JPS63231247A - 電気泳動分離検出方法及び装置 - Google Patents
電気泳動分離検出方法及び装置Info
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- JPS63231247A JPS63231247A JP62063780A JP6378087A JPS63231247A JP S63231247 A JPS63231247 A JP S63231247A JP 62063780 A JP62063780 A JP 62063780A JP 6378087 A JP6378087 A JP 6378087A JP S63231247 A JPS63231247 A JP S63231247A
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Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は蛍光標識ＤＮＡ、ＲＮＡあるいは蛋白などの分
離検出装置、特にＤＮＡ塩基配列決定装置として使用す
るに好適な電気泳動分離検出装置に関するものである。
離検出装置、特にＤＮＡ塩基配列決定装置として使用す
るに好適な電気泳動分離検出装置に関するものである。
従来、ＤＮＡ上の塩基配列決定はＤＮＡを放射性元素で
標識し、各塩基に特異な反応で断片化した後、ゲル電気
泳動により分離し、オートラジオグラフィーで分離パタ
ーンを転写・読み取り行っていた。しかし、放射性元素
を用いる煩雑さから蛍光標識による方法が提案されてい
る。（Ｒ’ａｔｕｒｓ３２１、６７４ （１９８６）入
この方法では、片方の末端を蛍光標識しＤＮＡを構成し
ている四種の塩基アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、シト
シン（Ｃ）。
標識し、各塩基に特異な反応で断片化した後、ゲル電気
泳動により分離し、オートラジオグラフィーで分離パタ
ーンを転写・読み取り行っていた。しかし、放射性元素
を用いる煩雑さから蛍光標識による方法が提案されてい
る。（Ｒ’ａｔｕｒｓ３２１、６７４ （１９８６）入
この方法では、片方の末端を蛍光標識しＤＮＡを構成し
ている四種の塩基アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、シト
シン（Ｃ）。
グアニン（Ｇ）の所で、それぞれ切断された一群の試料
を作成する。この時、四種の塩基で特徴づけられる四つ
の試料群を別々の色素で櫟識する。
を作成する。この時、四種の塩基で特徴づけられる四つ
の試料群を別々の色素で櫟識する。
これら試料をいっしょにして一つの泳動路上を泳動させ
て分離する。泳動路上の特定箇所を光照射するとそこを
通過するＤＮＡ断片の末端の種類Ａ。
て分離する。泳動路上の特定箇所を光照射するとそこを
通過するＤＮＡ断片の末端の種類Ａ。
Ｔ、Ｇ、Ｃに応じて異なる色の光がでる。これをフィル
ターを通して光電子増倍管で受光し検出する。フィルタ
ーは四つの色に対応して四枚用意し、モーターで回転さ
せ時分割してそれぞれの信号を検出している。報告例で
は泳動部に１本のカラム状のゲル管を用いているが、複
数試料の検出では複数のカラムゲルを並べたり、平面ゲ
ルに複数の泳動路を設けて、レーザーおよびフォトマル
をスキャンさせて計測するなどが行われている。
ターを通して光電子増倍管で受光し検出する。フィルタ
ーは四つの色に対応して四枚用意し、モーターで回転さ
せ時分割してそれぞれの信号を検出している。報告例で
は泳動部に１本のカラム状のゲル管を用いているが、複
数試料の検出では複数のカラムゲルを並べたり、平面ゲ
ルに複数の泳動路を設けて、レーザーおよびフォトマル
をスキャンさせて計測するなどが行われている。
一般に測定しようとする試料の数は複数である事が多く
、この場合、平板ゲルに複数の泳動路を設けてレーザー
およびフォトマルを一体化して一直線上をスキャンする
方式が取られている。
、この場合、平板ゲルに複数の泳動路を設けてレーザー
およびフォトマルを一体化して一直線上をスキャンする
方式が取られている。
