JPS6322802A - 新規なアミノ化アクリロニトリル系ポリマ−の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、多孔質構造を有する水不溶性アミノ基含有ア
クリロニトリル系ポリマーの製造法に関するものである
。

従来よυ、ニトリル基を有してなるポリアクリロニトリ
ルが生物学的活性物質である酵素を吸着することは知ら
れている（特開昭５１−１２１５９２号公報、特開昭５
２−７４８５号公報）。しかし、ポリアクリロニトリル
への酵素の吸着において、吸着される酵素量は少なく、
また吸着された酵素が容易に脱離されるため良好な酵素
の支持体となり得るものではなかった。

本発明者らは、多孔質構造を有するポリアクリロニトリ
ルの有するニトリル基を固相で一部還元せしめて得られ
るアミノ基含有ポリアクリロニトリルが、意外にも酵素
吸看量が著しく大きく、処理前のポリアクリロニトリル
に比べ約２〜３０倍も吸着し得るものであることを知シ
、さらにこの吸着された酵素は容易に脱離されない良好
なものであることを知った。また、このポリアクリロニ
トリルの代夛に、アクリロニトリル系モノマー、例えば
アクリロニトリル、メタアクリロニトリル、α−クロ豐
アクリａニトリル、シンナムニトリルなどのモノマーか
らなるホモポリマー、コポリマー、さらにこのアクリロ
ニトリル系モノマート共゛　重合し得るモノマーとのコ
ポリマーの還元によって得られたアミン基含有ポリアク
リロニトリル系ポリマーも良好なものであることを知っ
た。さらにまた、この支持体と、生物学的活性蛋白質で
ある酵素との結合は物理学的に吸着されるだけでなく、
必要に応じて縮合剤、架橋化剤を用いて、その結合を強
固にせしめても、これによってその生物学的活性蛋白質
は失活または劣化することなく、著しく強固に固定化さ
れたもので、これらの支持体と生物学的活性蛋白質との
結合した固定材はその生物学的活性蛋白質の性質に応じ
て、その生物学的活性蛋白質の活性により作用を受ける
物質に、長期間安定かつ効率よく使用し得るものである
ことを知った。

本発明は、上記の知見に基いて完成されたもので、その
目的は、生物学的活性蛋白質を著しく多量に、安定に結
合せしめた支持体の製造法を提供するものである。

次に、本発明を実施するに当って、本発明の支持体につ
いて述べる。

まず、アクリロニトリル系ポリマーとしては、例えばア
クリロニトリル、メタクリロニトリル、α−クロロアク
リロニトリル、シンナムニトリルなどのアクリロニトリ
ル系モノマーのホモポリマー、コポリマー、さらにこれ
らのアクリロニトリル系モノマーとエチレン性二重結合
を含む他のコモノマー、例エバスチレン、メチルスチレ
ン、エチルスチレン、ニトロスチレン、クロルスチレン
、フロムスチレン、クロロメチルスチレンなどのスチレ
ン系モノマー、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、
メタアクリル酸メチル、メタアクリル酸エチル、メタア
クリル酸エチレングリフールエステルなどのアクリル酸
エステル系モノマー、メチルビニルケトン、エチルイソ
ブ豐ベニルケトンなどのビニルケトン系モノマー、ビニ
ルクロライド、ビニリデンクロライドなどのハロゲン化
オレフィン、イソブチン、エチルビニルエーテル、ブチ
ルビニルエーテルなどのビニルケトン系モノマー、酢酸
ビニル、安息香酸ビニルなどのビニルエステル糸モノマ
ー、ブタジェン、イソプレンなどの共役ジエン、ジビニ
ルベンゼン、ジビニルトルエンなどの多官能性モノマー
、Ｎ−ビニルスクシンイミド、Ｎ−ビニルピロリドン、
Ｎ−ビニルフタルイミド（メタ）アクリルアミド、Ｎ、
Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミドなどのアミド糸ビ
ニルモノマー、ビニルピリジン、メチルビニルピリジン
、ビニルイミダゾール、Ｎ、Ｎ−ジエチルアミンエチル
（メタ）アクリレートなどの塩基性モノマー、などとを
、必要に応じて架橋重合剤、例えばジビニルベンゼン、
ジビニルトルエンを用いて、共重合せしめたものが挙ら
れ、これはまた多成分共重合体でもよく、またこれらの
重合においては公知の方法を適宜使用して行なえばよく
、さらに一般に市販されているニトリル基を有するポリ
マー、例えば繊維原料たる未加工のポリアクリロニトリ
ルを使用すればよい。

次いで、このアクリロニトリル系ポリマーは、その性質
を良好となすため、多孔質構造となすものであるが、こ
の多孔質構造となすに当っては、例えばアクリロニトリ
ルをホモ、あるいはコポリマーの条件下、そのモノマー
を水系で懸濁重合または乳化重合せしめるか、または該
ポリマーをジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサ
イド、濃硝酸、ロダン塩水溶液、塩化亜鉛水溶液などの
可溶化溶媒に溶解せしめ、これを水、アセトン含有水溶
液、ジメチルホルムアミド水溶液、エタノール含有水溶
液などの凝固浴中に滴下、糸状あるい４まフィルム状に
て押し出して、多孔質構造を有する粒状、繊維状、膜状
にせしめればよい。さらに、中空糸状の繊維状になして
もよい。このようにして得られる多孔質構造は、多分、
生物学的活性蛋白質をその内部に浸透せしめる役割を有
する大孔径の孔と、その表面および内部で生物学的活性
蛋白質を捕捉する役割を有する小孔径とを有しているも
のと推定され、これによシ、生物学的活性体が結合され
るものと認められるもので、その孔は約４０〜９０００
＾、好ましくは約５０〜４０００Ａ、さらに平均的には
約１００〜２０００Ｘ程度の孔径と推定される。

本発明の多孔質構造を有する水溶性アミン化ポリアクリ
ロニトリル系ポリマーは、この多孔質構造を有したアク
リロニトリル系ポリマーを、好ましくは不活性非溶媒中
還元されるものであるが、この還元の目的は該ポリマー
中に存在するニトリル基の一部をアミノメチル基に還元
せしめて、多孔質構造を有するアミノ基含有アクリロニ
トリル系ポリマーとなすものであって、この還元に使用
される不活性非溶媒としてはジエチルエーテル、ジオキ
サン、テトラヒドロフランなどの媒体にて行なわれるも
ので、また還元剤としては通常水素化リチウムアルミニ
ウムが挙げられる。その使用割合は目的とする遊離アミ
ノ基含量によって異なるが、そのニトリル基の推定量に
対し等モル以上の還元剤を用いればよく、一般にその反
応は室温ないし、使用する媒体の沸点温度で行なえばよ
く、反応時間は、反応温度、使用するポリマーの形状、
構造、重合度などにより異なるが、通常１０分程度から
４８時間程度の間で適宜行なわれる。

