JPS6314790A

JPS6314790A - 新規なエポキシ化ホスフアチジン酸誘導体およびそれを有効成分とする制癌剤

Info

Publication number: JPS6314790A
Application number: JP15929786A
Authority: JP
Inventors: Keisuke Hirasawa; 計介平澤; Michio Murakami; 村上　道男; Yoshiro Sato; 吉朗佐藤
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1986-07-07
Filing date: 1986-07-07
Publication date: 1988-01-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は新規な制癌剤に関する。更に詳しくは、ホスフ
ァチジン酸誘導体のホスファチシン酸残基中のシアシル
グリセロール部分にある２つのアシル基のどちらか一方
もしくは両方に少なくとも１つの工？キシ基を導入した
エポキシ化ホスファチシン酸誘導体およびそれを有効成
分とする制癌剤に関する。

〔従来の技術〕

ＩＶｉは今や［」本人の死亡原因の第−位となり、この
状況は主要先進国に於いても同様であって、その制圧は
人類全体の悲願とも言えるものである。現在のところ外
科的な治療が主力であるが、これを補完、もしくは代替
するための薬剤の開発に向けて、ｌ壮界各国の数多くの
研究者が長年の間莫大な努力を傾けてきた。

その結果として様々な化学療法剤、例えばマイトマイシ
ンＣ（ｍｉ　ｔｏｍｙｃ　ｉｎ　Ｃ）　、プレオマイシ
ン（ｂｌｅｏｒｎｙｃｉｎ　）、　５−　ＦＵ　（５−
ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ　）％アトリアフィシン（ａ
ｄｒ　ｉａｍｙｃ　ｉｎ　）　ｓメトトレギセ−ｈ　（
ｒｎｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ　）ｓシクロフォスフアミ
ド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｒｎｉｄｅ　）、ビンク
リスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）ｂ或いは免疫療法
ハリ、例えはクレスチン、ビシバニールなどが発明され
、臨床上多大な貢献をなしている。しかしながらこれら
の薬剤も、化学療法剤に於いては重篤な副作用が、また
免疫療法剤に於いては効果の面に難点が少なくなく、未
だに決定的な制癌剤は見出されているとはいえないもの
である。

一方ホスファチゾン酸誘導体、特にホスファチゾルコリ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチゾルエタノール
アミンはバクテリアから高等動植物に至るまで生物界に
広く見出される物質である。その薬剤としての使用は、
呼吸窮迫症候群の治療のための肺表面活性剤（特開昭５
９−９５２１９、西独特許公開３２２９１７９など）、
老化に伴う記憶障害の治療剤（アメリカ特許４，３８５
，０５３）脳卒中による意識混濁の治療剤（特開昭５５
−１１５８２４）等が知られている。しかしながら、制
癌剤としての用途は知られていない。

ホスファチシン酸誘導体の腫瘍細胞に対する作用につい
ては、「バイオケミカル・アンド・バイオフィシカル・
リサーチ・コミュニケーションズＪ　（Ｂｉｏｃｈｅｒ
ｎｉｃａｌ　ａｎｄ　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅ
ａｒｃｈ　Ｃｏｎｖｎｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）、第１１
４巻、第２号、８６３−８７１頁（１９８３年）におい
て、シェツトら（Ｊｅｔｔ　、Ｍ、　ｅｔ　ａｌ　、　
）による、植物由来のホスファチジルセリンのリポソー
ムが腫瘍細胞特異的な細胞障′古性を／Ｊ”　ｌ／　、
正常細胞には何ら細胞障害性ｆｒ：　ノＪ＜さないとい
う報告がある。そして彼らは同論文中で動物由来のホス
ファチゾルセリンのりｙｌｔ’ソームにはこのような効
果は認められなかったと記している。また彼らは、植物
由来のホスファチゾルイノシトールのみが癌細胞殺に殺
細胞効果を示したことからアラキドン酸欠如がもたらし
たものと推定している。本発明者らも同様な実験を行っ
たが必ずしも同様な結果を常に得ることができなかった
。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者らも癌制圧の課題の解決に向けて様々な確度か
ら取り組んできたが、その−環として上述したシェツト
らの報告等を参考にしてホスファチシン酸誘導体の腫瘍
細胞特異的な細胞障害性に注目しシェツトらの報告とは
異なる結果、即ち、補光動物由来のホスファチゾルセリ
ン（以下、ＰＳと言う）またけホスファチゾルイノシト
ール（以下、ＰＩと言う）がｉｎ　ｖｉｔｒｏで１ト１
瘍細胞に特異的に殺細胞作用を示し、また、１ｎｖｉｖ
ｏでは担癌マウスの平均寿命を延長せしめる制も９１作
用を示すことを明らかにした。（〜かしなからＩ）Ｓ、
ＰＩの該作用はサンプルによるばらつきがあり、安定し
た制癌作用の本体は明らかではなかった０〔問題点を解決するための手段〕かかる実情において、本発明者は、ホスファチシン酸誘
導体の制癌効果について更に研究？ｔ−行っていたとこ
ろ、ホスファチシン酸誘導体のジアシルグリセロール全
構成するアシル基の不飽和結合（二車結合）をエボ′キ
シ化したものが優れた制癌作用を有することを見出し、
本発明を完成した。

