JPS63190831A - 遊離基捕捉剤又は代謝抑制剤と生物活性蛋白質とを含有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明は、哺乳類宿主へ治療組成物として投与するのに
好適な組成物に関する。更に詳細には、本発明は、１ｌ
ｆｆｉｉ壊死因子（ＴＮＦ）のようなリンフォカインま
たは細胞毒素、およびｉＱ離基の発生によって惹起され
る損傷を防止するかまたは腫瘍の遊離基捕捉能を枯渇ま
たは減少させることによって腫瘍の遊離基による損傷に
対する感受性を選択的に高める１種以上の遊離基補足剤
、またはアラキドン酸代謝のシクロオキシゲナーゼまた
はりポキシゲナーゼ経路の一方もしくは両方の抑制剤か
ら成る生物学的改質剤を用いる遊離基による身体的損傷
の組み合わせ治療に関する。

〔従来の技術〕

インターロイキン−２、インターフェロン−α、インタ
ーフェロン−Ｔ、コロニー刺激因子および腫瘍壊死因子
のようなリンフォカインおよび細胞毒素は、抗原または
レクチンによってＴ細胞および／またはマクロファージ
を活性化することによって分泌されるタンパクである。

インターロイキン−２（ＩＬ−２）は一種のリンフォカ
インであって、正常な末梢血リンパ球によって産生され
、植物レクチン、抗原またはその他の刺激剤に暴露され
ると抗原もしくはマイトジェンに刺激されたＴ細胞の増
殖を誘起するものであり、モーガン・ディ・エイ（Ｍｏ
ｒｇａｎ　Ｄ、Ａ、）　らによって最初に報告された（
Ｓｃｉｅｎｃｅ　、１９７６年、１９３巻、１００７〜
１００８頁）。刺激されたＴリンパ球の増殖を誘起する
能力を有することにより当時Ｔ細胞成長因子と呼ばれて
いたものは、その成長因子特性に加えて試験管内および
生体内で各種の免疫系細胞の機能を調節することが認め
られており、インターロイキン−２（ＩＬ−２）と再命
名された。ＩＬ−２は数種類のリンパ球によって産生さ
れるメツセンジャー−調整分子の一つであり、免疫細胞
の相互作用及び機能を中介するものである。

腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）はカールスウェル（Ｃａｒｓｗ
ｅｌｌ）ら　（Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　八ｃａｄ
、　　Ｓｅｔ、−リＳＡ１．１９７５年、７２巻、３６
６６〜３６７０頁）によって、ネズミ中で成長する化学
的に形質転換された腫瘍細胞を壊死させる、エンドトキ
シンによって誘発される血清因子として最初に報告され
た、ヒ１−ＴＮＦは腫瘍細胞に対して細胞毒性を有する
ことが知られており、組換え形で産生されている。ペニ
カ（Ｐｅｎｎｉｃａ）　　ら、Ｎａｔｕｒｅ　（ロンド
ン）　、１９８４年、３１２巻、７２４〜７２９頁、シ
ライ（Ｓｈｉｒａｉ）ら、Ｎａｔｕｒｅ　（ロンドン）
、１９８５年、３１３巻、８０３〜８０６頁、およびソ
ング（Ｗａｎｇ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ　、１９８６年、
２２８巻、１４９〜１５４頁を参照されたい。

インターフェロン（ＩＦＮ）は天然のタンパクの群を構
成し、抗ウィルス、抗腫瘍および免疫調整機能を示すこ
とが知られている。二つの型のＩＦＮはそれらの外見上
の生物学的特性および分子構造の差異に基づいて同定さ
れている（■型および■夏型）。β−インターフェロン
（ＩＦＮ−β）はＩ型のＩＦＮであり、ウィルスの攻撃
によって線維芽細胞において誘発させることができ、約
１６５個のアミノ酸を有する。ＩＦＮ−αも白血球中で
誘発させることができるＩ型のＩＦＮであり、ｔＦＮ−
ｒはＩＩ型のＩＦＮであり、特異的なマイトジェン性刺
激剤に応答してリンパ球において誘発され、１４６個の
アミノ酸を有する。

２種類以上の抗癌剤をヒトの悪性腫瘍の治療に用いる組
み合わせ化学療法は、現在研究および臨床において用い
られている。抗癌剤としては、抗代謝薬、アルキル化剤
、抗生物質、一般的毒物等が挙げられる。薬物の組み合
わせを投与して、例えば癌、黒色腫、リンパ腫および肉
腫のようなほとんどの癌に対する相乗的細胞毒性作用を
得て、薬物耐性細胞の出現を減少させもしくは無くし、
且つそれぞれの薬物に対する副作用を減少させることが
試みられている。

例えば、ＩＬ−２はＩＦＮ−７と共に用いて腫瘍を有す
る宿主を治療して相乗効果を発揮することができ（欧州
特許出願公告筒１４９，５５１号明細書、１９８５年１
０月３１日発行（ゲネンテク（Ｇｅｎｅｎ　ｔｅｃｈ）
　）、または天然のキラー活性を増大することが知られ
ている（スベデルスキイ（Ｓｖｅｄｅｒｓｋｙ）ら、Ｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１９８４年、１３３巻、７１４〜７
１８頁およびシャラビー（Ｓｈａｌａｂｙ）　ら、Ｊ、
　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ、、１９８５年、５巻
、５７１〜５８１頁）。更に、１９８６年２月４日発行
のクリーゲイ（Ｃｒｅａｓｅｙ）　　らに対する米国制
定法発明筒Ｈ２２号明細占には、５−フルオロウラシル
とヒト組換えβ−インターフェロンの相乗的に有効量を
用いるある種の乳癌と黒色腫細胞ラインのコンビネーシ
ョン治療に於いて相乗的細胞毒性作用を示す組成物が開
示されている。また、７ＦＮ−ｒをＴＮＦおよび化学療
法剤と組み合わせて用いると、抗腫瘍活性の増大が観察
°された（スベデルスキイ（Ｓｖｅｄｅｒｓｋｙ）　　
ら、Ｉｎｔｅｒｎｌ、Ｊ。

免ｆ　ｔａｕ明ｌル１現１−１１９８５年、７巻、３３
０頁）。

各種リンフォカインと細胞毒素の作用機構およびこれら
のタンパクに対する腫瘍細胞の感作性の基礎を理解する
ことにより、これらの治療薬の臨床的研究および臨床的
治験法が容易になる。例えば、ＴＮＦは主にマクロファ
ージによって産生され、その細胞毒性または細胞増殖抑
制活性は正常細胞ではなく、多くの腫瘍細胞に対する選
択性を明らかに示した。例えば、カースウェル（Ｃａｒ
ｓｈｅｌｌ）ら、」上文就；ワング（Ｗａｎｇ）ら、Ｈ
上文鼠；ラフ（Ｒｕｆｆ）とギフオード（Ｇｉｆｆｏｒ
ｄ）　、ｒリンフォカイン」第２巻、ビック・イー（Ｐ
ｉｃｋ、ε、）監修、（アカデミツク・プレスインコー
ポレーテド（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、
）、ニュー醗ヨーク、ニュー−ヨーク、１９８１年）、
２３５〜２７２頁；ビュトラー（Ｂｅｕｔｌｅｒ）とセ
ラミ（Ｃｅｒａｓｉ）、Ｎａ　ｔｕｒｅ１９Ｂ６年、３
２０巻、５８４〜５８８頁：およびアーバン（ｔｌｒｂ
ａｎ）　　ら、Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　１９８
６年、８３巻、５２３３〜５２３７頁および前記文献に
引用されている文献を参照されたい。この選択的な腫瘍
細胞の殺傷は、ヒト二倍体線維芽細胞のようなＴＮＦ丁
細胞は十分な数の親和性の高いリセプターを有し、ＴＮ
Ｆをインクナリゼーションし、ＴＮＦ”細胞とまったく
同様に分解するので、リセプターの不在によるものでは
ない（ツクモト・エム（Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ、　Ｍ、）
ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ口、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ
ＳＡ、　１９８５年、８２巻、７６２６〜７６３０頁）
。

インターロイキン−１は単独で、遊離基依存性組織障害
のモデルにおいて保護作用を有する〔ネタ（Ｎｅｔａ）
ら、Ｊ、　ＩｍｍｕｎｏＬ、　、１９８６年、１３６巻
、２４８３〜２４８５頁〕。更に、ＴＮＦ−αおよびＩ
ＦＮ−γは通常のおよび慢性の肉芽腫性疾患患者から好
中球を誘発して超酸化物を放出することが見い出されて
いる（パラジノ（Ｐａｌｌａｄｊｎｏ）　　ら、Ｃｌ１
ｎ。

拡、１９８６年、３４巻、５０２頁；およびパラジノ（
Ｐａ　１　ｌａｄ　１ｎｏ）　　ら、Ｐｅｄ−損じ−、
１９８６年、２０巻、３０２頁）。

酸素−′ｔｉ離基種および関連したポリ不飽和脂肪酸脂
質過酸化生成物の生物活性は、共に十分に樹立されてい
る。例えば、反応性遊離基極の発生は、イオン化放射線
〔例えば、ベトカラ（Ｐｅｔｋａｕ）、Ａｃｔａ、　Ｐ
ｈ　５ｉｏ１．５ｃａｎｄ、　Ｓｕ　　１．．１９８０
年、４９２巻、８１〜９０頁およびビアグロウ（Ｂｉａ
ｇｌｏｗ）　ら、Ｒａｄｉａｔ。

匠、１９８３年、９５巻、４３７〜４５５頁を参照され
たい〕、各種化学療法剤〔例えば、トマッ（Ｔｏｍａｓ
ｚ）、Ｃｈｅｗ、　Ｂｉｏｌ、　Ｉｎｔｅｒａｃｔ、、
１９７６年、１３巻、８９〜９７頁；ローン（Ｌｏｗｎ
）とシム（Ｓｉｎ＋）　、Ｂｉｏｃｈｅｍ。

ｊ３ｉｏｇｈｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　、１９
７７年、７７巻、１Ｉ５ｏ〜１１５７Ｎおよびボレック
（Ｂｏｒｅｋ）とトロール（Ｔｒｏｌｌ）、Ｐｒｏｃ、
　ＮａＬ［、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｏ８４％　１９８
３年、８０巻、１３０４〜１３０７頁を参照されたい〕
、およびその他各種の生物学的方法、例えば、老化およ
び実験的発癌の開始および増殖段階〔例えば、ジギセソ
ビ（ＤｉＧｕｉｓｅｐｐｉ）とフリドビッチ（Ｆｒｉｄ
ｏｖｉｃｈ）　、、　ＣＲ鉦Ｃｒ１ｔ　　Ｒｅｖ、　Ｔ
ｏｘｉｃｏｌ、　、、　１９８４年、１２巻、３１５〜
３４２頁およびスレータ−（Ｓｌａｔｅｒ）、旧ｏｃｈ
ｅｍ、　Ｊ、、１９８４年、２２２巻、１〜１５頁を参
照されたい〕の細胞毒性効果において生じることが見い
出されている。免疫系の各種細胞によって用いられる呼
吸性バースト現象における反応性遊Ｍ基の発生および放
出は、異物標的の破壊の十分に知られた機構である〔例
えば、バス（Ｂｕｓ）　　とギブリン（Ｇｉｂｓｏｎ）
、Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｌｌｌ、　Ｔｏｘｉｃｏｌ、
、ホジソン（Ｈｏｄｇｓｏｎ）ら監修１．（エルセビー
ア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、ノース・オランダ、１９７９
年）、１２５〜１４９頁、およびバドウエイ（Ｂａｄｗ
ｅいとカルノプスキイ（Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ）　、Ａｎ
ｎ。

Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、１９８０年、４９巻、
６９５〜７２６頁を参照されたい〕。