このようにして得られたアミノ基含有アクリロニトリル
糸ポリマーは、必要に応じて水冷、水洗、市水溶液洗浄
、アルカリ水溶液洗浄などを行なえばよい。また、この
還元によって得られる遊離アミノ基の含量は、アミノ基
含有アクリロニトリル糸ポリマーが実質的に水溶性にな
らないまでの範囲内で有し、通常は該ポリマーｇ当、９
２０ＰＭから１１０６０Ｐ有する。さらにこの本発明の
支持体は、あらかじめ多孔質構造となしているアクリロ
ニトリル系ポリマーから製造されるため、その還元はポ
リマーを溶解しない媒体を使用して固体状にて反応せし
めて、多孔質構造のまま得られるものである。アクリロ
ニトリル系該アクリロニド！ＪＡ４ボ！Ｊマーの孔が多
孔質構造となっていない場合には、そのニトリル基のア
ミノメチル基への還元は弱いため遊離のアミノ基のニト
リル基に対する比率は少なくなるので、還元されるアク
リロニトリル系ポリマーは予め多孔質構造であるのが好
ましい。

本発明のアミノ基含有ポリアクリロニトリル系ポリマー
は、生物学的活性体を固定化するための支持体として有
用である。その使用に当っては必要に応じて生物学的活
性体と結合せしめる以前に、不活性媒体、例えば水性媒
体下にグルタルアルデヒドなどの架橋化剤を用いて、グ
ルタルアルデヒドの重合を防止のために冷却下にて処理
し、さらにこれに例えばヘキサメチレンジアミン、ドデ
カメチレンジアミンなどのアルキレンジアミン、リジン
などのスペーサーとしての化合物を、同様な水性媒体下
Ｏ℃〜室温にて処理し、再度架橋化剤にて処理して、目
的の支持体となしてもよい。

この多孔質構造を有する水不溶性のアミノ基含有アクリ
ロニトリル系ポリマーからなる支持体と生物学的活性蛋
白質とを結合せしめるものであるが、この生物学的活性
蛋白質としては、酵素、例えば酸化還元酵素、加水分解
酵素、転位酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼな
どであって、また酸化還元酵素としてはアルコールデヒ
ドロゲナーゼ、グリセロールデヒドロゲナーゼ、グリ七
ロールリン酸デヒドロゲナーゼ、ラクテートデヒドロゲ
ナーゼ、ガラクトースデヒド四ゲナーゼ、グルコース−
６−リン酸デヒドロゲナーゼ、３−ヒドロキシブチレー
トデヒドロゲナーゼ、グルツースオキシダーゼ、コレス
テロールオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、コ
リンオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、グルタミ
ン醜デヒドロゲナーゼ、アミノ酸オキシダーゼ、アミン
オキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、ジアホラーゼ
、ウリカーゼ、パーオキシダーゼ、カタラーゼ、リポキ
シゲナーゼなどが挙られ、加水分解酵素としてはリパー
ゼ、ホスホリパーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、コ
レステロールエステラーゼ、ホスファターゼ、アミラー
ゼ　グルコシダーゼ、ガラクトシダーゼ、ペプシン、ト
リプシン　キモトリプシン、パパイン、プロメライン　
ウレアーゼ、アミノアシラーゼ、ペニシリンアシラーゼ
、七７アロスポリンアシラーゼ、ベニシリナーゼ、セフ
ァロスポリナーゼ、クレアチナーゼ、クレアチニナーゼ
などが挙られ、転位酵素としてはクレアチンホスキナー
ゼ、ピルベートキナーゼ、ヘキソキナーゼ、グリセロー
ルキナーゼなどが挙られ、イソメラーゼとしてはアラニ
ンイソメラーゼ、グルコースイソメラーゼ、グルツース
ホスフェートイソメラーゼなど、リガーゼとしてはグル
タチオンシンテターゼが挙られ、以上の外に、蛋白質で
あって生物学的活性を有しているもので、該支持体と結
合し得るものであればよく、またこれらの蛋白質を公知
の種々の手段をもって、その誘導体となしたものであっ
てもよく、さらに使用される該生物学的活性蛋白質は、
単独または２以上を同時に用いてもよい。次いで、上記
の種々な支持体と、この支持体をカラムに充填し九カラ
ム法、または容器に分散せしめたバッチ法のいずれを用
いてもよく、その際に用いられる不活性媒体としては使
用する生物学的活性蛋白質が失活しない媒体であればよ
く、水、または種々の田に調整した緩衝液（例えばｐＨ
４〜６酢酸緩衝液、−６〜８のリン酸緩衝液、ｐＨｇ〜
９のホウ酸緩衝液など）、含水アセトンなどの水性媒体
が好ましく、また結合における温度は同様に失活しない
温度であればよく、通常Ｏ〜３０℃程度であシ、さらに
使用する生物学的活性蛋白質の鎗としては、該支持体の
結合容量が充分溝されるまで使用してもよく、その際は
結合後の不活性媒体中の生物学的活性蛋白質の活性の有
無によシ判断してもよく、また得られた固定材の生物学
的活性の測定を行なってもよく、例えば後述実施例にお
ける、アクリロニトリル５５部、シヒニルベンゼン２５
ｇ、、ビニルエチルベンゼン２０部よシなる共重合体の
多孔質構造の還元後の遊離アミノ基およびニトリル基を
有してなる支持体のバチルス・メガテリウム−Ｂ　−４
００（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ　Ｂ　
−４００：　Ｆ　Ｅ　ＲＭ　−ＰＮ１７４８）の生産す
るアシラーゼに対する結合は１５０ｕ／■、ツマモナス
・ニス・ビー・ｓＹ−７７−１（Ｃｏ−ｍａｍｏｎａｓ
　ｓｐ、　ＳＹ　−７−１：ＦＥＲＭ−ＰＬ２４１０　
）の生産するアシラーゼに対する結合は６７０ｕ／■、
アスロバクター・グロビフオーミス−’Ｂ　−０５７７
（Ａｒｔｈｒｏｂａｅｔｏｒ　ｇｌｏｂｉｆ。

−ｒｍｌｍＥ−０５７７：ＦＥＲＭ−ＰＩ’に３５１８
）の生産するコリンオキシダーゼに対する結合は７、Ｏ
ｕ／ｇであって、このように、使用する生物学的活性体
に応じて適宜その結合における使用量を変更すればよい
。