すなわち１本発明は、次の一般式（Ｉ）０Ｈ（Ｉ）（式中、均及び烏の少なくとも一方は、構造中に少なく
とも１個の工数キシ基を含む炭素数７〜２１の炭化水素
基を示し、残余は炭素数７〜２１の飽和もしくは不飽和
の炭化水素基を示す。Ｒ３は水素原子、セリン残基、イ
ノシトール残基、グリセロール残基、コリン残基又はア
ミノエチル基を示す）で表される工？キシ化ホスファチジン酸訪導体およびそ
れを有効成分とする制癌剤を提供するものである。

　８一式（１）で表わさ７するニーＰキシ化ホスファチシン酸
舖導体にＶｉ種々の異性体が存在するが、その倒れも優
れ九制癌効果を有するので、これらは全て本発明に包含
される。

本発明の工ｄ？キシ化ホスファチシンＩＭｌ導体（１）
は、例えば、次の一般式σ１）、ろ、１　　　　但）（式中、Ｒ４及び１４ｇの少なくとも一方は炭素数７〜
２１の不飽和炭化水素基を７Ｊくシ、残余は炭素数７〜
２１の飽和もしくは不飽和の炭化水素基を示す。ＩＣｓ
は１４Ｄ記と同じもの全示す）で表されるホスファチシ
ン酸誘導体を工？キシ化することにより製造される。

本発明において、但）式で表されるホスファチシン酸誘
導体としては次のものが挙げられる。

ホスファチジン酸（以下、ＰＡと言う〕Ｒ３：水素原子ホスファチゾルセリン（ＰＳ）Ｒｓ：セリン残基（−ＣＨ２Ｃ）ＩｃＯＯＨ）ＮＨ，ｚホスファチゾルイノシトール（Ｒ４＝Ｒ７＝　Ｈ：　Ｐ
Ｉ　）ＯＨ（Ｒ６、Ｒ７は水素原子父は利Ｄｓ）１２）ホスファチ
ゾルグリセロール（以下、ＰＧと言う）Ｒ８：グリセロ
ール残基（−Ｃ山ＣＨＣ１ｈ　ＯＨ，）ホスファチゾル
コリン（以下、ＰＣと言う）Ｒ３：コリン残基（−Ｃ［
ｈＧＨｚＮ”（ＣＨ３）５　）ホスファチゾルエタノー
ルアミン（以下、理と言う）Ｒ３ニアミノエチル基（−Ｃ）ｈ　ＣＨ２ＮＨ２）コレ
ラのホスファチシン酸誘導体は何しモ公知の化合物であ
り、大豆、唾乳動物、酵母等の天然物から分前するか、
あるいは合成によって入手することができる。

本発明方法において、ホスファチフッ１２Ｍ導体但）を
エポキシ化する方法は、自体公知の方法、例えば、Ｒｅ
ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ　。