この蛍光測定で感度を支配する重要因子は受光量と受光
量の時間的変動の大小である０発光総量がほぼ一定の場
合、受光量は受光立体角と測定のデユーティサイクルで
決まる。測定泳動路数を１０ケとすると、各泳動路を識
別して検出するには少なくとも１００点刻みでスキャン
する必要がある。更にフィルターを切り換えて４色を区
別するので塩基一種あたりの計測時間は連続測定の場合
の□と小さくなってしまう。また、受光量の時間変動は
主としてレーザーの変動に起因するが、この変化も各点
毎に異なるため高感度計測上の障害となる。
量の時間的変動の大小である０発光総量がほぼ一定の場
合、受光量は受光立体角と測定のデユーティサイクルで
決まる。測定泳動路数を１０ケとすると、各泳動路を識
別して検出するには少なくとも１００点刻みでスキャン
する必要がある。更にフィルターを切り換えて４色を区
別するので塩基一種あたりの計測時間は連続測定の場合
の□と小さくなってしまう。また、受光量の時間変動は
主としてレーザーの変動に起因するが、この変化も各点
毎に異なるため高感度計測上の障害となる。
本発明の目的は上記難点を克服するためになされたもの
である。
である。
上記目的は、各泳動路上の計測部を同一のレーザー光で
線状に照射し、線状部分から出る蛍光を集光すると共に
プリズムあるいは回折格子で分光して二次元光センサー
上に結像させて計測する事により達成される。
線状に照射し、線状部分から出る蛍光を集光すると共に
プリズムあるいは回折格子で分光して二次元光センサー
上に結像させて計測する事により達成される。
励起光で各部を同時に照射する事により、レーザーの変
動による泳動路上からの蛍光量の変化を補正する事がで
きる。また、二次元光検出器の使用により１時間分割す
る事なく各測定点からの蛍光を受光できるので受光量を
大きくする事ができる。
動による泳動路上からの蛍光量の変化を補正する事がで
きる。また、二次元光検出器の使用により１時間分割す
る事なく各測定点からの蛍光を受光できるので受光量を
大きくする事ができる。
以下、本発明の一実施例を第１図により説明する。装置
はレーザー光源４．４’、泳動ゲル１゜保持板２．バッ
ファー漕３からなる電気泳動部、集光レンズ５９回転フ
ィルター１４９回転シャッター１７からなる集光および
分光部、イメージ増巾器７．結合しンズ８．二次元検出
器９からなる二次元検出部、フレームメモリ１０および
計算機１１より成る。レーザー光は色素■、■励起用と
色素■、■励起用の２つがあり、回転ミラー１５で交互
に電気泳動板１の下部側面からゲルを線状に照射する。
はレーザー光源４．４’、泳動ゲル１゜保持板２．バッ
ファー漕３からなる電気泳動部、集光レンズ５９回転フ
ィルター１４９回転シャッター１７からなる集光および
分光部、イメージ増巾器７．結合しンズ８．二次元検出
器９からなる二次元検出部、フレームメモリ１０および
計算機１１より成る。レーザー光は色素■、■励起用と
色素■、■励起用の２つがあり、回転ミラー１５で交互
に電気泳動板１の下部側面からゲルを線状に照射する。
試料Ａ、Ｂ、Ｃ・・・は電気泳動板の上部に設けられた
バッファー漕３から注入され下方に泳動するが、光照射
部を通過する時に蛍光を発する。試料の流れる泳動路は
この例では１０本ある。従って照射路を見ると泳動路と
背景光だけを発する部分とが交互に並ぶ事になる。この
線状の発光部の光量および発光波長は時間と共に変化す
るがこれを分光すると共に位置検出して塩基配列を決定
する。
バッファー漕３から注入され下方に泳動するが、光照射
部を通過する時に蛍光を発する。試料の流れる泳動路は
この例では１０本ある。従って照射路を見ると泳動路と
背景光だけを発する部分とが交互に並ぶ事になる。この
線状の発光部の光量および発光波長は時間と共に変化す
るがこれを分光すると共に位置検出して塩基配列を決定
する。
発光像は結像レンズ５で集光され、プリズムあるいは回
折格子６で分光され像をイメージ増幅器７上に結ぶ、波
長の異なる光は図中あるいはイメージ増幅器上で上下方
向に分散されるので４色の光に対応して位置がずれて結
果レンズ８を介して二次元検出器９上にあられれる事に
なる。この様子はモニター１３上の画像で見る事ができ
