提供することにも成功
している（特開昭５３−１０４７２４）。

本発明者らは、これらの成功に引続き、実際にワクチン
として用い得るペプタイドを得るための研究を続けてき
た。

ワクチンとしては精製して得たＨＢＳＡＧ粒子をそのま
ま用いることもできるが、その場合感染性を有したＨＢ
ウィルスを完全に除去することは殆んど不可能であり、
混入が予測されるＨＢウィルスをフォルマリンや加熱処
理によって不活性化させる方法が検討されている。しか
し、不活性化したかどううかを証明する方法として、現
在ＨＢウィルスに感染する動物として知られているのは
チンパンジーのみであることから、チンパンジーを用い
たテストが必要となるが、現状では世界中のチンパンジ
ーの数も限られ、経済的にも高価なテストで将来継続し
て不都合なくテストが行えるという保障もない。またＨ
ＢＳＩ）粒子のままでは、ヒト血清蛋白の完全な除去も
極めて困難で、これら蛋白が不活性化処理を通じて変性
すればａ作用の原因にもなる恐れがある。

これに対し、精製ＨＢｓＡａより分子量の小さいサブユ
ニットを分離してペプタイドを得これをワクチンとする
ことができれば、粒子の大きいＨＢウィルスの混入して
くる恐れもなく、ＨＢ　ｓ　Ａ　ａ粒子においては何ら
かの親和性でこれより分離が困難であった血清蛋白成分
の分離除去す容易である。

ＨＢワクチンとして用いられるペプタイドは、ＨＢＳＡ
ｇの抗原性を有していることが必須である。既に説明し
たように、ＨＢＳＡにＪ粒子はこれに対する化学処理の
僅かな相異によって各種分子量のサブユニットに分離さ
れるが、ワクチンとして用いる場合にはその安全性と有
効性が変動してはならず、またワクチン製剤としての安
定性が確保されなければならないいから一定のポリペブ
タイドであることが最も望ましい。

本発明はこのような事柄を背景としてなされたものであ
り、本発明者らは、ＨＢＳＩ）の抗原性を有する、分子
績１８．０００〜２３，０００のベプタイドを得る方法
を発明し、安全且つ有効で安定なるＨＢワクチン製剤を
提供することに成功した。

本発明は、ヒト血漿より精製して得られるＨＢｓＡｑを
用い、界面活性剤および還元剤を存在さゼて加熱するこ
とにより、ＨＢＳＡＧをサブユニットのペプタイドに切
断し、これが再重合することのないように、界面活性剤
および還元剤を存在させてゲル濾過法により分画し、分
子量１８゜０００〜２３，０００のペプタイドから成る
分画を分別し、用いた界面活性剤を除去するための吸着
補助剤とペプタイドの溶解性を維持するための溶解補助
剤とを用いながら透析して、生理的に受入れられる中性
付近の溶液として回収したペプタイドからなるトＩＢワ
クチン製剤である。

本発明において用いられるＨＢ８７ＭＪとして公知の方
法によって血漿又は血清から純粋に得たちのを用いるこ
とができる。また血漿または血清の代りに、α−及びβ
−グロブリンを含む血漿画分、例えばコーンのアルコー
ル分画法におけるＮ−１画分もまた原料として好ましい
。

本発明に用いられる界面活性剤としてはドデシル硫酸ナ
トリウムなどのアルキル硫酸エステル塩あるいはアルキ
ルａｍエステル塩などから選ばれるアニオン界面活性剤
があげられる。界面活性剤の添加量は０．１〜１０％、
好ましくは０．５〜２．０％である。アニオン界面活性
剤の添加量は多くてら差しつかえないが濃度が高いと固
体化し易り、シたがって温度を高く保つ゛必要があるの
で好ましくない。

本発明に用いられる還元剤としては、２−メルカプトエ
タノール、ジチオスレイトール、グリタデオンなどから
選ばれるチオール型還元剤があげられる。還元剤の添加
量は０．１〜１０％、好ましくは０．５〜２．０％であ
る。