好気性菌では、各種の遊離基捕捉機構が、細胞および生
物レベルで発展して、水酸基、スーパオキサイド陰イオ
ンおよび過酸化水素のような致死反応性酸素種から保護
する〔例えば、ジギセソピ（Ｄ　ｉＧｕ　１ｓｅｐｐ　
ｉ）とフリドビッチ（Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ）　、Ｍ藷、
スレータ−（Ｓｌａｔｅｒ）、前星文献、およびバス（
Ｂｕｓ）とギブリン（Ｇｉｂｓｏｎ）、血皿文献を参照
されたい〕０重要なことは、酸素遊離基は、長時間続く
脂質の過酸化の連鎖反応を開始して、細胞から細胞へと
伝播させることができる。それらの過酸化生成物は、細
胞のＯＮ＾、ＲＮＡ、タンパクおよび細胞のリン脂質を
損傷することができる〔例えば、スレータ−（Ｓｌａｔ
ｅｒ）、血記文鼠；バス（Ｂｕｓ）とギブリン（Ｇｉｂ
ｓｏｎ）、ムーディ（Ｍｏｏｄｙ）　　とハソサン（）
ｌａｓｓａｎ）、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、
　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ％　１９８２年、’７９Ｓ、２８５
５〜２８５９ｉ　、レスコ（Ｌｅｓｋｏ）　　ら、Ｂｊ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒ、１９８０年、１９巻、３０２３〜
３０２８頁；およびセルフティ（Ｃｅｒｕｔｔｉ）　ら
、「腫瘍形成における遺伝子とタンパク」　（アカデミ
ツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、ニュ
ー・ヨーク、１９８３年）、５５〜６７頁を参照された
い〕。この種の損傷に対する防御細胞機構には、脂質お
よび細胞の水性相における酸化防止剤および遊離基捕Ｉ
に剤（例えば、α−トコフェロール、β−カロチン、グ
ルタチオンおよびアスコルビン酸）並びにスーパオキサ
イドディスムターゼおよびカタラーゼのような酵素があ
る〔例えば、フリートピッチ（Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ）、
５ｃｉｅｎｃｅ　、　１９７８年、２０１巻、８７５〜
８８０頁およびマイスター（Ｍｅｉｓｔｅｒ）　とアン
ダーリン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　
Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１９８３年、５２巻、７１１〜７６
０真を参照されたい〕、ヒトに見られる高い血漿尿酸レ
ベルも、主要な遊離基保護因子であることが示されてい
る〔アメス（八ｍｅｓ）ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、１９８１年、７８巻、
６８５８〜６８６２頁〕。

グルタチオン（ＧＳＨ）および関連した細胞性スルフヒ
、ドリル化合物は、キセノバイオティックス（ｘｅｎｏ
ｂｉｏｔｉｃｓ）および酸素／脂質遊離基極の親電子代
謝物の解毒の主要な機構の一つを表わす〔マイスター（
Ｍｅｉｓｔｅｒ）とアンダーリン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）
、前記文献〕。遊離基の抑制は、遊１ｉｉ１１基捕捉剤
としてのシスティンおよびＧ　Ｓ　Ｈのようなある種の
放射線防護剤が作用する方式と仮定される。細胞が酸素
発生化合物またはその他の酸化性ストレスに暴露される
と、（１，ＳＨは酸化されてジチオ基並びにタンパク混
合ジスルフィドを含むようになる〔アダムス（Ａｄａｍ
ｓ）　　ら、Ｊ、　Ｐｈａｒｍｃｏｌ、　Ｅｘ　、　Ｔ
ｈｅｒ、　、１９８３年、２２７巻、７４９〜７５４頁
参照〕。それ故、酸化されたＧＳＨの含量は細胞が暴露
された損傷または細胞自体を酸化性損傷から保護する能
力の一つの重要な指標である。ブチオニンスルホキシミ
ンは、Ｇ　Ｓ　Ｈ生合成の抑制剤であることが示されて
いる〔ミンチントン（旧ｎｃｈｉｎｔｏｎ）ら、虱ム」
１亘旦匹副匹虹且り肛虹エバＬユ１９８４年、１０巻、
１２６１−１２６４真参照〕。

単球細胞ライン細胞毒素（ＭＣＣＴ）と呼ばれるタンパ
クが特徴付けられ、ＭＣＣＴ活性に対する各種のプロテ
アーゼ抑制剤および過酸化水素捕捉剤の抑制効果が研究
された〔アームストロング（Ａｒｍｓ　ｔｒｏｎｇ）ら
、Ｊ、　Ｎ、　Ｃ，１，，１９８５年、７４巻、１〜９
頁〕。

更に、各種ヒドロキシル遊離基捕捉剤がリンフォトキシ
ンの酸性を抑制することも見い出された〔コバヤシ（Ｋ
ｏｂａｙａｓｈｉ）　　ら、Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅ＋ｓ、
　　ｒ＝）　。

１９８４年、９５巻、１７７５〜１７８２頁参照〕、最
後に、プリン誘導体であるメチツブリノールは、リンフ
ォカインであるリンフォトキシンの酸性を増加させるこ
とが示されている〔モーリン（Ｍｏｒｉｎ）　とバレッ
ト（Ｂａｌｌｅｔ）、Ａ１１ｅｒ　ｏｆ、　　Ｉｍｍｕ
ｎｏ　ａｔｈｏｌ、　　％　１９８２年、１０巻、１０
９〜１１４頁〕。

マーカス（Ｍａｒｃｕｓ）ら（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｈ、、　４７巻、４２０８〜４２１２頁、１９８
７年）は、ビタミンＣとＩＬ−２の使用を開示している
。

アリツク（Ａｒｒｉｃｋ）ら（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎ
ｖｅｓｔ、、７１巻、２５８〜２６７頁、１９８３年）
は、　（例えば、ブチオニンスルホキシミン（ＢＳＯ）
による）グルタチオン合成のｌｒＩ′１制が抗腫瘍剤に
よる腫瘍細胞の溶解を促進することを開示している。

ロミン（Ｒｏｍｉｎｅ）とケラセル（Ｋｅｓｓｅｌ）　
（Ｂｉｏｃｈｃｖ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　　４”ｌ　、１９８６年、３６
巻、３３２３〜３３２６頁）は、抗腫瘍剤に対する応答
性の決定基としての細胞内グルタチオンの役割を開示し
ている。

オノ（Ｏｎｏ）　　ら（Ｂｒ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　
＝　−）　、１９８６年、５４巻、７４９〜７５４頁）
は、ネズミの腫瘍および骨髄に対するＢＳＯとシクロホ
スファミドの共同効果を開示している。

ハミルトン（Ｈａｍ　ｉ　１　ｔｏｎ）ら　（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ。

（１９８５年７月１５日）３４巻、２５８３〜２５８６
頁）はＢＳＯを用いることによって薬物耐性および薬物
感作性癌細胞ラインにおけるアドリアマイシン、メルフ
アレンおよびシスプラチン細胞毒性の増大を開示してい
る。

アントリエース（Ａｎｄｒｅｗｓ）ら（Ｃａｎｃｅｒ　
Ｒｅｓ。

１９８５年１２月）４５巻、６２５０〜６２５３頁）は
、グルタチオンの除去によってヒト卵巣癌細胞における
アルキル化および白金他剤毒性の分画相乗作用を開示し
ている。

ルソソー（Ｒｕｓｓｏ）　ら（Ｃａｎｃｅｒ…、　　（
１９８６年６月）４６巻、２８４５〜２８４８頁）は、
ヒト正常ウィルス腫瘍細胞におけるグルタチオン水準の
選択的ｉＡ節および化学療法剤に対する分画応答を開示
している。

テ、：Ｌ　−（Ｔｅｗ）ら（Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔ　Ｒ−旺工１９８６年６月＞　’ｔｏ＠、７１
５〜７２０頁）は、エストラムスチンの抗分裂特性に対
するグルタチオン除去の関係を開示している。

ルソソー（Ｒｕｓｓｏ）ら（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｒａｄｉ
ａｔ、　０ｎｃｏｌ。

Ｂｉｏエユヱ垣枇工（１９８６年８月）１２巻、１３４
７〜１３５４頁）は、抗腫瘍性化学療法における細胞内
グルタチオンの役割を開示している。ドール（Ｄｏｒｒ
）ら、（セ■旦幻工」樟旦」ヒＵ、１９８６年、４巻、
３０５〜３１３頁）は、ヒトおよびネズミ腫瘍細胞に対
するＢＳＯによるグルタチオン合成の抑制の細胞毒性効
果を開示している。

グリーン（Ｇｒｅｅｎ）　ら（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　
　（１９８４年１１月）４４巻、５４２７〜５４３１頁
）は、ＢＳＯの存在で細胞をインキュベーションすると
、メルフアラン細胞毒性が著しく　（相乗的に）増大す
ることを開示しており、オキソールス（Ｏｘｏｌｓ）（
Ｓｅ＋＋＋ｉｎ、　０ｎｃｏｌ。

（１９８５年９月）１２巻、７〜１１頁）は、ＢＳＯが
メルフアレンおよびシスプラチンの細胞毒性を増加させ
ることを開示している。

オゾールス（０２０１！ｌ）ら（Ｄｅｖ、　０ｎｃｏ１
．１９８６年、４７巻、２７７〜２９３頁）は、抗腫瘍
剤の効力に対するＢＳＯの効果を開示している。

クルツク（Ｃｒｏｏｋ）　　ら（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ
、　　（１９８６年）４６巻５０３５〜５０３８頁）は
ＢＳＯがシクロホスファミドの細胞毒性を増大させるこ
とを開示している。

ホソジキス（ｌｌｏｄｇｋｉｓｓ）ら（Ｂｉｏｃｈｅｍ
、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ。

（１９８５年）３４巻、２１７５〜２１７８頁は、ＢＳ
Ｏを用いることによって、ニトロ芳香族化合物の細胞毒
性が増大することを開示している。ツムファイ−レーレ
（Ｓｏｍｆａｉ−Ｒｅ１１ｅ）ら（１９８４年）３３巻
、４８５〜４９０頁）は、ＢＳＯがネズミ腫瘍細胞をＬ
−フェニルアラニンマスタードに対して感作することを
開示している。

〔発明が解決しようとする問題点〕

したがって、本発明は、放射線防護剤または代謝抑制剤
のような遊離基捕捉剤を、リンフォカインまたは細胞毒
素の効力を増加させそして／または毒性を減少させる蟹
で、宿主を日時的にまたは別個に処理することによって
、試験管内および生体系においてリンフォカインまたは
細胞毒素の治療係数を増大させ得ることを見い出したこ
とに基づいている。

更に具体的には、本発明は、遊離基産生によって惹起さ
れる哺乳類宿主に対する生物学的損傷の治療または予防
法において、宿主に薬理学的に有効量の哺乳類由来の少
なくとも１種のリンフォカインまたは細胞毒素と、遊離
基捕捉剤または代謝抑制剤から選択される少なくとも１
種の生物学的改質剤を投与することを特徴とする方法に
関する。

好ましくは、リンフォカインまたは細胞毒素は腫瘍壊死
因子またはインターロイキン−２であり、遊離基捕捉剤
または代謝抑制剤は尿酸、ブチオニン・スルホキシミン
、ビタミンＣ１インドメタシン、イブプロフェン、Ｎ−
アセチルシステインまたはアスピリンである。

もう一つの観点では、本発明は、薬理学的に有効量の、
哺乳類由来の少なくとも１種のリンフォカインまたは細
胞毒素および少なくとも１種の上記生物学的改質剤の混
合物から成４呻乳類宿主に投与するのに好適な組成物を
提供する。

いずれかの理論に限定されるわけではないが、腫瘍性の
、感染されたまたは放射線を照射された細胞のような損
傷を受けた細胞のＴＮＦのようなリンフォカインまたは
細胞毒素に対する感受性は遊離基捕捉能によって変わる
と思われる。脂質過酸化及び他の関連基極、並びにリポ
キシゲナーゼ及びシクロオキシゲナーゼ経路の生物学的
に活性な代謝産物を生成するアラキドン酸カスチードの
活性化は、リンフォトキシン及び細胞毒素の作用機構に
関与すると信じられる。