る。上下方向が波長分散で蛍光は幅の広いバンドとして
観測できる。横方向は試料の種（Ａ、Ｂ、Ｃ・・・）で
ある、ＴＶカメラなどの二次元検出器９を用いる時は垂
直方向が光の分散方向とするのが便利である。これら二
次元検出器９の代わりに４本のダイオードアレーからな
るラインセンサーをそのままあるいはイメージ増幅器と
組み合わせて用いる事もできる。
折格子６で分光され像をイメージ増幅器７上に結ぶ、波
長の異なる光は図中あるいはイメージ増幅器上で上下方
向に分散されるので４色の光に対応して位置がずれて結
果レンズ８を介して二次元検出器９上にあられれる事に
なる。この様子はモニター１３上の画像で見る事ができ
る。上下方向が波長分散で蛍光は幅の広いバンドとして
観測できる。横方向は試料の種（Ａ、Ｂ、Ｃ・・・）で
ある、ＴＶカメラなどの二次元検出器９を用いる時は垂
直方向が光の分散方向とするのが便利である。これら二
次元検出器９の代わりに４本のダイオードアレーからな
るラインセンサーをそのままあるいはイメージ増幅器と
組み合わせて用いる事もできる。
以下試料の調整から蛍光検出および配列決定の様子を第
２図を用いて具体的に説明する。測定しようとするＤＮ
Ａ試料（第１図でＡ、Ｂ、Ｃ・・・とじたもの）を化学
反応などにより片方の末端を蛍光標識し、他端がアデニ
ン塩基Ａで終わる試料群。
２図を用いて具体的に説明する。測定しようとするＤＮ
Ａ試料（第１図でＡ、Ｂ、Ｃ・・・とじたもの）を化学
反応などにより片方の末端を蛍光標識し、他端がアデニ
ン塩基Ａで終わる試料群。
チミン塩基Ｔで終わる試料群、シトシン塩基Ｃで終わる
試料群およびグアニン塩基Ｇで終わる試料群の４種の試
料群を作成する。もちろん、作成する際、十数塩基から
なる蛍光標識付プライマーを用いて目的Ｄ Ｎ Ａ中の
各塩基種まで相補ＤＮＡ鎖を伸長しても良い。図には作
成された蛍光ラベル付ＤＮＡ断片群の様子を示しである
。ＤＮＡの化学切断で作成した場合には蛍光標識されて
いないＤＮＡ断片が多数生ずるが蛍光検出で検知できな
いので図示してない。断片群（Ａ）、（Ｔ）。
試料群およびグアニン塩基Ｇで終わる試料群の４種の試
料群を作成する。もちろん、作成する際、十数塩基から
なる蛍光標識付プライマーを用いて目的Ｄ Ｎ Ａ中の
各塩基種まで相補ＤＮＡ鎖を伸長しても良い。図には作
成された蛍光ラベル付ＤＮＡ断片群の様子を示しである
。ＤＮＡの化学切断で作成した場合には蛍光標識されて
いないＤＮＡ断片が多数生ずるが蛍光検出で検知できな
いので図示してない。断片群（Ａ）、（Ｔ）。
（Ｃ）、（Ｇ）はそれぞれ異なった色素■〜■で標識さ
れている。図中２３は蛍光ラベルプライマーあるいは蛍
光ラベル末端を示す。色素として使用可能な例には、■
Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉ
ｏｃｙａｎａｔｅ ；吸収波長４８９ｎｍ、発光波長５
１５ｎｍ）、■Ｎ Ｂ Ｄ −Ｆ （４−ｆｌｕｏｒ
ｏ−７ｎｉｔｒｏ、ｈｅｎ−ｚｏｔ軸ａｎ ；吸収波長
４７５ｎｍ、発光波長ｓ ４０ ｎｍ） ｒ■Ｔ ＲＩ
Ｔ Ｃ（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ ｒｈｏｄａｍｉｎ
ｅ １ｓｏｔｈｉｏ−ｃｙａｎａｔｅ ；吸収波長５５
０ｎｍ、発光波長５８０ｎｍ）−■Ｔｅｘａｓ Ｒａｄ
（ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅｌｏｌ ；吸収波長
５９０ｎｍ、発光波長６０５ｎｍ）などがある。標識Ｄ
ＮＡ断片を１つにまとめ同一泳動路上を泳動させる。す
なわち１つの試料について従来４つの泳動路を使用して
いたが、４色標識により１つの泳動路で済む。ＤＮＡ断
片は長さに応じて分離されるが、短いもの程早く泳動す
る。Ａｒレーザ−４８８ｎｍをＦＩＴＣおよびＮＢＤ−
Ｆ励起用に使用し、Ｈｅ −Ｎ ｅレーザー５４３ｎｍ
をＴＲＩ ＴＣおよびＴｅｘａｓ Ｒｅｄ励起用に用い
たにれらレーザ２１は交互に励起領域ａ、ａ’を照射し
、そこに到達してくるＤＮＡ断片を励起する。発する蛍
光は集光されプリズムあるいは回折格子６で分光されて
