JPS63185349A - 甘味誘導物質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） この発明は、甘味誘導物質の製造方法に関するものであ
る。さらに詳しくは、酸味を甘味に味覚を変える物質（
甘味誘導物Ｍ）を天然のミラクルフルーツから製造する
方法に関するものである。

（発明の背景） 西アフリカ原産のミラクルフルーツ（Ｒｉｃｈａｒｄｅ
ｌｌａ　　Ｄｕｌｃｉｆｉｃａ）には、これを口に含ん
でから酸味のものを味わうと甘く感じるという性質があ
る。

ミラクルフルーツのこの味覚を変える活性成分（味覚変
性物質）は分子量４０，０００前後の糖タンパク質であ
ることがすでに知られている。また、この糖タンパク質
に含まれる糖の割合はおよそ１０〜１５％前後であり、
糖の種類は、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−
キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−
グルコースであることが確認されている。

このミラクルフルーツの甘味発現の機構はいまだ解明さ
れていないが、ミラクルフルーツの果肉をあらかじめ酸
味物質と混ぜて一定時間放置したのち口に含んでも甘味
を示さないことから、ミラクルフルーツの活性成分であ
る七味誘導物質は、従来の甘味剤とは異なって、酸味そ
のものを甘味に変えるのではなく、活性成分が舌上皮の
４１味受容体と何らかの相互作用をすることにより七味
が発現すると考えられている。

このようなことからミラクルフルーツの１１味誘導物質
は新しいタイプの甘味剤として、特に、糖分の摂取を制
限されている人にも有効な甘味剤として期待されている
ものである。

しかしながら、この甘味誘導物質については、これまで
のところ純品として、高効率て取得することには成功し
ていない。この点が、利用上の大きな障害になっていた
。

ミラクルフルーツの■゛味誘導物質は、これまでは次の
ような抽出・精製の方法によって得られていた。

（１）凍結乾燥したミラクルフルーツの果肉を炭酸塩緩
衝液中でホモジナイズし、活性成分を抽出する。

（２）この抽出液に硫酸アンモニウムを加えて塩析する
。

（３）得られた沈澱をリン酸塩緩衝液に溶解し、透析に
より硫酸アンモニウムを除去する。

（４）得られた溶液を等電点電気泳動などによりＶｉ製
する。

しかしながら、」−記の（１）の処理から得らける抽出
液は濃い着色物質を含み、この着色不純物の除去はほと
んど不可能であった。さらにアルカリ条件下で抽出を行
うため、活性の一部が失われるという重大な欠点があっ
た。

（発明の目的） この発明は、以上のとおりの事情を鑑みてなされたもの
であり、従来の欠点を改善し、ミラクルフルーツから１
１゛味誘導物質を活性を失うことなく高純度に製造する
方法を提供することを目的としている。

（発明の開示） この発明の製造方法は、」−記の目的を実現するために
、まず最初にミラクルフルーツの果肉を洗液か着色しな
くなるまで水洗し、次いで塩化ナトリウム溶液で抽出す
ることを特徴としている。

すなわち、従来の方法では除去することのできなかった
抽出液中の着色物質を取り除くために、この発明の方法
においては、まず最初にミラクルフルーツの新鮮な、ま
たは乾燥した果肉を洗液が着色しなくなるまて水洗する
。ずなわぢ、ミラクルフルーツの凍結乾燥果肉に水を加
えてホモジナイズし、遠心分離する。この時上清は濃い
ピンク色を示す。この上清には酸味を甘味に変える活性
はない。このときの沈渣に当初と等量の水を加えてホモ
ジナイズし、遠心分離する。この操作を」−清が無色に
なるまで繰り返す。無色となったときの上清にも活性は
ない。

次に塩化すｌ〜リウム溶液を用いて抽出する。すなわち
、水洗操作て上清が無色となったときの沈渣に塩化すｌ
〜リウム溶液を加えてホモジナイズし、遠心分離する。

中性付近での抽出のなめ、得らる抽出液は活性を失うこ
となく高活性を示す。

抽出液の精製は、抽出液を硫酸アンモニウムで塩析した
のち、通常のクロマトグラフ法によって行うことができ
る。たとえば、塩析で得られた沈澱をＣＭ−セファロー
スイオン交換クロマトグラフィーにかけ、さらにアフィ
ニティークロマトグラフィーにより精製する。

以」二の方法により、極めて高純度の活性物質が得られ
る。この物質は、全く新しいタイプの甘味物質として、
食品、医薬品などに応用されるもので、この発明の方法
によって、その実用化は一層加速される。

−５＝ 次に、実施例を示してさらに詳しくこの発明を説明する
。尚、この発明は以下の実施例に限定されるものではな
い。

実施例 （１）水洗および塩化ナトリウム溶液による抽出ミラク
ルフルーツの凍結乾燥果肉５ｇをとり、４０ｃｃの水を
加えてホモジナイズし、遠心分離（１２，５００ｒｐＩ
Ｉ、２０分間）した。このとき上清は濃いピンク色を呈
し、これには酸味を甘味に変える活性はなかった。この
沈渣に４０ｃｃの水を加えてホモジナイズし、遠心分離
（１２，５００ｒｐｌ、２０分間）する。この操作を５
回繰返した。これによって得られ上清は無色となったが
、この上清には味覚を変更する活性はなかった。