このように処理することにより、アミノ基含有アクリロ
ニトリル系ポリマーからなる支持体と生物学的活性蛋白
質とを結合した固定材が得られるものであって、さらに
これは必要に応じて、同一系または別の糸として結合化
剤を使用して固定化してもよい。使用される結合化剤と
しては、該支持体の反応性の基、例えば遊離アミノ基と
生物学的活性蛋白質の遊離基例えばアミノ基、カルボキ
シル基、ヒドロキシル基、などを利用するものであって
、例えばヘキサメチレンジイソシアネート、ヘキサメチ
レンジイソチオシアネート、トルエンジイソシアネート
、キシレンジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジ
アルデヒドスターチ、ジメチルアシビミデート、ジメチ
ルスベリイミデート、ジメチル−３，３′−ジチオビス
プロピオンイミデート、無水コハク酸、クロトンアルデ
ヒド、アクロレインなどの架橋化剤を用いることにより
、該支持体と生物学的活性蛋白質が架橋結合される。

また、支持体と生物学的活性蛋白質とを直接共有結合す
る場合には、縮合剤、例えば１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）−カルボジイミドなどの水溶性
縮合剤が使用される。上記の如くの、結合化剤を用いる
に当っては、不活性媒体、例えばテトラヒドロフラン、
アセトン、エタノールなどを含有してもよい水性媒体中
で行なわれる。その際、室温下の条件が好ましく、また
使用する生物学的活性蛋白質の安定な田の範囲、−般に
…４〜１２の範囲にて適宜選択して行なえばよく、また
使用する結合化剤は結合せしめる遊離基に対し１〜２倍
モル程度でよい。

以上の如くして得られた固定材において、その生物学的
活性は著しく良好であり、この固定材はその生物学的活
性蛋白質の性質に応じて種々に利用されるものである。

従ってまた、以上の如くして得られた固定材は、その一
定量をカラムなどの一定容器に入れ、これを遊離アミノ
基およびニトリル基を有してなる支持体を生物学的活性
蛋白質とを結合した固定材の系となし、この際に必要に
応じて生物学的活性蛋白質の安定を保つため緩衝液を使
用することが好ましく、またこの系に対して、用いた生
物学的活性蛋白質の活性により作用を受ける物質を含有
する系を設けるものであるが、この系に使用される物質
としては、前記の生物学的活性蛋白質に対応するもので
あればよく、例えば、前記の種々の酵素の場合において
はその基質が挙られるものであって、またその基質は状
態により種々有るが、水溶液　水性媒体（例えば緩衝液
など）、血液、尿溶液またはこれらの処理液などの体液
の状態のものであってもよく、例えば前記の生物学的活
性蛋白質が酵素である場合においては、酵素としてアシ
ラーゼを挙げるならば基質としては７−アシル−セファ
ロスポラン酸誘導体（ＤＩＢ液、６−アシル−ペニシラ
ン酸誘導体の溶液、７−アミノ−３−セフェム−４−カ
ルボン酸またはその誘導体または６−アミノ−ペナム−
３−カルボン酸またはその誘導体とチェニル酢酸メチル
エステルとの溶液が一例として挙られるもので、また酵
素としてコリンオキシダーゼ、種々のホスホリパーゼ、
ウリカーゼ、グルコースオキシダーゼを挙げるならば対
応するリン脂質、尿酸、グルコースなどの血液、尿溶液
などの体液が挙られるものである。

以上の如くして、アミノ基含有アクリロニトリル系ポリ
マーからなる支持体と生物学的活性蛋白質とを結合した
固定材を使用することによシ、良好になし得るものであ
る。さらにこの支持体に、前記の生物学的活性蛋白質と
して、酵素以外の蛋白質、例えばホルモン、抗体などの
支持体として使用し得るものである。

次に、実施例および参考例を挙げて本発明を具体的に述
べるが、本発明は何んらこれらによって限定されるもの
ではない。

また、以下の実施例、参考例において、生物学的活性体
として酵素を利用した際のその活性測定法は、次に述べ
る方法を用いたものである。

（ペニシリンアシラーゼの力価測定法）１）酵素液の場
合 酵素液０．５ＷＬｌｓ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
５）４、０ｍ、　４　（Ｗ／Ｖ　）％ＰｃＧＰｃ中ム塩
１０．１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）０．５ａ（よ
シなる反応液を３７℃、３００分間反応しめた後、これ
から０．５ｄをとり、０．０５　ＮＮａＯＨ／　ｍｌ　
、　２０％酢酸２肩！よシなる緩衝液３ｍ１ｌＯ，，５
（Ｗ／Ｖ）％Ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド／メ
タノール溶ｆｆ０．５ｄ中に加え、室温下１０分間反応
させ、４１５ｕｍにおける吸光度を測定し、生成する６
−ＡＰＡｆｆｉを求める。

酵素活性は、１分間にＩＰモルの６−ＡＰＡを生成する
活性を１単位（ＩＵ）とする。

２）固定化酵素の場合 ０．１Ｍリン酸緩衝液（１）Ｈ７，５）４．５ｍ、４（
Ｗ／　Ｖ　）　％　ＰｃＧカリウム壌１０１Ｍリン酸緩
衝液（ｐ）（７，５）０．５１Ｊよシなる溶液中にあら
かじめ重量を測定した固定化酵素を添加し、３７℃、３
００分間反応しめる。以下上記酵素液の場合と同様にし
て生成する６−ＡＰＡｌｌを求める。

（アシラーゼ活性測定法−１） アシラーゼ含有液０．２５　ｒｎｌおよび基質たる７−
（４−カルボキシブタンアミド）−デスアセトキシセフ
ァロスポラン酸の１％、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１
７．０）溶液０．２５ｄからなる系、またはアシラーゼ
と支持体とを結合した固定材、上記と同一の基質溶液２
．Ｏｄおよび０．１　Ｍリン酸ａ２衝液２．Ｏｄからな
る系を、３７℃、３００分間反応しめ、反応後生成した
７−アミツージスアセトキシセファロスボラン酸（７−
ＡＤＣＡ）含有液０．５　ｍｌに、０、０５　ＮＮａＯ
Ｈ／　ｒｎｌ　、　　２０％酢＠　２　ｒａｔよりなる
緩衝液３ｍｌ、０．５％ｐ−ジメチルアミノベンズアル
デヒドメタノール溶液０．５　ｍＪを加え、室温下１ｏ
分間反応させ、その後４１５　ｎｍにおける吸光度を測
定し、７−ＡＤＣＡの検量線よシ試料中の７−ＡＤＣＡ
ｊｉｔ−ＸＩ定するもノテ、１００　ｒ　１　ｍｌの７
−ＡＤＣＡを生成する力価を１００ｕとする。