本明細書において用いる、「リンフォ力インコという用
語は、抗原またはレクチンがＴ細胞またはマクロファー
ジの成長または活性化を促進するとき、Ｔａ１ｌ胞およ
び／またはマクロファージによって分泌される低分子量
タンパクを表わす。「細胞毒素」という用語は、細胞中
の病原体のような異物を殺すエフェクター細胞を活性化
するタンパクを表わす。このようなリンフォカインおよ
び細胞毒素の例には、インターフェロン（例えば、イン
ターフェロン−α（Ｉ　ＦＮ−α）、インターフェロン
−β（Ｉ　ＦＮ−β）およびインターフェロン−γ　（
ＩＦＮ−Ｔ））、インターロイキン（例えば、インター
ロイキン−１（ＩＬ−１）　、インターロイキン−２（
ＩＬ−２）　、インターロイキン−３（ＩＬ−３）およ
びインターロイキン−４（ＩＬ−４））、ｌｌｆｆ１瘍
壊死因子−α（ＴＮＦ−α）腫瘍壊死因子−β（ＴＮＦ
−β）（リンフォトキシンとも呼ばれる）、コロニー刺
激因子（例えば、Ｃ３Ｆ−１、Ｃ３Ｐ−ＧまたはＣＳＦ
−ＧＭ）　、走化性物質（ｃｈｅｍｏｔａｘｉｎｓ）　
、遊走阻止活性因子（ＭＩＦ）、マクロファージ活性化
因子（ＭＡＦ）　、ＮＫ細胞活性化因子、Ｔ細胞置換因
子、白血球抑制因子（ＬＩＦ）、その他のリンフォトキ
シン、破骨細胞活性化因子（ＯＡＦ）、可溶性免疫応答
抑制剤（ＳＩＲ５）、成長刺激因子、単球成長因子等が
ある。

好ましくは、リンフォカインまたは細胞毒素は、インタ
ーロイキン（更に好ましくはＴＬ−２）、インターフェ
ロン（更に好ましくはＩＦＮ−β）、ＴＮＦ−αまたは
−βまたはコロニー刺激因子（更に好ましくはＣ３Ｆ−
１）である。最も好ましいものは、ＴＮＦ−αである。

本明細書に用いられる「組換体」という用語は、一般的
にはリンフォカインまたは細胞毒素をコードする遺伝子
が既知の組換えＤＮＡ技術によってクローン化される、
組換えＤＮＡ技術によって産生されるリンフォカインま
たは細胞毒素を表わす。

例えば、鋳型としてヒトリンフォカインまたは細胞毒素
ｃＤＮＡを用いることによって、ヒトリンフォカインま
たは細胞毒素ｃＤＮＡに相補性を示す遺伝子を細菌性プ
ラスミド、好ましくはイー・コーリー（Ｅ、　ｃｏｌｉ
）プラスミドのような好適なりＮＡベクターに挿入して
、組換えプラスミドを得て、このプラスミドを用いて適
当な宿主を形質転換する。

遺伝子が宿主中に発現して、組換えタンパクを産生ずる
。この目的に好適な組換えプラスミドの例には、ｐＢＲ
３２２、ｐｃＲｌ　、　ｐＭＢ９およびｐｓｃｌが挙げ
られる。形質転換された宿主は真核生物でもまたは原核
生物でもよいが、原核宿主であるのが好ましい。

本明細書に用いる「医薬として許容される」という用語
は、活性成分の生物活性の効果を妨げず且つ投与される
宿主に対して毒性を有しないキャリヤー媒質に関する。

本明細書に用いられる「予防または治療」処理とは、宿
主に生物学的損傷を加える前又は後にリンフォカイン（
類）または細胞毒素（類）および生物学的改質剤（類）
を宿主に投与することを表わす。生物学的損傷を起こす
薬物に暴露する前にリンフォカイン（類）または細胞毒
素（１）および生物学的改質剤（類）を投与する場合に
は、その処理は予防的（すなわち、宿主を損傷から保護
する）であり、損傷を起こす薬物に暴露した後に投与す
る場合には、その処理は治療的（すなわち、存在する損
傷を軽減する）である。計画および投与量は、例えば宿
主、病気、リンフォカインまたは細胞毒素および生物学
的改質剤の型によって変わる。生物学的を員傷が感染に
よって起こる場合には、予防処理のためには感染の１８
時間前に投与するのが好ましく、治療処理のためには感
染の初期に投与するのが好ましく、治療処理のためには
感染の後期の感染後１８時間までに投与するのが好まし
い。

生物学的損傷が癌であるときには、処理後に腫瘍が現わ
れたりまたは存在する腫瘍が消失も縮小もしない場合に
は、処理は治療的であるとは考えられない。投与の効果
は経時的に消失するが、ヒトには投与は数か月間または
数年間繰り返すことができる。癌の予防的処理は、患者
が癌の治療を受けた後、癌の再発を防止するために投与
することを意味する。

本明細書に用いられる「遊離基の発生によって惹起され
る宿主の生物学的損傷」とは、宿主の体内にＮｆｍ基が
産生されることによる、宿主が有する細胞、組織または
その他の身体的部分または機能に対する損傷を表わす。

遊ｉｉ１基は、アラキドン酸代謝経路の勤口を直接引き
起こすこともでき、またはアラキドン酸を動員させる脂
質過酸化を引き起こすこともできる。これらの基は、細
胞を殺す機構として産生ずることができる。このような
損傷を引き起こす例には、癌の治療中に局部的または全
身的なマイクロ波照射によって腫瘍の温度が上昇する高
熱、化学療法剤（化学療法）、放射線治療または遊離基
を産生じて細胞を殺す高酸素緊張によって起こされる損
傷および感染がある。

さらに、処理された腫瘍細胞が′ｔｉ離基による損傷を
大きくすることがある。高酸素緊張の例は、未熟児を高
圧酸素に暴露した場合にレニン性および肺の疾病を起こ
すような条件である。他の遊１ｉｆ１基の発生によって
引き起こされる損傷を表わす条件も、その定義内にある
と考えられる。

上記定義において用いられる「癌」という用語は、例え
ば腎臓細胞癌、カボジ肉腫、慢性白血病、乳癌、肉腫、
卵巣癌、腎臓癌、咽喉癌、黒色腫、結腸癌、膀胱癌、肥
満細胞腫、肺癌、消化器または胃癌のような細胞性異常
を含む腫瘍性疾病を表わす。癌は、結腸癌、黒色腫、腎
臓細胞癌、肉腫、肺癌、腺癌または乳癌であるのが好ま
しい。

上記定義において用いられる「感染」という用語は、細
菌、真菌、ウィルス、原生動物またはままは寄生虫によ
って引き起こされる如何なる種類の病理学的疾病をも表
わす。細菌感染症の例には、シュドモナス・エルギノッ
サ（Ｐ、　　肛聾紅旺旦）、Ｅ、コーリー（Ｅ、　　ｃ
ｏｌｔ）　、破傷風、ミコバクテリウム種、ストレプト
コッカス株、ジフテリアおよびサルモネラがある。真菌
感染症の例には、クリプトコックス症、ヒストプラスマ
症、およびその他のカンジダ種による感染症がある。ウ
ィルス感染症の例には、Ａ型肝炎、再発性単純ヘルペス
、エイズ、帯状ヘルペス、インフルエンザおよびライノ
ウィルスがある。好ましくは、感染症は細菌性であり、
更に好ましくはダラム陰性惑染症であり、最も好ましく
はシュドモナス・エルギノソサ（Ｐ、匹ｎ且皿旦）およ
びＥ、コーリー（Ｌ延）感染症である。

本明細書に用いられる「生物学的改質剤」という用語は
、２種類の化合物、すなわち遊離基捕捉剤または代謝抑
制剤の内の一方を表わす。「遊離基捕捉剤」という用語
は、ＭＬ’ｄ基の発生によって引き起こされる生物学的
損傷から哺乳類宿主を保護する如何なる化合物または物
質をも表わす。この定義には、直接ｔｘ離基の捕捉を行
う薬剤および宿主および／または腫瘍の遊離基捕捉能を
変更することによって作用する薬剤゛がある。いずれの
機横も、宿主のリンフォカインまたは細胞毒素に対する
応答に影響を与える。このような遊離基捕捉剤は放射線
防護剤であることができ、例えば尿酸、ブチオニン・ス
ルホキシミン、ジエチルマレエート、ビタミンＥ１ビタ
ミンＣ，システィン例えばＮ−アセチルシステイン、ま
たはグルタチオン、メトロニダゾール、および例えばビ
タミンＡのようなレチノイドがある。ジエチルマレエー
トはリンフォカインまたは細胞毒素の°毒性を増加させ
るが、腫瘍／宿主において優先的にグルタチオンを減少
させるので、治療係数が高くなる。これらの改質剤の如
何なる組み合わせのものも用いてもよい。最も好ましく
は、ヒトに対して本発明において用いられる遊離基捕捉
剤は、ブチオニン・スルホキシミン、ビタミンＣ１ビタ
ミンＥ１またはＮ−アセチルシステイン〔これはｌ、コ
ミスト（Ｍｕｃｏｍｙｓ　ｔ）という商標名（ミード・
ジョンソン（Ｍｅａｄ　Ｊｏｈｎｓｏｎ））を有する〕
である、ザ・１９８７−フィジシャンズ・デスク・レフ
ァレンス（ｔｈｅ　１９８７Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ　
Ｄｅｓｋ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）　、４１版、バーンハ
ート、パブ、オラデル、二ニー・シャーシー、メディカ
ル・エコノミックス・カンパニー・インコーボレーテド
（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ　Ｃｏｍｐａｎ
ｙ。

Ｉｎｃ、　）を参照されたい。尿酸はヒトに痛風を引き
起こすので、低い量が許容されるが、ヒト血漿中には約
３００−で天然に存在し、ヒトでは約６００〜１５００
／／Ｍが許容されると思われる。

第二の型の生物学的改質剤である「代謝抑制剤」は、ア
ラキドン酸カスケードのシクロオキシゲナーゼおよび／
またはりボキシゲナーゼ代謝経路を阻害または抑制する
化合物または物質を表わし、このカスケードにおいては
リン脂質がホスホリパーゼＡ２またはＣによってアラキ
ドン酸に転換され、このアラキドン酸がいずれかの代謝
経路を進行することができる。このような阻害または抑
制は、一方のまたは両方の経路を触媒する酵素のもので
あるか、酵素を含む細胞型のもの、または代謝経路の天
然生成物の１種以上のものであることが出来る。これら
のロイコトリエン、ヒドロペルオキシエイコサテトラエ
ン酸、ヒドロキシ−およびジヒドロキシ−エイコサテト
ラエン酸、プロスタグランジン、トロンボキサンおよび
、／またはプロスタサイクリンの数の減少は本明細書に
定義される生物学的損傷を生じさせ、代謝抑制を示す。

代謝抑制剤の例には、アスピリン、インドメタシン、イ
ブプロフェン、ノルジヒトログアンレチン酸（４，４’
−［２，３−ジメチル−１，４−プタンジイル］−ビス
［１，２−ベンゼンジオール］）（ＮＤＧ八）、シス−
８，１１，１４−エイコサトリエン−５−イン酸（ＥＴ
ＹＡ）および（天然とは異なる）合成プロスタグランジ
ンおよび／またはロイコトリエンで、酵素レベルにおい
てではなく産生レベルにおいて天然代謝生成物の効果を
阻害するものがある。アスピリン、インドメタシン、イ
ブプロフェンおよびＥＴＹＡはシクロオキシゲナーゼ代
謝経路を阻害することにより、天然プロスタグランジン
、トロンボキサンおよびプロスタサイクリンの産生を阻
害する。より高濃度では、インドメタシンはホスホリパ
ーゼＡ２をも阻害する。ＮＤＧＡおよびＥＴＹＡはリポ
キシゲナーゼ代謝経路を阻害することにより、天然ヒド
ロペルオキシエイコサテトラエン酸、ロイコトリエン、
並びにヒドロキシ−およびジヒドロキシ−エイコサテト
ラエン酸の産生を抑制する。本明細書においてＴＮＦと
共に使用する好ましい代謝抑制剤は、アスピリン、イン
ドメタシンおよびイブプロフェンから選択されるもので
ある。インドメタシンは、局所抗炎症作用を有する非ス
テロイド性抗すューマチ剤であり、レーダル・ラプス（
Ｌｅｄｅｒｌｅ　Ｌａｂｓ）のような製造業者から入手
できる。イブプロフェンはアスピリン代替品であり、こ
れもレーダル・ラプスから発売されている。これらの薬
剤は、上記の１９８７フイジシヤンズ・デスク・レファ
レンスに記載されている。