Ｖｏｌ　、ｌ　＊　１３５負に記載の方法に従って、ベ
ンゼン、クロロホルム、四塩化炭素等の不活性溶媒中、
有機過酸全反応せしめる方法が採用される。有機過酸の
量を変えることによって、町のアシル基の二重結合の一
部又は全部がエポキシ化された所望の目的物（１）が得
られる。

本発明化合物（Ｉ）において、工数キシ基は、２つのア
シル基の少なくとも一方に１個以上存在すればよく、又
その位置も問わないが、工？キシ基の数が多い方が制癌
効果が強い。

本発明化合物はエポキシ化ホスファチシン酸銹導体（Ｉ
）　’ｅ　ＩＪ　赦ンームの形にするのが好ましい。１
赦キシ化ホスファチジン酸誘導体は両親媒制であるので
、それ単独でもＩＪ　、Ｉｅソームを形成することがで
きるが、安定化剤としてコレステロールを使用すること
もできる。

本発明の制癌剤をヒトに投与するには、癌の原発部位、
手術後の癌摘出部位などの局所組織内、あるいは塗布、
皮肉、皮下、筋肉内、静脈、経口などによって投与され
る。投与量は投与法と癌の悪性度、癌の種類、患者の症
状及び癌の進行度などによって異なってくるが、例えば
１目に１．０〜ｌ　０００薦ｙ　／　Ｋｙを週１〜２回
、或いは連日投与するのが好ましい。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて説明する。

実施例１エポキシ化大豆ホスファチゾルコリンの製造：ｍ−クロロ安息香酸（ＭＣＰＢＡ）　（和光製薬社製）
、１ｏｏｒをクロロホルム２１に溶解し、三角フラスコ
（３１り中に入れ、まわり全水冷しながらマグネチツク
スターラーにて攪はんした。その中に１００ゴクロロホ
ルムに溶かした大豆ホスファチゾルコリン（純度９９％
以上、以下にと称す）　（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ社）５０ｆ
をゆっくり滴下した。滴下後、三角フラスコ全室温に戻
し、８〜１２時間攪時間音続は反応させた。反応終了後
、反応液をシリカゲルカラム（Ｍｅｒｃｋ社）にアゾラ
イし、ついでクロロホルム中のメタノール濃度を段階的
に増したグラジェント溶出で抽出し、クロロホルム中メ
タノール４０％の分画よりエポキシ化大豆ホスファチゾ
ルコリン（以下Ａ−大豆ＰＣと称す〕を４０２得た。

得られｆｃＡ−大豆にについてＮＭＲｌＩＲ及びＵＶ分
析を行い、構造を確認した。結果を第１図、第２図およ
び第３図に示す。

実施例２工？キシ化大豆ホスファチゾルイノシトールの製造：ｍ−クロロ安息香酸（ＭＣＰＢＡ）　（和光製某社！！
！りｔＯｏｒをクロロホルム２ｊに溶解し、三角フラス
コ（３ＩＩ）中に入れ、まわりを氷冷しながらマグネチ
ツクスターラーにて攪はんした。その中にｌ　ｉｌ　（
ｌゴクｊｌロホルムに溶かした大豆ホスファチゾルイノ
シトール（純度９９チ以上、以下円と称す）　（Ｎｏ−
ｃｈｅｃｋ社）５０２をゆっくり滴下した。滴下後、三
角フラスコを室温に戻し、８〜１２時間攪時間音続は反
応させた。反応終了後、反応液をシリカゲルカラム（Ｍ
ｅｒｃｋ社）にアプライし、ついでクロロホルム中のメ
タノール濃度全段階的に増したグラジェント溶出で抽出
し、クロロホルム中メタノール２５％の分画上り工？キ
シ化大豆ホスファチゾルイノシトール（以下Ａ−大豆Ｐ
Ｉと称す）を４０？得た。

