JPS63183585A - ブリオスタチン類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は海産資源からブリオスタチン９，１０゜１１．
１２及び１２と命名されるブリオスタチン１ｉ［（Ｂｒ
ｙｏｓｔａｔｉｎｓ）を単離させ精製することに関し、
そしてこれらの単離物がＰ３８８リンパ細胞白血病やそ
の他のＮＣＩテスト系に対し実質的な細胞成長抑制及び
抗新生物活性を示すという発見に関するものである。

本発明のブリオスタチン類は次の一般的化学構造をもつ
。

ま ただしＲ＋　＝Ｃ０Ｃ）Ｉｆｆ；　　Ｃ０ＣＨｚＣＨｔ
ＣＨａ　；又は−ＣＯＣ）ＩｚＣＨ（ＣＨｉ）ｚ　　；
そしてＲｚ　　＝　　Ｈ，０ＣＯＣＨｚｉ 又は−〇ＧＯ（ＣＩ）　ａ　（ＣＴｏ）　ｚＣＨｓ　。

（従来の技術） 化石の記録はブリオゾア（Ｂｒｙｏｚｏａ）門の発生に
おける多くの大異変と多量の古い個体が絶滅したことを
示す。

４０００プラス現存種は、高度に発達した生き残り機構
を極めて競走的な動物群に与える。たぶんそれらの一般
に平凡な外観と、海草やヒドロ虫やサンゴと誤られやす
さの故に１、これらの「コケ動物」（ｍｏｓｓ　ａｎｉ
ｍａｌｓ）にあまり生物学的や化学的に研究されなかっ
た。

本発明者らは以前に海産のコケムシ（ｂｒｙｏｚｏａｎ
）動物たるＢｕｇｕｌａ　ｎｅｒｉｔｉｎａ（リンネ）
の抽出物が合衆国国立ガン研究所（ＭＣＩ）のネズミ科
動物Ｐ３８８リンパ細胞白血病（ＰＳ系）に対し例外的
な抗新生物活性（１００％延命）をもつことを見出した
ので、その成分についてさらに研究を進めてきた。１４
年の後に我々は、低用量で極めて有効な新規の抗腫瘍物
質の一群と希望するところの最初のものであるところの
ブリオスタチン１の単離とＸ−線結凸構造を報告するこ
とができた。次いで我々は、著しい抗新生物活性（１ｏ
ｎｇ／ｋｇの用量レベルでＰＳを阻止する）をもつこと
がわかった他のタイプのブリオスタチン１及び４を発見
した。同じころ他のブリオスタチン類は多少の抗菌、抗
カビ又は抗藻作用をもつ新規のピロール、インドール、
キノリン及びプリン系の海産アルカロイドであり、また
他のものは受精したウニの卵細胞の分裂を阻止すること
を見出した。

一つ又はそれ以上の種類のガンの治療のために種々の天
然の及び合成可能物質を見出し決定する努力を続けるう
ちに、公知の化学療法剤に伴う重篤な副作用を完全に除
去できぬまでも実質的に最小にする一方で抗新生物活性
をもつ新規物質を単離し同定する試みのちとに、研究者
は天然の花や動物群を観察しつづけた。

この研究をさらに進めているうちに、今まで取り上げな
かった海産種を、もし成分が単離され＼ば抗新生物活性
があるかどうかの研究の対照とした。

（本発明の目的） したがって本発明の第一の目的は、１つ又はそれ以上の
タイプの癌の遅延又は寛解に有用な新しい薬剤を提供す
ることである。

本発明の他の目的は、人間宿主に生起する１つ又はそれ
以上のタイプの癌の治療に容易かつ有用に使用されるよ
うな形態で、海産物から抗新生物物質を単離する方法を
提供することである。

本発明のさらに別の目的は海産資源から新規な２０−デ
ソキシプリオスタチン類を単離し同定するユニークな手
段と方法を提供することである。

（発明の要旨） 生物学的に活性のＢｕｇｕｌａ　ｎｅｒｉｔｉｎａを引
続き研究したところ、こ＼にブリオスタチン９，１０．
。

１１．１２及び１３とよばれる５種の新しいブリオスタ
チン類が見出された。ブリオスタチン１０゜１１及び１
３は２０−デソキシブリオスタチンとよふところの新し
いブリオスタチン類である。このうちブリオスタチン９
は以下に述べるように合衆国国立癌研究所Ｐ３８８リン
パ細胞白血病（ＰＳ系）の生長を顕著に阻止（８ｏｎｇ
／ｋｇで４０％延命率ＰＳ　ＥＤ、ｏ−１，２ｘｌＯ−
’μｇ／ｍｆｆ）する。

ブリオスタチン１０及び１１は、それぞれＥＤＳ。

＝　７．６Ｘ１０−’及び１．８　Ｘ　１０−’μｇ／
−でｐｓ細胞系統生長阻止を示してｐｓ白血病に著しい
活性を示し、たとえばそれぞれ１ｏｎｇ／ｋｇで生体内
成長を阻止し９２．５μｇ／ｋｇで６４％阻止する。一
方ブリオスタチン１２と１３はまたＥＤｓｏでＰＳ白血
病細胞系統に有意の活性（’ｒ１２Ｊでは３０〜５０μ
ｇ／ｋｇで４７−６８％延命で０．０１４μｇ／■ｉ　
「１３　ＪではＥＤｓ。は０．００５４μｇ／−）を示
す。

（生物の記述） Ｅｃｔｏｐｒｏｃｔａ門の海産動物（通常はＢｒｙｏｚ
ｏａ又はＰｏ１ｙｚｏａとよばれる）は群体濾過撮食者
でその各々（細土）は別々の単位（主室）”中で囲まれ
ている。′その外観からコケムシ網（ｂｒｙｏｚｏａ）
はふつうコケムシ（ｓｅａ　ｌｌ１ａｔｓ）とか偽サン
ゴとして知られている。

Ｂｕｇｕｌａ　ｎｅｒｉｔｉｎａはコケのようなコケム
シとして広く分布し船体に付着することでよく知られて
いる。

Ｂ、ｎｅｒｉｔｉｎａやその他の海産コケムシ類はＪ、
Ｈ。

Ｄａｙの＠Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｌｉ
ｆｅ　ｏｎ　５ｏｕｔｈ　Ａｆｒｉ−ｃａｎ　５ｈｏｒ
ｅｓ　”　（Ｂａｌｋｅｍａ、＾、八へケープタウン、
　１９７４年、　ｐ、　１２３）及びＰ、Ｈ，Ｂｅｎ５
ｏｎ及びＲ，Ｗ、ＭｏｎｃｒｅｉｆｆのＴｈｅ　Ｅｆｆ
ｅｃｔｓ　ｑｆ　Ｚｉｎｃ　ａｎｄ　ｐＨｏｎ　Ｌａｒ
ｖａｌ　Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｍ
ｍｏｎ　Ｆｏｕｌｉｎｇ　Ｏｒｇａｎｉｓｍ＋　Ｂｕｇ
ｕｌａｎｅｒｉｔｉｎａ　”　Ｃｏｍｐｔ、Ｒｅｒｌｄ
、ｄｕ　Ｃｏｎｔｒｅｓ、　Ｉｎ’ｔｅｒｎ、ａｔｉｏ
ｎａｌｄｅ　ｌａ　Ｃｏｒｒｏｓｉｏｎ　Ｍａｒｉｎ−
ｅ　ｅｔ　ｄｅ　Ｓ’ａｌｉｉｓｓｕｒｅ←４ｊｈＡｎ
ｔｉｂｅｓ　ａｎｄ　Ｊｕａｎ−１ｅ−ＰｉｎｓｔＦｒ
、　７月１４−１８日、１９７６年に記載がある。

（生物の生息地）　　　　　　　　　　′構造決定のた
めに必要な量のブリオスタチン類はメキシコ湾（フロリ
ダ州、アリゲーター港）で５０ｋｇ（湿量）及びカルフ
ォルニアの沿岸地域で１０００ｋｇ　（湿量）のＢ、’
　ｎｅｒｉｔｉｎａのサンプルがら単離した。それらは
干潮時水面下０〜２メートルのところから採取した。こ
の生物を採取した他の場所としては日本の東京溝（北緯
３５°、東経１４０”）及びメキシコのシナロア近辺地
がある。

これら３カ所からのＢ、　ｎｅｒｉｔｉｎａの抽出物は
すべて抗新生物活性をもっていた。

（ブリオスタチン類の単離と精製） Ｂ、　ｎｅｒｉｔｉｎａのサンプルからブリオスタチン
類を単離し精製するために、たとえば溶媒抽出、分別ク
ロマト、シリカゲルクロマト、クレーブ装置における液
液分配、樹脂吸着及び溶媒による結晶化を含むいろんな
方法が用いられた。

選択された単離及び精製法はその各々の段階で次に掲げ
られている試験管内及び生体内の抗腫瘍テストによって
監視した。すなわちＲ，１，Ｇｅｒａｎ＋Ｎ、）１．Ｇ
ｒｅｅｎｂｅｒｇ、Ｍ、Ｍ、ＭａｃＤｏｎａｌｄ、Ａ、
Ｍ、Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ及びＢ、Ｓ、Ａｂｂｏｔ：Ｃ
ａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、Ｒｅｐｔ、第３部、
第３巻、　１−１０３（１９７２）；及びＪ、Ｍ、Ｓｃ
ｈｍｉｄｔ及びＧ、Ｒ。

Ｐｅｔｔｉｔ：Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ　１９７８，３
４：６５９−６６０．そのようなテストには培地中での
腫瘍細胞の生長阻害に必要な活性物質の濃度（たとえば
５０％生長阻止必要濃度すなわちＥＤＳ。）及び転移腫
瘍担持マウスの延命に必要な活性物質の用量の決定など
が含まれる。本発明のブリオスタチン類の化学構造は下
記１工 の如くであり、物性はそれぞれの実施例にて述べる。

ブリオスタチン１０　Ｃ３Ｃ−ＮＭＲによる）１Ｊ４　
　　　１．１Ｘ１ こ＼に述べるブリオスタチン類は遊離の水酸基と置換し
うるアシル基をもっており、それによって新規化合物の
いろんなアシルエステルが公知方法で合成できる。ブリ
オスタチン類のアシル誘導体は母体化合物と同様の生物
活性をもっている。