本明細書に用いられるリンフォカインもしくは細胞毒素
および生物学的改質剤に就いて用いられる「薬理学的に
有効量」という用語は、混合物中のまたは宿主に投与さ
れた化合物の、宿主の治療係数の上昇をもたらすそれぞ
れの成分の量を表わす。「治療係数」とは、本明細書で
は効力（腫瘍もしくは感染の減少またはその他の治癒の
程度）について、および宿主の毒性について定義するこ
とができる。

非ヒト宿主では、賦形剤コントロール（例えば、リン酸
緩衝食塩水）を用いた場合の効力より少なくとも５０％
効力が増加し且つ治療の開始時の平均体重に対する効力
の評価期間の終わりにおける平均体重の比率が少なくと
も０．９０　（すなわち、体重の損失が１０％以下）で
ある場合に、治療係数が増加した。平均体重の比率は、
毒性が無い場合を１として毒性の程度を示す。癌の治療
を受ける非ヒト宿主では、達成される効力の程度は、処
理の開始時における平均腫瘍体積に対する効力の評価時
の終わりにおける平均腫瘍体積の比率によって計測され
る。治療されたものが賦形剤コントロールに対して少な
くとも５０％の比率で減少するときには、効力が増加し
たことを示す。生物学的改質剤の最も好ましい投与量、
計画およびタイプは、平均腫瘍体積比が０〜５の間にな
るものであり、０の値は最適の場合であり、治癒を示す
。

ヒト宿主では、リンフォカイン／細胞毒素および生物学
的改質剤を用いて治療したときの効力が少なくとも５０
％増加し、且つ毒性が受容可能であれば、すなわら熱、
悪寒および／または一般的不快感に過ぎないならば、治
療指標が増加した。

癌の治療を受けているヒト宿主については、効力の範囲
は一般的には総ての測定された病気の産物の直交する直
径を測定することによって臨床において確認される。総
ての測定された病気の直交する直径の積の和において腫
瘍が少なくとも５０％収縮するときには、部分応答がお
こる。例えば、直交する直径が１０と１０である腫瘍が
直交する直径が８と８であるものに収縮する場合には、
腫瘍は１００から６４に収縮しただけであり、５０％減
少ではなく、部分応答ではない。しかしながら、１０と
１０の腫瘍が７と７に収縮する場合には、腫瘍は１００
から４９へ収縮しており、５０％以上の減少であるので
、部分応答である。

本発明の方法は、哺乳類宿主に、好ましくはヒト宿主に
１種以上のリンフォカインもしくは細胞毒素、および１
種以上の生物学的改質剤を投与することから成っている
。リンフォカイン（類）、細胞毒素（類）および生物学
的改質剤（顛）は試験管内で投与前に混合され、あるい
は宿主へいずれかの順序、または交互にもしくは同時に
別個に投与され、−１的にはリンフォカイン／ＩＩＩ胞
毒素の投与は生物学的改質剤の投与後２４時間以内に行
い、あるいは生物学的改質剤の投与はリンフォカイン／
細胞毒素の投与後約１時間以内に行うことが出来る。好
ましくは、生物学的改質剤は、リンフォカインまたは細
胞毒素を加える前に、またはそれと同時に加える。

投与は、経口、皮下および非経口投与のいずれかの適当
な技法によって行うことができるが、非経口または経口
投与が好ましい。非経口投与の例には、静脈内、動脈内
、筋肉内および腹腔内投与があるり、腹腔内および静脈
内投与が好ましい。

投与法および投与量は、リンフォカイン（類）もしくは
細胞毒素（頻）および生物学的改質剤（類）を治療また
は予防目的で、個別にまたは混合物として投与するかど
うか、生物学的損傷および宿主のタイプ、宿主の病歴、
リンフォカインまたは細胞毒素のタイプ、用いられる生
物学的改質剤のタイプによって変わる。旧は、上記のよ
うな治療係数の上昇を達成するのに有効なものでなけれ
ばならない。ヒトは本明細書に例示されるマウスおよび
う７）よりも長時間治療され、治療時間は病気の経過の
長さおよび薬物の効力に比例する長さを有する。投与は
数日間に亙る単回投与または複数投与を行うことができ
るが、単回投与が好ましい。本発明のためには少なくと
も５０％の保護水準とは、治療された宿主°の少なくと
も５０％が感染症に対して延命率の向上、より速やかな
回復または症状の改善または消失のような改善を示す事
を意味するが、これらに限定されるものではない。

−Ｓ的には、癌については投与量は、ある種の腫瘍を減
少させ、またはリンフォカインで活性化されたキラー（
ＬＡＫ）　ｌｌ１ｌ胞活性を増大させるのに有効なもの
でなければならない。ＬＡＫ細胞はリンパ様細胞であっ
て、新鮮で、未培養の、天然のキラー細胞に耐性の腫瘍
細胞を溶解するが、正常細胞は溶解しないものである。

投与は単回投与でも、複数投与出もよい。複数投与を用
いる場合には、例えば投与頻度を宿主のタイプおよび癌
のタイプ、投与量等によって変えるのが好ましい。

ある種の型の癌または癌系については、毎日投与するの
が有効であるが、他のものでは、−日置きまたは三日置
きの投与がよいが、毎日投与は無効である。実施者は、
日常の実験で、どの投与経路および投与頻度が特定の場
合に最も有効であるか確定することができる。

本明細書において最も有効であると思われる癌に対する
投与量は、腫瘍の大きさを縮小させ、または腫瘍が完全
に消滅して再度出現しない量であって、宿主の患者には
有毒ではないかまたは毒性が許容可能な程度であるもの
である。一般的には、熱、悪寒および一般的不快感のよ
うな状態は許容可能であると考えられる。更に、生物学
的改質剤の投与は、リンフォカインまたは細胞毒素の抗
腫瘍活性を抑制するほど多くすることは出来ない。

これらの最適投与水準は、例えば宿主、癌、投与経路、
計画および投与順序のタイプ、存在する腫瘍の大きさ、
リンフォカインまたは細胞毒素および生物学的改質剤の
タイプ、および毒性の定義のような多くのファクターに
よって変わる。毒性は、ヒト宿主における副作用の程度
および型によって定義され（熱、悪寒および通常の不快
感は本発明の研究では許容可能な毒性と考えられるもの
である）、あるいは上記の治療係数に就いて所定の期間
の後の体重の損失量または非ヒト宿主では死亡によって
定義される。

ＴＮＦ−αはリンフォカインまたは細胞毒素として用い
られ、ヒトにおける投与レベルは一般的には少なくとも
患者体重１　ｋｇ当たり０．２４１！ｇであり、マウス
では少なくとも２５ｎ／ｋｇである。一般的には、ヒト
に投与されるＴＮＦ−αの量はマウスに用いられる量の
数と近似的またはその数そのものであり、単位がｔｔｇ
　／　ｋｇではなく、ｔｔｇ／ｇである。

ＴＮＦ−αの投与前および／または投与中にブチオニン
・スルホキシミンを最少有効ｉｌｌ離油捕捉濃度投与す
る場合には、ＴＮＦ−αは約２５〜１００■／ｄの量で
ヒトに投与するのが好ましい。スミス（Ｓｍｉｔｈ）　
　ら、ムｈ’　　　　　　　、２８巻（１９８７年３月
）４４０頁によれば、ピーグル犬に１００■／ｋｇ／投
与のＢＳＯを８時間毎に経口で１５回投与した場合には
比較的毒性がなく、ＢＳＯを４００〜８００■／贈を同
じ投与条件で投与したときには、毒性を有する。ＴＮＦ
−αを投与する前にビタミンＣを最少有効遊離基捕捉濃
度で投与するときには、ＴＮＦ−αを１２５ｘ／ｍの量
で投与するのが好ましい。ＴＮＦ−αを投与する前（例
えば、１〜４時間前）に、患者体重１　ｋｇ当たりアス
ピリンを約１５〜３０■の量で投与するときには、ＴＮ
Ｆ−αを２５〜１００ｇ／ｒｒｒの量で投与するのが好
ましい。ＴＮＦ−αを投与する前にインドメタシンを約
２５〜５０■の量で投与するときには、ＴＮＦ−αをヒ
トに約５０〜２００ｇ／ｍの量で投与するのが好ましい
。ＴＮＦ−αを投与する前にイブプロフェンを約４００
〜６００ｍｇの量で投与するときには、ＴＮＦ−αをヒ
トに約１５０〜２５０ｐｇ／ボの量で投与するのが好ま
しい。ＴＮＦ−αを投与する前にＮ−アセチルシステイ
ンをラット体重１　ｋｇ当たり２５０−１０００■の■
で投与するときには、ＴＮＦ−αをヒトに約２００〜４
００ａｇ／ｒｄの量で投与するのが好ましい。実施者は
、宿主、リンフォカイン／細胞毒素および生物学的改質
剤が変わるときに、最適投与水準および投与法を決定す
ることができるであろう。

ＩＬ−２がリンフォカインまたは細胞毒素として用いる
時には、ヒトにおける投与水準は一般的には少なくとも
約３Ｘ１０６単位／ｍ′／日であり、マウスでは、少な
くとも約５〜１０■／　ｋｇである。

ＩＬ−２の投与前にビタミンＣ，ビタミンＥ、アスピリ
ン、Ｎ−アセチルシステイン、イブプロフェンまたはイ
ンドメタシンを投与するときには、ＩＬ−２をヒトに少
なくとも３Ｘ１０’単位／ｄ／■の量で投与するのが好
ましい。

ヒトにおけるＤＳＦ−１の投与水準は決定されてはいな
いが、マウスでは、約５０■／ｋｇ（１００〜１５０ｎ
ｗ／ｋｇでは、マウスは死に至ることがある）であって
もよい。

ヒトにおけるインターフェロン（具体的にはＩＮＦ−β
）の典型的な投与水準は、約１００単位〜１０’単位／
ｄである。ＩＮＦ−βの投与前にビタミンＣ１ビタミン
Ｅ１アスピリン、Ｎ−アセチルシステイン、イブプロフ
ェンまたはインドメタシンを投与するときには、ＩＦＮ
−βはヒトに少なくとも１０００単位／ｄの量で投与す
るのが好ましい。

非経口投与では、リンフォカインは単位投与での注射可
能な形（溶液、懸濁液、エマルジョン）、好ましくは元
来非毒性であり且つ非治療性もしくは非予防性である医
薬として許容されるキャリヤー媒質中に配合される。か
かるビヒクルの例には、水、食塩水、リンゲル溶液、デ
キストロース溶液、マンニトールおよび正常血清アルブ
ミンがある。

硬化油、プロピレングリコールおよびオレイン酸エチル
のような非水性ビヒクルを用いることもできる。このキ
ャリヤー媒質は、等張性および化学的安定性を増加させ
る物質、例えば緩衝剤および防腐剤のような少量の添加
物を含むことができる。

リンフォカイン（類）／細胞毒素類および生物学的改質
剤類は、典型的には前記キャリヤー中で、それぞれ約０
１ｍｇ／ｍｌ〜１００＋ｎｇ／ｍｌ、好ましくはそれぞ
れ０．２〜１■／ｍｌの濃度で配合される。

或いは、リンフォカインがＩＬ−２であるときには、殺
菌され、安定な凍結乾燥された配合物にして、精製され
たＩＬ−２を、バルクを供するマンニトールのような水
溶性キャリヤーと、十分な量のドデシル硫酸ナトリウム
と混合して、組換えＩＬ−２を水中に確実に溶解させる
ようにすることが出来る。この配合物は、非経口投与の
ための水性注射液に再構成するのに好適であり、安定で
あり且つヒト患者に十分許容される。配合法は、米国特
許第４　、６０４　、３７７号明細書に更に完全に記載
されている。また、（Ｌ−２は、グアニジンを用いて再
おりたたみを行い、更に可溶性の生成物を得ることもで
きる。グアニジンを用いて、下記の段階から成る工程に
おいてＩ　Ｌ−２粒子ペーストを可？容化することがで
きる。

