JPS63198696A - 固相ペプチド合成 - Google Patents

固相ペプチド合成

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JPS63198696A
JPS63198696A JP62324235A JP32423587A JPS63198696A JP S63198696 A JPS63198696 A JP S63198696A JP 62324235 A JP62324235 A JP 62324235A JP 32423587 A JP32423587 A JP 32423587A JP S63198696 A JPS63198696 A JP S63198696A
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resin
amino acid
acid
peptide
sulfide
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ダニエル　ポール　ゲットマン
ロバート　マーチン　ハインツ
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Monsanto Co
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/04—Reduction, e.g. hydrogenation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、固相ペプチド合成用樹脂支持体及びペプチド
を合成するだめの該樹脂支持体の使用法に関する。
関連技術の記述 ペプチド合成は、アミノ酸のカルボキシル基ト他のアミ
ノ酸のアミノ基とを縮合（又は結合）させてペプチド結
合を形成することによって、一般的に実施されている。
そして個々のアミノ酸縮合を一段階ずつ繰り返丁ことに
よりて、あるいはある場合には２つのペプチド断片（縮
合断片）を縮合することによって、目的とするアミノ酸
配ダリを構成することができる。これらの両者の縮合法
においては、反応に関与しないアミノ基及びカルボキシ
ル基は、保護基でブロック（又は保護）する必要がある
。更には、反応性のアミノ酸測鎖官能基も保護する必要
かある。
一連の縮合反応により大ぎな分子量のペプチドの合成を
成功させるには、各段階において定鎗的に生成物を回収
する必要がある。Ｌ　Ｂ、　Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによ
って開発された固相ペプチド合成法はこの要求を一応満
たしている。この合成法では、ペプチド鎖は通常、ベン
ジル型カルざキシル保護基によって不溶性ポリスチレン
樹脂に結合されている。
最初のアミノ酸はベンシルエステル結合を介してこのポ
リスチレン樹脂に結合しており、そのアミノ基が脱保護
され、そして保護されたα−アミノ基を有する第２のア
ミノ酸と縮合して保羨されたジペプチドエステルが形成
される。保護基はトリフルオロ酢酸によって除去され、
塩基によって中和されてフリーのアミンを形成し、次い
で第２のＮ−保護アミノ酸と縮合される。この工程を何
回も繰り返した後、目的とする完全な長さのペプチドが
、酸処理によってポリスチレン側脂から脱離される。不
溶性の樹脂支持体を便用しているため、縮合反応後に樹
脂を濾過し洗浄して副生成物及び出発原料を除くことに
よって、各縮合反応後の生放物を単離することができる
［　Ｂａｒａｎｙ、　Ｇ及びＭｅｒｒｉｆｉｅｌ（Ｌ、
　Ｒ，ＢＩ、　’　Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｖｏ
ｌ、　２″。
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、工ｎｃ、、　ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ、　１９７９　＊ｐｐ、　１−２８４　：　ｘ
ｅｍｐ　ｖｅｌｌａｃｃｉｏ、　”　ｏｒｇａｎｔｃＣ
ｈθｍ１ｓｔｒｙ”、　ｐｐ、１０３０−１０３２（１
９８０）〕。
固相ペプチド合成法においては、ペプチドと樹脂との結
合は、ペプチド合成にとって非常にＮ要であって臨界的
である。該結合は、典型的な方法である濃縮した酸を用
いるアミノ基の脱保護反応に灯して安定でなければなら
ない。もしこの結合が脱保護反応に対して安定でない場
合には、ペゾチ−が樹脂から離れてしまう。更には、こ
の結合は、ペプチドの合成が完結した際には、好ましく
はこの完結したペプチドに害を与ないような条件下で樹
脂から脱離する必要がある。
ペプチドと樹脂との結合を改良するために、これまで多
くの提案がなされている。即ち、列えばＭθｒｒｉｆｉ
θ１ｄによって、アミノ基の脱保護に必要とされる強酸
条件下においてより安定なフェニルアセトアミドメチル
結合が開発されている［　Ｂｔｅｗａｒｔ、　Ｊ、　Ｍ
、及びＹｏｕｎｇ、　Ｊ、　Ｄ、　、　５ｏｌｉｄ　ｐ
ｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　５ｅ
ｃｏｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ、　ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉ
ｃａｌ　ｃｏ、、　ＲＯ（！ｋｆｏｒｄ、工］ｊ４ｎｏ
ｉ８．　ｐｐ、　１１と１２　：　Ｇｒｏｓｅ、　ｚ、
及びＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、　　、Ｔ、　、　　Ｔｈｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　Ａｎａｌｙｓｉｓ、　５ｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ、　Ｂｌｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ。
２　、　Ａｃａａｅｍｌｃ　Ｐｌ−ｅ８１１．１９８０
　、　ｐｐ、　３−２５０：］。
ペプチドの分子がより大きくなりより複雑になるにつれ
て、ペプチドは、脱保護及び樹脂からのペプチドの脱離
に必要な酸性条件に対してより不安定となる。そのため
、温和な試薬によって脱離することのできるペプチドと
樹脂との結合が開発されている。即ち、例えば、２５％
トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液によって脱離す
ることのできるｐ−アルコキシペンシルアルコール１ｔ
ｌＪＷがｗａｎｇによって開発されている（　Ｂｔｅｗ
ａｒｔ、工ｄ。
ｐ、１２．１３．］。
脱離させるためのより温和な条件を求める試みとして、
酸性条件下におい又はとんど７″ロトン化されてなくて
求核性のままである適当な弱い塩基を使用して、脱離に
用いた強酸、典型的には無水フッ化水素の酸性機能を減
少せしめる方法が、Ｔａｍ　Ｋよって開発されている（
σ、Ｂ、ｐａｔａｎｔＡ４５０７．２３０）。
しかしながら、上記したいずれの文献においても、温和
な条件下で容易に脱離するとともに酸に対して安定な、
同相ペプチド合成法用のペプチドと樹脂との結合は記載
されていない。
Ｊ、　Ｍ、　ＳａｍａｎｅｎとＺ、　Ｂｒａｄｅｌｉｓ
の文献Ｃ”ｐ−メチルスルフィニルペンシル基、選択的
脱離が可能な保護基”、第９回アメリカペプチドシンポ
ジウム、　Ｔｏｒｏｎｔｏ、　６月２３−２８日、１９
８５］には、溶液相ペプチド合成に用いるカルボキシル
保護基としてｐ−メチルスルフィニルペンシル基カ有用
であることが記載されている。スルホキシド置換ペンシ
ルエステル結合が、アミノ基の脱保護Ｉｃ便用されるト
リフルオロ酢教条汗に対して安定である。そしてスルホ
ヤシトがスルフィドに還元されるとぎに、エステル結合
が切れて無水トリフルオロ酢鍍中で脱離可能となる。こ
の保護基を固相ペプチド合成に便用することについては
、いずれの文献にも記載されていない。
本発明者らは、強酸に対して安定であり且つ比較的温和
な酸性条件下で容易に脱離してペプチドと樹脂とを与え
る、固相ペプチド合成用の樹脂、及びかかる樹脂を用い
たペプチドの合成法を見出した。
発明の要旨 本発明は、固相ペプチド合成用に用いる腐脂、及びかか
る樹脂を用いたペプチドの合成法を包言する。
かかる樹脂は、下記式 ％式％ で表わされる構造を富む。
上記ペプチドの合成法は、 （ａ）　　保護されたカルボキシ末端アミノｌ！！ｔ’
、下記式 ％式％ で表わされる樹脂に固定してベンジルエステル結合を形
成せしめ： （切　固定化アミン＃ｌｔ脱保護し： （０）　　［７！１足化アミノ緻を中和してアミンに変
換し：（ｄ）　　工程（Ｃ）で得られるアミンに、１Ｍ
＠されたカルボキシ末端アミノ酸を縮分せしめ： （ｅ）　　工程（１））　、　（Ｃ）及び（ｄ）？繰り
返して、工程（ａ）の樹脂上に目的とするペプチドを合
成し：（ｆ）　　スルホキシドをスルフィドに還元し：
久い（ｇ）樹脂からペプチドを脱離せしめて合成したペ
プチドを得る、 ことを富む合成法である。
樹脂 本発明の樹脂は下記式の構造を有する。
Ｐ−１１ｎ−Ｒ２ｍ−８−Ｒ３−ＣＨ２０Ｈ式中、Ｐは
ポリマー支持体、Ｒ１は置換もしくは非置換の芳香族基
好ましくは非置換のフェニル基Ｒ２は炭素数１−２０の
アルキル基である。好ましいアルキル基はメチレンであ
る。Ｒ３は置換もしくは非置換のフェニル基好ましくは
非置換フェニル基であり、ｎ及びｍはそれぞれ独立にＯ
又は１である。Ｒ工及びＲ３が置換されている場合には
、その置換基はペプチド合成条件下で反応しないもので
なければならない。Ｒ１とＲ３の適当な置換基のガとし
ては、例えばメチル、エチルなどのアルキル基：フェニ
ルなどのアリル基：プロペンなどのアルケニル基：ヘキ
シンなどのアルキニル基：二トロ基：クロロ、フルオロ
、テロモナトノハロｒンなどが挙げられる。
ポリマー支持体は、ポリアミド、ポリスルファミド、＃
拠ポリスチレン、ポリエチレングリ；−ル、フェノール
樹脂、ポリサッカライげ、ポリスチレンなどのポリマー
、コポリマー、ポリマーの組合わせのいずれでもよい。
ポリマー支持体は、ペプチド合成に用いる溶媒に対して
不溶性でかつ不活性であれば、ガラスピーズなどのいず
れの固型物であってもよい。好ましいポリマー支持体は
、スチレンと約１％のｍ−ジビニルベンゼンあるいは架
橋剤とを懸濁コポリマー化することによって得られるｒ
ルである。このような架橋化ｒルは、有機溶媒中で膨張