ブリオスタチン９，１０，１１．１２及び１３のアシル
化に用いうる酸は例えば次のようなものである。

（ａ）　　飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖の脂肪族
カルボン酸、たとえば酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ
酪酸、ターシャリブチル酢酸、吉草酸、イソ吉草酸、カ
プロン酸、カプリル酸、デカン酸、ドデカン酸、ラウリ
ン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、
パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アクリル
酸、クロトン酸、ウンデシレン酸、オレイン酸、ヘキシ
ン酸、ヘプチン酸、オクチン酸、等々 （ｂｌ　　飽和又は不飽和の脂環式カルボン酸、たとえ
ばシクロブタンカルボン酸、シクロベンクンカルボン酸
、シクロペンテンカルボン酸、メチルシフ６ ク ロペンテンカルボン ン酸、ジメチルシクロヘキサンカルボン酸、ジプロピル
シクロヘキサンカルボン酸、等々（Ｃｌ　　飽和又は不
飽和の、脂環式脂肪族カルボン酸、たとえばシクロベン
クン酢酸、シクロベンクンプロピオン酸、シクロヘキサ
ン酢酸、シクロヘキサン酪酸、メチルシクロヘキサン酢
酸、等々（ｄ）　　芳香族カルボン酸、たとえば安息香
酸、トルイル酸、ナフトエ酸、エチル安息香酸、イソブ
チル安息香酸、メチルブチル安息香酸、等々（ｅｌ　　
芳香族−脂肪族カルボン酸、たとえばフェニル酢酸、フ
ェニルプロピオン酸、フェニル吉草酸、桂皮酸、フェニ
ルプロピオル酸、ナフチル酢酸、等々適当なハロ、ニト
ロ、ヒドロキシ、ケト、アミノ、シアノ、チオシアノ及
び低級アルコキシ炭化水素カルボン酸は、１つ又はそれ
以上のハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、ケト、アミノ、
シアノ又はチオシアノ又は低級アルコキシ（好ましくは
６コ以下の炭素原子をもつ低級アルコキシ、たとえばメ
トキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、アミロキシ
、ヘキシロキシ及びそれらの異性体）で置換された炭化
水素カルボン酸を含む。

そのような置換炭化水素カルボン酸の例は次のようであ
る。モノ、ジ及びトリクロロ酢酸；α−及びβ−クロロ
プロピオン酸；α−及びγ−ブロモ酪酸；α−及びδ−
ヨード吉草酸；メバロン酸；２−及び４−クロロシクロ
ヘキサンカルボン酸；シキミ酸；２−ニトロ−１−メチ
ルシクロブタンカルボン酸；　１．２，３，４．５’、
６−へキサクロロシクロヘキサンカルボン酸；３−ブロ
モ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸；４−及び５
−ブロモ−２−メチル−シクロヘキサンカルボン酸；５
−及び６−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン
酸；２１３−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカル
ボン酸；２，５−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサン
カルボン酸；４，５−ジブロモ−２−メチルシクロヘキ
サンカルボン酸；３−ブロモ−３−メチルシクロヘキサ
ンカルボン酸；６−ブロモー３−メチルシクロヘキサン
カルボン酸；Ｌ６−ジプロモー３−メチルシクロヘキサ
ンカルボン酸；２−ブロモ−４−メチルシクロヘキサン
カルボン酸；１，２−ジブロモ−４−メチルシクロヘキ
サンカルボン酸；３−ブロモ−２，２，３−トリメチル
シクロベンクンカルボン酸；１−ブロモ−３，５−ジメ
チルシクロヘキサンカルボン酸；ホモゲンチス酸；ｏ−
，ｍ−及びｐ−クロロ安息香酸；アニス酸：サリケル酸
；ｐ−ヒドロキシ安息香酸；ｐ−レゾルシル酸；没食子
酸；ベラトリン酸；トリメトキシ安息香酸ニトリメトキ
シ桂皮酸；４，４’−ジクロロベンジリン酸；ｏ−、ｍ
−及びｐ−ニトロ安息香酸；シアノ酢酸；３．４−及び
３，５−ジニトロ安息香酸ｉ２，４．６−　）リニトロ
安息香酸；チオシアノ安息香酸；シアノプロピオン酸；
乳酸；エトキシ義酸（水素炭酸エチル）；リンゴ酸；ク
エン酸；イソクエン酸；６−メチルサリケル酸；マンデ
ル酸；レブリン酸；ピルビン酸；グリシン；アラミン；
バリン；イソロイシン；ロイシン；フェニルアラニン；
プロリン；セリン；スレオニン；チロシン；ヒドロキシ
フ゛ロソン；オルニチン；リジン；アルギニン；ヒスチ
ジン；ヒドロキシリジン；フェニルグリシン；ｐ−アミ
ノ安息香酸；ｍ−アミノ安息香酸；アントラニル酸；ア
スパラギン酸；グルタミン酸；アミノアジピン酸；グル
タミン；アスパラギン；等々。

本発明の理解をさらに助けるために、但し限定するため
ではなしに以下に実施例を掲げる。

笑旌斑上 （−膜製法）クロマトに使用する溶媒は再蒸留する。ゲ
ル浸透や分別クロマトに用いるセファデックスＬ）ｌ−
２０（２５−１００）はスウェーデン、ブラウサのＰｈ
ａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　ＡＢ
から入手のものを使用した。他の大気圧カラムクロマト
分離はＥ、メルク社（ダルムシュタット）から提供され
る。ローバーサイズＢシリカ６０　（４０〜６３μ）又
はシリカゲル６０　（７０−２３０μ）で行った。フラ
クションを集めるためにギルフンＵＶモニター（モデル
ＨＭ）及びギルソンのマイクロフラクショネーターを用
いた。

イギリスのチェシャーのＨＰＬＣテクノロジー社製造の
チクシル−１０Ｍ−Ｃ−１８逆相吸着剤（フェノメネソ
クス）で包まれたＨＰＬＣカラム（１０鶴ＩＤ　Ｘ　５
００．ぺンシルバニア州ベルフォントのサペルコ社、）
　ヲ最終精製に使用した。ＨＰＬＣカラムはアキランフ
１０コントローラ及び二つのアルテックス（モデルｌｌ
０Ａ）ポンプに面している。分析薄膜クロマト用の層シ
リカゲル板（Ｆ２５４；０．５及び０．２５＊ｎの層）
及びシリカゲルＧＦ単板はそれぞれＥ、メルク社及びプ
ラウエア州ニューアークのアルテック社製のものである
。薄層クロマトグラムは短波長紫外線でみるか又は／及
びアニスアルデヒド−酢酸−硫ｆｉｌ（１：９７：２）
スプレー試薬で展開し、次いで約１５０℃に５−１０分
加熱した。

ＨＰ　−７２２５Ａプロツタ一つきのヒユーレット・パ
ラカード８４５０υＶ／ＶＩＳ分光光度計を使用して紫
外スペクトルを得た。旋光度はパーキン・エルマー２４
１可変波長偏光計で測定した。赤外スペクトルはニコレ
ＦＴＩＲ（モデルＭＸ−１）器を用いて記録した。

すべてのＳＰ　−ＳＩＭＳ質量スペクトルはＶＧ分析Ｍ
Ｍ２ＡＢ−２Ｆ質量分光計を用いて得た。高分解度の測
定に際しては、サンプルをヨードカリ含有の２−ヒドロ
キシエチル・ジサルファイドに溶解した。

ＮＭＲスペクトルは、Ｈ−及びＣ−ＮＭＲ測定のために
はそれぞれ４００．１３ＭＨ２及び１００．６２ＭＨｚ
で作動する、ＡＳＰＩＩＩＣＴ３ＱＯＯ電算機及びパル
ス・プログラマ一つきのブルーカーＡＭ　−４００ナロ
ウ・ボア分光計で測定した。

大施班遣 カルフォルニア湾、Ｂ、ｎｅｒｉｔｉｎａＢ、　ｎｅｒ
ｉｔｉｎａ　１２．５ｋｇ　（湿重量）　（１９８２年
１月にメキシコのバヒア・キノ・ソノラにて採集）をま
ず２−プロパツールで抽出し次いで既述のようにメチレ
ンクロリド・メタノール（１：　１）で抽出した。２−
プロパツール保存液から製したメチレンクロリド抽出物
は５０．９ｇの分画を、そして水相は１８１．９　ｇの
分画を与えた。メチレンクロリド・メタノール（１：　
１）抽出物から製したところの対応するメチレンクロリ
ド及び水分面はそれぞれ２１．５　ｇ及び８０．１ｇで
あった。双方のメチレンクロリド抽出物はＰ３８８リン
パ細胞白血病に対し顕著に活性を示し、前者はＴ／Ｃ１
４１−１６８（６，２５−２５■／　ｋｇ　）とＥＤｓ
。３．４μｇ／−であり、後者はＴ／Ｃ１４１−１７０
（６，２２５−２５ｎ／　ｋｇ）とＥＤｓｏ　４．８μ
ｇ／−であった。

両方のメチレンクロリド分画を合併し、メタノール−水
（９：１）に溶解し、ヘキサンで抽出する。メタノール
−水溶液を４：１に希釈し四塩化炭素で再抽出する。得
られたヘキサン（３８，４ｇ　）、四塩化炭素（１４，
５ｇ　）及び４：１メタノール−水（１３，６ｇ　）分
画を生物学的評価に付したところ、四塩化炭素分画が濃
縮ｐｓ活性（３■／　ｋｇでＴ／Ｃ１５５−１６１，Ｅ
Ｄ５゜２．０ｇｇ／−）成分を含有していることがわか
った。

尖膚Ｕ潰走 （ブリオスタチン９の単離） 単離されたブリオスタチン９は無色針状晶、融点１５９
−１６２℃、〔α）　ｎ”＋８７．３１　（Ｃ＝　０．
４゜Ｃ）１．ＯＨ）、ＵＶλｍａｘ（ＣＨａＯＨ）２２
９ｎｍ（ξ３６，２００）　、ｉｒｒｍａｘ（ＫＢｒ）
　３４６５．３４４０　、２９７５　２９４０．１７３
５．１７２５゜１６５５−１６４５．１４４０．１３８
０．１３６５．１２９０．１２４０．１１６０゜１１０
０．１０８０．１０７０．１０４５．１０００及び８７
０　ｃｍ−’＋　５ｐ−ｓｉｒｎｓ　：　　ｍ／ｚ　８
７５　（Ｍ＋Ｎａ）　”　、８７５　（Ｍ＋Ｎａ　−１
８）　”　、８４３　［Ｍ＋Ｎａ　−３２）　”　、８
３３　（Ｍ＋Ｎａ　−４２）　”　。