（ａ）微生物の細胞膜を破砕し、 （ｂ）水に水溶性のＩＬ−２含有物質を破砕物から分離
し、 （ｃ）ｐＨ約７〜約９で、段階（ｂ）の不溶性Ｉ　Ｌ−
２含有物質を還元剤とカオトロピック剤（ｃｈａｏｔｒ
ｏｐｉｃ　ａｇｅｎｔ）の水性溶液と混合して、不溶性
物質中のＩＬ−２を溶解させて、そして変性させ、 （ｄ）不溶性物質の未溶解部分から段階（ｃ）のＩＬ−
２含有溶液を分離し、 （ｅ）分離されたＩＬ−２含有溶液から還元剤を除去し
、 （ｆ）カオトロピック剤の濃度を強度性濃度に保持しな
がら、溶液中のＩＬ−２を酸化して、Ｉ　Ｌ−２の天然
のジスルフィド架橋を形成し、（ｇ）段階（ｆ）の酸化
が完了した後、溶液を希釈して、溶液中のカオトロピッ
ク剤の濃度を減少させて、酸化されたＩＬ−２が再生し
、そして沈澱が生ずるようにし、 （ｈ）溶液から沈澱を分離しで、上澄液を得、（ｉ）（
１）逆相高速液体クロマトグラフィによって上澄液中の
酸化されたＩＬ−２を精製し、次いで、クロマトグラフ
ィによって生じる沈澱をカオトロピック剤の溶液中に溶
解させ、溶液からカオトロピック剤を除去し、または（
２）疎水性相互作用クロマトグラフィの後、イオン交換
クロマトグラフィを行い、 （ｊ）　　ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミド
ゲル電気泳動分析による還元によって少なくとも約９５
％のＩＬ−２含量を有する精製され、酸化された、可溶
性の非対応ヒ）ｒＬ−２ｍ成物を回収し、リン酸緩衝食
塩水中での溶解度力月ｍｌのＩｔ、−２当たり少なくと
も約５■であり、ＨＴ−２細胞増殖性によって決定した
比活性が少なくとも約ｌＸｌ０ｂ単位／■であり、内毒
素含量が１■のＩＬ−２当たり約０．１ｎｇ未満となる
ようにする。

もう一つの態様では、ＩＩＰＬｃ段階の後に下記の工程
においてグアニジンを用いることができる。簡単に説明
すれば、ｒｌＬ−２は、ｒｌＬ−２を含む形質転換され
た微生物宿主の細胞成分のバルクから分離され、ｒｌＬ
−２は還元形で可溶化され、酸化されて、臨床的に受容
可能な純度および内毒素水準まで精製され、カオトロピ
ック剤の溶液中にｒｌＬ−２を入れることによって変性
される。

その後、固形物を溶液から除去して、ｒｌＬ−２を溶液
から再結合させる。カオトロピック剤の溶液は、４〜８
Ｍ水性グアニジン塩酸溶液であるのが好ましい。

さらにもう一つの態様では、ＩＬ−２は、適合免疫療法
では製薬上受容可能なキャリヤー中で、単離されリンフ
才力４ンにより活性化されたリンパ球と共に投与してこ
の方法においては、腫瘍に犯されているヒトにＩＬ−２
を投与するときに、リンパ球が抗腫瘍活性を有する様に
することができる。この方法は、１９８７年９月１日発
行の米国特許第４．６９０．９１５号明細書およびロー
ゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）　　ら、Ｎｅｗ　Ｅ
ｎ　１ａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ
、　１９８５年、３１３巻、１４８５〜１４９２頁に更
に詳細に記載されてい・る。もう一つの態様（ローゼン
バーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）　　ら、５ｃｉｅｎｃｅ
　％　　２３３巻、１３１８〜１３２１頁、１９８６年
）では、ＩＬ−２中で拡げられた腫瘍浸潤性リンパ球（
ＴＩＬ）を、特にシクロホスファミドと組合せて、治療
処理のために移行せしめることができる。ＴＩＬによる
方法も、本発明で用いることもできる。

上記の様に、本発明に用いられる組換えリンフォカイン
は、組織培養物からまたは組換え技術によって得られる
、および例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブ
タおよびヒトのような哺乳類から得られる如何なるリン
フォカインであってもよい。好ましくは、リンフォカイ
ンはヒト由来のものであり、更に好ましくはヒト組換え
リンフォカインである。最も好ましくは、リンフォカイ
ンは組換えヒト［Ｌ−２もしくはＴＮＦ単独、又はそれ
ぞれＭｉ換えＴＮＦもしくはＩＬ−２と組合せてもので
ある。

組換えＩＬ−２は、呑口ら、Ｎａｔｕｒｅ、　　３０２
巻、３０５〜３１０頁、１９８３年およびデボス（Ｄｅ
ｖｏｓ）、Ｎｕｃｌｅｉｃ　　Ａｃ１ｄｓ　　Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｈ、　　１１巻、　４３０７〜４３２３頁、１９
８３年によって記載されているように、天然ヒトＩＬ−
２遺伝子をクローン化し、それを形質転換された微生物
中で発現させることによって得ることができる。米国特
許第４，５１８，５８４号明細書に記載のように、ＩＬ
−２ムテイン（ｍｕｔｅｉｎ）であって野生型または天
然の分子の位置１２５に通常あるシスティンはセリンま
たはアラニンのような中性アミノ酸によって置換された
もの、または１９８６年１１月５日発行の欧州特許出願
公告第２００．２８０号明細書に記載のＩＬ−２ムテイ
ンであって、野生型または天然の分子の位置１０４に通
常あるメチオニンがアラニンのような中性アミノ酸によ
って置換されたものであってもよい。

好ましくは、ＩＬ−２はグリコジル化されていないタン
パクであって、天然のヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に少
なくとも実質的に同一なアミノ酸配列をコード化し、位
置５８〜１０５にシスティンのジスルフィド結合を有し
且つ天然のヒ）ＩＬ−２に共通な生物活性を有するＩＬ
−２のヒ）　ｃＤＮ＾配列または改変されたヒ）　ｃＤ
ＮＡ配列で形質転換された微生物によって産生されるも
のである。アミノ酸配列が実質的に同一であるとは、配
列が同一であるかまたは合成タンパクと天然のヒトＩＬ
−２との間に好ましくない機能上の差異を起こさない１
個以上のアミノ酸の変更（削除、付加、置換）によって
異なる事を意味する。このような特性を有するＩ　Ｌ−
２タンパクの例は、呑口ら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８３年
、３０２巻、３０５〜３１０頁、デポス（Ｄｅｖｏｓ）
、Ｎｕｃｌｅｉｃ　　Ａｃ１ｄｓ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
、　　１９８３年、　１１巻、　４３０７〜４３２３頁
、米国特許第４．５１８．５８４号明細書く同上）、お
よび欧州特許出願公告第２００．２８０号明細書（同上
）、に記載されているものがある。最も好ましくは、Ｉ
Ｌ−２はｄｅｓ−ａｌａｌ−［Ｌ−２ｓ＊ｒ＋ｚｓムテ
インであって、最初の末端アラニンが除去され、位置１
２５のシスティンがセリン残基によって置換されている
ものである。

ＩＬ−２は、１９８６年２月１１口発行の米国特許第４
．５６９，７９０号明細書に記載され且つ特許請求され
ている方法によって産生され臨床的純度にまで精製する
ことができる。更に、ＩＬ−２は、１９８６年１２月３
０日発行の欧州特許出願公開第２０６，８２８号明細書
に記載のスクロースを用いて屈折体（ｒｅｆｒａｃｔｉ
ｌ。

ｂｏｄｙ）から回収することができる。ＩＬ−２は、１
９８７年１月１５日発行のＰＣＴ８７／　０００５６号
明細書に記載のように、ポリエチレングリコールまたは
ポリオキシエチレン化ポリオールを用いて誘導体にする
ことによって改質することもできる。

本発明のヒトＴＮＦ−αは、ペニカ（Ｐｅｎｎｉｃａ）
ら、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８４年）３１２巻、７２４〜
７２９頁；山田ら、Ｊ、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｕ、
１９８５年、３巻、　１４１〜１５３頁；ワンプ（Ｗａ
ｎｇ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ　、１９８５年、２２８＠、
１４９〜ｘ５４頁；白井ら、Ｎａｔｕｒｅ　（ロンドン
）　１９８５年、３ｘ３Ｓ、　　８０３〜８０６頁、　
１９８５年９月２９日発行の欧州特許第１５５，５４９
号明細書、１９８５年１０月１６日発行の欧州特許第１
５８，２８６号明細書；１０００年１月１５日発行の欧
州特許第１６８，２１４号明細書；および１９８６年４
月２４日発行のＰ’ＣＴ　０５８５１０１９２１号明細
書に記載の方法で組換え形で得ることができる。組換え
ウサギＴＮＦ−αは１９８５年６月２６日発行のＥＰ第
１４６，０２５号明細書および１９８５年７月１７日発
行のＥＰ第１４８，３１１号明細書に記載の方法〕　で
、得ることができる。

１５１および１５５個のアミノ酸を有する　（天然形よ
りも２および６個少ない）ヒトＴＮＦ−αは、１９８５
年９月２５日発行のＥＰ第１５５，５４９号明細書（大
日本製薬株式会社）に記載され、１５５個のアミノ酸を
有するヒトＴＮＦ−αは１９８５年１０月１６日発行の
ＥＰ第１５８．２８６号明細書（旭化成工業株式会社）
および１９８５年１１月２０日発行の対応する英国特許
第２．１５８．８２９Ａ号明細書に開示されている。成
熟ＴＮＦ−α（１５７個のアミノ酸を有するもの）のク
ローン化およびその各種改質形（ムティン）は１９８６
年１月１５日発行の欧州特許第１６８．２１４号明細書
（ゲネンテク（Ｇｅｎｅｒ＋　ｔｅｃｈ）　）および１
９８７年６月３０日発行の米国特許第４，６７７．０６
４号明細書および１９８７年６月３０日発行の米国特許
第４，６７７．０６３号明細書（両方共シタス・コーポ
レーション（ＣｅｔｕｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））に
開示されている。

好ましくは、ＴＮＦ−αはヒドロキシＴＮＦムティンで
あって、最初の８個のアミノ酸残基の１個以上、好まし
くは最初の４個または最初の８個を、米国特許第４，６
７７．０６４号明細書、同上に記載の方法を用いて除去
したものであるか、またはＴＮＦ−αは、１９８７年６
月３０日発行の米国特許第４　、６７７　、０６３号明
細書（同上）、および米国特許第４．５１８，５８４号
明細書（同上）に記載のシスティン除去ムティンである
。ＴＮＦは、１９８７年５月６日発行の欧州特許公開第
２２０，９６６号明細書に記載の方法によって精製する
ことができる。

本発明のＴＮＦ−αの正確な化学構造は、多くの因子に
よって変わる。イオン化可能なアミノおよびカルボキシ
ル基が分子中に存在し、ＴＮＦ−αの特定の形は酸性も
しくは塩基性塩としてまたは中性の形で得られる。適当
な環境条件におくことによって生物活性を保持するこれ
らの製剤は、総て本発明のＴＮＦ−αの定義に包含され
る。更に、ＴＮＦ−αの一次アミノ酸配列は、糖残基を
用いる誘導体化（グリコジル化）によって、または脂質
、リン酸塩、アセチル基等の他の相補性分子によって、
更に一般的にはサツカライドとの接合よって増加させる
ことが出来る。この様な増大のある種の観点は産生宿主
の翻訳後プロセシングによって行われ、その他の改質を
試験管内で導入することができる。いずれにせよ、この
ようなる改質は、ＴＮＦ−αの生物活性が破壊されない
がぎり、本発明のＴＮＦ−αの定義に包含される。

勿論、この様な改質は、各種方法でのＴＮＦ−αの活性
を増加させまたは減少させることによって生物活性に定
量的にまたは定性的に影響を与えることも考えられる。

ある配合では、ＴＮＦ−αは、ポリマーが室温で水溶性
であるという条件で、ポリエチレングリコールまたはポ
リオキシエチレン化ポリオールのホモポリマーまたはコ
ポリマーと反応せしめることができる。このポリマーを
、最初にタンパクの遊離アミノまたはチオール基および
ポリマーのヒドロキシル基と反応性の末端基を有するカ
ンブリング剤と反応せしめる。かかるカンプリング剤の
例には、ヒドロキシニトロベンゼンスルホン酸エステル
、シアヌル酸塩化物およびＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ドがある。次に、ＴＮＦ−αは、上記のような水溶性キ
ャリヤーおよび緩衝液と直接に配合され、この配合物を
凍結乾燥して、凍結乾燥した混合物を上記のように再構
成することができる。