して乾燥時の容量の約５−６倍になる。膨張することに
よって、溶媒と反応試薬がポリマー支持体上の反応部位
に近づくことがでさ、ポリマーの外部表面同様同部表面
においても反応か可能となる。
クロロメチルメチルエーテルを用いてクロロメチル化す
ることによって、ポリマーに官能基を導入することがで
きる。クロロメチル化架橋化ポリスチレンｒルはＭｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄ樹脂と言われている。
Ｍ８ｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂の詳細は、Ｂｔｅｗａｒｔ、
　Ｊ　、　Ｍ、とＹｏｕｎｇ、　Ｊ−Ｄ−＊　’″固相
ペプチド合成”、第２巻。
Ｐｉｅｒｃｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏ、、　ＲＯｃｋ
ｆｏｒｄ、工１１１ｒｏｉｓに記載されており、これら
の記載を本明細書に引用する。
好筐しい樹脂は下記式で表わされる。
ここでＰは架橋化ポリスチレン樹脂を表わ丁。第２の好
ましい樹脂は下記式で表わされることかできる。
ここでＲ１は炭素数１〜２０のアルキル基を表わし、Ｐ
はポリマー支持体を表わし、ｎは０〜２０を表わ丁。
樹脂工の合成については、米国特許出願番号点９４７．
６５１号明細書に詳細に記載されており、かかる記載を
本明細書に引用する。樹脂Ｉの合成は、ポリマー支持体
Ｐと下記式 で表わされるメルカプタンとを反応せしめてスルフィド
樹脂を形成せしめ、次いでこれを酸化してスルホキサイ
ド樹脂を形成せしめることによって行なわれる。
樹脂■の合成については、米国特許出願番号ム０３１．
８２３号明細書に詳細に記載されており、かかる記載を
本明細書に引用する。使脂■の合或は矢のようにして行
なわｎる。即ち１．（ハロメチル）フェニルアルキルカ
ルボン酸ハライＩ’ト［保楓基とを反応せしめてエステ
ルを形成せしめ、こノエステルとｐ−メルカプトベンシ
ルアルコールとを反応せしめてスルフィドを形成せしめ
、このスルフィドを酸化してスルホキサイドを形成せし
め、このスルホキサイドのアルコール基とカルボキシ末
端Ｎ−保護アミノ酸とを反応せしめてエステルを形成せ
しめ、上記スルホキサイドのエステルから酸保護基を加
水分解して＃ｌを形成せしめ、次いでこのカルボキシル
基を介して官能基を有丁ルホリマーに該スルホキサイド
を固定化して固相ペプチド合成用の樹脂を形成せしめる
ことによって行なわれる。
ペプチド合成 ペプチド合成法？まとめて示すと以下の通りである。
保護基−Ｎ　−０−０−０−Ｈ＋ＨＯＯＨ２−Ｒ３−Ｂ
−Ｒ２Ｒ１−９ＲＯＯ ＲＯＯ Ｉ　　ＩＩ　　　　　　　ＩＩ Ｈ２Ｎ−（！−Ｃ！−０−ＯＨ２Ｒ３Ｓ−Ｒ２Ｒ１−Ｐ
■ ＢＯＣ−Ｎ−Ｃ−０００Ｈ （（Ｌ）　　脱水試薬 ＲＯＲＯ０ （ｆ）　　ＭＣＩ ＲＯＲＯ ＨＨＨ ペプチド　　　　　　スルフィド樹脂 固定化、脱保護、中和及び縮合工程を言むペプチド合成
法はよく知られており、前記した＄ｔθｗａｒｄらの文
献にその詳細が記載されており、また以後の本明細瞥に
おいても詳細に説明する。
樹脂に固定化するアミノ酸はカルボキシ末端アミノ酸で
あり、このアミノ酸の末端アミノ基は保護されている。
適当な保護基は、例えば９−フルオレニル−メチルオキ
シカルざニル（ＦｍＯＣり　、２−（４−ビフェニリル
）−プロピル（２）オキシカルボ＝　／ｌ／　（Ｂｌ）
ＱＣ）　、２−７　工＝　Ａ／プロピル（２）−オキシ
カルボニル（ＰＯす、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂ
ｏａ　）などである。側鎖の官能基も、ベンシル誘導体
などの保護基によって保ａする必要がある。アミノ酸の
カルボキシル基は、ベンジルエステル結合によって樹脂
に結合される。アミノ酸を樹脂に結合せしめるのに愛用
する縮合反応は、適当なものであればいずれでもよい。
樹脂に結合せしめる好ましい縮合反応におい℃は、樹脂
が膨張するような溶媒列えはメチレンクロライド、テト
ラヒドロフラン、ベンゼン、トルエン、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミドなどに樹脂を懸濁せしめる〇そして保護
されたアミノ酸、Ｎ、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジ
ンなどの触媒、及び１，６−ジインプロピルカルざジイ
ミド、１．６−シシクロヘキシルカルボジイミドなどの
縮合剤を室温で混合する。
樹脂に固定化されたアミノ酸は、酸分解などの公知の方
法によって脱保護される。樹脂がスルホキサイドの状態
にあるときには、該樹脂は脱保護条件に対して安定であ
る。好ましい方法は、トリフルオロ酢酸：アニソール、
ジメチルスルフィド、レゾルシノール、メチオニンなど
のカルボニウムイオンスカベンジャー、好ましくはアニ
ソール：及びメチレンクロライドなどの溶媒とともに反
応せしめてアミン塩を形成することにより脱保護する方
法である。次いで脱保護されたアミノｒＲ？、ジインプ
ロピルエチルアミン、トリエチルアミン、トリメチルア
ミンなどの第６級アミンで処理してフリーのアミンを形
成せしめることによって中和する。
後述する如く、樹脂は、最初にスルフィド結合を形成し