この測定法は、コマモナス・ニス・ビー・５Ｙ−７７−
１の生産するアシラーゼを利用した場合に行なったもの
である。

（アシラーゼ測定法−２） 上記のアシラーゼ測定法−１において、基質として１％
７−７エニルア七ドアミド−デスアセトキシセファロス
ボラン酸の０．１　Ｍリンｍａｉ液（ｐＨ７，５）を用
いて、上記のアシラーゼ測定法−１と同様に行なったも
ので、この測定法はバチルス・ｆｉｊｆ＋’）ラム・Ｂ
−４００の生産するアシラーゼを利用した場合に行なっ
たものである。

（フリンオキシダーゼ活性測定法） コリンオキシダーゼ含有液５１ＬＩ　、またはコリンオ
キシダーゼと支持体とを結合したＩ＃定材１〜５■、０
．２　Ｍ　）　リｘ塩醗緩衝液（ｐｉ（８，０）　０．
０５ｍｌ、３■１ゴ４−アミノアンチピリン０．０．５
珈ｌ、０．１％７エノール０．１０ａｔ、　２　ｕ　１
■パーオキシダーゼ０．１０　ｍｌ、０．ＩＭｉ化コリ
ン０．１０ｍＡ！および蒸留水０．１　ｒｎｌからなる
系を、３７℃、５分間反応させた後、２，５１１１１の
エタノールを加えて反応を停止せしめ、次いで４８０　
ｎｍにおける吸光度を測定し、１分間にＩ　Ｐｍｏ　１
・の過酸化水素を生成する活性を１ｕとする。また該固
定材の力価の算出は次式に従う。

この測定法は、アースロパクター・グロビフオーミス・
Ｂ−０５７７の生産するコリンオキシダーゼを利用した
場合に行なったものである。

参考例１ ５００ｒＲ１容三つロフラスコを約３５℃の恒温水浴に
ひたし、約１５分間窒素で置換せしめ、次いで、フラス
コ内に１２０１ｎ／の蒸留水を加え、さら酔水最ナトリ
ウム０．０３３，９を加え、約３時間撹拌せしめて乳濁
液を得、次いでこれを約５００ｍ１の水に注ぎ、撹拌子
塩を加えて凝固せしめて生成物を析出し、これを戸別、
水洗し、通風乾燥してポリアクリロニトリル（０，５％
、３０℃におけるジメチルホルムアミドでの対数粘度は
約１０．５である）を得た。次いでこのポリアクリロニ
トリル１０、！ｉｒヲジメチルホルムアミド１５０ｄに
溶解し、これを、２０％ジメチルホルムアミド含有水浴
中に、糸状に成形して、多孔質構造を有するポリアクリ
ロニトリル（アクリロニトリル９０％以上）繊維（太さ
２０〜３５ミクロン）を得た。同様に、ポリアクリロニ
トリル１０ｇを２０％ジメチルホルムアミド含有水浴中
に、アトマイザ−カップを用いて滴下して、多孔質構造
を有するポリアクリロニトリル（アクリロニトリル９０
％以上）粒状物（平均粒径１００メツシユ）を得た。

この様にして得られたポリアクリロニトリルは後述実施
例の如く使用する。

実施例１ 水素化リチウムアルミニウム２５ｇを三つロフラスコに
加え、乾燥エーテル１０９ｍを添加・撹拌し、これに参
考例１の如くして得られた多孔質構造を有するポリアク
リロニトリルの粒状物２ｇを加えて５０℃にて１６時間
加熱還流し、反応援水冷下、水を滴下して未反応の水素
化リチウムアルミニウムを分解せしめ、さらにＩＮＭＣ
Ｉを滴下して、その分解物を溶解せしめ、次いでこれを
戸別して、アミノ化された該ポリアクリロニトリルを回
収し、次いでＩ　Ｎ　ＭＣＩ　、水、Ｉ　Ｎ　ＮｕＯＩ
（ｓ　水０、　Ｉ　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，５）
の順で洗浄して薄黄色の多孔質構造を有するアミン化ポ
リアクリロニトリルの粒状物（平均粒径１００メツシユ
）を得た。

同様に、上記の多孔質構造を有するポリアクリロニトリ
ルの粒状物の代りに、多孔質構造を有するポリアクリロ
ニトリルｌ＃維を用いて行なった結果、多孔質構造を有
するアミノ化ポリアクリロニトリル繊維を得た。

実施例２ 水素化リチウムアルミニウム２９を乾燥エーテル５０ゴ
に添加し、攪拌し、これに参考例１と同様にして得られ
た多孔質構造を有するポリアクリロニトリル系ポリマー
（アクリロニトリル５５部、ジビニルベンゼン２５ｇ、
ビニルエチルベンゼン２０部よシなるコポリマー）の粒
状物３ｇを冷却下少量づつ添加し、４５℃で各々１０分
〜８時間加熱還流し、次いで氷浴中、冷却撹拌下に２１
Ｒ１の水を添加して未反応の水素化リチウムアルミニウ
ムを分解せしめ、さらにＩＮＨｃＩを添加した後その不
溶物たるアミノ基を有する該ポリマーを戸数し、これを
洗浄して多孔質構造を有するアミノ化ポリアクリロニト
リル系コポリマーの平均粒径１００メツシユ、湿重量９
ｇを得た。

得られたアミノ化コポリマー粒状物の物理化学的性質は
次の通りである。

色；淡黄色、還元時間が長くなるに従い、黄色味が強く
なる。

粘度；不明（下記の溶媒に対して溶解しなしまため測定
不可能） 溶媒に対する溶解性；ＤＭＳＯｌＤＭＦ、濃硝酸、６５
％ＫＳＣＮ溶液（６０℃）、クロロホルム、アセトニト
リル、ピリジン、ニトロメタン、シクロヘキサン、ジエ
チルエーテル、３０％ＮａＯＨ溶液の各溶媒に不溶性。