８１７　（Ｍ＋Ｎａ　−５８）　”　、８１５　（Ｍ＋
Ｎａ　−６０）　”　、及び７８７　（Ｍ＋Ｎａ　　８
８）　”　。

（ブリオスタチン９のアセチル化） ブリオスタチン９　（１，２■）を無水酢酸０．１−及
びピリジン０．１５−と室温で４時間処理してアセチル
化した。粗製物をメタノール−水（５０：５０〜９０：
１０）でｆｌＰＬｃ逆相カラム（Ｃ−１８）クロマト処
理して、０．７■のアセテートを得た。メチレンクロリ
ド−メタノールから融点１５５−１９２℃の無色針状晶
となる。〔α）ｎ　”　　９５．７０（Ｃ＝０．０５．
　ＣＨ３０Ｈ）、ＵＶλ（ＣＨｓＯＨ）２２８ｎｍ　（
ξ３５．５００）ｉｒｒｍａｘ（ＫＢｒ）　３４６５　
、２９８０−２９５０．１７４０．１７２５　。

１６５５−１６４０．１４３８．１３７５．１３６５．
１２８５．１２４０　。

１１６０．１１００．１０８５．１０７０．１０４８．
１０００　ａｎｄ　８７５ｃ１＋１−’、　　Ｓｐ−５
１ｍ５　　：　　　ｍ／ｚ　　９１７　　（Ｍ＋ＮＡ）
　　”　　＋（Ｍ＋８９４、ＣＨＯ）、８９９　（Ｍ＋
Ｎａ−１８３”　、８８５　（Ｍ＋Ｎａ　−３２）　”
８７５　　（Ｍ＋Ｎａ　−４２）　”　、８７３　（Ｍ
＋Ｎａ　−４４）　、８７１（Ｍ＋Ｎａ−４６）　”　
、８５９　（Ｍ＋Ｎａ　−５８）　”　、８５７　（Ｍ
＋Ｎａ−６０）　”　、８２９　（Ｍ＋Ｎａ　−８８）
　”　、ＴＬＣ：　Ｒｆｏ、３１　（ブリオスタチン６
アセテートのＲｆ：０．３７．　　ｎ−ヘキサン−アセ
トン−（７：　３．　シリカゲル）使用〕大施孤（ （ブリオスタチン１０及び１１の単離）メチレンクロリ
ド中のＢ、ｎｅｒｉｔｉｎａから製した四塩化炭素分画
（１４，５ｇ　）溶液を、９９：１〜１：１の勾配のメ
チレンクロリド−メタノールを用いてのシリカゲルの乾
燥カラム（３，８Ｘ１００　ｃ＋ｎ）でクロマト処理し
た。ＥＤ５ｏ　１．１ｘｌＯ−’μｇ／−でかつ２００
−８００ｇｇ／−でＰＳ　Ｔ／Ｃ１３０−１５８のフラ
クション０．２９１　ｇを、シリカゲル上でメチレンク
ロリド−メタノール−水（９０：１０：０．８）を用い
ての薄膜クロマト及びＰＳバイオアッセイによる詳細な
単離のために選択した。アニスアルデヒド−酢酸試薬に
よる噴霧及び加熱により、ブリオスタチンは赤味がかっ
た紫色を呈した。

上記分画から次の処理をする最も効果的にブリオスタチ
ン９．１０及び１１を単離することができた。すなわち
ｐｓ活性分画０．２９１ｇを、まず１：１→９：１メタ
ノール−水勾配による逆相、次いで酢酸エチル−ヘプタ
ン−メタノール−水（１５０：　３５０　：　３　：０
．３）による正常相を用いてのＨＰＬＣをひきつづいて
行い注意深く単離する。ブリオスタチン１０と１１を含
む活性分画（７４■）が多成分（７：３ヘキサン−アセ
トン及び４：６ヘキサンー酢酸エチルによるＴＬＣによ
る）無晶形粉末として得られる。これら新規なブリオス
タチン類は、まず５：１→ｔｉｔ勾配のヘキサン−アセ
トンで、そして３：１→１：２勾配のヘキサン−酢酸エ
チルを用いてシリカゲルカラムクロマトにより更に濃縮
する。いずれの場合も乾燥カラム（１，ＯＸ６０ｃｍ）
カラムの技術を用いる。ブリオスタチン１０と１１の最
終単離と精製は、１：１−９７１勾配のメタノール−水
を２．Ｍ／分の流量で逆相ＨＰＬＣを行って達成される
。各成分の最終精製も同様にして行う。この手段により
、ブリオスタチン４　（１２，３ｇ）　、ブリオスタチ
ン５　（３，０■）、ブリオスタチン６　（２，８■）
、ブリオスタチン７　（０，６■）、ブリオスタチン８
　（０，５■）、ブリオスタチン１０　（９，２■、　
８　Ｘｌ０−７％収率）及びブリオスタチン１１と９の
分離し難い混合物（２，０■）を得た。

メキシコ湾で採取したＢ、ｎｅｒｉｔｉｎａの５０ｋｇ
（湿重量）に同じ方法を用いてブリオスタチン１０を３
３．４■（７Ｘ１０−７％収率）及びブリオスタチン１
１を８．１■（２Ｘ１０−’％収率）を純品（下記参照
）として得た。

実施例５　（ブリオスタチン１０） メチレンクロライド−メタノールから再結晶したブリオ
スタチン１０の分析用サンプルの性状は次のとおり。板
状晶、融点１６１−１６４℃；シリカゲルＴＬＣＲｆｏ
、４１　（７：　３のヘキサン−アセトン）、０．５８
（１：１のヘキサン−酢酸エチル）及び０．２７　（逆
相、４：１のメタノール−水）；旧（ＳＰ−５ＨＭＳ）
Ｍ”　８０８　Ｃ４□Ｈ６４０＋５　、スルホラン中ヨ
ウ化ナトリウムで、（ｍ／ｚ）８３１．４１３４（ＣＭ
＋Ｎａ）　”　。

ＣｔｚＨｂａＯ＋　ｓＮａとしての計算値：　８３１．
４１４３）　、８１３（Ｍ＋Ｎａ−ＩＵ　”　、７９９
　（Ｍ＋Ｎａ−３２３”　、７７３　（Ｍ＋Ｎａ−５８
）　”　、　７４１　　（Ｍ＋Ｎａ−９０）　”及び７
２９（Ｍ＋Ｎａ−１０２）“、スルホラン中テトラフ・
ノ化ホウ酸銀で、９１５及び９１７　（Ｍ＋Ａｇｌ０７
及びＨ＋Ａｇｌ０９１　”　、　８８７及び８９９　（
Ｍ十へｇ同位元素−１８〕“及び８７９，８８１　ＣＭ
＋八へ同位元素−３６〕“　；（α）　Ｄ　”＋９９．
８°（ＣＯ，０４、ＣＨ３０）１）　　ｉ　ＵＶ（ＣＩ
（ｆｆｏ）ｌ）λｍａｘ２２９　（６３６，２００）　
　；　ＩＲ（ＫＢｒ）’３４７０．２９８０−２９４５
．１７２０．１６５０．１６４５．１４３５．１３８０
．１３７０　。

１２８５．１２３０．１１５０．１１００．１０？５．
１０６０．１０００及び８６０ｃｍ−’、　”ＣＮＭＲ
のデータは上記のブリオスタチン１０の構造を示し、４
０ＯＮＭＲのスペクトルアサインメントを下記実施例６
の表Ａに示す。

ブリオスタチン１０及び１１の極めて価値ある性質のた
めに、そして質量及び核磁気共鳴スペクトルのデータが
構造アサインメントに明白な支持を与えたために、元素
分析は行わなかった。

尖旌桝旦（ブリオスタチン１１） メチレンクロリド−メタノールから結晶化したブリオス
タチン１１の純品の性状は次のとおり。

融点は１７１−１７３°Ｃの針状晶１ＴＬｃ　ＲｆＯ，
３１（４：１メタノール−水による逆相プレート）；Ｍ
Ｓ　（ＳＰ−ＳＩＭＳ）分子量７６６、Ｃｌ９８５１＋
０１５として、スルホラン中ヨウ化ナトリウム使用、（
ｍ／ｚ）７８９゜３６７５　（（Ｍ＋Ｎａ）　′″、Ｃ
３ＪｓｓＯ＋ｓＮａとしての計算値ニア８９．３６７２
）　、　　７７１　（Ｍ＋Ｎａ　　１Ｂ）　’　、７５
７　（Ｍ＋Ｎａ−３２）　　、７３１　　（Ｍ十Ｎａ　
　−５８）　　”　　、７２９　　（Ｍ＋Ｎａ　　−６
０）　　”及び６９９　　（Ｍ＋Ｎａ　−９０）　’″
　；　　（（Ｘ　）　ｎ”　＋　４２．５゜（Ｃ０，０
５，Ｃｌ３０Ｈ）　ｉ　ＵＶ（ＣＨ３０Ｈ）　　λｍａ
ｘ２２７　（ｔ　３５．５００）ｎｍ；及びＩＲ（ＫＢ
ｒ）　３４６５．２９８０−２９４５．１７４０．１７
２０゜１６５８−４６４０．　１４４０．１３８０．１
３６５．１２８０．１２４０゜１１６０、１０９５．１
０７５．１０４０．１０００及び８７５ｃｍ−’。