イメージ増幅器７上に結像する。この像は増幅されて４
本のラインセンサーあるいはＴＶカメラで検出される。
れている。図中２３は蛍光ラベルプライマーあるいは蛍
光ラベル末端を示す。色素として使用可能な例には、■
Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉ
ｏｃｙａｎａｔｅ ；吸収波長４８９ｎｍ、発光波長５
１５ｎｍ）、■Ｎ Ｂ Ｄ −Ｆ （４−ｆｌｕｏｒ
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０ｎｍ、発光波長５８０ｎｍ）−■Ｔｅｘａｓ Ｒａｄ
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５９０ｎｍ、発光波長６０５ｎｍ）などがある。標識Ｄ
ＮＡ断片を１つにまとめ同一泳動路上を泳動させる。す
なわち１つの試料について従来４つの泳動路を使用して
いたが、４色標識により１つの泳動路で済む。ＤＮＡ断
片は長さに応じて分離されるが、短いもの程早く泳動す
る。Ａｒレーザ−４８８ｎｍをＦＩＴＣおよびＮＢＤ−
Ｆ励起用に使用し、Ｈｅ −Ｎ ｅレーザー５４３ｎｍ
をＴＲＩ ＴＣおよびＴｅｘａｓ Ｒｅｄ励起用に用い
たにれらレーザ２１は交互に励起領域ａ、ａ’を照射し
、そこに到達してくるＤＮＡ断片を励起する。発する蛍
光は集光されプリズムあるいは回折格子６で分光されて
イメージ増幅器７上に結像する。この像は増幅されて４
本のラインセンサーあるいはＴＶカメラで検出される。
第１図１３にイメージ増幅器上の像を模式的に示した。
あられれている点は５つの試料に対応している。波長の
ちがいは図中上下位置の変化としてあられれる。１つの
試料に着目すると位置と強度が時間と共に変化すること
になる。４つの色素Ａこ対応した信号の時間変化を検出
する事により配列を決定する事ができる。実施例ではＮ
ＢＤ−Ｆの発光波長と励起光の１つであるＨ ｅ −Ｎ
ｅレーザー５４３ｒ＋ｎ＋とがほとんど重なってしま
い、Ｈｅ−Ｎｅレーザー光のゲルによる散乱光が測定の
障害となる。そこでイメージ増幅器の前にレーザーの交
互照射と同期して動くシャッター１７を取りつけ、障害
となる背景光を取り除いた。すなわちＡｒレーザー照射
中はＦＩＴＣとＮＢＤ−Ｆの計測に用いられる光電面だ
け受光し、Ｈｅ −Ｎ ｅレーザー照射時にはＴＲＩＴ
ＣとＴｅｘａｓ Ｒｅｄの計測に用いられる光電面だけ
受光するようにした。蛍光の発光波長は幅が広〈実施例
で用いたＦＩＴＣとＮＢＤ−ＦおよびＴＲＩＴＣとＴｅ
ｘａｓ Ｒｅｄからの発光を完全に分離する事はで ・
きない。そこでそれぞれ両者の差を取り他の蛍光体から
の寄与を取除くようデータを補正して用いた。第３図は
補正後のデータでピークの位置がら塩基配列を図示した
ように決定できる。
ちがいは図中上下位置の変化としてあられれる。１つの
試料に着目すると位置と強度が時間と共に変化すること
になる。４つの色素Ａこ対応した信号の時間変化を検出
する事により配列を決定する事ができる。実施例ではＮ
ＢＤ−Ｆの発光波長と励起光の１つであるＨ ｅ −Ｎ
ｅレーザー５４３ｒ＋ｎ＋とがほとんど重なってしま
い、Ｈｅ−Ｎｅレーザー光のゲルによる散乱光が測定の
障害となる。そこでイメージ増幅器の前にレーザーの交
互照射と同期して動くシャッター１７を取りつけ、障害
となる背景光を取り除いた。すなわちＡｒレーザー照射
中はＦＩＴＣとＮＢＤ−Ｆの計測に用いられる光電面だ
け受光し、Ｈｅ −Ｎ ｅレーザー照射時にはＴＲＩＴ
ＣとＴｅｘａｓ Ｒｅｄの計測に用いられる光電面だけ
受光するようにした。蛍光の発光波長は幅が広〈実施例
で用いたＦＩＴＣとＮＢＤ−ＦおよびＴＲＩＴＣとＴｅ
ｘａｓ Ｒｅｄからの発光を完全に分離する事はで ・
きない。そこでそれぞれ両者の差を取り他の蛍光体から
の寄与を取除くようデータを補正して用いた。第３図は
補正後のデータでピークの位置がら塩基配列を図示した
ように決定できる。
なお本実施例ではシャッターを用いてレーザー光の切り
換えに対応して計測受光面を切り換えたが、プリズムあ
るいは回折格子をレーザー光の切り換えに同期して回転
させ像の結像位置を変化させ、Ｈｅ−Ｎ ｅ ５４３ｎ