加熱は中性付近の緩衝液中１００〜４０℃で２〜６０分
間、好ましくは１００〜９０℃で１〜５分間あるいは７
０〜５０℃で２０〜４０分間行う。

この処理で生成したペプタイドは、界面活性剤および還
元剤が存在しない上限では再結合するのでアニオン界面
活性剤およびチオール基を有した還元剤が存在している
条件においてゲル濾過し、各種の生成したベプタイドを
分子量の大きざによって分画する。

ゲル濾過は、界面活性剤として例えばドデシル硫酸すト
リウムを０．０５〜２％、好ましくは０．１〜０．５％
、および還元剤として例えば２−メルカプトエタノール
０．０５〜２％、好ましくは０．１〜０，５％存在せし
めた中性付近の緩衝液を用いて、１０〜４５℃、好まし
くは１５〜２５℃にて行なう。

ゲル濾過剤としては、セルロース、アガロース、交差結
合デキストランなどの高分子多糖体顆粒あるいは交差結
合ポリアクリルアミドがあげられ、商品名としてはセフ
ァクリル■、セファデック■　　　　　　　　　　■　
　　　　　　　　■　　。

ス　、セファロース　、Ｂｉｏ−Ｇｅｔ　Ｐ　　、　Ｂ
＋ｏ−ＧＯＩ　Ａ　’等であるが、分子あるい作用を有
する担体であれば、これらに限定されることはない。

ゲル濾過の結果、分子量が約６８，０００、約２７．０
ＯＯＪ３よび約２２　、０−ＯＣ１（７）他カラ成る幾
つかの分画が得られるが、これらのうち分子屋約１８，
０００〜２３，０００から成る分画を分取する。

このようにして得られた分画は適当な濃度になるよう濃
縮し、分画に含まれていたアニオン界面活性剤およびチ
オール基を有した還元剤を除去して、生理的に受は入れ
られる溶液とするのであるが、界面活性剤および還元剤
を共に完全に除去してしまうとペプタイドの溶解性が低
下し、その溶液を長期間保管したいような場合沈澱を析
出する恐れがあるので、プルロニックＦ６８、ＴＷＱｅ
ｎ　８０などの非イオン界面活性剤から選ばれた溶解補
助剤を溶液中に含有させるようにするのがよい。

濃縮したのちの溶液は、中性付近の緩衝液に対して透析
することにより、加熱反応に用いた界面活性剤と還元剤
とを除去するが、この際完全な除去はかなり困難である
。

そこで透析外液にプルロニックＦ　６　Ｂ　、Ｔｗｅｅ
ｎ８０などの非イオン性界面活性剤から選ばれた溶解補
助剤を０．０１〜０．１％含有し、アニオン界面活性剤
及び還元剤を吸着除去するための吸着剤としてＢｉｏ−
Ｒａｄ　Ａ　Ｇ　−２＜商品名）などの塩基性陰イオン
交換吸着剤を加えたものを用いる。

このようにして得た溶液は、中性付近の生理的に等張で
、一定量のベプタイド濃度となるように調製し、除菌濾
過したのち、容器に分注してＨＢワクチン製剤の製造を
完了する。

Ｈａワクチン製剤の有効性は、これのＨＢＳＡｇ抗原力価と共に、これをウサギ、モルモット
等の実験動物に注射してＨＢ　Ｓ　Ａ　Ｃ２に対する抗
体の産生をみることによって求めることができる。

本発明のペプタイドの理化学的特徴は、実施例１で得ら
れたちのを用いて求めた。。

（１）　　分子量本発明のペプタイドを、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法により分子量を測定した
ところ、約２２．０００であった。またセファデックス
Ｇ−１００によるゲル濾過分析では分子ｍｉｓ、ｏｏｏ
〜２３゜ＯＯＯであった。従って分子量を１８．０００
〜２３，０００の範囲とすることが最も信頼痕が高いと
思われる。

（２Ｊ　　溶解性本発明のベプタイドの水に対する溶解性は中性付近で約
５％以下であり、それ以上では蛋白乳濁色を呈するよう
になる。この溶解性は塩化ナトリウム溶液、リン酸塩緩
衝液、トリス−ＨＣ１緩衝液においても大差ないが、０
．０１〜０．１％程度のプルロニックＦ６８あるいはＴ
ｗｅｅｎ　８０などの非イオン界面活性剤から選ばれた
溶解補助剤の存在で溶解性は高まる。