次いで適当な条件でスルフィド結合を酸化して目的とす
るスルホキサイド結合とすることによって調製すること
ができる。
樹脂を調製する際にスルフィド樹脂ｆｔ＃Ｒ化してスル
ホキサイドを形成せしめる時に、下記の如く、未反応の
スルフィド樹脂が残るが、このスルフィド樹脂は脱保護
工程によって封鎖される。
Ｐ−Ｒ１Ｒ２Ｂ−Ｒ３ＣＨ２０Ｈ十　　Ｐ−Ｒ４Ｒ２Ｓ
−Ｒ３ＣＨ２０Ｈこの残った未反応スルフィド樹脂は、
最初の縮合工程においてカルボキシ末端アミノ酸と反応
するが、次ぎの脱保護工程での酸処理に対して不安定で
あるために、目的とするペプチドを合成する前に未完成
のペプチドの状態で樹脂から脱離してしまう。未反応ス
ルフィド樹脂を上記の如（封鎖することによって、この
不完全な状態での脱離を、最初のアミノ酸縮合後にスト
ップさせることができ、このために目的とするペプチド
のトータル収率が上昇する。しかして、固定化された未
反応のスルフィド樹脂は、以下の如く、脱保護工程にお
いて封鎖される口 封鎖されたスルフィド樹脂 更に、縮合剤の存在下に保護されたアミノ酸と反応せし
めることによって、更に他の１つの保護さｒしたカルボ
キシ末端アミノ酸とフリーのアミノ酸とが縮合される。
そして、目的とするペプチドが合成されるまで、脱保護
、中和及び縮合工程がくり返される。
スルホキサイド結合は、アミノ酸を脱保護するのに使用
されるトリフルオロ酢酸条件に対して安定であり、他方
スルフィド結合は無水トリフルオロ酸ｌ！１！によって
脱離される。還元を行なうには多くの方法が、Ａｄｖａ
ｎｃｅｃＬ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第
２巻、　Ｊ、Ｍａｒｃｈ、　１９７７、　ｐ、１１３０
に記載されており、かかる記載を本明細書中に引用する
。
好ましい方法は、無水塩酸などの強酸で樹脂を処理し、
次いで別の工程で、前記した如きカル＆＝ウムイオンス
力ベンゾヤーの存在下にフッ化水素酸、トリフルオロ酢
酸、臭化水素酸、トリフルオロメタンスルホン酸などの
強酸を用いて樹脂からペプチドを脱離させる方法である
。他の好ましい方法は、スルホキサイドをスルフィドに
還元すると同時に、ＳＮ２条件下に求核性スカベンジヤ
ーの存在下にフッ化水素［（ＨＦ）−Ｅたはトリフルオ
ロメタンスルホン酸（ＴＦＭＢＡ）で処理して脱離させ
る方法であり、かかる方法は’Ｉ’ａｍら、σ、　８．
　Ｐａｔｅｎｔ４．５０７，２３０号明細誉及びＪＡ（
！Ｓ、　１９８６ｅ１０８．５２４２−５２５１に記載
されており、かかる記載は明細書中に引用する。
以下の実施列は説明のみを目的としたものであり、本発
明の範囲な°限定するものではない。
例 以下に述べるペプチド合成に使用する樹脂は、次のよう
にして調製した。
工程１ 樹脂へのスルホキサイドリンカ−の結合架橋化ポリスチ
レン支持体を次のようにして機能化、即ち官能基を導入
した。
５００　＝ｍ丸＆フラスコに、クロロメチル化１ｔｈ架
橋化ポリスチレン２０．０　［１、！ＩＩ：　Ｍｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄ　樹脂２００−４００メツシユ、１．１ｍ
θｑりｏライド／　ｇｒａｍ　、　２２ｍｍｏｌ　：　
ドライテトラヒドロフラン１６０ｄ：４−メルカプトペ
ンシルアルコール６．６２＆　（４５ｍｍｏｌ　）　：
及びトリエチルアミン６．６−（４，８１、４８ｍｍｏ
ｌ　）　ｋ入れ７Ｌ　にのフラスコを、コンデンサーを
備えたロータリーエバポレーターにセットして、窒素雰
囲気下［６０”Ｃの水浴に浸しに。フラスコを２４時間
回転した。
室温に冷却後、樹脂を、濾過用の粗いガラスフリットを
備えた振と５容器に移し、次いでＴＨＩＩ’　。
２０％水／８０％ＴＨＦ（Ｖ：Ｖ）　、　５０％水１５
０％メタノール、メタノールのそれぞれ１６０−を用い
て６回づつ洗浄した。得られる樹脂な分素分析に付した
所、塩素原子０．４４重ｔ％（０，１２ｍｅｑ／ｌ’）
、硫黄原子２．４６重ｔ％（２，４３ｍｅｑＪ　）であ
り１こ。赤外線スペクトル分析に付した所、クロロメチ
ル基による１２６５ｃｍ−”の吸収バンドはほんのわず
かしか見られず、これによってクロロメチル基はメルカ
プタンとほぼ完全に反応したことが示された。
か（して機能比され１こ樹脂を、以下のようにしてスル
フィドからスルホキサイドへ酸化した。
５０〇−丸底フラスコに、上記の機能化樹脂１７．１　
ｙ　（０，７９ｍｅｑｉ黄／　ｊｌ　、　　１３．．５
　ｍｍｏｌン及びメチレンクロライド１７０−を入れた
。５℃に耐却ｆ、８３．３％メタクロロ過安息香酸漿化
剤２．４７．９　（２，０６，ｕ活性過酸、　１１．９
　ｍｍ０Ｌ　）　’ｆ、１５分間かけてゆっくり８口え
た。ｆＡ卯後、フラスコを冷室中で７゛０で２４時間ロ
ータリーエバポレーターで回転させた。得られる樹脂を
振とう容器に移し、メチレンクロライド、メタノールの
それぞれ１５０−で６回づつ洗浄した。得られる樹脂ヲ
赤外線スペクトル分析した所、スルホキサイド基による
１　０２０　ｃａ−’の強い吸収バンドが現われた。
列１ 工程２ 最初のアミノ酸を次のようにしてスルホキサイド樹脂に
固定化した。
振ト５容器に、スルホキサイド樹脂４．００．＠−（０
，７９ｍθｑ硫黄／Ｍ　、　３．１６１ｍ（１１）及び
メチレンクロライド４Ｍを入れた。次いで、以下の試薬