組換えＩ　ＦＮ−４は、グレイ（Ｇｒａｙ）ら、Ｎａ　
Ｌｕｒｅ、２９５巻、５０３頁、１９８２年によって記
載の方法によって得られる。

本発明の各種観点を、下記の実施例によって更に説明す
るが、これらの実施例はいかなる様式でも本発明を制限
することを意図するものではない。

これらの実施例では、固形物に対する総ての部は重量部
であり、液体および気体に対する総ての百分率は特に断
らないかぎり容積百分率であり、総ての温度は摂氏温度
である。

実施Ｍ１．呆改夏使■ Ａ、二股前処理 マウス 雌のＢａ１ｂ／ｃマウス〔チャールス・リバー・ブリー
ディングラボラトリーズ・インコーボレーテド（Ｃｈａ
ｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、）、ウィルミングトン、マサ
チューセンタ〕の総て６〜８週令のものを、生体内試験
に用いた。動物は、２０±３ｇの重量のものとして、ケ
ージ当たり５匹で無作為化して、耳に印を付けた。総て
の動物は到着後７日間検疫観察を行い、マイクロ隔離ケ
ージ〔ラブ・プロダクツ・インコーボレーテド（Ｌａｂ
　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｉｎｃ、））に保持し、標準的
な実験飼料を供給し、飲料水は自由に与えた。

ＴＮＦ　−α Ｎ−末端から最初の８個のアミノ酸が除去されたヒトＵ
ＮＦ−αのムティンを１９８７年６月３０日発行の米国
特許第４．６７７．０６４号明細書およびワンプ（１＋
ｌａｎｇ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ　、　１９８５年、２２
８巻、１４９〜１５３頁に記載の方法で調製した。簡単
に説明すれば、ＴＮＦはＨＬ−６０細胞から誘発され、
精製され、配列決定された。次いで、富化したｍＲＮＡ
を調製し、ｃＤＮへライブラリーを構成し、プローブを
選択し、ライブラリーを試験して配列を回収することに
よって、ヒトＴＮＦをコード化するイントロンなしの配
列を調製した。次いで、ＡＴＧ開始コドンを部位特定変
異誘発によって成熟タンパクのＮ−末端バリンをコード
するＧＴＣ配列の直前に導入した。クローンを選択して
、鎖を発現ベクターに連結して、ムティンの原核性発現
を得た。

次に、ムティンを標準的精製技法を用いてカラム精製に
よって精製し、精製緩衝液中に回収した。

ムティンを無菌バイアル中で凍結乾燥した粉末として調
製し、使用前の４日以内に無菌リン酸緩衝食塩水を用い
て再構成し懸濁し、保存する場合には、４℃で保存した
。ＴＮＦは、生産ロットによって、１■のタンパク当た
り０．００１〜０．００６ｎｇ未満のエンドトキシンを
含んだ。

遊離基捕捉剤 本発明に用いた遊離基捕捉剤は、市販の尿酸（シグマ）
であった。

・セル−インおよび重　の？　・ 用いた標的細胞はドクター・ロイド・オールド・メモリ
アル・スローンーケタリング・キャンサー・センター　
（叶、　Ｌｌｏｙｄ　Ｏｌｄ、　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｓ
ｌｏａｎ−ＫｅＬｔｅｒｉｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｎ
ｔｅｒ）、ニュー０ヨーク、ニュー・ヨークからの腹水
通過腫瘍として得て、保存品として凍結し使用の前には
少なくとも２回腹水を通過させた。これらの細胞を、マ
スウ宿主の肩甲骨上部に皮下移植した。

Ｂ、鯖宋 表−１はＴＮＦムティン単独、尿酸単独およびＴＮＦム
ティンと尿酸の各種組合せの注射を、１群当たり５匹の
マウスに、ｌｌｆｆ１瘍を移植した後７日日から開始し
て３日毎に３回皮下投与し、最終測定を１４日日日行っ
た（２〜３回反復）。賦形剤コントロールをＰＢＳを用
いて注射した。

尿酸は、動物の体重を減少させずに達成し得る最高濃度
より若干少ない量であり、予備毒性試験において決定し
、ＴＮＦ接種の直前に投与した。

ＴＮＦ投与量は、マウスの体重（マウスの体重はそれぞ
れ約２０ｇであった）１ｋｇ当たり５０　、１００゜１
５０、２００および２５０μｇの範囲をカバーするよう
に選択した。尿酸の投与量は、尿酸を投与するときには
単にマウス体重１　ｋｇ当たり２５■であった。

表二よ 賦形剤コントロール　　　　１．３６±、１３　　１／
１５”　　６０．４±２３．９　　０／１４尿酸　　　
　　　　　　　　１．２９±、０７　　１／１５ゝ　５
１．７±１７．７　　０／１４７ＮＦ　（５０μｇ／ｋ
ｇ）　　　　　　　　１．１±、１４　　１／１５　　
７．９±６．２　　１／１４ＴＮＦ　（５０μｇ／ｋｇ
）十尿酸　　　１．０５±、０２　　１／１５”　　１
０．５±５．９　　０／１４ＴＮＦ　（１００Ｉ！ｇ／
ｋｇ）　　　　　　１．０±、０２　　１／１０　　１
．４±０．６　　０／９７ＮＦ　（ｌｏｎｎ／ｋｇ）→
−尿酸　　１．０７±、１２　　１／１０°　１６．４
±２２　　　０／９ＴＮＦ　（１５０Ｉ！ｇ／ｋｇ）　
　　　　　１．０４　　　　６／１０　　０．４２　　
　　　０／４ＴＮＦ　（１５０μｇ／ｋｇ）十尿酸　　
１．０２±、０７　　１／１０°　　８．７±７．３　
　０／９ＴＮ＋１（２００μｇ／ｋｇ）　　　　　　１
．０１±、０３　　５／１０　　０．４８　　　　　３
１５ＴＮＦ　（２００ｊ１ｇ／ｋｇ）十尿酸　　１．０
４±、０２　　３／１０　　１０．６±３．１　　　０
／７ＴＮＦ　（２５０Ｉ！ｇ／ｋｇ）　　　　　　　−
−−１５／１５　　　−−−　　　　　−−−ＴＮＰ　
（２５０ｐｇ／　ｋｇ）十尿酸　　１．０５±、０７　
　８／１５　　１．２１±０．５　　０／７１ΔＢＷ：
処理後１４日口の平均体重（ｇ）の処理開始時の平均体
重（ｇ）に対する比 率によって測定した体重の変化。

ｂΔＴＷ：処理後１４日口の平均腫瘍容積（龍３）の処
理開始時の平均腫瘍容積（ｍｍ３Ｈ対する比率によって
測定した腫瘍容積 −の変化。

０治癒数：ΔＴＷ＝Ｏ１または処理開始後２１日１に腫
瘍は視認されない。

１「腫瘍死亡」、毒性による死亡ではない。

この結果は、マウスを組合せ処理するとＰＢＳコントロ
ールおよびＴＮＦ単独に就いての毒性は宿主の死亡によ
って計測したことろ減少し、効力は、ＰＢＳ対照のΔＴ
Ｗと組合せのΔＴＷを比較することによって計測したと
ころ、増加することを示している。それ故、本明細書に
定義される治療係数は増大した。

尿酸は、アメス（Ａｍｅｓ）らの上記文献よって、反応
性酸素種による損傷および霊長類には存在するが４歯類
には存在しない脂質過酸化に対する主要な防護剤と考え
られている。これらの実験の結果は、反応性酸素種およ
び脂質過酸化物様生成物がＴＮＦの作用機構に役割を果
たしている事を示している。

実施者は、これらの結果が同様に動物およびヒトにおけ
るＴＮＦ投与量に関する抗腫瘍効果の間の予想される相
関に基づいてヒトにも適用される事を予言することがで
きる。ＴＮＦ単独の前臨床応答は、結腸癌に対するＴＮ
Ｆの臨床的応答と相関を有していた。

′−１２ビ　ミンＣ（アスコルビン　）の雌Ｂａ１ｂ／
ｃマウスに、実施例１と同様にＭｅｔｈ　−ＡＭｆｆｉ
瘍細胞を皮細胞移植した。

表−２は、ビタミンＣまたは実施例１のＴＮＦムティン
を単独で、またはビタミンＣとその直後にＴＮＦムティ
ンとからなる各種組合せとを５匹のマウスからなる群に
、Ｉ］ｆＸ瘍の移植の７日後から始めて静脈内に投与し
、３日毎に３回注射を継続し、処理の開始から１４日１
に測定を行うことによって得られる結果を示している。

以下余白 表二又 １２５　　　　０　　　　８１　　　１／１０　　１．
５　　４／９１２５　　　　３５　　　　８６　　　０
１５　　１０．０　　０１５１２５　　　　７０　　　
　８３　　　２１５　　１２．０　　０１５１ΔＢＷ：
処理後１４日口の平均体重（ｇ）の処理開始時の平均体
重（ｇ）に対する比 率によって測定した体重の変化。

百分率はコントロール群に対して規格 化した値である。

ゝΔＴＷ：処理後１処理後１乎 の処理開始時の平均腫瘍体積（１ｍ’）［対する比率に
よって測定した腫瘍容積 の変化．百分率はコントロール群に対 して規格化した値である。

Ｃ治癒数：ΔＴＷ＝０、または処理開始後２１日口重腫
瘍は視認されない。

ビタミンＣは、水性区分遊離基捕捉剤として働き、コラ
ーゲン安定性等に寄与する。

これらの結果は、ビタミンＣとＴＮＦとで処理する際、
１２５ｑ／ｋｇのＴＮＦの投与量では、治癒数が少なく
且つ毒性もほとんど変化しないが２水準の高投与量のビ
タミンＣではＰＢＳコントロールに対して効力が増大す
ることを示している。高投与量のＴ　Ｎ　Ｆ　（２５０
ｕｇ　／　ｋｇ）では、ビタミンＣによる緩衝は不可能
であった。ビタミンＣ単独では、試験した３水準の投与
量では毒性はなかった。圀歯類は内因性のアスコルビン
酸を存するので、外因性の投与に影響を与える副整機構
があると思われる。しかしながら、−ビタミンＣは７■
／　ｋｇの投与量で治療係数を有意に向上させるものと
思われる。

以下余白 夫ｔＪ　１３プチオニン・スルホキシミン　ＢＳｏ雌［
１ａ！ｂ／ｃマウスに、実施例１に記載したのと同様に
Ｍｅｔｈ−Ａ腫瘍細胞を皮下に移植した。処理を、移植
から７日後に開始した。

ＢＳＯまたは実施例１のＴＮＦムティン単独、またはＢ
ＳＯを’「Ｎ　Ｆムティンと共に投与するプロトコール
を用いた。ＢＳＯは腹腔内に投与し、ＴＮＦは静脈内に
投与した。ＢＳＯは、ＴＮＦの投与の２４時間前に投与
を開始し、−日２回（６〜８時間の投与間隔で）１０日
間投与し、ＴＮＦはＢＳＯの二回目の投与と共に３日毎
に３回投与した。ＢＳＯ賦形剤をＴＮＦ単独の群での容
積コントロールとして用いた。ＰＢＳを対脇として用い
た。プロトコールを、下記に示す。