（３）　　紫外線吸収本発明のペプタイドの水溶液の２８０　ｎｎ＋におｎｍ
は３８であった。

（４１Ｗ度安定性本発明のベプタイドの０．０５％のプルロニックＦ　　
６８を含有するｐＨ７，２のリン酸塩緩衝液を６０℃±
０．５℃で１時冊加熱しても、そのＨ［３ＳＡＧの抗原
性は失われなかった。

（５）　　呈色反応本発明のペプタイドの水溶液につぎ、ローリ−・フォリ
ン法で試験した結果ペプタイド特有の青色を呈した。ま
た６規定塩Ｍ溶液中、１１０℃で２２時閂加水分解した
のちニンヒドリン反応で試験した結果、α−アミノ酸に
よる紫青色を呈した。糖類試験のためのα−ナフトール
硫酸反応（Ｈｏｌｉｓｈ反応）およびフェノール硫酸反
応では共に陰性であった。

（６）　　構成アミノ酸本発明のペプタイドを常法により加水分解して、アミノ
酸自動分析装置を用いて、アミノ酸組成を求めた。結果
は第１表のとおりである。

第１表生成ＨＢｓＡｏのアミノ酸組成に対する分析結果も第１
表に含めて示しであるが、この結果と本発明のペプタイ
ドの結果と比べるとき大きな差異は認められない。この
ことからこのペプタイドはＨＢｓＡｇの主たる部分を構
成していることが推察される。

（７）　　色および形本発明のペプタイドは、凍結乾燥させたときほぼ白色の
不定形粉末となった。

本発明を更に具体的に説明するために以下実施例を掲げ
るが、実施例の記載は本発明を何ら限定するものではな
い。

実施例１ＨＢｓＡａ陽性と判定されたヒト・プール血漿１１を、
抗Ｈａｓ抗体グロブリン（ウサギ）結合セファロース４
　Ｂ　（ａｎｔｉ−ＨＢ　ｓ　　ｇｌｏｂｕｌｉｎｃｏ
ｕｐｌｅｄ　５ｅｐｈａｒｏｓｅ　４　Ｂ　＞で作成し
たカラムを通過させ、ＨＢｓＡｑをカラムに吸着させる
。吸着カラムは０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液を流して
洗浄後、０．４Ｍグリシン・Ｈ０１！１衝液（ｐＨ２，
５）でＨＢｓＡｇを溶出させる。

溶出液は０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液で透析したのち
、抗ヒト血漿抗体グロブリン（ヤギ）結合セファロース
４Ｂで作成したカラムを通過させ、と１・血漿成分をカ
ラムに吸着させる。吸着せずに通過した溶液は濃縮した
のち、塩化セシウムによるリニア・グレデイエント超遠
心分離を行い、密度１．１９〜１．２３の分画を集め、
濃縮して２ｄとした。

このものは抗ヒト血漿抗体グロブリン（ウサギ）に対し
て免疫電気泳動を行った結果、ヒト結成成分の存在を認
めず、電子顕微鏡観察で直径２２ｎｍの均一なＨＢＳＡ
Ｑの小型球形粒子から成り立っており、大型粒子の存在
は認めず、ＲＰＨＡ法による測定で抗原価は１　：１，
２８０，０００であった。回収率は５２％であった。こ
の生成Ｈａｓ△９をＨＢペプタイドワクチンＨＢの材料
とした。

生成ＨＢＳＡＱの溶液に、ドデシル硫酸ナトリウムおよ
び２−メルカプトエタノールをそれぞれ１Ｗ／Ｖ％濃度
となるように加え、１００℃で２分間加熱処理したのち
、別にあらかじめ０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０
．１％　２−メルカプトエタノールおよび０．１５Ｍ塩
化ナトリウムを含有する１７１００　Ｍリン酸塩緩衝液
、ｐＨ７，２で平衡化したセファクリルＳ−２００のカ
ラムを用いて３７℃にてゲル濾過した。そのときの分画
像は第１図に示したとおりである。図中、Ｆ１〜Ｆ５は
それぞれ分画を示す。