を以下の順序で１分間振とうしながら卯えた。
即ち、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｌ
−７ｘニルアラ＝”　２．１０１！　（７，９ｍｍｏｌ
）、Ｎ、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン４０１ｑ（
０−３３ｍｍｏｌ）、１，６−ジインプａビルカルポジ
イミド１．５　ａｄ　（１−３７ｆｌ　、　１０−９　
ｍｍｏｌ）である。反応混合物を室温で２４時間振とう
し、溶媒を流し、次いでメチレンクロライド、メタノー
ル、メチレンクロライドのそれぞれ４０−で３回づつ樹
脂を洗浄、した。湿った樹脂に、メチレンクロライド４
Ｑｄ、Ｎ、Ｎ−ジインプａピルエチ゛ルアミン３．２　
ｔｄ　（２，４３、！ｉ’　、　１８．８　Ｍｏｌ　＞
及び無水酢酸１．５ｄ　（１，８０、Ｖ　、　１７．７
　ｍｍｏｌ　）を加えた。次いで容器を２時間振とうし
た。溶媒を流した後、樹脂を、メチレンクロライド、メ
タノールのそれぞれ４０−で６回づつ洗浄した。得られ
る樹脂をアミノ酸分析に付した所、フェニルアラニン０
．６４ｍθｑ／Ｉｔ脂１ｇが固定化されたことが示され
た。
工程６ 以下のようにして、樹脂を脱保護し未反応の残りのスル
フィド樹脂を封鎖した。
スルフィ−リンカ−基に結合したフェニルアラニンを除
くために、上記の樹脂を、４５％トリフルオロ酢酸１５
％アニンール１５０％メチレンクｏライ）Ｆ（Ｖ：Ｖ：
Ｖ）４０−で２１時間処理し、次いでメチレンクロライ
ド、メタノールのそれぞれ４０−で６回づつ洗浄し、次
いで減圧下に乾燥した。この樹脂をアミノ酸分析に付し
た所、フェニルアラニン０．５８　ｍｅｑ　／樹脂１ｙ
が樹脂に固定化されていることが示された。この樹脂は
、スルホキサイドリンカ−基に結合したフェニルアラニ
ンのみを有しており（スルフィドリンカ−基は封鎖され
ている）、これはペプチド合成に使用できる。
工程４ 以下のようにして、スルホキサイド結合をスルフィド結
合に還元し、次いで低濃度ＨＦ条件下にアミノ酸を樹脂
から解離せしめた。
上記シタフェニルアラニン＃Ｌ換スルホキサイド樹脂試
料（０，５０，ｕ、０．５８ｍｅｑ／、？、（Ｊ、２９
朋ＯＸ　）を、ｐ−クレゾール１．Ｄ−、ジメチルスル
フィド６．５−及び無水ＨＦ２．５−の混合物で、０℃
で２時間処理した。試薬を減圧下に除いた後、樹脂を、
メチレンクロライド、トリフルオロ酢酸、メチレンクロ
ライド、メタノールのそれぞれ５−で２回づつ洗浄し、
次いで減圧下に乾燥した。この樹脂をアミノ酸分析に付
した所、フェニルアラニン量は０．０６２　ｍｅｑ　／
ｊｉであり、このことは８９％が脱離したことを示して
いる。赤外線スペクトル分析に付した所、１０２０ｃｍ
−１ｉｃスルホキサイドの吸収バンドが見えず、このこ
とはスルホキサイド基が十分に還元されたことを示して
いる。
スルホキサイド結合を還元し、アミノ酸を樹脂から脱離
する他−の方法として、低濃度トリフルオロメタンスル
ホン酸条件を用いる以下の如き方法がある。
上記のフェニルアラニン置換スルホキサイド樹脂試料Ｃ
Ｄ、２０　、！＠　、　０．５８　ｍｅｑ　／　Ｍ　、
　０．１２ｍｍｏ１）を、ジメチルスルフィド０．６０
＋ｄ、）リフルオロ６［１，２ｗｔ及びトリフルオロメ
タンスルホン敏０．２０−の混合物で室温で１時間処理
した。欠いで樹脂を、トリフルオロ酢酸、メチレンクロ
ライド、メタノールのそれぞれ５−で洗浄し、減圧下に
乾燥した。この樹脂をアミノ酸分析に付した所、フェニ
ルアラニン量は０．０５５　ｍｅｑ／　９であり、この
ことは９１％が脱離していることを示している。スルホ
キサイド基の存在を赤外線スペクトルテ分析した所、ト
リフルオロメンスルホン酸による吸収バンドのためにバ
／−が複雑化していた。
ガ２ Ｌ−ロイシンとＬ−フェニルアラニンのジペプチドを、
上記樹脂を用いて調製した。例１の方法に従い、Ｎ−（
ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−り一ロイシンを
縮合させた。この樹脂をアミノ酸分析した所、ロイシン
量は肌７５ｍａｑ／、９であった。ガ１と同様にして４
５％ドリトリオｃｒ酢酸で処理して脱保護及び未反応の
残ったスルフィドを封鎖した時には、ロイシン量は０．
４９　ｍｅｑ　／　＆に下かった。この樹脂サンプル（
０，９９４，？。
０．４９　ｍｍｏｌ　）　’ｋ、１０％ジインプロピル
エチルアミンのメチレンクロライド溶液で２回洗浄し、
次いでメチレンクロライｒで６回洗浄して樹脂を中和し
た。樹脂をメチレンクロライド１〇−中に懸濁し、Ｎ−
（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−７，−７エ：
−にアラニア４６４Ｗ　（１−７５ｍｍｏｌ）及びＮ、
Ｎ−ジインプロピルカルボシイミー０．２７ｍ（２３５
＋ｖ、１．８６ｍｍｏｌ　）を加えて、樹脂にＮ−（ｔ
ｅｒｔ−ブチルオキシカルざニル）−Ｌ−フェニルアラ
ニンを縮合させた。２時間振と５後、樹脂をメチレンク
ロライドで３回洗浄し、真空下に乾燥した。アミノ酸分
析に付した所、ロイシン量は０−４０　ｍｅｑ　／　ｉ
であり、フェニルアラニン量は０．４０１ｎｅ（Ｌ　／
　、＠であった。
以下のようにして、スルホキサイド樹脂な脱保獲し、無