アミノ基含量；実施例１に記載の塩酸測定法によジアミ
ノ基含量を測定すると、各還元時間における支持体の推
定アミノ基含量は次のとお９である０ 還元時間　　アミノ基含量（消費塩＃置）１０分　　　
　５４５　ＰＭ　１支持体ｇ１時間　　　　７３８　　
　＃ ８時間　　　　７８０　　　〃 また、この原料である多孔質構造を有するポリアクリロ
ニトリル系ポリマー（アクリロニトリル５５部、ジビニ
ルベンゼン２５部、ビニルエチルベンゼン２０部よシな
るコポリマー）（対照）と、これを還元して得られた多
孔質構造を有するアミン化コポリマーの粒状物（本発明
）との、後述参考例で得られる種々の酵素に対する結合
能は次の通シである。

また、結合能の測定は、本発明または対照５０〜１００
に；ｌをＬ型試験管に加え、これに酵素含有緩衝液を加
えて、３０℃、６０分間撹拌した後、これを戸数し、次
いで０．５　Ｍ食塩１０．１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）テ洗浄し、次１ｔ’テ０．１　Ｍ　ＩＪ　ン
酸緩衝液（声７．５）で洗浄し、得られたものについて
、上記の活性測定法を用いて行なったものであるＯ 実施例３ 実施例２の如くして得られた多孔質構造を有するアミノ
化ポリアクリロニトリルの粒状物９ｇを０、１　Ｍ　’
Ｊン酵緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄した後、あらかじめ
氷冷した１２５−グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（
ｐＨ８，５）２００ｍに加えて０℃、２０分間撹拌し、
このグルタルアルデヒド処理支持体を戸数して０．１　
Ｍ　ＩＪ　７酸緩衝液（ｐＨ７，５）で充分に洗浄して
、これを、バチルス・メガテリウム・Ｂ−４００の生産
するアシラーゼ酵素液（６０ｎ　／　Ｒ１）　５　Ｑ　
ｍｉ中に加えて４℃で一夜撹拌した。

次いで、これを戸数し、０．５Ｍ食塩／　０．　Ｉ　Ｍ
　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，５）、次いで０．１Ｍリン
＃緩衝液（…７．５）で洗浄して、該粒状物とアシラー
ゼとを結合した固定材８．７９（アシラーゼ活性３２４
ｕ／！ｎ９）を得た。

実施例４ 実施例３で得られたグルタルアルデヒド処理支持体とア
シラーゼとを結合した固定材をジャケット付カラム（径
１．２Ｘ８ｃＴｒ１）に充填し、３７℃にて７−フエニ
ルアセドアミトーデスアセトキシセフアロスボラン＃１
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）の１％溶液をｓ　
ｖ　Ｏ，５で２０日間連続的にチャージし、得られた反
応液中の７−ＡＤＣＡ含量は、０、０５　ＮＮａＯＨ１
ｙｙｌ、２０％酢＃２ゴよシなる緩衝液、０．５％ｐ−
ジメチルアミノベンズアルデヒドメタノール溶液０．５
　ｍＪを用いて１０分間反応後４１５　ｎｍにて吸光度
を測定する方法（ＰＤＡＢ法）にて測定し、その７−Ａ
ＤＣＡの検ｉ１線よシ求められ、黄軸に、反応液量／カ
ラ人容輩、およびチャージ日数、縦軸に７−ＡＤＣＡの
生成率をとって示せば、第２図に示す通りで、その結果
、本発明の固定材は著しく長期間使用し得るものである
ことが明らかである。

実施例５ 水素化リチウムアルミニウム３．８ｇを乾燥エーテル１
２０ｍＪに加え、これに多孔質構造を有するポリアクリ
ロニトリル（アクリロニトリル９５％）繊維２５ｇを加
え、４５℃、２４時間撹拌下還元せしめ、次いでこれに
、水浴中、冷却撹拌下３　ｍｉの水を滴下し、さらにＩ
　ＮＭＣＩを少量づつ滴下し、水素ガスの発生が止った
時点にて、これを（ｐ２ｇし、多孔質ｗｔ造を有するア
ミノ化ポリアクリロニトリルｕＡ維１２５ｐ　（湿重量
）を得た。

参考例２ 実施例５で得られた該繊維物６００■（湿重量）を、０
．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄し、これを冷
却した１２５％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（ｐ
Ｈ８，５）５０ｄ中に加えて、０℃、２０分間撹拌した
後これを戸数し、さらに０．１　Ｍ　！Ｊン酸り衝液（
ｐＨ７，５）で洗浄し、この洗浄物を、コマモナス・ニ
ス・ビー・５Ｙ−７７−１の生産スるアシラーゼ酵素液
８　ｍｌ　（１２９，７ｕ　／　ｒｔｔｌ　）中に加え
、室温下５分間撹拌した後、さらにこれに２５％グルタ
ルアルデヒド１０Ｐ！を添加し、３０℃、６０分間撹拌
し続けた。その後これを戸数して、その固形物を回収し
、０．５Ｍ食塩１０．ＩＭリン酸緩衝液（ｐ）′１７．
５）で洗浄し、さらに０１Ｍリン酸緩衝液（μｍ７．５
）で洗浄して、該繊維物とアシラーゼとを結合した固定
材（アシラーゼ活性］、９２ｔｔ／ｆｆ＋９）３００１
Ｉ１１７（湯止ｕ）を得た。

さらに、この様にして得られた固定材４．５ｙ（湿重量
）をジャケット付カラム（Ｉ　Ｘ　５ｃｍ、　Ｖ　＝４
　ｍｌ　）に充填し、これを０．１Ｍリン酸緩衝液（…
７．５）で洗浄し、次いでこれに９．９２■ｌ　ｒｕｇ
の７−（４−力ルボキシブタンアミド）−七７アロスボ
ラン酸の０．１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液をＳ　Ｖ　１．５
にて連設的にチャージし、得られた７−アミノ−セファ
ロスポラン酸（７−ＡＣＡ）を含有する流出液は、Ｐ　
ＤＡＢ法を用いて、その７−ＡＣＡの検量線よシ、その
７−ＡＣＡ含量が求められ、横軸に通液量、縦軸に７−
ＡＣＡの生成率である切断率として示せば、第３図に示
す通シであって、本発明の固定材は何んら、その酵素活
性の劣化しないもので長期間良好７に使用し得るもので
あった。さらに、上記の７−ＡＣＡを含有する流出液６
００１＋１／（切断率８４．５％）を用い、これをｐＨ
３，２に調節した後濃縮して約５５ｍとなし、次いでこ
れを４℃、１晩放置して析出した７−ＡＣＡ３．２２．
ｌｉ＋（純度８６．３％）を得た。

