JPS63207394A - 発酵法によるマイトマイシンｂの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 魔呈上東肌尻立豆 本発明は、発酵法によるマイトマイシンＢの製造法に関
する。マイトマイシンＢは抗腫瘍作用を有し、抗腫瘍剤
として有用である。

ｌ米坐狭五 発酵法によるマイトマイシンＢの製法としては、ストレ
プトミセス・ケスピトーズスを用いる製法が知られてい
る（特公昭３４−７５９７号公報）。

が　°　しようとする　　占 従来法では、マイトマイシンＢの生成量が低く、また副
生物が多いため精製収率が低い。

、　占を　゛するための 本発明者は、マイトマイシンＢを工業的に有利に製造す
る方法について研究を行った結果、ストレプトミセス属
微生物の各種変異株の中に、マイトマイシンＡおよびマ
イトマイシンＣが培養物中に生成せず、マイトマイシン
Ｂの蓄積が顕著に増大した変異株を見い出し、本発明を
完成した。

以下に本発明について詳細に説明する。

本発明方法によると、ストレプトミセス属に属し、マイ
トマイシンＢ生産能ををし、かつマイトマイシンＡおよ
びマイトマイシンＣ生産能欠失性を有する菌株を培地に
培養することにより、マイトマイシンＢを培養物中に著
量蓄積せしめ、これを採取することにより高収率にマイ
トマイシンＢを製造することができる。ここでマイトマ
イシンＡおよびマイトマイシンＣ生産能欠失性とは菌体
および培地中にマイトマイシンＡおよびマイトマイシン
Ｃが全く生産されない場合および実質的に生産されない
場合のいずれをも含む。

本発明に用いる菌株としては、ストレプトミセス属に属
し、マイトマイシンＢ生産能を有し、かつマイトマイシ
ンＡおよびマイトマイシンＣ生産能欠失性を有する菌株
であれば、いずれも用いることができる。具体的な菌株
の一例としては、ストレプトミセス・ケスピトーズス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｓ）　
ＭＳ−１４８−１５９（以下、ＭＳ−１４８−１５９株
と称す）があげられる。

この菌株は昭和６２年２月１７日付で工業技術院微生物
工業技術研究所にＦ［！ＲＭ　ＢＰ−１２９０として寄
託されている。

この菌株はストレプトミセス・ケスピトーズスＡＴＣＣ
２７４２２（以下、ＡＴＣＣ２７４２２株と称す）を変
異誘導することによって得られた変異株である。具体的
変異方法について以下に示す。

完全培地（グルコースＬｇ／ａ、ペプトン０．２ｇ／ａ
、肉エキｘＯ，１ｇ／ｄｉ、酵母エキス０．１ｇ／ａ及
び寒天２ｇ／ｄ１、ｐＨ７，２）上で２８℃で５日間生
育させたＡＴＣＣ２７４２２株の胞子をＮ−メチル−Ｎ
’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン２００１／ｙａｌ
を含むトリス・マレート緩衝液（ｐＨ６，０）中に懸濁
し室温に１〜３時間放置する。胞子を分離洗條し、完全
培地寒天上に塗布して２８℃で３日間培養する。出現し
た集落を嚢全培地に２８℃で３日間培養し、生産される
マイトマイシン類を薄層クロマトグラフィーにより分離
したのちクロマトスキ”ヤナー分析装置による分別定量
を行う。

分別定量の結果マイトマイシンＡおよびマイトマイシン
Ｃの生産が認められない菌株を選び出す。

その菌株の１つがＭＳ−１４８−１５９株である。

本発明に使用する微生物の培養培地としては、炭素源、
窒素源、無機物、その他栄養物を程よく含有する培地な
らば合成培地または天然培地いずれも使用できる。炭素
源としては、グルコース、フラクトース、シェークロー
ス、廃糖蜜、でんぷん、グリセリン、大豆油などが使用
できる。窒素源としては、大豆粉、酵母、コーンスチー
プリカー、ペプトン、肉エキス、大豆粕などが使用でき
る。

無機物としては、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、塩
化ナトリウムなどが使用できる。その他栄養物としては
、ビタミン（チアミン、ニコチン酸など）などが使用で
きる。

培養は振盪培養、通気撹拌培養などの好気的条件下でお
こなわれる。培養中のｐＨは５〜８が好適であり、ｐＨ
ｔＰＩ整剤としては水酸化ナトリウム、炭酸カルシウム
などが用いられる。培養期間は通常３〜４日間である。

培養液中からのマイトマイシンＢの単離は、吸着剤によ
る吸着、培養抽出等常法による操作によっておこなうこ
とができる。

以下に実施例を示す。

実施例１ グルコース１．５　ｇ　／ａ、酵母１ｇ／ａ、でんぷん
０．５ｇ／ａ、食塩０．５ｇ／Ｊ及び炭酸カルシウム０
．３　ｇ　／ａＯ）組成よりなるｐ１１７．２（７）種
培地３００Ｉｌｌｌを２１容三角フラスコに入れ殺菌し
た。これにＭＳ−１４８−１５９株を接種し、２８℃で
３日間振盪培養した。一方発酵培地として、シェークロ
ース２ｇ／ｄｅ、でんぷんＩｇ／ｄ、大豆粉４ｇ／ｄ１
、食塩０．５ｇ／ａ及び炭酸カルシウム０．３ｇ／ａか
らなるＰＨ７，２の培地３１を５２容ジャーファーメン
タ−に入れ殺菌した。これに種培養液３００ｍ１を接種
し、３０°Ｃ，４００ｒｐＨ−＋　　３１／ｗｉｎ通気
の条件下で４日間培養した。一方親株であるＡＴＣＣ２
７４２２株にっても前記と同様に培養した。このときの
マイトマイシン類の生成量を第１表に示す。

第　　　１　　　表 前、記マイトマイシンＡ、Ｂ及びＣは菌体除去した培養
液を約５０倍に濃縮しシリカゲル薄層クロマト（シリカ
ゲルＭｅｒｃｋ　５７２１．１０１１１．スポット）を
行い酢酸エチル：アセトン（３：２容量比）に展開しク
ロマトスキャナーにより分別定量を行うことにより検出
した。

尚この検出方法による検出限界濃度は１γ／　ｍ　１で
ある。

ついで、前記で得られたＭＳ−１４８−１５９株の培養
終了発酵液３１を直ちに遠心分離し菌体を除去した。

ろ液に２０ｇの活性炭を加え、マイトマイシンＢを吸着
させた。この活性炭を分離後、アセトン８０ｍ１を加え
、ｐＨ６程度で攪拌抽出し４５℃で濃縮した。

この濃縮液をアルミナ柱〔活性アルミナ２００メツシユ
（和光純薬製）〕を通過させ、メタノール濃度を加えた
クロロホルム溶液にてマイトマイシンＢをクロマト溶出
した。マイトマイシンＢの区分をさらにアルミナ柱に通
過させ、酢酸エチルにて抽出した。これを４５℃で減圧
濃縮してマイトマイシンＢの結晶４５０■を得た。

光■鬼沫果 本発明方法により、高収率でマイトマイシンＢを得るこ
とができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ストレプトミセス属に属し、マイトマイシンＢ生産能を
   有し、かつマイトマイシンＡおよびマイトマイシンＣ生
   産能欠失性を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
   マイトマイシンＢを生成蓄積させ、該培養物から生成蓄
   積したマイトマイシンＢを採取することを特徴とする発
   酵法によるマイトマイシンＢの製造法。