水ＨＣｊでスルフィドに還元し、次いでトリフルオロ酢
酸でペプチドを樹脂から脱離せしめた。
列２の上記した縮合樹脂サンプル（１００ｖｔＱ、ｌ　
４　ｍｍｏｌ　）を、４．１モル無水ＨＣＬのジオキサ
ン溶液５−ととも［４時間振とうした。樹脂をメチレン
クロライド５−で５回洗浄し、真空下に乾燥した。アミ
ノ酸分析に付した所、矢の如きアミノ酸量を示した。即
ち、ロイシン量は０−２８　ｍｅｑ／Ｉであり、フェニ
ルアラニン量は０．３２ｍｅｑ／ｙであった。このこと
は２５％が解離したことを示している。次いで樹脂を、
４５％トリフルオロ酢！１５％アニンール１５０％メチ
レンクロライド（ｖ：ｖ：ｖ）で２４時間処理し、濾過
し、メチレンクロライド５−で６回洗浄し、次いで真空
下に乾燥した。得られる樹脂をアミノ酸分析に付した所
、ロイシン量は０．０８ｍｅｑ／ｉであり、フェニルア
ラニン量は０．１１　ｍｅｑ　／　＆であった。このこ
とは７２−８１％が脱離したことを示している。
別の実験で、無水ＨＣＪ処理を２４時間そしてトリフル
オロ酢酸処理を２４時間行なった所、脱離した量には変
化はなかった。
列６ での合成 Ｓａｒ−ｅａｒ−ｇａ−’ｐｈ←Ｇ１７−Ａｒｇ’−−
Ｓ 工程ＩＫ従って調製したスルホキサイド樹脂４．００　
、Ｖに、Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−０−２
＊６−ゾクロロベンジルーＬ−チロシンを工程２の方法
に従って結合させた。トリフルオロ酢酸処理を行なう前
と後で、アミノ酸分析を行なツタ所、０−５１　ｍｅｑ
　／　ｉ　、０−４２　ｍｅｑ　／　Ｎの量かそれぞれ
結合していることが示された。次いで得られる樹脂に、
５当量の試薬（アミンｉ！！／Ｄ工１１ＣＤ／ＨＯＢＴ
　＝　１．０　／　１．２　／　２．０　）のメチレン
クロライド／Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０：５
０．Ｖ：Ｖ）溶液を使用ｔ、’ｅｉ−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール（ＨＯＢＴ）　／　Ｎ　、　Ｎ−ジインプ
ロピルカルボジイミド（Ｄ工ＰＯＤ）縮合試薬を用いて
、上記した各棟のＮ　−ＢＯＱ　−Ｌ−アきノ酸を縮合
させた。各梅のＮ　−ＢＯＣ−Ｌ−アミノ酸に用いた保
護基は次の通りである。即ち、セリンの場合はＯ−ベン
ジル、システィン−１９の場合はＳ−パラ−チオメチル
ペンシル、システィン−３の場合はＳ−パラ−メトキシ
ベンジル、アルギニンの場合はＮｇ−２，４，６−ｈリ
メチルベンゼンスルホニル、アスパラギン酸の場合は０
−ベンジル、チロシンの場合はＯ−２，６−ジクロロベ
ンジルである。ペプチドを合成後、得られる樹脂のアミ
ノ酸分析を行なった所、ＡｓＰは０．６８ｍｅｑ　／　
ｊｌ　、　ＳｅｒはＯ−４０、ＧｉｎはＵ、１９　、　
Ｇ１７は０．８６．ＡｌａはＯ−２０、工１ｅは０−３
２　、　：ｃ、ｅｕは０．２０　、　Ｔｙｒは０．１８
　、　ｐｈｅは（Ｊ、１９　、　Ａｒｇは０．５１であ
った。これは目的とする合成が成功したことと一致する
。’ｒａｍらの方法（、ｒ、　Ａｍ５ｒ、　Ｏｈｅｍ。
−８ａｃ、、１９８３，１０５．６４４２−６４５５　
＞に従って、ジメチルスルフィド／ルーフレ１戸−ル／
無水ＨＩ’　（６，５ｍ／　１．０　ｍ／／　２−５　
ｍ　＞を用い℃Ｏ″Ｃで２時間処理し次いで真空下に揮
発性物質を除き無水ＩＦ（１０ｍ）を０　′Ｇで１時間
かけて東に添加して、上記樹脂サンプル（０，１５，Ｖ
）を還元してスルホキサイドとスルフィドとしそして脱
離せしめた。上記した文献の記載を本明細書に引用する
。得られる樹脂のアミノ酸分析を行なった所、７６％が
解離していることが示された。粗生成物を水に溶解して
環化せしめ、−を８，５に上げてふたのないピータ−中
で１晩放置した。得られる粗生成物を、ｙｙｄａｃ　Ｏ
−１８カラムを用いた分離用クロマトグラフィーで精製
した。得られたペプチドのアミノ酸配列を決定した所、
目的とするペプチドの正しい構造を有していた。
ガ４ での合成 ５ｏｒ−ｓ　ｅ　ｒ　−０７８−ｐｈ８４１ｙ−Ｇｌｙ
−堵Ｓ□Ｓ 工程１に従って調製したスルホキサイド樹脂に、Ｎ−・
（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−０−（２−フロモベ
ンジルオキシカルビニル）−Ｔ、＋−’Ｆ−１：１シン
を工８２の方法に従って結合した。トリフルロ酢酸処理
をする前と後とで、樹脂のアミノ酸分析なＬ　タ所、Ｏ
−５９ｍｅｑ／　９−０−４０　ｍｅｑ／　ｇの量でそ
れぞれ結合していることが示された。次いで得られる樹
脂に、Ｎ−α−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｎｇ
−Ｃパラ−トルイルスルホニル）−Ｌ−アルギニン、Ｎ
−（ｔ−−ｆ”チルオキシカルボニル）−Ｌ−フェニル
アラニンを、５当量の１−とｒロキシペン１戸トリア・
戸−ルｃＨＯＢＴ＞／ジインプロピルカルざジイミド（
Ｄ工ＰＣＤ）縮合試薬（アミノ酸／Ｄ工ｐａＤ／ａｏＢ
Ｔ＝　１．［］　／　１．２　／　２．０）の５０：５
０メチレンクロライド／　Ｎ　、　Ｎ−ジメチルホルム
アミド溶液を用いて、結合させた。次いでアミノ酸を、
４５％トリフルオロ酢酸１５％アニンール１５０％０Ｈ