実施例３工数キシ化シリルイン酸ホスファチジルコリンの製造： ■　ｘｊ容ｉナスフラスコに粗精製ホスファチジルコリ
ン（Ｎｕ−ｃｈｅｃｋ社）５０２を無水エーテルに溶解
させたものと、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド
溶液（２５％メタノール溶液、　Ａ１ｄｌｉｃ１１社）
５０−を加え栓をし２分間振った。５〜ｌＯ分後、溶液
は濁り沈殿が生じた。上澄み液をピペットで吸い取り、
ついで沈殿に１２５ｍのメタノールを加え沸騰させた０その後、Ｉ（ｙｆｌｏ−８ｕｐｅｒ−Ｇｅｌ　（Ｍｅｒ
ｃｋ社）ｌｙを加え熱いうちに吸引ろ過した。ろ液を冷
却し無水エーテル２５０ｍ／金力１１え沈殿を析出させ
、上演をデカンテーションで取り除いた。この沈殿にＣ
ｄ（Ｊ２溶液（ＣｄＣ＃　・２Ｈ＋０１６９　／　４０
　ｍｌ水）を沸騰させてから加え、軽く攪拌し、更にエ
タノール２５０−を加え、４℃で一夜放置した。結晶を
析出させ、ｌ二清をデカンテーションで除き、結晶を乾
燥して、グリセリルホスホリルコリン−３ＣｄＣＡ’ｚ
複合体（以下、Ｌ−ａ　−ＧＰＣ−Ｃｄ（Ｊｚと称する
）の結晶２０ｒを得た。

■　冷却装置付＋ｌＩナスフラスコにリルイン酸（牛丼
化学社）［１ｏｒと塩化チオニル（半井化学）　１７１
　ｆｉ入れ、温浴（ウォーターバス）中で２時間還流し
反応させた。反応終了後ウォーターパスの温度を４０℃
までさげ、冷却装置ｔａミーフラスコりはずし、上部開
口部をサッカーにつなぎ減圧下で未反応の塩化チオニル
を溜去した。塩化チオニルを除去した後、反応液全減圧
蒸留しリルイン酸クロライド７］、２ｆを得た。

■　５００　ｍｌｌ容量三ツフラスコ１００−ガラスピ
ーズ（５ｎ５ｉｕ＋）　（！：　ｌ　ｔ　ｙのＬ−ｆｆ
−ＧＰＣ−Ｃｄ（Ｊ！全金入、氷冷しながら激しく攪は
んしＬ−α−ＧＰＣ−ＣｄＣＡ！ｚ　ｋ粉砕した。つい
で５９．４ｆリルイン酸クロライドの無水クロロホルム
溶液６〇−を徐々に加え、更に無水ビリシン１ｌｒｎｌ
ｂ無水クロロホルム１００ｍ１の混合液を添加し、０℃
で３０分間、室温で２時間反応させた。反応終了後、反
応液全減圧蒸留ろ過装置を通してガラスピーズを除去し
た後、反応液に１００ｄメタノールをゆっくり加え、更
に１００７２．５％食塩水を加え相分離を行なった。ク
ロロホルム相を濃縮し合成り一α−ゾリルノイルホスフ
ァチゾルコリン（以下１合成ゾリルイン酸ンＣと称す）
を得た。

■　ｍ−クロロ安息香酸２ｒ’ｉクロロホルム３００−
にｆ４解し、三角フラスコ（５（１０ｍ／）中に入れ、
まわり全水冷しながらマグネチツクスターラーにて攪は
んし、その中にクロロホルム５０　ｍｌに浴かした１（
）２の合成ゾリルイン酸ＰＣｋゆっくり滴ｉ・Ｎ〜、１
０分間０℃で反応させ、続いて三角フラスコを室温に戻
し、８〜１２時間攪はんを続は更に反応させた。

社得られた反応液をシリカゲルカラム（Ｍｅｒｃｋ”）に
アゾライしクロロホルム中のメタノールを徐々に増しな
がら溶出するグラジェント溶出で精製し、クロロホルム
中メタノール４０％分画より純度９９％以上の工？キシ
化合物ゾリルノイルホスファチゾルコリン（以下Ａ−シ
リルイン酸ＰＣと称す）を８を得た。