”Ｃ−ＮＭＲを行うにはブリオスタチン１１の量しま不
足であったが４００’Ｈ−ＮＭＲスペクトルのためには
極めて効果的であり、それを下の表Ａｌこ示す。

表Ａ ブリオスタチン１０及びｌ　１　、　’Ｈ−ＮＭＲ（４
００Ｍ）Ｉｚ）化学シフト・アサインメント（テトラメ
チルシラン対応）重水素クロロホルム溶液中 ２　　　　　　２．４５　　　ｍ　　　　２．４４９　
　　ｍ３　　　　　　４．１５　　　、ｔｎ　　　　４
．１４８　　　ｍ４　　　　　　１．６０．２．０５ｍ
、ｍ　　　１．６０，２．０５　Ｉｎ、ｎ＋５　　　　
　　４．１８　　　ｍ　　　　４．１９２　　　ｍ６　
　　　　　１．４２，１．７４ｍ、ｍ　　　１．４２．
１．７５　ｍ、ｍ７　　　　　　５．０９．　　　ｍ　
　　　５．０４８　　　ｍ１０　　　　　　１．６６．
２．１６ｍ、ｍ　　　１．６７．２．１６　ｍ、ｍ１１
　　　　　　３．８７　　　ｍ　　　　３．８６３　　
　ｍ１２　　　　　　２．１８　　　ｍ　　　　２．１
８５　　　ｍ１４　　　　　　１．８５，２．０５ｍｒ
ｍ　　　１．８５＋２．０５　ｍ＋ｍ１５　　　　　　
４．１０　　　ｔｎ　　　　４．０６５　　　ｍ１６　
　　　　　５．４２１　　　、　　５．３２９ｄ、ｄ（
８，４，１５，８）　　ｄ、ｄ（８４６，１５，７８）
１７　　　　　　５．７９９　ｄ（１５，８）　　５．
７９８６（１５，７８）２０　　　　　　　　　２．４
４１　ｄ（１０，５）　　　２．４４３６（１０，５）
２２　　　　　　　　　１．８５．２．ＯＯｍ、ｍ　　
　　１．８５，２．００　ｍ、ｎ＋２３　　　　　　　
　３．９８　　　　ｍ　　　　　３．９６４　　　　ｍ
２４　　　　　　　　１．７８，１．．９０ｍ、ｍ　　
　　１ｔ７７．１．９５　ｍ、ｍ２５　　　　　　　　
５．０４　　　　ｍ　　　　　５．１１１　　　　ｍ２
６　　　　　　　　　３．７４　　　　　ｍ　　　　　
３．８０７　　　　　ｍ２７　　　　　　　　１．２０
０　ｄ（６，３）　　　　１．２０３　ｄ（６，３）２
８”　　　　　　　　　１．０６２　　　　ｓ　　　　
　１．６０２　　　　ｓ２９”　　　　　　　　　１．
００５　　　　ｓ　　　　　１．００２　　　　ｓ３０
　　　　　　　　５．６６３　　　　ｓ　　　　　５．
６６７　　　　ｓ３２”　　　　　　　　　１．００５
　　　　ｓ　　　　　Ｏ，９９２ｓ３３”　　　　　　
　　　０．９２４　　　　ｓ　　　　　０．９２９　　
　　ｓ３４　　　　　　　　　５．６７７　　　　ｓ　
　　　　５．６７６　　　５３ｆｌ＋　　　　　　　　
　　３．６８８　　　　ｓ　　　　　３．６８８　　　
　　ｓ３７　　　　　　　　　３．６４９　　　　ｓ　
　　　　３．６４９　　　　ｓＣ−フイソパレート　　
　　Ｃ−７アセテート２’　　　　　　２．２３　　　
ｍ　　　　２．０２７　　　ｓ３　’　　　　　　、　
１．８５−１．９５ｍ４　’　　　　　　１．１７　ｄ
（１４，５）＊これら４つのグループに対するアサイン
メントは互いに交換可能である。

尖旌性工（ブリオスタチン１０の酸触媒による加水分解
） 方法Ａ２１％塩酸含有メタノール０．２ｄ中のブリオス
タチン１０　（１，２■）の溶液を３日間室温に保つ。

溶媒を窒素気流中で濃縮し、粗製品（１，０■）を１：
１〜９：１勾配のメタノール−水を用いたＣ−１８上の
逆相ＨＰＬＣでクロマトにかける。純粋のブリオスタチ
ン１０のΔＩ　、Ｑ　＜、、’ｌ　Ｏ）−オレフィン（
０，３２■）誘導体は下の方法Ｃに示すような性状をも
つ。

方法Ｂ：４：１のメチレンクロリド−メタノール０．２
Ｉｄ中の０　、２　ｍｇのブリオスタチン１０の溶液を
室温に１週間保つことによりΔ１９（！０１−オレフィ
ン５０μｇを得、これを方法Ｃに示すようにして同定し
た。

方法Ｃ：　　１．０■のブリオスタチン１０のメチレン
クロリド（０，４ｉｆ）溶液に、メチレンクロリド中の
１％塩酸の１滴を加え、３０分後にこの混合物を氷水に
入れメチレンクロリドで抽出する。溶媒を水洗し、乾燥
し、乾固させる。逆相ＨＰＬＣにかけるとブリオスタチ
ン１０のΔ１９（２０）−オレフィン誘導体０．４１■
を得る。板状晶（メチレンクロリド−メタノールから）
；融点１４３−１４５°Ｃ；ＴＬＣＲｆ　　（シリカゲ
ル）、　０．３３（７：　３ヘキサンーセトン）、　０
．２５（１：　１ヘキサン−酢酸エチル）；耶（ＳＰ−
ＳＩＭＳ）分子量７９０．　Ｃ４゜Ｈ６□ＯＩ４．スル
ホラン中ヨウ化ナトリウムから、ｍ／ｚは次のとおり：
８１３　　（Ｍ十Ｎａ）　”　、７９５　（Ｍ＋Ｎａ−
１０２）　”　　；〔α）　ｖ”　９６．５２°（Ｃ，
０，０４，ＣＨ３０Ｈ）　ｉ　ＵＶλｍａｘＣ）Ｉ３０
Ｈ２２６（８３０，５００）及び３０Ｈｇ　３６，９０
０）ｎｍ　　；　ＩＲ（ＫＢｒ）３４６５．　２９８０
−２９４０．１７２５．１６００．１６５０゜１６４５
、１５７０．１４４０．１３８０．１３７０．１２５５
．１２３０゜１１５０、１１００．１０７５．１０６０
．１０００及び８７０ｃｍ−’；及び４００ＭＨｚ、’
Ｈ−ＮＭＲ（テトラメチルシランに関し重水素クロロホ
ルム）６０．９８及び１．０４９　　（ｓ、　Ｃ−２８
及び２９Ｈ）　、１．１７　（ｄ、Ｊ＝１４．５．側鎖
ジメチル）。

１．２１Ｈｄ、Ｊ　＝６．３Ｈｚ　、Ｃ−２７Ｈ）、　
１．２３２　　（ｓ　、　Ｃ−３２及び３３ＦＩ）、２
．１７　（ｍ、Ｃ’　　１２Ｆ＋）、　２．４５　（ｍ
、ｃ　−２Ｈ）、　　３．６６７　　（ｓ、Ｃ−３６）
、　　３．６９７（ｓ、Ｃ−３７■）＋　　５．２１７
（ｓ、Ｃ−２０Ｈ）、　５．４１２　（ｄｄ、　Ｊ＝８
．３Ｈｚ及び１５．５６Ｈｚ。

Ｃ−１６Ｈ）、　５．６００　（ｓ、Ｃ−３０８）、及
び６．０１０　（ｄ、Ｊ＝１５．５６Ｈｚ、　　Ｃ−１
７Ｈ） ｆｆｉ（ブリオスタチン１０の２６−アセテート） ブリオスタチン１０の２．８■をアセチル化し、室温で
４時間無水酢酸−ピリジン（０，４：　０．２０ｄ）中
で精製する。氷水と混じ、メチレンクロリドで抽出し、
稀塩酸及び水で洗滌し、乾燥し、溶媒を留去する。粗製
品を１：１→９：１勾配のメタノール−水を用いＣ−１
８逆相カラム（９，４ｍｍ内径×５００　ｍｍ）でＨＰ
ＬＣクロマトにかけて８．０■の純粋のブリオスタチン
１０の２６−アセテートを得る。

メチレンクロリド−メタノールから再結晶して融点１４
５−１４８°Ｃの板状晶を得る。シリカゲル上のＴＬＣ
Ｒｆは０．５２　（７：　３アセトン−ヘキサン）及び
０．７３　（１：　１ヘキサン−酢酸エチル）；スルホ
ラン中のヨウ化ナトリウムからのＣ４４Ｈ６６０１６に
９　ζ 対する分子量８５０、ここにＩＩＩ／ｚ実測値は８７３
（Ｍ＋Ｎａ）　”、８５５　（Ｍ＋Ｎａ−１８）　’　
、８４１　（Ｍ＋Ｎａ−３２〕”　、８１３　ＣＭ＋Ｎ
ａ−６０）　”　、７８３　（’Ｍ＋Ｎａ　−９０）　
”　、及び７７１　（Ｍ＋Ｎａ−１０２）　”　　；　
　（α）　ｎ”＋５６．８５（ＣＯ，３５，ＣＨ３０Ｈ
）　　；　ＵＶλｍａｘ　ＣＨｓＯＨ２２８（ｔ３６．
０００）ｒ＋ｍ　；　ＩＲ（ＫＢｒ）３４５０．　２９
８０−２９４５．１７４０゜１７２５、１６５０；　１
６４５，１４３５．１３７５．１３６０．１２８５．１
２３０゜１１５０、１１００．１０８０．１０６０．１
０００及び８６叶「１；及び’Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ）は下記の表Ｂに示すとおり。