参考例３ コリンオキシダーゼ１６０ダ（３，６ｕ／；ｎ９）を０
、１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）５ｍｌに溶解し、
これに、実施例５の如くして得られた９５％アクリ四ニ
トリルからなるポリアクリロニトリルを用いて得られた
多孔質構造を有するアミノ化ポリアクリロニトリル繊維
１００■（湿重量）を加え、氷ＩＩ中で撹拌し、次いで
これに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル
）−カルボジイミド２０Ｐ、ｌを加え、Ｉ　ＮＨＣｌで
Ｉ）８７．５に調節し、水溶中で３Ｍ間、さらに４℃で
一夜撹拌した彼、これを戸数し、０．５Ｍ食塩／　０．
１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄しさらに０．
１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｒｉ４７．５　）で洗浄して
、該フィラメント状物とコリンオキシダーゼとを結合し
た固定材（コリンオキシダーゼ活性５．６　ｕ　／　９
）を得た。

参考例４ 参考例３において、コリンオキシダーゼの代りに、バチ
ルス・メガテリウム・Ｂ−４００の生産するアシラーゼ
酵素液（９６ｕ／ｍｌ）　５ｍｌを用い、また１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイ
ミド４０Ｐｌを用いて、実施例１０と同様に行なって、
該フィラメント状物と７シラーゼとを結合した固定材（
アシラーゼ活性２６４ｕ／９）を得た。

参考例５ 実施例２と同様にして得られた、多孔質構造を有するア
ミノ化ポリアクリロニトリル系コ〆リマーの粒状物（平
均粒径１００メツシユ）５００ｑ（湿重量）を、１２５
％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（ｐＨ８，５）３
０ａｕ中に加え、０℃、２０分間撹拌した後戸数し、こ
れを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）にて充分洗浄
し、次いでこれを０．５Ｍへキサメチレンジアミン水溶
液（ｐＨ９，５）３０ｄ中に加えて、４℃、２４時間撹
拌して戸数し、充分に水洗した。さらに、これを１２５
％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（ｐＨｓ、５）で
処理し、洗浄した後バチルス・メガテリウム・Ｂ−４０
０の生産するアシラーゼ酵素液７２　ｕ　／　ｍｌ　）
　５　ｍｌに加えて４℃、１２時間撹拌し、その後これ
を戸数し、０．５Ｍ食塩１０．ＩＭリン酸緩働ｆ＆（ｐ
１４７．５　）、さらに０．１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）にて洗浄して、該球状物とアシラーゼとを結合
した固定材（アシラーゼ活性２５０ｕ／ｇ）４４０■（
湿重量）を得た。

実施例６〜８ ■５００ｄ容三つロフラスコに窒素導入管、撹拌機、還
流コンデンサーを取り付け、フラスコを約４０℃の恒温
水浴にひたし、１５分間窒素で置換した。次いで、この
フラスコ内に、１ｇのアルキルスルホ／酸ナトリウムを
溶解した１２０１１Ｊの蒸留水を加えて撹拌し、さらに
禁止剤を除いた７０１のアクリロニトリルと１０．９の
スチレンを加えて乳化し、その後これに過硫酸カリウム
０．１９を加えて２０〜２２時間重合せしめて、０．１
〜１．ＯＰの粒径を有する乳濁液を得、これを５００　
ｒａｔの水に注ぎ、撹拌しながら食塩を加えて凝固させ
、この生成物たるアクリロニトリル−スチレンコポリ！
−を戸数し、水洗、乾燥し、さらに減圧して未反応の該
七ツマ−を除去し、ジメチルホルムアミドにおける極限
粘度１．３の該コポリマーを得、さらにこのコポリマー
１０ｇを２００ｍ１のジメチルホルムアミドに溶解し、
これをアトマイザ−カップを用いて２０％アセトン水浴
５０！中に液滴状に滴下して、含水状の多孔質構造の球
状物（径０．５〜１　ｍ　）を得た。

■上記■と同一の装置を用いて、２ｇのトリトン（Ｔｒ
ｉｔｏｎ）と７２０（ローム−アンド−ハス社製）と２
ｇのテルギトール（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ）　（ユニオン・
カーバイド社製〕とを溶解した蒸留水３００ｘｔｌに、
０．２９の過硫酸カリウムを加えて撹拌し、さらにあら
かじめ禁止剤を除いた８ｏＩのアクリロニトリルと２０
９の蒸留したアクリル酸メチルを加えて４０〜５０℃に
加熱して重合せしめ、約３０分後に還流温度９０℃にな
るように重合せしめ、反応後その懸濁液を１５〜２０分
間水蒸気蒸留して、未反応の該モノマーを除去し、その
後、■と同様にして、塩析、通風乾燥して、ジメチルホ
ルムアミド中の極限粘度１．２を有するアクリロニトリ
ル−アクリル酸メチルコポリマーを得た。

次いでこのフざリマ−１０ｇをジメチルスルホキサイド
１００Ｊに溶解して、アトマイザ−カップを用いて液滴
状に、２０％ジメチルスルホキサイド水浴中に滴下して
、該コポリ・マーの含水ゲル状の多孔質構造を有する球
状物（径０５〜１龍）を得た。

θ上記の■のスチレンの代シに、ジビニルベンゼンＩＯ
Ｊを用いて、■と同様に行なって、アクリロニトリル−
ジビニルベンゼンコポリマーの含水ゲル状の多孔質構造
の球状物（径０５〜１龍）を得た。

上記■、０．０で得られたコポリマーの多孔質構造を有
する球状勧告々２ｇを用いて、各々以下の通シの還元を
行なった。即ち、水素化リチウムアルミニウム２５．９
を三つロフラスＰに加え、乾燥エーテル１００１１１７
を添加して撹拌し、これに上記コポリマ−２ｇを加え、
５０℃の恒温にて、１６時間加熱還流し、反応復水浴中
で、水、１ＮＨｃ１で処理し、さらにＩ　ＮＨＣＬ水、
Ｉ　ＮＨａＯＨ，水、ｏＩＭ　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７
，５）の順で洗浄して、多孔質構造を有するアミノ化ア
クリロニトリル系コポリマーの粒状物を得た。さらに、
上記の各々の多孔質構造を有するアミノ化アクリロニト
リル系ポリマーの粒状物３００■（湿重量）を、水冷し
た１２５％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（ｐＨ８
、５）　５０　ＴＲＩに加えて０℃、２０分間撹拌し、
次いでこれを戸数し、０．１Ｍリン酸緩１ｆｆ（ｐＨ７
，５）にて洗浄後、これをＬ型試験管に入れたバチルス
・メガテリウム・Ｂ−４００の生産するアシラーゼ酵素
液（７２ｕ／ｍ１）３１中に加え、３０℃、６０分間撹
拌し、その後これをＦ取し、０．５Ｍ食塩１０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，５）、０，１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）で洗浄して、各々目的とするアシラーゼと結
合した固定材を得た。