（日数） 表−３は、この研究の結果を示しており、見出しは表−
２の脚注に定義されている。括弧内の数字は実験の繰り
返しの結果を示している。

Ｂ５０（１，２５８／ｋｇ＞　　　　１．１９　０／１
０　２９．８　０／１０　　−−−ＴＮＦ（２５／／ｇ
／ｋｇ）　　　　　１．０９　０／１０　７．８　　１
／１０　　−ＴＮＦ（２５Ｊｔｇ／ｋｇ）＋〇５０　　
１．０３　　０／１０　　　１．８’　　　０／１０　
　　　４．３ＴＮＦ（５０塀／ｋｇ）　　　　　１．０
４　０／１０　４．９　　１／１０　　−ＴＮＦ　（５
に／ｋｇ）→・ＢＳｏ　　０．９８　０／１０　　１／
１’　　８／１０　　４．４ＴＮＦ（１００ｎ／ｋｉｒ
）　　　　０．９９　１／１０　　１．９　３／９　　
　−ＴＮＦ　（１００ｇ／ｋｇ）　＋ＢＳ００．９９　
１／１０−９／９　　　ａ。

コントロール（食塩水）　　１．２０　　０／１０　３
０．０　　０／１０　　　−為データーは２回の独立な
実験に就いてのものである。マウス５匹／群。

ｂ２回の実験の平均値。

ゞ平均値。

４　「治癒数」は１４日口重は明確な腫瘍がない事を示
す。

０　「投与量改変ファクター」はＴＮＦｉ独のΔＴＷ／
ＴＮＦ　＋　ＢＳＯのΔＴＷの比率である。

′変動のクアード等級分析（ｐを０．０５に設定）によ
ればＴＮＦ単独とは　　有為差を有する。

これらの実験の結果は、ＢＳＯで前処理すると、実験を
行ったＴＮＦの総ての投与量で、ＴＮＦの治療係数が増
加し、ＴＮＦの抗腫瘍効力は増加するが、「投与量改変
ファクター」という見出し欄に示されるように、毒性は
ほとんど増加しない事を示している。これらのデーター
は更に、効力及びある程度までは毒性の生体内機構が遊
離基産生に関係しているという仮定を支持している。腫
瘍細胞の感受性／耐性は、腫瘍細胞が遊離基による…傷
から細胞自体を保護する能力によって変わる。

下記の表−４に、各種ヒトセルラインのＴＮＦに対する
感受性と、細胞中のグルタチオン（ＧＳＨ）含量に対す
るＴＮＦ感受性の関係とを示している。ＢＳＯを用いて
、宿主に比較してＭｅｔｈ　−ＡのＧＳＨレベルを優先
的に減少させることによって、Ｍ！Ｉ瘍の遊離基捕捉能
を除去する。下記の総てのセルラインは、アメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション（八ＴＣＣ）、ロッ
クビル、メリーランドから入手できる。

表−４ 生体内でのＴＮＦ耐性と細胞内グルタチオンレベルとの
相関ＰＡＮ−０２（マウス耳佛）４８４±９００１１７
２９　（ヒト結ｌｌ勘耐鳥）３０８±１３１９Ｐ８１５
　（マウス腫瘍）３０５±１９７　　　　　　　　２０
Ｐ３８８　（マウス腫瘍）２８０±１５０１５Ｂ−１６
（マウス腫瘍）１８０±５６６０ＬＩ２１０（マウスＩ
ＩＩ島）　　　　　　　１０５±３７７４門Ｅ１８０（
ヒト頚会圓　　　　１４，５±４．６　　　　　　　　
洪１定せずｂＬ９２９　（マウス１１面島）　　　　　
　１４．０±０．７　　　　　　　　　測定せず５Ｍｅ
ｔｈＡ（マウス腫Ｇ’）　　　　　　９．１±４．３　
　　　　　　１００１対照腫瘍の容積増加が少なくとも
２０倍となる最終時点でＴＮＦの最大許容投与量で測定
した。

これらのモデルでは一般的に移植後１７〜２８日目であ
口重Ｌ１２１０．Ｐ２Ｏ３，Ｐ８１５およびＢ−１６腫
瘍ラインでは、マウスを、腫瘍を皮下に移植後１日日か
ら１４日間、毎日２５０１／ｇ／ｋｇを腹腔内に投与し
て処理し、ＰＡＮ−０２および１ＩＴ２９は腫瘍の移植
後７０目から開始してそれぞれ１５０または１００μｇ
／ｋｇを３日毎に３回静脈内投与した。これらの条件下
では、対照に対する体ｆｆ１ｔＮ失が１０％未満であり
、これらのモデルでは、宿主の毒性による非特異的腫瘍
の成長抑制を誘発することな（最大抗腫瘍効果のシグナ
ルが得られると考えられた。

５既に報告されているデーターは、試験管内では５０％
の動物が死亡するＴＮＦの投与１（ＴＣＩＤ、。）はＭ
Ｅ１８０に対しては５０単位／　ｍ　ｌ、Ｌ　９２９で
は２０単位／ｍ＋である事が示されている（クリ−ジー
（Ｃｒｅａｓｅｙ）　　ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　
、４７巻、１４５〜１４９頁、１９８７年）。

４、アスビ１ンの− 雌Ｂａ１ｂ／ｃマウスを、実施例１と同様にＭｅｔｈ　
−へ腫瘍細胞を皮下移植することによって処理した。

１群当たり５匹のマウスを用いた。移植から７日後に治
療を開始した。

アスピリンまたは実施例１のＴＮＦムティンを単独でま
たはアスピリンをＴＮＦムティンと共に静脈内投与を行
うプロトコールを用いた。組合せ群では、アスピリンを
毎日、５日間に亙って投与し、それぞれの投与から１〜
４時間後にＴＮＦを投与した。ＰＢＳをコントロールと
して用いた。

アスピリン３０■／　ｋｇの単回投与またはアスピリン
を一日１回５日間に互って投与した後、ＴＮＦ　２５０
ｊ１ｇ／ｋｇを投与したところ、アスピリン処理したマ
ウスの９／１０はＴＮＦで処理してから４８時間以内に
死亡した。対照的に、アスピリン単独では、毒性はなく
、ＴＮＦ単独では１１５のマウスが死亡した。

ＴＮＦの投与量を２５〜１５０μｇ／ｋｇ宿主体重に減
少し、その結果を表−５に示す。最終的測定は、処理を
開始してから１４日口重行った。見出しは、表−１の脚
注に定義されている。

表−５ Ｍ　　　　　　　　　　　　　　　ΔＢＷ　　　亡　　
ΔＴＷ　　ン、ｊ；ＪシＬ満３ζアスピリン（３０■／
ｋｇ）　　　　１．３４　　０１５　　６６．６　　０
１５Ｐ　Ｂ　Ｓ　　　　　　　　　　１．２５　０１５
　５４．２　０１５ＴＮＦ　（２５ｐｇ／ｋｇ）　　　
　　１．１５　０１５　２３．８　０１５＋アスピリン
（３０曙／ｋｇ）　　　１．１７　　１１５　　２３．
４　　０１５７ＮＦ（５０鱈／ｋｇ）　　　　　Ｌ、１
５　０１５　１１．３　１１５＋アスピリン（３０■／
ｋｇ）　　　１．１２　　０／４　　６．９　　３／４
７　Ｎ　Ｆ　（１００パ／　ｋｇ）　　　　　１．０６
　０１５　　３．２　２１５＋アスピリン（３０ｍｇ／
ｋｇ）　　　１．０９　　１１５　　５．６　　３／４
７ＮＦ（１５０ｇ／ｋｇ）　　　　　０．９８　０１５
　　１．５　０１５＋アスピリン（３０■／ｋｇ）　　
　１．１０　　３１５　　０．７　　１／２これらの結
果は、ＴＮＦ投与量が低い場合には、アスピリンで前処
理することによって、ＴＮＦの治療係数が増大する（す
なわち、効力が増加し、毒性は極わずかたけ増加する）
事を示す。事実、ΔＴＷによって測定した場合のＴＮＦ
単独での効力の増加は、アスピリン３０＊／ｋｇの存在
では５０Ｉｔｇ／ｋｇのＴＮＦにおいて、ファクターは
約２であり、更に、この組合せ群では、４匹の内３匹が
治癒したがＴＮＦ単独では５匹のうち治癒したのは１匹
だけであった。１５０μｇ／ｋｇでは、アスピリンを組
合せることによって毒性が強くなるが、効力はほとんど
変化しなかった。

雌Ｂａ１ｂ／ｃマウスを、実施例１と同様にＭｅｔｈ−
Ａ腫瘍細胞を皮下移植することによって処理した。

表−６は、ＮＤＧＡ　［シグマ・ケミカル・カンパニー
（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）製〕、アス
ピリン、ＮＤＧＡとアスピリンとの組合せ、実施例１の
ＴＮＦムティン単独およびＮＤＧＡおよびアスピリンと
にＴＮＦムティンを加えた各種組合せを、５匹のマウス
から成る群に、腫瘍を移植してから７日後に投与を開始
して、３日毎に３回継続した場合に得られる結果を示し
ている。これらのプロトコールの詳細は、表−６の脚注
に示されている。ＰＢＳを対照として用いた。結果を、
処理を開始してから１４日ロー評価した。見出しは、表
−１の脚注に定義されている。

表−６ 」　　　　　　　　　ΔＢＷ　　ΔＴＷ？、ハ。

ＴＮＦ”　　　　　　　　１．０４　２．０　０１５　
０１５＋アスピリンｂ１．０８　　３．６　　０１５　
　０１５＋ＮＤＧＡｃ　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１．０４　　　　　３．１　　　　０１５　　
　　０１５÷アスピリン＋ＮＤＧＡ　　　　１．０３　
　０．７　０１５　０１５アスピリン（３０■／ｋｇ）
’　　　１．２　　６０．３　　０１５　　０１５アス
ピリン（３０■／ｋｇ）　　　１．４　　４７．８　　
０１５　　０１５（５日日）＋ＮＤＧＡ　　（１５，６
＊／ｋｇ）’ＰＢＳ　　　　　　　　１．３　５０．４
　０１５　０１５１総での組合せについて、３日毎に３
回１１００ｐ／ｋｇずつ、静脈内投与。

ｂそれぞれのＴＮＦ投与の１時間前に３０ｇ／ｋｇを、
静脈内投与。

０それぞれのＴＮＦ投与の５分前に、プロピレングリコ
ール中３１２鱈　７２０ｇマウス（１５，６■／ｋｇ）
を投与。

″３日毎に３回、静脈内投与。

ａ３日毎に３回、腹腔内投与。

ｆアスピリンは、３日毎に３回、静脈内投与、ＮＤＧＡ
は、それぞれアス　ピリンを投与してから１時間後に腹
腔内投与。

ＮＤＧＡは５′−リポキシゲナーゼの代謝経路を抑制す
ることが知られており、ロイコトリエン合成およびそれ
による宿主中のロイコトリエンの産生に関連した毒性を
抑制することが考えられる。更に、ＮＤＧＡは幾つかの
場合に遊離基捕捉作用を有し、この作用もＴＮＦの毒性
を・減少さ廿ることが期待される。本発明の条件下での
正確な１機構は現時点では完全には知られていないが、
いずれか一方の効果またはこれらの効果がＴＮＦの毒性
を減少させる得ることを示唆する証明がなされている。

雌Ｒａ１ｂ／ｃマウスを、実施例１と同様にＭｅｔｈ　
−Ａｌｌ！Ｉｉｉ細胞を皮下移植することによって処理
した。

表−７は、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェ
ン、実施例１のＴＮＦムティンを単独で、およびアスピ
リン、インドメタシンまたはイブプロフェンを投与して
から２時間後にＴＮＦムティンを、１０匹のマウスおよ
び５匹のマウスの群に、腫瘍を移植してから７日後から
投与するときに得られる結果を示している。プロトコー
ルの詳細については、表−７の脚注を参照されたい。結
果をＴＧＩについては処理の開始後１４０目に評価し、
治癒データーについては、少なくとも２１日口重通常は
２８日口重評価した。ＴＧＩは腫瘍成長抑制であり、対
照の１４日ロー腫瘍の重量に対する１４日ロー処理され
た腫瘍の重量の百分率を１００から差し引いたものとし
て計算される。（例えば、処理された容積が３０であり
、コントロール容積が１２００であれば、比率は２．５
％であり、ＴＧＩ％は９７．５となる）、治癒数は、表
−１の脚注Ｃに定義されたものと同じである。