表Ｂ ブリオスタチン・アセテート’Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ）化学シフトアサインメント（テトラメチルシラン対
応）重水素クロロホルム溶液中 ２　　　　　　２．４６２　　　　　　　　ｍ３　　　
　　　４、１４９　　　　　　　　ｍ４　　　　　　１
．６０．２．０５　　　　　　ｍ、ｍ５　　　　　　４
．１７９　　　　　　　　ｔｎ６　　　　　　１．４２
．１．７４　　　　　　ｍ、ｍ？　　　　　　　　　　
　５．０６９　　　　　　　　　　　ｔａｌｏ　　　　
　　　　　　１．６６．２．１６　　　　　　　　、ｍ
、ｍ１１　　　　　　　　　３．８４９　　　　　　　
　　　　ｍ１２　　　　　　　　　２、１８　　　　　
　　　　　　　ｍ１４　　　　　　　　　１．８５，２
．０５　　　　　　　　ｍ、ｎ＋１５　　　　　　　　
　４．１２４　　　　　　’　　　　　ｍ１６　　　　
　　　　　５．３２３　　　　　　　　ｄｄ（８，４，
１５，７）１７　　　　　　　　５．８１１　　　　　
　　　　ｄ（１５，７）２０　　　　　　　　　２、４
３７　　　　　　　　　ｄ　（１０，３）２２　　　　
　　’　　　　１．８５，２．００　　　　　　　　＋
＊、ｍ２３　　　　　　　　　　３．９１９　　　　　
　　　　　　ｍ２４　　　　　　　　　１．７８，１．
９０　　　　　　　　ｍ、ｍ２５　　　　　　　　　’
　　５．２９４　　’　　　　　　　　　　ｔｎ２６　
　　　　　　　　５．０３６　　　　　　　　　１１１
２７　　　　　　　　　１．２４３　　　　　　　　　
　ｄ（５，９）２８＊　　　　　　　　　　１．０５６
　　　　　　　　　　　ｓ２９＊　　　　　　　　　　
１．００４　　　　　　　　　　　ｍ３０　　　　　　
　　　　５．６６４　　　　　　　　　　５３２８　　
　　　　　　　１．００４　　　　　　　　　　　ｓ３
３＊　　　　　　　　　　０．９２７　　　　　　　　
　　　ｓ３４　　　　　　　　　５．６７７　　　　　
　　　　　ｍ３６　　　　　　　　３．６９２　　　　
　　　　　　ｍ３７　　　　　　　　３．６５０　　　
　　　　　　５Ｃ−７イソバレレート ２　’　　　　　　２．２３　　　　　　　　　ｍ３　
’　　　　　　１．８５Δ１．９５　　　　　ｍ４　’
　　　　　　１．１７４　　　　　　　ｄ（１４，５）
５′ Ｃ−２０ブチレート ２６　０ＣＯＣＨ３２，０５５ｇ ＊これら４つの位置に対するアサインメントは交換可能 ！（ブリオスタチン１０の２６−ｍ−ブロモベンゾエー
ト） ブリオスタチン１０　（２，３■）をピリジン０．５０
ｄ中でｍ−ブロモベンゾイルクロリド０．４４ｍでエス
テル化し、生成物を上記に準じて単離してｍ−ブロモベ
ンゾエートを得る。メチレンクロリド−メタノールから
再結晶して１．８４■（収率８０％）の２６−ｍ−ブロ
モベンゾエートの純品を得る。融点１６４−１６８℃、
　ＭＳ　（ＳＰ−３ＨＭＳ）分子量９９１ＣａｑＨｂｒ
ＢｒＯＩｂ　として、ｍ／ｚ１０１４　（Ｍ十Ｎａ）　
”　、９９６（ｈ＋Ｎａ−＋８）　”及び９５６　（Ｍ
＋Ｎａ−５８）”　。

［α］　Ｄ”＋７７．４°（Ｇ　Ｏ，０３５，ＣＨｚＯ
Ｈ）　；　ＵＶＡｍａｘＣ）ＩＪＨ２２９（ｅ　３６，
２００）及び２６５（ｅ　６，８００）ｎｍ及びＩＲ（
ＫＢｒ）　２４４５．２９８０−２９５０．１７４０．
１７２８．１６５８−１６４０、１４４０．１３８０．
１３６５．１２Ｂ０．１２４５．１１６０゜１１００、
１０９０．１０Ｂ５．１０５０．１０００及び８７５Ｃ
市−１゜高分解能（４００ＭＨ２）陽子ＮＭＲスペクト
ルはブリオスタチン１０の２６−ｍ−ブロモベンゾエー
ト２Ｃと予期されるものであった。

災胤拠上度（２６−オキソ−ブリオスタチン１０）ピリ
ジン１．２ｄ中で３．０■のブリオスタチン１０を１．
２■の三酸化クロムで酸化し、生成物を２６−オキソ−
ブリオスタチン４の製造のところで要約したようにして
精製する。メチレンクロリド−メタノールから再結晶し
て板状晶の２６−オキソ−ブリオスタチン１０の純品（
１，８■；収率６０％）を得た。融点１６３−１６５℃
ＭＳ　（ＳＰ　−ＳＩＭＳ）分子量８６０．　Ｃａ。Ｈ
ｂｚＯｒ−、、ｒｎ／ｚ　８２９　ＣＭ＋Ｎａ）　”　
、８１７（Ｍ＋Ｎａ−１８）　”　、７７１　（Ｍ＋Ｎ
ａ　　５８）　”　。

３９　（Ｍ十Ｎａ−９０）　”　、？２７　（Ｍ＋Ｎａ
−１０２）　”　　；（α）　ｎ”＋９５．２°（ＣＯ
，０３５，ＣＨ３０Ｈ）　；　ＵＶＡｍａｘＣ）１３０
）１２２７（ｍ３６，０５０）ｎｍ　　；　ＩＲ（ＫＢ
ｒ）　３４５０．２９８０−２９３８、　１７４５．　
１７２４．　１６５０．　１４３５．　１３７０．　１
３６０゜１２８５、　１２４０．　１１６５．　１１０
０．　１０８５．　１０４５．　１０２５゜１０００及
び８７０ｃｍ−’、高分解能陽子ＮＭＲスペクトル及び
その解釈を下の表Ｃに要約する。

表Ｃ ２６−オキソ−ブリオスタチン１０ ’Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） 化学シフトアサインメント（テトラメチルシラン対応） 重水素クロロホルム溶液中 ２　　　　　　　２．５３９　　　　　　　　　ｍ３　
　　　　　　４．１８８　　　　　　　　　Ｉｎ４　　
　　　　　１．５８５．２．０９７　　　　　　ｍ、　
ｍｎ ５　　　　　　　　　　４．１７９　、　　　　　　　
　　　　ｍ６　　　　　　　　　　１．４１９．１．７
６４　　　　　　　　ｍ、ｗ＋７　　　　　　　　　　
４　、９０３　　　　　　　　　　　　ｔｎｌｌｏ　　
　　　　　　　　　１．５７６．２．１０９　　　　　
　　　ｍ、ｍ１１　　　　　　　　　　３．８６６　　
　　　　　　　　　　ｍ１２　　　　　　　　　２．２
０３　　　　　　　　　　　　ｍ１４　　　　　　　　
　１．８７７、２．１１５　　　　　　　　ｍ、　ｍ１
５　　　　　　　　　４．０５５　　　　　　　　　　
　　ｍ１６　　　　　　　　５．３４９　　　　　　　
ｄｄ　（８，３３，１５，６７）１７　　　　　　　　
　５．６９４　　　　　　　　ｄ（１５，６７）２０　
　　　　　　　　２．３９９　　　　　　　　ｄ　（１
０，６）２２　　　　　　　　　　１．８００．２．２
０３　　　　　　　　ｍ、ｍ２３　　　　　　　　　４
．２５５　　　　　　　　　　　　ｍ１２４　　　　　
　　　　１．７６Ｂ、２．１３９　　　　　　　　ｍ、
ｍ２５　　　　　　　　　　５．１１３　　　　　　　
　　　　　Ｉｎ２７１１　　　　　　　　２．１８７　
　　　　　　　　　　８２８＊　　　　　　　　　　１
．０８１　　　　　　　　　　　　ｓ２９＊　　　　　
　　　　　１．０１６　　　　　　　　　　　　ｍ３０
　　　　　　　　　５．６６２　　　　　　　　　　　
　ｓ　ｕ ３２＊　　　　　　　　　　　１．０１０　　　　　　
　　　　　　　ｓ３３＊　　　　　　　　　　　０．９
２５　　　　　　　　　　　　　ｍ３４　　　　　　　
　　　５．７０７　　　　　　　　　　　３３６　　　
　　　　　　　３．６８３　　　　　　　　　　　　ｍ
３７　　　　　　　　　　３．６５２　　　　　　　　
　　　　５２’　　　　　　　　　　　２．２５　　　
　　　　　　　　　　ｍ３’　　　　　　　　　　　１
．９５　２．００　　　　　　　　ｔ。

４’　　　　　　　　　　　１．１７　　　　　　　　
　　ｄ（１４，５）＊これら四つの位置のアサインメン
トは交換しても良い。

＊＊２６−オキソ−ブリオスタチン４の２７−メチルの
信号はシャープな一重項として２．１５３ｐｐｍで表わ
される。

実施炎上上（１３→３０−エポキシブリオスタチン１０
） ブリオスタチン１０　（３，Ｏｇ）のエポキシ化を行な
った。メチレンクロリド０　、５　ｍｆｌ中のブリオス
タチン１０の溶液にｍ−クロロ過安息香酸１．５ｍｇを
加え、混合物を室温に４８時間保つ。氷水で稀め、メチ
レンクロリドで抽出し、溶液をヨウ化カリと重亜硫酸ソ
ーダで、次いで氷で洗滌する。溶媒を留去し、組成物を
実施例Ｂの）ＩＰＬクロマトで精製する。メチレンクロ
リド−メタノールから再結晶して融点１８４−１８６℃
の板状晶の１３−３０エポキシドを２．０■得た。ＭＳ
　（ＳＰ−３′ＭＳ）分子量８２４、Ｃ４＋Ｊ６４０＋
ａ９ｍ／Ｚ　８４７　（Ｍ＋Ｎａ）　”　、８２９　（
Ｍ＋Ｎａ−１８）　”　、８１５　（Ｍ＋Ｎａ−３２）
　、７８９　（Ｍ＋Ｎａ　−５８）　”　、７５７　（
Ｍ十Ｎａ−９０）　”及び７４５（Ｍ＋Ｎａ−１０２）
”；（α）　Ｄ”＋８８．５０（Ｇ　Ｏ，０３５，ＣＩ
ｌ＋ＯＨ）；ＵＶλｍａｘ（ｍ３６，０００）ｎｍ　　
；　ＩＲ（ＫＢｒ）　３４６０．２９８０−２９４０、
１７４０．１７２０．１６５０．１４３５．１３８０．
１３５８゜１２８３、１２３５．１１６５．１１００．
１０８０．１０３０．１０００及び８７２　ｃｍ−’、
アサインメントを伴なう陽子Ｎｌ’ｌｌ？スペクトルを
下の表りに示す。