ｍがらの散乱光がＮＢＤ−Ｆからの蛍光受光部に入らな
いようにし必要な光だけをスリットから取り出すように
しても良い。
換えに対応して計測受光面を切り換えたが、プリズムあ
るいは回折格子をレーザー光の切り換えに同期して回転
させ像の結像位置を変化させ、Ｈｅ−Ｎ ｅ ５４３ｎ
ｍがらの散乱光がＮＢＤ−Ｆからの蛍光受光部に入らな
いようにし必要な光だけをスリットから取り出すように
しても良い。
本発明はここで用いた標識色およびその数に限定された
り、ＤＮＡ塩基配列決定に限定されるものでない。
り、ＤＮＡ塩基配列決定に限定されるものでない。
以上述べたように本発明によれば、複数泳動路からの蛍
光信号を時間分割する事なく同時に計測できるので全体
として受光量赫増し、感度を上げる事ができる。
光信号を時間分割する事なく同時に計測できるので全体
として受光量赫増し、感度を上げる事ができる。
第１図は本発明の一実施例の模式図である。第２図は試
料調製の説明および配列決定原理図である。第３図は測
定データの一例である。 １・・・泳動ゲル、２・・・保持板、３・・・バッファ
ー漕、４．４′・・・レーザー光源、５・・・集光レン
ズ、６・・・回折格子、７・・・イメージ増幅器、８・
・・結合レンズ、９・・・ＴＶカメラｏｒ二次元センサ
ー、１０・・・フレームメモリ、１１・・・計算機、１
２・・・出力機器、１３・・・モニター画像、１４・・
・回転フィルター。 １５・・・回転ｏｒ振動ミラー、１６・・・ミラー、１
７・・・回転シャッター、１８・・・被測定ＤＮＡ試料
、１９・・・調整済試料、２０・・・泳動板、２１・・
・レーザー光、２２・・・分離された蛍光ｍｍｏＮＡフ
ラグメント。 第１ 図 １ｏ ｉ／ ／２第 ２ 図 茅３Ｂ ｌ貴 Ｂ！−省 一−一・−〇
料調製の説明および配列決定原理図である。第３図は測
定データの一例である。 １・・・泳動ゲル、２・・・保持板、３・・・バッファ
ー漕、４．４′・・・レーザー光源、５・・・集光レン
ズ、６・・・回折格子、７・・・イメージ増幅器、８・
・・結合レンズ、９・・・ＴＶカメラｏｒ二次元センサ
ー、１０・・・フレームメモリ、１１・・・計算機、１
２・・・出力機器、１３・・・モニター画像、１４・・
・回転フィルター。 １５・・・回転ｏｒ振動ミラー、１６・・・ミラー、１
７・・・回転シャッター、１８・・・被測定ＤＮＡ試料
、１９・・・調整済試料、２０・・・泳動板、２１・・
・レーザー光、２２・・・分離された蛍光ｍｍｏＮＡフ
ラグメント。 第１ 図 １ｏ ｉ／ ／２第 ２ 図 茅３Ｂ ｌ貴 Ｂ！−省 一−一・−〇
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、試料断片が泳動するゲル電気泳動部、該ゲル電気泳
動部に励起光を照射する励起光源、および励起光源から
の光が試料に照射されて発する蛍光を検出する蛍光検出
部を具備する装置において、上記蛍光検出部は上記試料
断片の複数色素から出る蛍光を集光する手段、集光され
た光を分光するプリズムあるいは回折格子、および分光
された光を検出する二次元センサーを具備する事を特徴
とする電気泳動分離検出装置。 ２、特許請求の範囲第１項記載の装置において、励起光
源はレーザーであり、ゲル電気泳動部は平板型であり、
レーザー光はゲル泳動開始ラインから一定距離の所を直
線状に照射する事を特徴とする電気泳動分離検出装置。 ３、特許請求の範囲第１項又は第２項記載の装置におい
て、蛍光の波長分散方向がレーザー光と直角方向である
事を特徴とする電気泳動分離検出装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62063780A JP2702920B2 (ja) | 1987-03-20 | 1987-03-20 | 電気泳動分離検出方法及び装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62063780A JP2702920B2 (ja) | 1987-03-20 | 1987-03-20 | 電気泳動分離検出方法及び装置 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7328579A Division JP2697719B2 (ja) | 1995-12-18 | 1995-12-18 | 電気泳動分離検出方法及び装置 |