２ＣＪ２によって脱保護した。
得られる樹脂をアミノ酸分析に付した所、　Ｔ７ｒが０
−４０　ｍｅｑ　／　９　、　Ａｒｇか０．３６　ｍｅ
ｑ　／　ｆｆ　、　Ｐｈｅが０．４２ｍｅｑ／、？の量
で結合し又いろことが示された。この樹脂サンプル（０
，９４ｇ　、　０．３８　ｍｍｏｌ）を、Ａｐｐｌｉｅ
ｄ　Ｂ：ｌｏｓｙｓｔｅｍｓ自ｔｔｒｔへｙチトシンセ
−ｖ−イブ−Ｈｏｄｅｌ　４３　Ｄ　Ａ　ＩＣセットし
て、スタンダードペプチド合成条件に付した（４当量の
アミノ酸、Ｎ、Ｎ−ジシクロヘキシルカルざジイミド、
９０：　１Ｑ（Ｖ：Ｖ）メチＬ／７クロライド／Ｎ、Ｎ
−ジメチルホルムアミｐ、ｏ、ｓ時間縮合）。アルギニ
ンとアスパラインアミノ酸を、ＨＯＢＴを用いて２重縮
合した。各種のＮ　−ＢＯＱ　−Ｌ−アミノ酸の保護基
としては、セリンの場合は０−ペンシル、システィンの
場合はＳ−アセトアミドメチル、アルギニンの場合はＮ
ｇ−パラトルイルスホニル、アスパラギン醗の場合は○
−ベンジル、チロシンノ場合は０−２−ブロモベンジル
オキシカルボニルを用いた。合成完了後、得られる樹脂
をアミノ酸分析した所、ＡＳｐハ０．６６ｍθｑ／９．
Ｓｅｒは０−３６　、　ｅｌｎはＬｌ、１６　、　Ｇｌ
ｙは０−７５　、　ｈｌａは０．１６　、工１ｅは［Ｊ
、２５　、　Ｌ６１ｕは０．１７　、　Ｔｙｒは０−１
９　、　ｐｈｅは０−３５　、　Ａｒｇ　ｋＬ　Ｏ，５
ＣＪであツｙ、−０これは目的とするペプチドの分取か
成功したことを示している。次いで前記した’１’ａｍ
らの方法に従い、ジメチルスルフィド／ルーフレ・戸−
ル／無水ＨＦ　＜　６−５１Ｒｔ／　１．Ｏｍｔ／　２
．５７！ンでＵｏＣで２時間処理し、更に減圧下に揮発
性物質を除いて、無水ＨＦ（１０ｍ）を０′Ｃで１時か
けて更に加えて、スルホキサイド結合をスルフィド結合
に還元しさらに解離した。この方法によって、粗ペプチ
ド生成物９６０　ｑ、を得、その１部をｗａｔｅｒｓ　
ＢｏｎｄａｐａｋＣ−１８カラム（１９１１ＬＩＩＸ１
５Ｑｕ）を用イタ分離用ＨＰＬＯによってｆｆ製し、飽
和ヨード／水溶液とともに酢酸中で環化し、仄いで分離
用Ｈｐｒ、ａで精製した。得られる樹脂をアミノ酸分析
した所、７６％のペプチドが得られたことが示された。
精製したペプチドをアミノ酸分析した所、ＡＣｌｐに２
．１３　、　ｓｅｒは３．６２　、　Ｇｌｎは１．ロア
、Ｇｌｙは５．１４　、　Ａｌａは１．０６．工１θは
１−８２　、　Ｌｅｕは１．０５　、　Ｔｙｒは［Ｊ、
９７　、　’ＰＭは２．０４　、　Ａｒｇは６．１１で
あった。
例５ 以下に示すペプチドの、スルホキサイド樹脂上での合成 Ｂｅｒ−Ｂｅｒ−ｅｙｅ−Ｐｈｅ−（）］］ｙ−Ｇ１７
−Ａ２ｍ１□Ｓ 工程１に従って調製したスルホキサイド樹脂に、Ｎ−（
ｔ−ブチルオキシカルボニル）−０−（２−ブロモペン
シルオキシカルボニル）Ｌ−チロシンを工程２の方法に
従って結合させた。トリフルオロ酢酸で処理する前と後
とで樹脂のアミノ酸分析を行なった所、それぞれ０．５
１　Ｃ８（１／Ｍ　。
０．３９　ｍｓｑ　／　９の址が結合していることか示
された。次いで得られる樹脂に、Ｎ−α−（ｔ−ブチル
オキシカルボニル）−Ｎｇ−（２，４，６−トリメチル
ベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニン、Ｎ−（ｔ−ブ
チルオキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニンを、２
．５当量のＨＯＢＴ／Ｄ工ＰＯＤ　＠合試薬（アミノ酸
／Ｄ工ＰＯＤ／ＨＯＢＴ＝１．０／１．２／２．０）の
５［Ｊ：５［］（Ｖ：’７）メチレンクロライド／Ｎ、
Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いて、縮合させ１こ
。４５％トリフルオロ酢酸７５％アニンール１５０にメ
チレンクロライドを用いてアミノ酸を脱保護した。この
樹脂をアミノ酸分析に付した所、Ｔ７Ｚ”が０．３０　
ｍｅｑ、　／　ｉ　、　Ａｒｇが０．２１　ｍｓｑ／Ｊ
’、Ｐｈｅか０．３２ｍａｑ／ｉの鎗で結合しているこ
とが示された。この樹脂サンプル（０，９４，Ｖ。
０．２８　ｍｍｏｌ　）　４．　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｔ３
ＬＯ８７Ｂｔｅｍ８自動ペプチドシンセサイデ−Ｍｏｄ
ｅｌ　４３０　Ａにセットし、スタンダードペプチド合
成条＃（４当倉のアミノ酸、Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシル
力ルホシイミｈ１１１９０’：１０（ｖ：ｖ）メチレｙ
りｃｒライｌ’／Ｎ。
Ｎ−ジメチルホルムアミ）’％０−５時間縮合ンに付し
た。アルギニンとアスパライン酸アミノ酸なＨＯＢＴを
用いて２重縮合した。各種のＮ　−ＢＯＣ−Ｌ−アミノ
酸に用いた保護基は、セリンの場合は０−ベンシル、シ
スティンの場合はＳ−７セトアミドメチル、アルギニン
の場合はＮｇ−２，４゜６−トリメチルベンゼンスルホ
ニル、アスパラギン酸の場合には０−ペンシル、チロシ
ンの場合は０−２−ブロモペンジルオキシカルビニルで
あった。合成完了後、アミノ酸分析を行なった所、Ａｓ
ｐは０．３０　ｍｅｑ　／　ｊ９　、　ｓｅｒは０．３
２　、　Ｇｌｎは０．１３　、　Ｇ１７はＯ−６５、Ａ