表Ｄ ブリオスタチンユボキシド’Ｊ（−Ｎ月Ｂ　（４００Ｍ
）Ｉｚ）化学シフトアサインメント（テトラメチルシラ
ン対応） 重水素クロロホルム溶液中 ２　　　　　　　２．５７６　　　　　　　　　ｍ３　
　　　　　　４．１５５　　　　　　　　　ｍ４　　　
　　　　１．８０，２．０５　　　　　　　ｍ、ｍ５　
　　　　　、　４．２５７．　　　　　　　　ｍ６　　
　　　　　１．４２，１．６６　　　　　　　ｍ、ｍ７
　　　　　　　５．１０４　　　　　　　　　ｍ１０　
　　　　　　１．４８，１．８５　　　　　　　ｍ、ｍ
１１　　　　　　　４．１２０　　　　　　　　　ｍ１
２　　　　　　　２．００ １４　　　　　　．１．５５，１．８０．　　　　　ｍ
、ｍ１５　　　　　　４．３９９　、　　　　　　　　
ｍ１６　　　　　　　５．２２０　　　　　　ｄｄ　（
８，３，１５，８）１７　　　　　　　５．８２４　　
　　　　　　　ｄ（１５，８）２０　　　　　　　　　
　２．４４２　　　　　　　　　　　　　ｄ（１０，２
）２２　　　　　　　　　　１．７８，２．０５　　　
　　　　　　ｍ、ｍ２３　　　　　　　　　　４　、０
０２　　　　　　　　　　　　　ｍ２４　　　　　　　
　　　１．７５．１．９８　　　　　　　　　ｍ、ｍ２
５　　　　　　　　　　５．１６０　　　　　　　　　
　　　　ｍ２６　　　　　　　　　　３．７４０　　　
　　　　　　　　　　ｍ２７　　　　　　　　　　１．
２１０　　　　、　　　　　　　　ｄ（６，３）２８＊
　　　　　　　　　　１．１０８　　　　　　　　　　
　　　ｓ２９＊　　　　　　　　　　０．９９３　　　
　　　　　　　　　ｍ３０　　　　　　　　　　３．３
５９　　　　　　　　　　　　　ｍ３２本　　　　　　
　　　　　　　０．９８４　　　　　　　　　　　　　
　　　　ｓ３３＊　　　　　　　　　　０．９０３　　
　　　　　　　　　　ｍ３４　　　　　　　　　　５．
６８５　　　　　　　　　　　　　ｍ３６　　　　　　
　　　　３、７６０　　　　　　　　　　　　ｍ３７　
　　　　　　　　　３．６５２　　　　　　　　　　　
　５Ｃ−７イソバレレート ２’　　　　　　　　２．２５　　　　　　　　　　ｍ
３’　　　　　　　　、　１．９５−２．００　　　　
　　　ｍ４’　　　　　　　　１．１７　　　　　　　
　　６（１４，５）・５′ ＊これら四つの位置のアサインメントは交換してもよい
。

実施例１２ 以下の実施例に用いたクロマト及び機器技術はＧ、Ｒ，
Ｐｅｔｔｉ　ほか：　Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１
０６．６７６８（１９８４）に動物分類学及び採集デー
タ技術と共に述べられている。いずれの場合においても
メキシコ湾で採集したＢ、　ｖｅｒｉｔｉｎａを出発物
として用いた。メチレンクロリド−メタノール抽出操作
からの最初のメチレンクロリド部を、ヘキサン−四塩化
炭素で９＝１→４：１のメタノール−水溶媒分配順序に
付した。あとのクロロカーボン分画を、Ｇ、Ｒ。

Ｐｅｔｔｉ　ほかＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４１．９８
５（１９８５）に従ってセファデックスＬＨ−２０上の
ゲル浸透及び分配クロマト、シリカゲル及び逆相カラム
クロマト、分取相及び高速液体クロマトを用いて鋭意分
離した（ＰＳバイオアッセイ使用）。

実施例１３（ブリオスタチン９の加水分解）１．０■の
ブリオスタチン９の標品を、メクノーＧ ル中１％塩酸０．４ｄ中で１８〜２０°Ｃで３日間加水
分解した。反応混合物を窒素ガス中で濃縮し乾燥し、メ
タノール−水混合物を用いるＨＰＬＣ逆相カラム（Ｃ−
１８）クロマトにより０．６５■の加水分解物を単離し
た。この化合物は融点１４７−１４９°Ｃの無色粉末と
して得られた。〔α）　ｎ！６＋８７．２４（Ｃ＝０．
０３．　ＣＬＯＨ）、　ＵＶλｍａｘ　２２９ｎｍ（ｇ
３６，１００）　　；ＩＲｒｍａｘ（ＫＢｒ）３４７０
．２９８０−２９５０．１７４２．１７２５゜１６５８
−１’６４０．１４３５．１３８０．１３７０．１２Ｂ
８．１２４０゜１１６０、１１００．１０９０．１０７
５．　ｔｏｓｏ、　１ｏｏｏ及び８７０　ｃｎｒ’　；
　ＳＰ−５ＨＭＳ　：　ｍ／ｚ８３３　ＣＭ十Ｎａ）　
”　、　　（Ｍ＋１８Ｃ４１１１６２０１６）、　　８
１５　（Ｍ＋Ｎａ　　１８）　”　、　　７７５　ＣＭ
＋Ｎａ−５８）　”　、７４５　［Ｍ＋Ｎａ−８８］　
”　　；　ＴＬＣＲｆ　（４：１メタノール−水による
逆相薄層クロマトプレート上）。この分解生成物の物性
はブリオスタチン８の加水分解物（Ｇ、Ｒ，Ｐｅｔｉｔ
ｔのほかｔＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ４１、９８５．１９
８５年参照）の性状と同一であった。

実施尻上４　（Ｂ、　ｎｅｒｉｔｉｎａ）１９８１年に
湿量１０００ｋｇに対応する海産コケムシ（Ｂｕｇｕｌ
ａ　ｎｅｒｉｔｉｎａ）　４０００リツトルをカルフォ
ルニア州のモンテレー近辺で採集し、２−プロパツール
中に３０力月保存した。

抽出操作は次のように行なった。Ｂ、　ｎｅｒｉｔｉｎ
ａ採集品４０００リットルから２−プロパツールを除去
し、半乾燥体（約１００１００Ｏを９１％２−プロパツ
ールで２週間再抽出し、２−プロパツール抽出物を集め
、１９０リツトルに濃縮し、１０００リツトルのステン
レス鋼の容器に入れ、各々１８０リツトルの蒸留水及び
メチレンクロリドの間で５回分配操作を行った。濃縮後
、メチレンクロリド抽出液（１６，４ｋｇ）をヘキサン
（１００リツトル×４）とメタノール−水（９：１）の
間で分配させた。ヘキサン相を分離し、メタノール−水
の部分を蒸発乾固して、１．８ｋｇの固状物を得る。こ
のもの１．８ｋｇを、メチレンクロリド中で６１ｋｇの
ダビシル６３級のシリカゲル（２００〜４００メツシユ
）から作った一連の１５Ｘ３０５ｃｍのステンレス網Ｈ
ＰＬＣカラムでクロマト処理する。まずメチレンクロリ
ドで溶離し次いでメタノール勾配の増大したもので行う
。流速はおよそ毎時６８リツトルとする。２０リツトル
の分画を集めＴＬＣ（メチレンクロリド中４〜７％のメ
タノール）により集め２６の主要分画を得る。

ｍユ」−（ブリオスタチン１２と１３の単離）７：３の
ヘキサン−アセトン及び３：２の酢酸エチル−ヘキサン
を用いてブリオスタチン１及び２を精製しその近縁分画
の分析的ＴＬＣをしたところ、比較的少量のこれ以外の
ブリオスタチンタイプの成分の存在が認められた。この
分画をＲＰ−１８逆相ＨＰＬＣにより個々にクロマト処
理した。それぞれの場合において、まずメタノール−水
（１：　１）（流速毎時２．０ｍ）で溶離を始め、順序
メタノールへと勾配させた。これによって純粋の無晶形
ブリオスタチン３　（１，６ｍｇ）　、ブリオスタチン
８（１３，２■）、ブリオスタチン９．　（１６，４ｍ
ｇ）　、ブリオスタチン１２　（３，７■）及びブリオ
スタチン１３（０，７■）が単離できた。公知のブリオ
スタチン１゜２．３及び′８は標準品との直接比較（主
として４００ＭＨｚ　ＮＭＲ、ＳＰ−３ＨＭＳ分子量決
定）及び種々の溶媒系での共同ＴＬＣによって同定した
。

ブリオスタチ７１２　：　ＣａｑＨｔｚＯＩ？；　ＴＬ
ＣＲｆＯ，５６（ＣＨ２Ｃｆ２−ＣＨ３０Ｈ９５：　５
　）　　；　ＭＳ　（ＳＰ−３ＨＭＳ）ｍ／ｚ　　９７
１　ＣＭ　＋Ｋ　）″、９５７　ＣＭ＋に、−ＣＨ３＋
Ｈ’：ｌ　”８９７　（Ｍ＋Ｋ　　Ｃ０ＣＬＣＬＣＨｉ
　　３Ｈ）　”及び８８３（Ｍ’＋Ｋ　　０ＣＯＣＨｚ
ＣＨｔＣＨｓ　　Ｈ）　”　；　　−（α）ｎ”＋３９
　（Ｃ＝０．１０８．ＣＨ３０１１）　；　ＵＶλｍａ
χ（ＣＨｓＯＨ）　２３１及び２６３ｎｍ（ｌｏｇ　ｇ
４．４６，４．４７）　；　ＩＲ７ｍａｘ　（ＮａＣｊ
２上の薄膜）　３４７０．３３４６．２９６４＝２９４
９．１７３４．１７１７．１６６０−１６４０．１４４
０．１３８０．１３６５．１２７０．１２５０．１２２
０゜１１６４、１１００．１０７０．１０５５；　１０
００及び８６０ｃｍ−’　、　’　”ＣＮＭＲデータは
上述ブリオスタチン１２の構造図に示しである。