得られたＡ−プリンレイン酸ＰＣについてＮＭＲ，ＩＲ
及びＵＶ分析を行い、構造を確認した。

結果を第４図、第５図および第６図に示す。

同様な方法で純度９９％以上のエポキシ化ソリノール酸
ホスファチゾルコリン（以下Ａ−シリノール酸ＰＣと称
す）を得た。

実施例４リ？ソームの製造：実施例１〜３で得たエポ′キシ化ホスファチシン酸誘導
体（Ａ−大豆ｐｃ％Ａ−大豆ＰＩ％Ａ−ゾリルイン酸Ｐ
Ｃ）　ｌ　（１０Ｑをクロロホルム１０−に溶＊１１．
　、史に１．５艷のクロロホルム／　メタ／　−ル／　
０．５Ｍ　Ｋ、０Ｉｌ＝７５／２５／２　（Ｖ／Ｖ／Ｖ
）の混合液全試験管壁に工？キシ化ホスファチシン酸誘
導体全付着させるように試験管を回しつつ、窒素ガスを
吹き付けながら乾燥させた。これに組織培養に於いて通
常用いられている組織培養液、例えばＲＰＭＩ　ｌ　ｆ
ｉ　４０、ＭＥＭなど全加えて、素早くポルテックス・
ミキサーにてよく攪拌して八−大豆ＰＣ，Ａ−大豆ＰＩ
、Ａ−ゾリルイン酸ＰＣの各り赦ソームを得た。

実施例５延命効果試験ニ一群６匹（オス、５週令、体重２３士ｌｒ）のＣＤＦ　
１マウスの腹腔内に白血病系腹水癌Ｌ−１２１０細胞１
０５個を移植した。移植２４時間後より１，３．５及び
７日の４回の投与計画で実施例４で調製した各リポソー
ムを第１表に示す量で腹腔内投与し、下式に基いて延命
率を求めた。

Ｔ　：　’Ｊ　’ｔ’ンーム投与群の平均生存日数Ｃ：
コントロール群の平均生存日数その結果を表１に示す。

表　　１実施例６急性毒性ニ一群１０匹（メス、５週令、体重２３土１２）のＣＤＦ
Ｉマウスの静脈内に投与して［ＪｐａｎｄＤｏｗｎ法で
調べたところ、Ａ−シリルイン酸ｐｃのＬＤｓｏは１２
００ｍｙ／に９であった。

【図面の簡単な説明】

第１図はＡ−大豆ＰＣのＮＭＲスペクトル、第２図は同
ＩＲスペクトル、第３図は同Ｗスペクトル、第４図はＡ
−ソリルイン酸ＰＣのＮＭＲスペクトル、第５図は同Ｉ
Ｒスペクトル、第６図は同ＵＶスペクトルである。以上

Claims

【特許請求の範囲】１、次の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）（式中、Ｒ＿１及びＲ＿２の少なくとも一方は、構造中
に少なくとも１個のエポキシ基を含む炭素数７〜２１の
炭化水素基を示し、残余は炭素数７〜２１の飽和もしく
は不飽和の炭化水素基を示す。Ｒ＿３は水素原子、セリ
ン残基、イノシトール残基、グリセロール残基、コリン
残基又はアミノエチル基を示す）で表されるエポキシ化ホスフアチジン酸誘導体。２、次の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）（式中、Ｒ＿１及びＲ＿２の少なくとも一方は、構造中
に少なくとも１個のエポキシ基を含む炭素数７〜２１の
炭化水素基を示し、残余は炭素数７〜２１の飽和もしく
は不飽和の炭化水素基を示す。Ｒ＿３は水素原子、セリ
ン残基、イノシトール残基、グリセロール残基、コリン
残基又はアミノエチル基を示す）で表されるエポキシ化ホスフアチジン酸誘導体を有効成
分とする制癌剤。３、エポキシ化ホスフアチジン酸誘導体のリポソームで
ある特許請求の範囲第２項記載の制癌剤。