さらに、実施例１で得られた多孔質構造を有するアミノ
化ポリアクリロニトリルの粒状物を用いて、上記と同様
にして、アシラーゼを結合せしめて固定材を得た。

その結果、Ｏにおいて得られたコポリマーを使用した場
合の固定材におけるアシラーゼ活性は１６２ｕ／、９．
＠）において得られたコポリマーを使用した場合の固定
材におけるアシラーゼ活性は２１８　ｕ　／　ｇ、ｏに
おいて得られたコポリマーを使用した場合の固定材のア
シラーゼ活性は１９２ｕ／Ｉ、および実施例２における
多孔質構造を有するアミノ化ポリアクリロニトリルの粒
状物を使用した場合の固定材のアシラーゼ活性は２５２
　ｕ／９であった。

参考例６ 実施例１と同様にして得られた、多孔ＪＢｔ！ｌＩ造を
有するポリアクリロニトリルの粒状物１．５ｇを、アセ
トン２５１１Ｌｌに浸け、トリエチルアミン１Ｍを加え
、さらにこれに無水コハク酸１ｇのア七トン溶液１２ｍ
Ａ！を約５分にて滴下して６時間撹拌し続け、反応後こ
れを戸数し、水洗し、ＩＮＭＣＩで洗浄した後水洗し乾
燥した。次いでこの反応生成物ＩＩを、塩化カルシウム
管を付した５０ｍ／容三角フラスコに加え、ジオキサン
３に／、さらにＮ−ヒドロキシスクシンイミド１ｇを添
加し、氷冷し、これに撹拌下、Ｎ　、　Ｎ／−ジシクロ
へキシルカルボジイミド１ｇを溶解したジオキサン２＃
１１を約１０分にて滴下し、１０℃で一夜撹拌した。反
応後、これを戸数し、その２０倍量のジオキサンを用い
てデカンテーションによる洗浄を行ない、不溶物を除去
し、さらにジオキサンで洗浄し、これを減圧乾燥し、次
いでこの活性エステルを有する反応生成物３０■を０．
１　Ｍ　９ン酸緩衝液（…７，５）で充分膨潤せしめ、
戸数した後これをバチルス・メガテリウム・Ｂ−４００
の生産するアシラーゼ酵素液（７，２ｕ／ｍ）５ｍに添
加し、水浴中にて…７．５で４時間撹拌し、反応後戸数
し、０．１Ｍ９ン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄した後
、ＩＭグリシン／　０．１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
５）中にて室温下６０分撹拌して未反応の活性エステル
基を除去し、次いでこれを戸数して、その固体相を０．
５Ｍ食塩１０、　Ｉ　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で
洗浄し、さらに０、１　Ｍ　ＩＪン秦緩衝液（ｐＨ７，
５）で洗浄して、該粒状物とアシラーゼとを結合した固
定材（１７７，６ｕ　／　Ｉ　）　８４０１Ｒ９（ｍｆ
ｆＥ黛）を得た。

実施例９ 多孔質構造を有するアミノ化ポリアクリロニトリル繊維
の製造 水素化リチウムアルミニウム１．５ｇに乾燥ジエチルエ
ーテル１２０ｄを加え、これに実施例１で得た多孔質構
造を有するポリアクリロニトリル（アクリロニトリル９
０％以上）ｉａ維１．５９を加え、還流冷却管を取υ付
け、５０”Ｃの油浴中で１゜分〜３０時間加熱還流する
。反応後、繊維を取り出し、乾燥ジエチルエーテルで洗
浄した後、ＩＮ塩酸、水、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液
、水の項で充分に洗浄して多孔質構造を有するアミノ化
ポリアクリロニトリル繊維（太さ２０〜３５ミクロン）
を得る。未反応の水素化リチウムは少量の水を滴下して
分解する。

得られたアミノ化ポリアクリロニトリル繊維の物理化学
的性質は次の通シである。

色；ポリアクリロニトリルよりもや一黄色味を帯びてい
る。還元時間が長くなるに従い黄色味が強くなる。

粘度：不明（下記の溶媒に対して溶解しないため測定不
可能） 溶＃に対する溶解性ニ アミノ化ポリ　ポリアクリ リル繊維　　　繊維 ＤＭＳＯ−ｆ１６溶解※　　溶解 Ｄ　Ｍ　Ｆ　　　　　　　　　　　　　　＃　　　　　
　　ＪＦ濃硝＃！　　　　　　　　　ｌ　　　　　＃６
５％ＫＳＣＮＩＩ液　　　　ｌｌ クロロホルム　　　　　　不溶　　　不溶アセトニトリ
ル　　　　　ｌＩ ピリジン　　　　　　　　　ＪＦ　　　　　　ｊニトロ
メタン　　　　　　　ｒ　　　　　′シフ胃ヘキシン　
　　　　Ｉ　　　　　　Ｎジエチルエーテル　　　　ｌ
　　　　　＃ジオキサン　　　　　　　　＃　　　　　
ｌテトラヒトｏ７ラン　　　１１ ３０％Ｎａ０ＨＷＩ液　　　　　１　　　　　　Ｎ※織
繊維太さが殆んど変化することなく繊維の形態で残存し
て完全に溶解しない。溶媒に水を加えると白濁し、次の
実験により重量が減少していることからみて、−ＳＳ解
していることが分る。

各還元時間で得たアミノ化ポリアクリロニトリｋｌａｍ
３０３１！ＦをＤＭＦ　５ｍ中ニ入し、６０℃で３分間
加熱処理した後、繊維をＰ取、水洗いして乾燥時の重量
を測定すると次の結果が得られた。

還元時間　　　　　　重量城少率 ５分　　　　　　３１．３％ １時間　　　　　　　２９．０％ ５時間　　　　　　　２７．０％ ２．４．６−）リニトロベンゼンスルホン爵ソーダに対
する呈色性；ポリアクリロニトリル繊維は呈色しないが
、アミノ化ポリアクリロニトリル繊維は黄色に呈色し、
アミノ基を有することが確認された。

アミノ基台景； 得られた支持体の固定化蛋白質、推定アミノ基含有量に
つき次の試験方法によシ求めた結果を第１表ないし第３
表に示す。

ｌ）固定化蛋白質 上記で得た各反応時間における支持体１８Ｉηを１２５
％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（ｐ）（８，５）
１０ｍｌ！中に加え、０５℃で２ｕ分１１ＪＪ　ｆｉ拌
する。