ブＩＪ　オスタチン１３　：　ｃａ＋Ｈｂｚｏ＋ｓ　　
：　ＴＬＣＲｆｏ、５ｉ（ＣＨ２１，Ｉ！、２−Ｃ）１
３０１（，９５：　５　）　；　ＭＳ　（ＳＰ−５ＨＭ
Ｓ）ｍ／’ｚ８３３　（Ｍ＋Ｎａ）　”　、低分解能Ｍ
Ｓ　ｍ／Ｚ　８１７　（Ｍ＋Ｎａ）　”　、７４５　（
Ｎ＋Ｎａ’　ＣＯ’ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３Ｈ〕及び７２７
　　（Ｍ＋Ｎａ　　０ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３３）１）
　”　、　ＵＶλｍａｘ（ＣＨ３０Ｈ）２２８ｎｍ、　
（ｌｏｇ　Ｃ３，９６）　　；　ＩＲｒ　（薄膜）　３
４７５゜３３５９、２９２６．１７３４．１７１？、　
１６８５．１６５３．１６０６゜１４３６、１３８０．
１１５３．１０９６及び１０７７ｃｍ−’、　’Ｈ＝Ｎ
ＭＲデータは上述のブリオスタチン１３の構造図中に示
しである。

実施例１６（ブリオスタチン２の１２への変換）ブリオ
スタチン２の標品（２０■）をピリジン２５戚と無水酪
酸０　、５　ｍｌで処理し、この溶液を窒素中で室温に
４４時間放置し、蒸発乾固し、７：３のへキサン−アセ
トンを用いる分取ＴＬＣにかけてブリオスタチン２ジブ
チレート（ＣｓＪ７ｓＯ＋ｓ）１２ｍｇを得た。ＴＬＣ
Ｒｆｏ、８０　（ＣＨ２（＃２−メタノール９５：５）
及びＭＳ　（ＳＰ−３ＩＭＳ）　ｍ／ｚ　１０４１　（
Ｍ＋Ｋ〕゛。

エタノール中のブリオスタチン２ジブチレート（１２■
）溶液に０．２５戚の６Ｎ塩酸を加え、エタノールを除
き、残渣をメチレンクロリドと水の間で分配する。クロ
ロカーボン相を無水硫酸ソーダで乾燥し、溶媒を蒸発さ
せ、残渣を移動相としての９５：５メチレンクロリド−
メタノールの使用による分取ＴＬＣで精製してブリオス
タチン１２を２．５■得た。このものは天然物と、ＴＬ
Ｃ、’ＨＮＭＲ。

１３ｃ　）ＪＭＲ、ＩＩ？、　ＵＶ、　　（α）　ｎ及
び５Ｐ−３，！ＭＳスヘクトルで比較し同定した。回収
した出発物を再び同様の加水分解にふしてブリオスタチ
ンの収率を向上させた。

ブリオスタチン９〜１３め投与は、新生物病たとえば急
性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、悪性黒色腫、肺
腺癌、神経芽腫、肺の小細胞癌、胸部癌、結腸癌、卵巣
癌、ぼうこう癌、等に冒されている人間や動物の治療に
有用である。

投与用量は新生物病の特定、年令や健康状態や体重をも
含めた患者の型、現在実施中の治療法、治療の頻度や治
療比などによって変動するが、例示をすれば活性物質成
分の投与用量レベルは静注では０．１から約２００■／
ｋｇ、筋注では１から約５００ｍｇ／ｋｇ、経口では５
から約１０００ｍｇ／ｋｇ、経鼻投与では５から約１０
００■／ｋｇ、そしてエロゾルでは５から約１０００■
／ｋｇ　（いずれも患者の体重眩あたり）である。

濃度で表現した場合、本発明組成物中の本発明成分は、
皮膚、鼻、咽頭、気管支、膣、直腸又は眼のような局所
に適用するときは組成物中で約０．０１から約５０％ｗ
／ｗ　、好ましくは約１から約２０％−／−である。非
経口投与のときは組成物中に約０．０５から約５０％ｗ
／ｖ　、好ましくは約５から約２０％―／Ｖである。

本発明の組成物は、人間や動物に対し、活性成分を適量
含有するところの単位用量形態（たとえば錠剤、カプセ
ル、ピル、散剤、課粒、坐剤、無菌の非経口用溶液又は
懸濁剤、無菌の経口用溶液又は懸濁剤など）で好ましく
に投与される。

経口投与のためには固形又は液状の単位用量形態が用い
られる。

散剤は、活性成分を適当な細かいサイズにし、これを同
様に処理した希釈剤と混合することにより極めて簡単に
製造される。希釈剤は乳糖やデンプンのような可食性の
炭水化物であって良い。有利には、賦香油と同じ（甘味
剤や砂糖が用いられる。

カプセル剤は、上述の方法でえた粉末混合物をゼラチン
のさやに充填して製造される。有利には、充填作業を助
けるためにタルク、ステアリン酸７グネシウム、ステア
リン酸カルシウム等の潤滑剤を充填前に粉末混合物に添
加する。

ソフトゼラチンカプセル剤は、活性成分のスラリーを、
使用可能な植物油、軽質液状ペトロラタムや他の不活性
の油やトリグリセリドと共に機械的にカプセル充填して
作られる。

錠剤には粉状混合物をつくり、課粒化又はスラグ化し、
滑剤を加え圧縮して錠剤とする。粉状混合物は、好まし
くは粉末とした活性成分を、デンプン、ラクトース、カ
オリン、燐酸シカルシウムの如き希釈剤と混合して作ら
れる。該粉状混合物は、コーンシロップ、ゼラチン液、
メチルセルロース液又はアラビアゴム液で湿らせたのち
、ふるいを強制通過させて顆粒とする。顆粒にする代り
に、該粉状こ混合物をスラグ化する、すなわち錠剤機を
通過させ、こ−に得た不完全形態の錠剤を小片すなわち
スラグに砕く。このスラグはステア　　。

リン酸、ステアリン酸塩、タルクや鉱物油の如きものを
添加して、錠剤整形具にくっつかぬように゛潤滑化する
。潤滑化された混合物は、次いで圧縮して錠剤とする。

有利には錠剤は、シェラツクの密閉又は腸溶コーティン
グ、砂糖とメチルセルロースの被覆及びカルナウバロウ
の磨き用被覆から成る保護被覆を施される。

経口投与のための液状単位用量形態たとえばシロップ、
エリキシル、懸濁液は、その茶さじ一杯が、投与される
べき活性成分の一定量を含有するようにして製造される
。水溶性のものは砂糖、賦香剤及び保存剤と共に水性ビ
ヒクル中に溶解してシロップとする。エリキシルは適当
な甘味剤や賦香剤と共に、水性アルコールベヒクルを用
いて製造する。懸濁剤は不溶性の形態のものを、アラビ
アゴム、トラガカント、メチルセルロースのような懸濁
用剤の助けをかり、適当なベヒクルを用いて製造する。

非経口投与のためには、液状単位投与形態を活性成分と
無菌のベヒクル（水が好ましい）を用いて製造する。使
用される形態や濃度に応じて、活性成分はベヒクル中に
懸濁させるか又は熔解させる。溶液を作るには、水溶性
の活性成分を注射用水に溶かし、適当なバイアルやアン
プルに入れ閉じる前に滅菌濾過をする。有利にはベヒク
ル中に局所麻酔剤、保存剤及び緩衝剤の如き助剤を溶解
させる。非経口用の懸濁剤を作るには、活性成分をベヒ
クル中に溶解させずに懸濁させ、かつ滅菌を濾過により
行い得ないという点を除き、実質的に上述と同様にして
製造される。活性成分は、滅菌ベヒクルに懸濁させる前
にエチレンオキサイドで滅菌する。有利には、界面活性
剤や湿潤剤を組成物に包含させ、活性成分を均一に分布
させるのを助ける。

経口や非経口の投与のほかに、直腸や膣からの投与も用
いられる。活性成分は主剤という手段で投与できる。体
温付近の融点をもつベヒクル又は容易に可溶となるベヒ
クルが用いられる。たとえばカカオ脂やいろんなポリエ
チレングリコール類（カーボワックス類）がベヒクルと
して使用できる。

経鼻点滴のためには活性成分と適当な医薬用ベヒクル（
好ましくはＰ、Ｆ、水）を用いて液状単位用量形態をつ
くる。もし吸入が望まれるときはドライパウダーを処方
することができる。

エロゾルとして用いるために、必要とあればまた所望に
応じ通常の助剤（たとえば共溶剤や湿潤剤）と共に気状
又は液状の噴射剤（たとえばジクロロジフルオロメタン
、二酸化炭素、窒素、プロパンなど）を活性成分と一緒
に加圧エロゾル容器につめることができる。

本明細書及びクレームにおける「単位容量形態」という
用語は人間や動物に対する単位用量として適当な物理的
に個々の単位を意味し、こ−に各々の単位は、必要とさ
れる医薬用希釈剤、担体又はベヒクルと関連して所望の
治療効果を生ずるべく計算されたところの活性成分の一
定量を含有するものとする。本発明における新規な単位
用量形態の明細は、直接的に下記のものに指示され依存
する。すなわち（ａ）活性成分のユニークな特性及び達
成されるべき特別の治療効果、及び（ハ）本明細書に開
示されたような人間の治療用に活性な材料を処方する技
術に固有の限界、こ＼にこれらは本発明の態様を成すも
のである。本発明に関しての適当な単位用量形態の例は
錠剤、カプセル剤、トローチ、生剤、粉末の一定量、ウ
ェファ又はカシェ、茶さじ一杯分、大さじ一杯分、滴数
、アンプル、バイアル、これらの適当な組合せ、その他
これ迄に説明したもの等である。

抗腫瘍剤として用いられる活性成分は、それ自体公知で
ありまた確立された製法により製造できる医薬材料の使
用により、容易に上述のような単位用量形態にすること
ができる。以下に本発明の単位用量形態の製造の説明の
ための例を示す。これらは本発明を限定するものではな
い。

本発明の実施化のために幾つもの用量形態を製造したが
、これは以下に例示される。ニーに「活性成分」とはバ
ンクラチスタチン、７−ゾオキシナルシクラシン、それ
らの合成的等個物及びそれらの非毒性かつ医療活性誘導
体をあられす。

組成物Ａ（硬ゼラチンカプセル剤） １カプセル中に活性成分２００ｍｇを含有するところの
二鞘式硬質ゼラチンカプセル剤１０００個を、次のタイ
プと分量の成分から製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　２００ｇトウモロ
コシデンプン　　　　　　　２０ｇタルク　　　　　　
　　　　　　　　　２０ｇステアリン酸マグネシウム　
　　　　　２ｇエア・マイクロナイザーで微粉化した活
性成分を、他の微粉化成分に加え、完全に混合し、常用
に従ってカプセルに充填する。