| JP9130667A Division JP2795276B2 (ja) | 1997-05-21 | 1997-05-21 | 電気泳動分離検出装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63231247A true JPS63231247A (ja) | 1988-09-27 |
| JP2702920B2 JP2702920B2 (ja) | 1998-01-26 |
Family
ID=13239234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62063780A Expired - Lifetime JP2702920B2 (ja) | 1987-03-20 | 1987-03-20 | 電気泳動分離検出方法及び装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2702920B2 (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0299855A (ja) * | 1988-10-07 | 1990-04-11 | Hitachi Software Eng Co Ltd | Ｄｎａパターン記録方法及びその実施装置 |
| JPH02269935A (ja) * | 1989-04-12 | 1990-11-05 | Hitachi Ltd | 光検出電気泳動装置 |
| JPH02269937A (ja) * | 1989-04-12 | 1990-11-05 | Hitachi Ltd | 多色蛍光検出型電気泳動装置 |
| JPH02269936A (ja) * | 1989-04-12 | 1990-11-05 | Hitachi Ltd | 蛍光検出型電気泳動装置 |
| EP0504943A2 (en) * | 1991-03-22 | 1992-09-23 | Hitachi Software Engineering Co., Ltd. | Multi-colored electrophoresis pattern reading system |
| US5290419A (en) * | 1992-04-14 | 1994-03-01 | Hitachi, Ltd. | Fluorescence detection type electrophoresis apparatus |
| US5543026A (en) * | 1994-02-07 | 1996-08-06 | The Perkin-Elmer Corporation | Real-time scanning fluorescence electrophoresis apparatus for the analysis of polynucleotide fragments |
| JPH08261936A (ja) * | 1996-04-09 | 1996-10-11 | Hitachi Ltd | 多色蛍光検出型電気泳動装置における蛍光検出方法 |
| JPH08261935A (ja) * | 1996-04-09 | 1996-10-11 | Hitachi Ltd | 蛍光検出型電気泳動装置における蛍光検出方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60220860A (ja) * | 1984-01-16 | 1985-11-05 | カリフオルニア・インステイテユ−ト・オブ・テクノロジ− | オリゴヌクレオチドの分析法 |
| JPS60242368A (ja) * | 1984-05-16 | 1985-12-02 | Hitachi Ltd | 核酸塩基配列決定方法 |
| JPS6162843A (ja) * | 1984-08-13 | 1986-03-31 | Hitachi Ltd | 螢光検出型電気泳動装置 |