無色となったときの沈渣に４０ｃｃの０．５Ｍ塩化す１
〜リウム溶液を加えてホモジナイズし、遠心分離（１２
，５００ｒｐｍ　、２０分間）した。これによりえちれ
た上清は無色で、味覚を変更する活性を示した。４０ｃ
ｃの０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液による抽出操作を３回
繰返し、３回分の上清を合わせた。

（２＞Ｊｉｆｆ酸アンモニウムによる塩析上記の操作を
４回繰返して行って得られた抽出液約４００ｃｃに４０
％飽和になるように硫酸アンモニウムを加え、活性物質
を析出させた。遠心分離（１３，０００ｒｐｌ、２０分
間）して得た沈澱を水に溶かし、限外濾過することによ
りアンモニウム塩を除去したのち、凍結乾燥した。

（３）ＣＭ−セファロースイオン交換クロマトグラフィ
ー 凍結乾燥物を１５ＣＣの０．５Ｍ塩化ナトリウム溶液に
溶かし、３倍員のリン酸ｗＬ衝液（ｐＨ６゜８）を加え
た。あらかじめ十分にリン１１２緩衝液により平衡化し
たＣＭ−セファロースカラムにのせた。次いで、最初に
リン酸緩衝液（ｐＨ６，８＞で十分溶出した後、塩化ナ
トリウム溶液０〜１゜０Ｍのリニアグラジェントで溶出
した（流速５ｃｃ／　１５　ｎｉｎ　、１分画５ｃｃ、
全溶出液量４００ＣＣ）。その結果を示したものが第１
図である。この第１図のピーク（Ａ）が甘味誘導活性物
質である。

（４）アフィニティークロマトグラフィー上記のピーク
（Ａ）の部分（分画番号７９〜９２）を、限外濾過で１
０ｃｃに濃縮し、さらに溶媒を０．５Ｍ塩化ナトリウム
を含む０．０１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ６，８）に溶媒
置換した。この濃縮液をＣｏｎＡ−セファロース４Ｂカ
ラムにより処理した。はじめに０８５Ｍ塩化ナトリウム
を含むＯ，０１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ６，８＞で洗い
、ついでα−メチル−α−Ｄ−グルコシド溶液０〜０．
１５Ｍのリニアグラジェントで溶出した（流速３ｃｃ／
　１４ｎｉｎ　、全溶出液量２００ｃｃ）。

その結果を示したものが第２図である。この第２図にお
いて、ピーク（Ａ）−ｎが活性物質である。ピーク（Ａ
）−Ｉは活性を示さない。

（５）高速液体クロマトクラフィー 活性物質（ピーク（Ａ）−ｍ）の純度を高速流体クロマ
トグラフィーを用いて確認した。

第２図のピーク（Ａ）　−ＩＩ　（分画番号４０〜５１
）をそれぞれプールし、高速液体クロマトグラフィーに
よりその純度を確認した。

カラムはＴＭＳ−２００を用い、アセトニトリル−Ｈ２
０系２０〜７０％のリニアグラジェントで溶出した。

その結果、第３図に示すように、鋭い単一ピークを示し
、きわめて純度が高いことが確認できた。

【図面の簡単な説明】 第１図は、ミラクルフルーツから水洗、抽出、塩析操作
によって得た甘味誘導物質のＣＭ−セファロースイオン
交換クロマトグラムである。 第２図は、第１図のピーク（Ａ）部分（分画番号７９〜
９２）をＣｏｎＡ−セファロース４Ｂカラムにより処理
したアフィニティークロマトグラムである。 第３図は、第２図のピーク（Ａ）−Ｉ［部分く分画番号
４０〜５１）の高速液体クロマトグラムである。 代理人　弁護士　　杉　　　浦　　　宏復代理人　弁理
士　　西　　澤　　利　　夫第　　２　　図 分　　画　　番　　号 第　　３　　図 手続補正書（自発） 昭和６２年　３月１２日 昭和６１年特　許願第２８９６１６号 ２、発明の名称 甘味誘導物質の製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 ４、復代理人　（郵便番号１５０） 東京都渋谷区渋谷ｌ−８−１３ ＧＳハイム宮益坂９０３号 （３）図　　面 ６、補正の内容 （１）願書の特許出願人の欄を別紙の通り補正する。 （２）明細書第３頁第１７行目の「得らける」を「得ら
れるｊに補正する。 （３）同第４頁第１９行目および第２０行目、第５頁第
２〜３行目および第４行目、第６頁第９行目、第１３行
目、第１４行目、第１８行目および第２０行目の「上清
」を、「上澄」に補正する。 （４）同第６頁第１３行目の「得られ」を「得られた」
に補正する。 （５）図面の第１図および第２図を別紙の通り補正する
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ミラクルフルーツの果肉を洗液が着色しなくなるまで水
   洗し、次いで塩化ナトリウム溶液で抽出することを特徴
   とする甘味誘導物質の製造方法。