ｌａはＣ１，１２，工１ｅハ０．２０　、　ｂｅｕは０
．１３　、　Ｔｙｒは０．１４　、　ｐｈθは［１，３
０、Ａｒｇは０．３６であった。これは目的とするペプ
チドの合成が成功したことを示している。
解離を室温で５時間行なう以外は、Ｔａｎらの方法ｃ　
Ｊ、Ａｍｅｒ、ＯＭｍ、ＳＯＣ，、１９８６＊　１０８
　＋５２４２−５２５１　）に従い、ジメチルスルフィ
ド／トリフルオロ酢酸／ｍ−クレゾール／トリフルオロ
メタンスルホン酸（３−０、ｄ／　５．０．１１／／　
１．０ｖ／１．０−）の混合物を用いて、得られる上記
樹脂サンプル（０，５０！りのスルホキサイド結合をス
ルフィド結合に還元しそして解離して、粗ペゾチド生成
物６６４ηが得られた。ペプチドを酢酸／水の８０：２
０（Ｖ：Ｖ）混合物３０ｄＩＣ溶解し、飽和ヨード酢酸
溶液１０ｄ′？ニア１０えた。室温で１時間かくはん後
、ダウからｐｏｗｅｘ■（１９１ｇｍａ　ＷＧＲ２）の
名前で入手することのできる弱い塩基性の樹脂を卯え、
更ＶＣ１時間攪拌を続けた。樹脂を濾過し、水で洗浄し
て、減圧下に濃縮した。
Ｗａｔｅｒｓ　Ｂｏｎｃｌａｐａｋ■Ｃ−１８分離用力
；７ム（１９ＲＸＸ　１５０１ｕＥ　）を用いたクロマ
トグラフィーに付し、アミノ酸配列分析を行なった所、
正しい構造を有していることが示された。得られる樹脂
のアミノ酸分析を行なった所、７２％が脱離したことが
示された。

Claims (12)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここでＰはポリマー支持体、Ｒ＿１は置換もしくは非
    置換の芳香族基、Ｒ＿２は炭素数１〜２０のアルキル基
    、Ｒ＿３は置換もしくは非置換のフェニル基、ｎ及びｍ
    はそれぞれ独立にＯ又は１を表わす。〕 で表わされる構造を有する固相ペプチド合成用樹脂。
  2. （２）ポリマー支持体が架橋化ポリスチレンゲルである
    特許請求の範囲第１項記載の樹脂。
  3. （３）Ｒ＿１及びＲ＿３が非置換フェニル基であり、Ｒ
    ＿２がメチレン基である特許請求の範囲第１項記載の樹
    脂。
  4. （４）下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここでＰは架橋化ポリスチレン樹脂である。〕で表わ
    される構造を有するポリマー支持体を含む固相ペプチド
    合成用樹脂。
  5. （５）下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここでＲ＿１は炭素数１〜２０のアルキル基、Ｐは架
    橋化ポリスチレン樹脂、ｎは０〜２０を表わす。〕 で表わされる構造を有する固相ペプチド合成用樹脂。
  6. （６）Ｒ＿１がメチレン基であり、ｎが１である特許請
    求の範囲第５項記載の樹脂。
  7. （７）ペプチド合成法であつて、 （ａ）保護されたカルボキシ末端アミノ酸を、下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここでＲ＿１は置換もしくは非置換の芳香族基Ｒ＿２
    は炭素数１〜２０のアルキル基、Ｒ＿３は置換もしくは
    非置換のフェニル基、ｎ及びｍはそれぞれ独立に０又は
    １を表わす。〕 で表わされる樹脂に固定化してベンジルエステル結合を
    形成せしめ； （ｂ）固定化アミノ酸を脱保護し； （ｃ）固定化アミノ酸を中和してアミンに変換し；（ｄ
    ）工程（ｃ）で得られるアミンに、保護されたカルボキ
    シ末端アミノ酸を縮合せしめ； （ｅ）工程（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）を繰り返して、工
    程（ａ）の樹脂上に目的とするペプチドを合成し； （ｆ）スルホキサイドをスルフィドに還元し；次いで （ｇ）樹脂からペプチドを脱離せしめて、合成したペプ
    チドを得る、 ことを含む上記合成法。
  8. （８）塩酸で処理することによつてスルホキサイド結合
    をスルフィド結合に還元し、次いでカルボニウムイオン
    スカベンジャーの存在下で、トリフルオロ酢酸、臭化水
    素酸、フッ化水素酸及びトリフルオロメタンスルホン酸
    からなる群より選ばれる酸で処理してペプチドを樹脂か
    ら脱離せしめる特許請求の範囲第７項記載の方法。
  9. （９）スルホキサイド結合をスルフィド結合に還元し、
    同時に、Ｓ＿Ｎ＿２条件の塩基の存在下で低濃度フッ化
    水素酸あるいは低濃度トリフルオロメタンスルホン酸で
    処理してペプチドを樹脂から脱離せしめる特許請求の範
    囲第７項記載の方法。
  10. （１０）未反応の残つたスルフィド樹脂を、脱保護工程
    で封鎖する特許請求の範囲第７項記載の方法。
  11. （１１）脱保護工程を、カルボニウムイオンスカベンジ
    ャーの存在下でトリフルオロ酢酸と保護されたアミノ酸
    とを反応せしめることによつて行なう特許請求の範囲第
    １０項記載の方法。
  12. （１２）スルホキサイドがスルフィドに還元された特許
    請求の範囲第１項〜第６項のいずれか１項記載の樹脂。
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