第１図のＦ５分画を集め、１％のＢｉｏ−Ｒａｄ　Ａ　
Ｇ２と０．０５％のプルロニックＦ６８を含有したリン
ＭＭｍ液溶液で透析する。透析の終った液は０．０５％
プルロニックＦ６８含有０．１５Ｍ塩化す１〜リウム溶
液を加えて希釈してペプタイドが５０μｇ／ｄとなるよ
うに調製し、除菌濾過後、１ｄずつ容器に小分けしたＨ
Ｂワクチン製剤３７０本を得た。

このようにして得たＨＢワクヂンを３匹のウサギに注射
した。注射は１回０．５ｄを背部皮下および皮肉に行い
２週間１５１陽で３回注射したのち２週間後に採血し、
その血漿につきＰ　ＨΔ法でＨＢＳ抗体価を測定したと
ころ、それぞれ１：５１２．１　：２，０４８．１　：
１６．０００のＨＢＳ抗体産生を認めた。

実施例２実施例１の精製ＨＢｓＡｇを用い、実施例１で用いた２
−メルカプトエタノールの代りにジチオスレイトールを
用いて６０℃、３０分間加熱処理したのち、別にあらか
じめ０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．１％ジチオ
スレイトールおよび０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含有す
る１／１００ＩＶＩリンＭｊ［衝液、ｐｌ＋７．２で平
衡化したセファデックスＧ２００のカラムを用いて３７
℃にてゲル濾過した。実施例１と同様にしてＦ３分画を
集め、実施例１と同様に操作して１−ＩＢワクチン製剤
２４５本を得た。

このものの２匹のウサギに対するＨ　Ｂ　ｓ抗体産生は
、それぞれ１　：１．０２４であった。

実施例３実施例１において、Ｆ５分画を集めに再ゲル濾過して混
在しているＦ４分画成分を完全に分離したものにつき０
．０５％のＴＷＯＯｎ　８０を含有した０、１５Ｍ塩化
ナトリウム溶液で透析したのち同じ液で希釈してベプタ
イドが５０μび／ｄとなるように調製した。この液に０
．１％の水酸化アルミニウムを加え、除菌濾過後、１ｄ
ずつ容器に小分（プしたＨＢワクチン製剤３９０本を得
た。

このようにして得たトＩＢワクチンを３匹のモルモット
に注射した。注射は実施例１と同様にして行った。結果
はそれぞれのモルモットに７：１゜０２４．１　：１６
．０００．１　：３２，０００のトＩＢｓ抗体産生を認
めた。

【図面の簡単な説明】

第１図は私製１−Ｉ　Ｂ　Ｓへ〇のゲル濾過の分画像で
ある。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ＨＢｓＡｇ　Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原を界面活
性剤と還元剤とを存在させて加熱処理し、界面活性剤と
還元剤とを存在させてゲル濾過した後に、塩基性陰イオ
ン交換吸着剤と非イオン性界面活性剤を含有する中性付
近の緩衝液を外液として透析することにより得られる、
次の理化学的性質を有するペプタイドを含有するＢ型肝
炎ウィルス感染防止のためのワクチン製剤。ａ）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミドによる電気泳
動分析で、１８，０００〜２３，０００である。ｂ）溶解性：水に対する溶解性は、中性付近において約
５％以下であり、それ以上では蛋白乳濁色を呈する。ｃ）紫外線吸収：２８０ｎｍにおける分子吸光係数（Ｅ
＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）は、３８である。ｄ）温度安定性：水溶液を６０℃±０．５℃で１時間加
熱してもその抗原性は失われない。ｅ）呈色反応：ローリー・フオリン反応によりペプタイ
ドの、また加水分解後ニンヒドリン反応によりアミノ酸の呈色反応を示す。ｆ）構成アミノ酸：アスパラギン酸、スレオニン、セリ
ン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、システイン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイシン、チロジン、フェニルアラニン、リジン、ヒスチジン、アルギニンｇ）色および形；ほぼ白色、不定形である。