こ−に得たカプセル剤は、１回１〜２カプセル１日１〜
４回経口投与すれば新生物病（腫瘍）の治療に有用であ
る。

上記方法に準じ、活性成分量を２００ｇの代りに５０ｇ
、２５０ｇ又は５００ｇ用いることにより、１カプセル
中に活性成分を夫々５０■、２５０■又は５００■含有
する製剤を製造することができる。

組成物Ｂ（軟ゼラチンカプセル剤） まず最初に化合物をトウモロコシ油０．５蔵に懸濁して
材料をカプセル化できるようにし、次いで上述の方法で
カプセル化して、１カプセル中に活性成分（エア・マイ
クロナイザーで微粉化）２００ｍｇを含有する経口投与
用の一鞘式ソフトゼラチンカプセル剤を製造する。

このカプセル剤は１回１〜２カプセルを１日１〜４回経
口投与すれば新生物病（腫瘍）の治療に有用である。

組成物Ｃ（錠剤） １錠中に活性成分２００ｍｇを含有する錠剤１０００錠
を、次のタイプと分量の成分から製造した。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　２００ｇ乳　　
　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３００ｇ
トウモロコシデンプン　　　　　　　　５０ｇステアリ
ン酸マグネシウム　　　　　　　４ｇ軽質液状ペトロレ
ータム　　　　　　　　５ｇエアマイクロナイザーで微
粉化した活性成分を他の成分に加え、完全に混合しスラ
グ化し、このスラグを１６番篩を通して力を加えて粉砕
し、得られた顆粒を圧縮して錠剤とし、１錠中に活性成
分が２００■含まれるようにする。

上述の錠剤は１回１〜２錠、１日１〜４回経口投与する
ことによって、新生物病を治療するのに有用である。

上述と同様にして、活性成分２００ｇの代りに２５０ｇ
又は１００ｇを用いることにより、１錠中に活性成分を
２５０■又は１００■含存する錠剤を製造できる。

組成物Ｄ（経口用懸濁剤） 次のタイプと量の成分を用いて、各条さじ１杯（５ｍ）
用量あたり５０■の活性成分を含有する水性懸濁液１０
００ｄを製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　１０ｇクエン酸
　　　　　　　　　　　　　　　　２ｇ安息香酸　　　
　　　　　　　　　　　　１ｇ蔗　　　糖　　　　　　
　　　　　　　　　　　７９０ｇトラガカント　　　　
　　　　　　　　　　５ｇレモン油　　　　　　　　　
　　　　　　　２ｇ脱イオン水を加え全量　　　　　　
１０００　ｍＲクエン酸、安息香酸、蔗糖、トラガカン
ト及びレモン油を充分な量の水に分散させ８５０ｍの懸
濁液とする。エアマイクロナイザーで微粉化した活性成
分を、それが均一に分布するまでシロップ中で撹拌し、
充分な量の水を加え１０００ｄとする。

このようにして製造された組成物は１同条さじ１杯（１
５＋＋＋１）１日３回投与することにより、新生物病を
治療するのに有用である。

組成物Ｅ（非経口用製品） 新生物病治療用活性物質３００■をその１　ｍＲ中に含
有する非経口注射用無菌水性懸濁液を、次のタイプと量
の成分から製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　３０　ｇポリソ
ルベート８０　　　　　　　　　５　　ｇメチルパラベ
ン　　　　　　　　　　　２．５ｇプロピルパラベン　
　　　　　　　　　０．１７ｇ注射用水を加え全量　　
　　　　　　１０００戚活性成分比外のすべての成分を
水に溶かし、溶液を濾過して無菌とし、これにエアマイ
クロナイザーで微粉化した無菌の活性成分を添加し、得
られる懸濁液を無菌のバイアルに充填し、バイアルを密
閉する。

このようにして得られる組成物は、１回Ｉｄ（ＩＭ）を
１日３回用いることにより新生物病の治療に有用である
。

組成物Ｆ（経直腸及び経膣坐剤） 次のタイプと量の成分を用い、１個の重量２．５ｇでか
つ活性成分２００■を含有する坐剤１０００個を製造す
る。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　　１５ｇプロピ
レングリコール　　　　　　　１５０ｇポリエチレング
リコール４０００を加え全量２５００　ｇ活性成分をエ
アマイクロナイザーを用いて微粉化し、プロピレングリ
コールに添加し、混合物が均一に分散されるまでコロイ
ドミルを通過させる。

ポリエチレングリコールを融かし、プロピレングリコー
ル分散液をゆっくりと、撹拌しつつ添加する、この懸濁
液を、冷却してない型（４０°Ｃ）に注入し、組成物を
放冷して固化させ、型から取り出し、各々の坐剤をホイ
ルで包む。

上述の坐剤は新生物病の治療のために直腸又は膣に挿入
する。

組成物Ｇ（経鼻用懸濁剤） 次のタイプと分量の成分を用いて、１　ｖｔｌ、あたり
２００■の活性成分を含有する経鼻点滴用の無菌水性懸
濁液１０１００Ｏを製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　１５ｇポリソル
ベート８０　　　　　　　　　　５ｇメチルパラベン　
　　　　　　　　　　　２．５ｇプロピルパラベン　　
　　　　　　　　０．１７　ｇ脱イオン水を加え全量　
　　　　　　１０１００Ｏ活性成分以外のすべての成分
を水に溶かし、その溶液を濾過して無菌とし、この無菌
液に、エアマイクロライザーで微粉化した無菌の活性成
分を加え、得た懸濁液を無菌容器へ無菌充填する。

この組成物は０．２〜０　、５　ｍｌを１日１〜４回点
鼻することにより新生物病の治療に有用である。

活性成分はまた、実施例１２−１４に示すように非希釈
の純品形態で皮膚、経鼻、経咽喉頭、経気管支又は経口
的に局所使用のために存在しうる。

組成物Ｈ（粉末剤） バルク形態の活性成分５ｇをエアマイクロナイザーを用
いて微粉化し、シェイヵータイプの容器に入れる。

上記組成物は１日１〜４回局所に適用することにより新
生物病の治療に有用である。

組成物Ｉ（経口用粉末剤） バルク形態の活性成分１００ｇをエアマイクロナイザー
を用いて微粉化し、各々２００■ずつ分包する。

上述の粉末は、１回１〜２包を１日１〜４回、コツプ１
杯の水に懸濁させて経口投与することにより、新生物病
の治療に有用である。

組成物Ｊ（吸入剤） バルク形態の活性成分１００ｇを、エアマイクロナイザ
ーを用いて微粉化する。

このものは３００■を１日１〜４回吸入することによっ
て新生物病の治療に有用である。

組成物Ｋ（硬ゼラチンカプセル剤） １カプセル当り２ｏｏｍｇの活性成分を含有する、二鞘
式ハードカプセル剤１００個をつくる。

エアマイクロナイザーを用いて活性成分を微粉化し、こ
れを常法に従ってカプセル充填する。

上述のカプセルは、１回１〜２個、１日１〜４回経口投
与することにより新生物病の治療に有用である。

上述の方法により、活性成分２００■の代りに５０ｇ、
２５０ｇ又は５００ｇを用いて同様の操作により、夫々
１カプセル中に活性成分を５０．２５０及び２５０■含
有するカプセル剤を製造できる。

（発明の要約） さいごに本発明を要約すれば次のようである。

すなわちブリオスタチン９，１０．１１及び１２″と命
名されるところの新規かつ極めて有効な抗新生物用剤が
海産動物のＢｕｇｕｌａ　ｎｅｒｉｔｉｎａから単離さ
れその構造決定が行われた。それらの各々について有意
の抗新生物活性が見出された。

以上述べたところから次のことは明白であろう。

すなわち本発明は著しく予測不能の態様ですべての上述
の目的を満足するようにこ−に記述され説明された。む
ろんそれらの変形、変法及びが応用で当業者がこ＼の記
載に基き容易に為し得るものは本発明の精神内に包含さ
れ、本発明はその請求の範囲によってのみ限定をうける
ことは了解されるべきである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式をもつブリオスタチンと称する化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝−ＣＯＯＨ＿３；−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ＿
   ２ＣＨ＿３；又は−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２
   ；そしてＲ＿２＝−Ｈ，−ＯＣＯＣＨ＿２； 又は−ＯＣＯ（ＣＨ）＿４（ＣＨ＿２）＿２ＣＨ＿３。 ２、第１項においてＲ＿１＝−ＣＯＣＨ＿３でＲ＿２＝
   −ＣＯ（ＣＨ）＿４ＣＨ＿２ＣＨ＿３である化合物ブリ
   オスタチン９。 ３、第１項においてＲ＿１が−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ
   ＿３）＿２でＲ＿２がＨである化合物ブリオスタチン１
   ０。 ４、第１項においてＲ＿１が−ＣＯＣＨ＿３でＲ＿２が
   Ｈである化合物ブリオスタチン１１。 ５、第１項においてＲ＿１が−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｃ
   Ｈ＿３でＲ＿２が−ＯＣＯ（ＣＨ）＿４（ＣＨ＿２）＿
   ２ＣＨ＿３である化合物ブリオスタチン１２。 ６、第１項においてＲ＿１が−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｃ
   Ｈ＿３でＲ＿２がＨである化合物ブリオスタチン１３。 ７、次の構造式をもつブリオスタチンの有効量を宿主に
   投与することから成る新生物疾患をもつヒト又は動物の
   治療方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ただしＲ＿１＝−ＣＯＣＨ＿３；−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ＿
   ２ＣＨ＿３；又は−ＣＯＣＨ＿２ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２
   ；そしてＲ＿２＝−Ｈ，−ＯＣＯＣＨ＿２； 又は−ＯＣＯ（ＣＨ）＿４（ＣＨ＿２）＿２ＣＨ＿３８
   、第７項において該ブリオスタチンがブリオスタチン９
   である方法。 ９、第７項において該ブリオスタチンがブリオスタチン
   １０である方法。 １０、第７項において該ブリオスタチンがブリオスタチ
   ン１１である方法。 １１、第７項において該ブリオスタチンがブリオスタチ
   ン１２である方法。 １２、第７項において該ブリオスタチンがブリオスタチ
   ン１３である方法。