これらの結果から、３■／ｋｇのインドメタシンに対す
るＴＮＦのマウスに対する最適投与量は、約５０〜２０
０■／ｋｇ宿主重量（ヒトについては５０〜２００ｔｒ
ｇ／ｍ）であることが示される。ＴＮＦと組合せたイブ
プロフェンの効果は、ＴＮＦと組合せたアスピリンの効
果とほぼ等しい。これらの結果から、３０■／ｋｇ宿主
のアスピリンについて、ＴＮＦの最適投与量が確定され
る。

チャールス・リバー・ラプス（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖ
ｅｒＬａｂｓ）から購入したＣＤラットに、実施例１に
記載したＴＮＦムティン２００または４００ｐｇ／ｋｇ
を、１回、０時間に静脈内に注射した。更に、０時間に
おけるＴＮＦの静脈内投与の２４時間および１時間前に
、ＣＤラットにＮ−アセチルシステイン（シグマ（Ｓｉ
ｇｍａ））を２５０および１００ｍｇ／ｋｇ宿主で静脈
内注射した。表−８に示されるデークーは、２４時間以
内の死亡数／総処理ラット数である。

Ｎ−アセチルシステインを投与することによって、ＴＮ
Ｆの毒性が試験した総ての投与量で減少することが判る
。

Ｌユ ＴＮＦｉ性および効力に対するシクロオキシゲナーゼ１
鳴り剤の効果ＴＮＦ（５０ＪＩｇ／ｋｇ）”　　　Ｏ／
４０　　　　０　　　−　　　７５　　　　　３０＋Ｉ
ＮＤＯ’　　　　　Ｏ／２５　　　０　　−　　９４　
　　６８＋ＡｓＡｅＯ／３０　　　　０　　　−　　　
８６．５　　　　３５ＴＮｌ’ｉ　（１００死／ｋｇ）
’　　４／３５　　１１．４　１．５　９１．６　　６
５（１〜６） ＋１ＮＤＯ’　　　　　　　ｌ／２５　　　　４　　　
１　　　９５．３　　　　９２＋＾５Ａｃ２／２５　　
　　８　　　１　　　９３．３　　　　６０−数 ＋ＩＮロ０ｂ１４／２５５６１９９．５９１（１〜４） ＋ＩＢい　　　　　　２１／２５　　　　８４　　　１
　　　９９　　　　１００（１〜７） ＋ＡＳＡ’　　　　　　　３４／４０　　　　８５’　
　　１　　　９６　　　　　６７（１〜６） ＴＮＦ　（３００！ｊｇ／ｋｇ）”　　３３／４０　　
　　８２．５　　１　　　１００　　　　　６７（１〜
６） ＋１ＮＤＯ’　　　　　２４／２５　　　９６　　１　
　１００　　　　ｔｏ。

（１〜４） ＋　１１１１１ｂ′２５／２５　　１００　　１＋ＡＳ
Ａ’　　　　　　　３３／３５　　　　９４．３１　　
　９５　　　　１００（１〜５） ”ＴＮＦは３日毎に３回静脈内投与し、実験は６回行い
、２回の実験は１０匹のマウス／群で、４回の実験は５
匹のマウス／群とした。

ｂＴＮＦ投与の２時間前にインドメタシン（３■／ｋｇ
）を腹腔内に、３日毎に３回投与した。実験は３回行い
、２回の実験は１０匹のマウス／群で、１回の実験は５
匹のマウス／群で行った。

ゝ’ＴＮＦ投与の２時間前に、イブプロフェン（２０ｒ
ｒｇ　／　ｋｒ　）を、３日毎に３回、腹腔内に投与し
た。

’　ＴＮＦ投与の２時間前に、アスピリン（３０■／ｋ
ｉｒ）を、３日毎に３回、静脈内に投与した。実験は４
回行い、２回は１０匹のマウス／群で、２回は５匹のマ
ウス／群で行った。

４５回の実験を行い、２回は１０匹のマウス／群であり
、３回は５匹のマウス／群であった。

＠３回の実験を行い、２回は１０匹のマウス／′群で、
１回は５匹のマウス／群で行った。

１６回の実験を行い、２回は１０匹のマウス／群であり
、４回は５匹のマウス／群であった。

内毒素（Ｌ＾１．）：ＩＮＤＯ＝　＞０．１２／　＜　
１．２回ｇ／ｍ１（２００ｍ投与容積）、 ＩＢＵ＝　＜　０．２　ｎｇ／ａｌｌ、ＡＳＡ＝　＜０
．０１ｎａ／ａ＋Ｉ。

１ニエ ２４時間以内の死亡数／＆？２処理ラット数上記の効果
は、ＴＮＦ以外のリンフォカインまたは細胞毒素におい
て観察されると考えられる。

例えば、生物学的改質剤はＩＬ−２によって媒介される
殺腫瘍性活性において役割を果たしている。

各種１１ｆｉ蕩細胞の遊Ｍ基捕捉能の量とそれらのＴＮ
ＦおよびＩＬ−２の両者に対する感受性との間には明ら
かな関係が見られている６以下の実験で、ＩＬ−２がＴ
　Ｎ　Ｆと同様に有効であることを説明する。

ＩＪｆ！Ｊ　８．　Ｉ　Ｌ　−２トー（７）ｆｄ雌Ｂａ
１ｂ／ｃマウスを、実施例１と同様にＭｅｔｈ　−Ａｌ
ｌ！瘍細胞全細胞移植することによって処理した。

ｄｅｓ−ａｌａ＋−ＩＬ２−ｓｅｒ＋ｚｓ　（成熟ＩＬ
−２分子の１位にはアラニンがなく、成ｙＢ　ｔ　ｔ、
　−２分子の１２５位はセリンである）と命名されるＩ
Ｌ−２ムテインを、上記の米国特許第４，５１８，５８
４号明細書に記載の方法によって調製し、１９８６年１
２月３０日発行のＥ　Ｐ　２０６，８２８号明細書によ
る屈折体（ｒｅｆｒａｃｔｉｌｅｂｏｄｉｅｓ）から単
離し米国特許第４　、６０４　、３７７号明細書に記載
の方法でドデシル硫酸ナトリウムに配合した。　　ｄｅ
ｓ−ａｌａｌ−ＩＬ２−ｓｅｒ＋ｚｓという名称は成熟
天然［Ｌ−２配列の最初のアラニンがなく、成ｙ）天然
ｒＬ−２配列の１２５位におけるシスティン残基はセリ
ンによって置換されていることを示している。

表−９は、本明細書に記載されたＴＬ−２ムテイン単独
、尿酸単独、およびＩＬ−２ムテインと尿酸との各種組
合せの注射を、腫瘍の移植後７日日から始めて、１群５
匹のマウスに静脈内投与を行い、−口１回、５日間継続
し、ＩＬ−２と尿酸の両方を投与するときにはｒＬ−２
の投与の直前（約１０分前）に尿酸を投与する場合に得
られる結果を示している。最終的測定は１４日ロー行っ
た。賦形剤対照をｐｎｓと共に注射した。尿酸の投与量
は、総て２５■／ｋｇマウス重量であった。

見出しは、表−１の脚注に定義されている。

以−１に余白 、表二」− 賦形剤コントロール　１．１８　　０１５　　３０．５
　　０１５尿酸　　　　　　　　１．２９　　０１５　
　４２゜３　０１５ＩＬ−２（１，５■／　ｋｇ）　　
　　１．０８　　０１５　　１１．６　　０１５ＩＬ−
２（１，５ｍｇ／ｋｇ）　　　　１．１３　　０１５　
　１８．４　　０１５＋尿酸 ＩＬ−２（５，０＋ｗ／　ｋｇ）　　　　１．０７　　
０１５　　３．９　　０１５ＩＬ−２（５，０■／ｋｇ
）　　　　１．１１　　０１５　　８．１　　０１５＋
尿酸 これらの結果は、組合せてマウスを治療することにより
ＩＬ−２対照の毒性は減少するが、ＩＬ−２の効力は尿
酸と組合せるとほぼ半分になることを示している。この
効力の減少は、低いＴＮＦ投与量と尿酸とを用いて観察
される減少幅と同じである。治療をより長時間行い且つ
ＩＬ−２の投与量を増加させることによって、＋＋ｉ瘍
が治癒することが予測される。ヒトに用いられる好まし
い生物学的改質剤は、アスピリン、ビタミンＣ、ビタミ
ンＥ１イブプロフエン、インドメタシンおよびＮ−アセ
チルシステインである。ヒトに対しては、ＩＬ−２は典
型的には、１日当たり３Ｘ１０’単位／ｒｄの水準で投
与される。

本発明は下記の目的を達成するものである。第一に、ｉ
勇１１基を捕捉する宿主または腫瘍の能力は、例えばＢ
ＳＯとの組合せ治療によって減少し、”したがって宿主
についての腫瘍の治療係数が増加する。第二に、遊離基
産生によって引き起こされる宿主レヘルでの生物学的損
傷は、例えば前景によって媒介されるｉｕＭ基捕捉剤、
尿酸によって阻害される。第三に、脂質および水性分画
における反応性遊離基によって影響され且つこれらの反
応性ＭＨ基を生成するアラキドン酸塩カスケードの代謝
を調節して、リンフォカインまたは細胞毒素の治療係数
を増加させることができる。生物学的改質剤の有効量は
、ヒトの臨床治験を行うときにマウスのデーターからの
翻訳に基づいてヒトに就いて決定することができる。

要約すれば、本発明はリンフォカインまたは細胞毒素お
よび生物学的改質剤を組合せて、哺乳麦においてリンフ
ォカインまたは細胞毒素単独のζ合に比較して治療係数
を増強させるものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、遊離基の発生によって引き起こされる哺乳類宿主の
   生物学的損傷を治療または予防するために宿主に投与す
   るのに好適な組成物であって、薬理学的に有効量の哺乳
   類由来の少なくとも１種のリンフォカインまたは細胞毒
   素と、遊離基捕捉剤または代謝抑制剤から選択される少
   なくとも１種の生物学的改質剤を含んで成る組成物。 ２、前記リンフォカインまたは細胞毒素がインターロイ
   キン−２、インターフェロン−β、腫瘍壊死因子または
   コロニー刺激因子−１である、特許請求の範囲第１項記
   載の組成物。 ３、前記リンフォカインまたは細胞毒素が腫瘍壊死因子
   −αである、特許請求の範囲第１項または第２項記載の
   組成物。 ４、前記生物学的改質剤が尿酸、ブチオニンスルホキシ
   ミン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、Ｎ−アセチルシステイ
   ン、レチノイド、グルタチオン、メトロニダゾール、ア
   スピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ノルジヒ
   ドログアヤレチン酸、シス−８，１１，１４−エイコサ
   トリエン−５−イノン酸、合成プロスタグランジン、合
   成ロイコトリエンおよびこれらの改質剤の１種以上の組
   み合わせから選択される、特許請求の範囲第１〜３項の
   いずれか１項記載の組成物。 ５、前記リンフォカインがインターロイキン−２である
   、特許請求の範囲第１項、第２項または第４項のいずれ
   か１項記載の組成物。 ６、前記生物学的改質剤が尿酸であり、そしてインター
   ロイキン−２が天然インターロイキン−２分子の位置１
   ２５にセリン残基を有するデスアラニル、ムテインであ
   る、特許請求の範囲第５項記載の組成物。 ７、遊離基の発生によって惹起される哺乳類宿主に対す
   る生物学的損傷の治療または予防法において、宿主に薬
   理学的に有効量の哺乳類由来の少なくとも１種のリンフ
   ォカインまたは細胞毒素と、遊離基捕捉剤または代謝抑
   制剤から選択される少なくとも１種の生物学的改質剤を
   投与することを特徴とする方法。 ８、リンフォカインまたは細胞毒素と生物学的改質剤を
   別個に宿主に投与し、且つ生物学的改質剤を最初に投与
   する、特許請求の範囲第７項記載の方法。 ９、リンフォカインまたは細胞毒素がインターロイキン
   、インターフェロン、腫瘍壊死因子またはコロニー賦活
   因子からなる群から選択される、特許請求の範囲第７項
   または第８項記載の方法。 １０、治療される生物学的損傷が、癌、感染症または高
   酸素緊張、放射線療法もしくは化学療法によって惹起さ
   れる損傷である、特許請求の範囲第７〜９項のいずれか
   １項記載の方法。