繊維を濾過し、ホウ酸緩衝液（Ｐｉ（８，５）、０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で充分に洗浄した後、直
ちに０．３％牛血清アルブミンまたは、バチルス・メガ
テリウムＢ−４００のペニシリンアシラーゼ（１４０ｕ
／ＩＩ＆）１０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）２ｄ
中に加え、３０℃で１時間振盪した後、濾過し、母液中
に残存する牛血清アルブミン含量およびペニシリンアシ
ラーゼをＬｏｖｒｙ法［０，Ｈ，Ｌｏｖｒｙ。

Ｊ、Ｂｔｏｌ、Ｃｈ＠ｍ、１９３　、２６５　（１９５
１）　］で測定し、牛血清アルブミンまたはペニシリン
アシラーゼの該支持体への結合蓋を求めた。

また、該支持体をグルタルアルデヒド処理せずにａｍ＋
牛血清アルブミン溶液またはペニシリンアシラーゼ溶液
中に入れ、３０℃で１時間振盪した後、上記と同様にし
て牛血清アルブミンまたはペニシリンアシラーゼの該支
持体への吸着量を求めた。

＋＋）アミノ酸結合による推定アミノ基含有社上記で得
た各反応時間における支持体１８ｊ１４；ｌを前記１）
と同様にして１２５％グルタルアルデヒド溶液で処理し
た後、これを０．３％濃度のグルタミニ’　醗（Ｇｌｓ
）　、スレオニン（Ｔｈｒ）、７−アミツデスアセトキ
ンセ７ア四スボラン酸（７−ＡＤＣＡ）の各ア９．／＃
Ｉ１０．ＩＭす７ｔｊ；Ｒ緩Ｊ［（ＰＨ７，５）２ｄ中
に加え、３０℃で１時間振盪する。反応混合物をＦ取し
、上澄液のアミノ酸含量をアミン醸自動分析機にて定量
し、該支持体中のアミノ基含有量をアミノ酸結合容置と
して求めた。尚、本試験を実施するに当って、使用アミ
ノ酸が該支持体に対して吸着特性のないことをアミノ酸
の代シにアミノ酸ヒドラチドを用いる試験により確認し
た。

またアミノ酸として７−ＡＤＣＡを使用した場合は、上
澄液中の７−ＡＤＣＡ含朧は高速液体クロマトグラフィ
ーを用い２５４　ｎｍの索外部吸収値から求め、該支持
体の７−ＡＤＣＡ結合容虱を求める。

１１１）滴定による推定アミノ基含有社寺還元時間にお
ける支持体８０！ＩＫ／を２　ｍ　Ｍ　ｊ４ｉ　Ｈ１５
ｄ１蒸留水３０１１７と共に１時間撹拌する。過剰の塩
酸を２ｍＭ水酸化す）　ＩＪウム水溶液で滴定し、試料
支持体中のアミノ基装置を塩酸塩として消費した塩醸短
として求める。

ｉＶ）　　試験結果 第３表　滴定による塩酸消費量 酵素（ペニシリンアシラーゼ）吸着量：前項１）におい
て、バチルス・メガテリウムＢ−４００（ＦＥＲＭ−Ｐ
２Ｏ３）の生産するペニシリンアシラーゼについて、そ
の結合蓋を求める代シに、前記のペニシリンアシラーゼ
活性画定法によりペニシリンアシラーゼ活性を求めた。

その結果は次の通υである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）、多孔質構造を有するアクリロニトリル系ポリマー
   を不活性非溶媒中ニトリル基を部分的にアミノ基に還元
   することを特徴とする多孔質構造を有する水不溶性のア
   ミノ基含有アクリロニトリル系ポリマーの製法。 ２）、多孔質構造が平均孔径４０〜９０００Åの範囲に
   ある多数の孔を有する構造である特許請求の範囲第１項
   記載の製法。 ３）、アクリロニトリル系ポリマーが繊維状、粒状、膜
   状または中空系状成形物である特許請求の範囲第１項ま
   たは第２項記載の製法。 ４）、アクリロニトリル系ポリマーがアクリロニトリル
   系モノマーのポリマーまたはこれとエチレン性二重結合
   を含む他のコモノマーとのコポリマーである特許請求の
   範囲第１項記載の製法。 ５）、アクリロニトリル系ポリマーがアクリロニトリル
   、メタアクリロニトリル、α−クロロアクリロニトリル
   またはシンナムニトリルである特許請求の範囲第４項記
   載の製法。 ６）、コモノマーがスチレン系モノマー、アクリル酸エ
   ステル系モノマー、共役ジエン、ハロゲン化オレフィン
   、ビニルエーテル系モノマー、ビニルケトン系モノマー
   、ビニルエステル系モノマー、アミド系ビニルモノマー
   、塩基性モノマーまたは多官能性モノマーである特許請
   求の範囲第４項記載の製法。 ７）、アクリロニトリル系ポリマーが、多孔質構造を有
   し、アクリロニトリル９０％以上からなるポリアクリロ
   ニトリルの繊維状、粒状、膜状または中空系状成形物で
   ある特許請求の範囲第４項記載の製法。 ８）、アクリロニトリル系ポリマーが、多孔質構造を有
   し、アクリロニトリル、ジビニルベンゼンおよびビニル
   エチルベンゼンよりなるコポリマーの繊維状、粒状、膜
   状または中空系状成形物である特許請求の範囲第４項記
   載の製法。 ９）、非溶媒がアクリロニトリル系ポリマーおよびアミ
   ノ基含有アクリロニトリル系ポリマーを溶解しない有機
   溶媒である特許請求の範囲第１項記載の製法。 １０）、有機溶媒がジエチルエーテル、ジオキサンまた
   はテトラヒドロフランである特許請求の範囲第９項記載
   の製法。 １１）、還元を水素化リチウムアルミニウムで行う特許
   請求の範囲第１項記載の製法。 １２）、還元をアミノ基含有アクリロニトリル系ポリマ
   ーが実質的に水溶性にならないまでの範囲で行う特許請
   求の範囲第１１項の製法。 １３）、還元を１０分〜３０時間の範囲で行う特許請求
   の範囲第１２項の製法。 １４）、アミノ基含有アクリロニトリル系ポリマーが実
   質的に水溶性にならないまでの量のアミノ基を有するア
   クリロニトリル系ポリマーである特許請求の範囲第１項
   の製法。 １５）、アミノ基が該アミノ基含有アクリロニトリル系
   ポリマーｇ当たり２０〜１０００μの範囲で含有する特
   許請求の範囲第１４項記載の製法。