| JPS61213974A (ja) * | 1985-03-19 | 1986-09-22 | Mitsui Mining & Smelting Co Ltd | 光散乱画像解析装置 |
| JPS6336147A (ja) * | 1986-07-30 | 1988-02-16 | Shimadzu Corp | ゲル電気泳動装置 |
-
1987
- 1987-03-20 JP JP62063780A patent/JP2702920B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60220860A (ja) * | 1984-01-16 | 1985-11-05 | カリフオルニア・インステイテユ−ト・オブ・テクノロジ− | オリゴヌクレオチドの分析法 |
| JPS60242368A (ja) * | 1984-05-16 | 1985-12-02 | Hitachi Ltd | 核酸塩基配列決定方法 |
| JPS6162843A (ja) * | 1984-08-13 | 1986-03-31 | Hitachi Ltd | 螢光検出型電気泳動装置 |
| JPS61213974A (ja) * | 1985-03-19 | 1986-09-22 | Mitsui Mining & Smelting Co Ltd | 光散乱画像解析装置 |
| JPS6336147A (ja) * | 1986-07-30 | 1988-02-16 | Shimadzu Corp | ゲル電気泳動装置 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0299855A (ja) * | 1988-10-07 | 1990-04-11 | Hitachi Software Eng Co Ltd | Ｄｎａパターン記録方法及びその実施装置 |
| JPH02269935A (ja) * | 1989-04-12 | 1990-11-05 | Hitachi Ltd | 光検出電気泳動装置 |
| JPH02269937A (ja) * | 1989-04-12 | 1990-11-05 | Hitachi Ltd | 多色蛍光検出型電気泳動装置 |
| JPH02269936A (ja) * | 1989-04-12 | 1990-11-05 | Hitachi Ltd | 蛍光検出型電気泳動装置 |
| EP0504943A2 (en) * | 1991-03-22 | 1992-09-23 | Hitachi Software Engineering Co., Ltd. | Multi-colored electrophoresis pattern reading system |
| US5290419A (en) * | 1992-04-14 | 1994-03-01 | Hitachi, Ltd. | Fluorescence detection type electrophoresis apparatus |
| US5543026A (en) * | 1994-02-07 | 1996-08-06 | The Perkin-Elmer Corporation | Real-time scanning fluorescence electrophoresis apparatus for the analysis of polynucleotide fragments |
| JPH08261936A (ja) * | 1996-04-09 | 1996-10-11 | Hitachi Ltd | 多色蛍光検出型電気泳動装置における蛍光検出方法 |
| JPH08261935A (ja) * | 1996-04-09 | 1996-10-11 | Hitachi Ltd | 蛍光検出型電気泳動装置における蛍光検出方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2702920B2 (ja) | 1998-01-26 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |