JPS63107999A - 治療用ヒト抗シユ−ドモナス・アエルギノサ抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 シュードモナス・アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は、感染の危険にさらされた
宿主、特に嚢胞性繊維症、熱傷の患者、放射線療法もし
くは化学療法をうけた癌患者、腹部手術をうけた患者及
び集中治療中の患者に感染することが多い遍在的な細菌
である。　Ｐ。

アエルギノサによる病院感染症は、病原株が抗生物質に
耐性であることが多いことから治療が困難である。有効
な抗生物質療法が存在しないということが、シュードモ
ナス属細菌感染症を治療予防するための新たな療法の研
究を促した。Ｐ、アエルギノサ感染が免疫系に関与して
いる可能性は、正常ヒト血清中における抗シュードモナ
ス・アエルギノサ抗体の検出に端を発した［ヤングら、
インフェクション・アンド・イムニティー、第２巻、第
４９５−５０３頁、１９７０年（Ｙ　ｏｕｎｇ、　ｅｔ
ａｌ、、　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉ
ｔｙ　２　；　４９５−５０３　（１９７０））］、　
　Ｐ、アエルギノサ敗血症敗者症患けるシュードモナス
・アエルギノサエキソトキシンＡ及びリボ多糖類（ＬＰ
Ｓ）と反応するポリクローナル抗体の存在は、生存率の
増加と相関関係があった［ボラック及びヤング、ジャー
ナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション、第
６３巻、第２７６−２８６頁、１９７９年（Ｐ　ｏｌｌ
ａｃｋａｎｄ　Ｙｏｕｎｇ、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉ−ｇａｔｉｏｎ　６
３　：　２７６−２８６（１９７９））］。

抗リす多糖類免疫グロブリンはＰ、アエルギノサ感染を
防止し得ることが、マウス熱傷敗血症モデルにおいて最
近証明された［クリズ（Ｃｒｙｚ）ら、インフェクショ
ン・アンド・イムニティー、第３９巻、第１０７２−１
０７９年、１９８３年］、　Ｐ、アエルギノサ免疫型１
，２゜４及び６９国際抗原分類系血清型（Ｉ　ｎｔｅｒ
ｎａ−ｔｉｏｎａｌ　Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　Ｔｙｐｉｎ
ｇ　Ｓｙｓｔｅｍ　５ｅｒｏｔｙｐｅｓ。

ＩＡＴＳ）と反応する抗体をはじめとするヒトポリクロ
ーナルＩｇＧは、同一免疫型の生存Ｐ、アエルギノサの
侵入からマウスを保護したが、他の免疫型に対しては保
護できなかった［コリンズ及びロビー、アメリカン・ジ
ャーナル・オブ・メディシン、第７６巻、第１６８−１
７４頁、　１９８４年（Ｃｏｌｌｉｎｓａｎｄ　Ｒｏｂ
ｙ、　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ７６：１６８−１７４．１９８４］、　　
ホーマ血清型［ホーマら、ＪＰＮジャーナル・オブ・エ
クスペリメンタル・メデイシン、第４１巻。

第８９−９４頁、１９７１年（Ｈｏ＋１ｍａ　ａｔ　ａ
ｌ、。

Ｊ　Ｐ　Ｎ　Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍ
ｅｎｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ４１：８９−９４（１９
７１））１　２．７及び１３　Ｐ、アエルギノサＬＰＳ
と反応するマウスモノクローナル抗体（ＭＡｂ）が製造
された。これらのＭＡｂはマウス系における感染に対し
高度な保護を及ぼした［サワダら、ジャーナル・オブ・
インフェクショス・ディジーシス、第１５０巻、第５７
０−５７６頁。

１９８４年（Ｓａｗａｄａ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ
ｓ　１５０　：　５７０−５７６（１９８４））］。

ヒト由来ポリクローナル又はマウスモノクローナルいず
れかの抗Ｐ、アエルギノサ抗体のヒトにおける治療的用
途は、強い制限をうけている。広汎な治療的用途のため
にヒトドナー血清から十分量の適当なポリクローナル抗
体を製造することは極めて困難である。Ｐ。

アエルギノサと反応するマウスＭＡｂの使用は、抗体が
異物として認識されかつ個体が治療用ＭＡｂに対し潜在
的に有害な免疫応答を引き起こすことから、ヒトの場合
では実現不可能である。

Ｐ、アエルギノサエキソトキシンと特異的に反応するヒ
トモノクローナル抗体が製造された（欧州特許出願筒１
７６．３６５号明細書）。　この抗体は、Ｐ、アエルギ
ノサ微生物が侵入した場合にマウスを保護することがで
きる。Ｐ、アエルギノサ細胞を凝集させ得るヒトモノク
ローナル抗体は、最近日本特許出願筒６０−２４８６２
６号明細書で明らかにされた。これらの抗体はＩｇＧイ
ソタイプに属し、それらはＰ、アエルギノサ感染からマ
ウスを保護していることが示唆されている。

シュードモナス・アエルギノサの表面上に存在するリボ
多糖類と特異的に反応する抗体を分泌するヒトリンパ芽
球細胞系及びハイブリドーマが開発されている。ｇ々の
モノクローナル抗体は、Ｐ、アエルギノサのフィッシャ
ー（Ｆ　１ｓｈｅｒ）免疫型の１種以上に対して免疫的
に特異的である。抗シュードモナスモノクローナル抗体
類は、Ｐ、アエルギノサ感染症を治療上又は予防上処置
するために個別に又は併用して使用される。１種以上の
モノクローナル抗体は、免疫上の危険にされかつ免疫的
に抑制された個体を治療上又は予防上処置するために、
１種以上の抗生物質と一緒に同時投与される。

以上のように、本発明の目的はシュードモナス・アエル
ギノサ感染症から受動的に保護するためのモノクローナ
ル抗体を提供することである。他の目的は、これらのモ
ノクローナル抗体を産生ずるための手段を提供すること
である。さらに他の目的は、モノクローナル抗シュード
モナス・アエルギノサ抗体を分泌し得るハイブリドーマ
細胞系を製造することである。さらに他の目的は、抗Ｐ
、アエルギノサモノクローナル抗体を含有する医薬組成
物を提供することである。さらに他の目的は、Ｐ、アエ
ルギノサ感染症の治療又は予防的処置が必要とされる場
合に、抗Ｐ、アエルギノサモノクローナル抗体を投与す
ることからなる治療方法を提供することである。さらに
他の目的は、Ｐ、アエルギノサ感染症並びにＰ、アエル
ギノサ及び１以上の他の微生物を含む複合微生物感染症
の治療又は予防的処置が必要とされる場合に、抗Ｐ、ア
エルギノサモノクローナル抗体及び抗生物質の同時投与
からなる治療方法を提供す名ことである。

さらに他の目的は、Ｐ、アエルギノサ免疫型及び血清型
確認のためのモノクローナル抗体を提供することである
０本発明のこれら及び他の［１的は下記記載から明らか
となるであろう。

本発明は、シュードモナス・アエルギノサの特定の免疫
型と特異的に反応するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）の
産生、及び特異的モノクローナル抗体を産生ずる細胞系
に駕する。

本明細書で用いられるモノクローナル抗体という語は、
関連抗原との同種結合性という特徴をもった単一の抗体
種を表わす、ここで用いられる同種結合性とは、シュー
ドモナス・アエルギノサリボ多糖類（ＬＰＳ）上の特異
的炭化水素配列のような特異的抗原又はエピトープと結
合し得る抗体種の能力を表わす。

モノクローナル抗体は、リンパ芽球細胞又はハイブリド
ーマから産生されかつ分泌される。

リンパ芽球細胞とは、生体内で長期間かつ多世代にわた
り細胞を増殖させしかも大量の特異的抗体を産生させる
ことができるエプスタイン−バール（Ｅｐｓｔｅｉｎ−
Ｂａｒｒ）ウィルス（Ｅ　Ｂ　Ｖ）で形質転換された抗
体産生Ｂリンパ球である。本明細書で用いられるハイブ
リドーマとは、ハイブリッド細胞を形成させるために非
ＥＢＶ形質転換抗体産生Ｂリンパ球又はＥＢＶ形質転換
抗体産生Ｂリンパ芽球細胞と永久増殖性（ｉｍｍｏｒｔ
ａｌｉｚｉｎｇ）細胞との融合によって形成された細胞
を表わすが、ＥＢＶ形質転換Ｂリンパ芽球細胞の方が好
ましい。

抗体産生Ｂリンパ球又はリンパ芽球細胞は。

宿主を免疫し、抗体産生細胞を単離するか又は特異的抗
体産生細胞の存在について正常個体をスクリーニングす
ることにより得ることができる。細胞系は同種結合性と
いう特徴をもつ単一抗体を産生ずる細胞を選択するため
にクローニングされる。選択クローニングは融合前に行
なわれ、即ちこの場合にはリンパ芽球細胞がクローニン
グされ、あるいはクローニングは融合後に行なわれ、即
ちこの場合にはハイブリドーマ細胞がクローニングされ
る。クローニング方法は当該技術分野において公知であ
る。リンパ芽球細胞系及びハイブリドーマ細胞系は、モ
ノクローナル抗体を産生するために使用することができ
る。

下記の記載及び実施例はＰ、アエルギノサ免疫型１，２
，３，４，５，６及び７と反応するモノクローナル抗体
に関して本発明を説明するものであるが［フィッシャー
ら、ジャーナル・オブ・バタテリオロジー、第９８巻。

第８３５−８３６頁、１９６９年（Ｆ　１ｓｈｅｒｅｔ
　ａｌ、、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ　９８　：８３５−８３６　（１９６９））コ
、本発明は他のＰ、アエルギノサ免疫型及び血清型と反
応するモノクローナル抗体にも適用可能であると解され
る。他の血清型としてはＩＡＴＳ３及び１５があるが、
格別それらに限定されない。

抹消血リンパ球は、不連続密度勾配遠心法による全血の
分離によって、嚢胞性繊維症の健常人ボランティア又は
子供から得られる。

精製されたリンパ球は、エプスタイン−バールウィルス
（ＥＢＶ）で持続的に感染されかつこれを放出する細胞
、好ましくはＢ９５−８細胞からの上澄液と混合される
。ＥＢＶに富む上澄を得るために、Ｂ９５−８細胞は約
１×１０ｓ〜約３×１０ｓ細胞／ｍＱ、好ましくは約２
Ｘ１０’細胞／　ｍ　Ｑ　　の濃度で培養される。細胞
は、許容される培地中、好ましくは１０％牛脂児血清、
抗生物質及びグルタミン含有＋７）ＲＰＭＩ−１６４０
中約３７℃で約７日間培養される。無細胞培養液は、遠
心分離及び０．４５ｍｍフィルターでの濾過によって得
られる。約２時間にわたるリンパ球及びＥＢＶのインキ
ュベート後、細胞は遠心分離によってペレット化され、
増殖培地、好ましくは約１５％牛脂児血清、グルタミン
及び抗生物質が添加されたＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁
され、大量培養にて増殖せしめられるか又は更に好まし
くは約５００〜約７，０００細胞／ウエルの濃度で培養
プレート中に分配される。このインキューベート中に、
ＥＢＶは特異的抗体を産生ずるＢリンパ球をはじめとす
るリンパ球に感染する［バードら、ジャーナル・オブ・
エクスペリメント、第１５４巻、第８３２−８３９頁、
１９８１年（Ｂ　１ｒｄａｔ　ａｌ、、　Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍａｎｔ　１５４　：８３２−
８３９　（１９８１））コ、　ウィルス感染の結果、リ
ンパ芽球細胞と称されるリンパ球及びＢリンパ芽球細胞
と称されるＢリンパ球に関して細胞の形質転換が生じる
。Ｂリンパ芽球細胞は長期間にわたって増殖し、しかじ
も同種結合特性を備えた特異的抗体を経済的に多量に分
泌することができる。経済的に重要なことは、治療に必
要な量で生体外において産生され得るというレベルに関
してである。リンパ芽球細胞の増殖性は、増殖中の細胞
、好ましくはスティン及びシグル、セルラー・イムノロ
ジー、第７９巻、第３０９−３１９頁、１９８３年［５
ｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｓｉｇａｌ。

Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｉｍ＋＋＋ｕｎｏｌｏｇｙ　７９　
：　３０９−３１９（１９８３）］　　に記載されたよ
うに放射線照射された細胞からの上澄液の不連続密度勾
配遠心分離による精製後、植物凝集素で刺激された放射
線照射ヒト調帯血リンパ球の約５×１０４〜約５　Ｘ　
１０’個、好ましくは５　ＸＩＯ’個／ウ個用ウェルに
よって高められる。７種のフィッシャーＰ、アエルギノ
サ免疫型の各々に対する抗体の産生に関して調べるため
に、培養液は培養開始後約３週間口及び約４週間口に回
収され、固相放射免疫試験法（ＳＰＩＲＡ）、酸素結合
免疫試験法又は蛍光免疫試験法、好ましくはＳ　Ｐ　Ｉ
　ＲＡによって試験される。

成人ヒトドナー由来リンパ球から樹立された培養物のス
クリーニングにより、それぞれＰ、アエルギノサフィッ
シャー免疫型２，４及び５に対する抗体を産生する３つ
の細胞系を確認した。抗免疫型２抗体産生細胞系はＲＭ
５と称され、得られる免疫グロブリンはＭＡｂ−ＲＭ５
と称される。抗Ｐ、アエルギノサ免疫型５抗体分泌細胞
系は１１Ｆ９と称され、得られる免疫グルプリンはＭＡ
ｂ−１１Ｆ９と称される。抗Ｐ、アエルギノサ抗体分泌
細胞系はＦＤＤ７と称され、得られる免疫グロブリンは
ＭＡｂ−ＦＤＤ７と称される。

ＦＤＤ７細胞はコズバーら、ジャーナル・オブ・イムノ
ロジー、第１３３巻、第３００１−３００５頁、１９８
４年［Ｋｏｚｂｏｒ　ａｔ　ａｌ、。

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｌ　３
３　：　３００　Ｌ　−３００５（１９８４）］限界希
釈操作に供され、抗体産生クローンが単離される。抗体
はＭＡｂ−ＦＤＤ７と同一であって、ＭＡｂ−ＦＤＤ７
．７と称され、　り、ローンされるリンパ芽球細胞系は
ＦＤＤ７．７と称される。嚢胞性繊維症患者からのリン
パ球の形質転換により、Ｐ、アエルギノサフィッシャー
免疫型３．６及び７と反応する抗体を産生ずる細胞系が
得られた。この細胞系はＣＦ　−９Ｈ１０と称され、得
られる免疫グロブリンはＭＡｂ−９８１０と称される。

抗体の特徴は、ＭＡｂ−ＲＭ５がＰ、アエルギノサフィ
ッシャー免疫型２　から抽出されるリポ多糖類（ＬＰＳ
）と反応しかつに　（カッパ）Ｌ鎖をもつＩｇＭイソタ
イプであることを示している。細胞系１１Ｆ９はＩｇＭ
イソタイプのＭＡｂ−１１Ｆ９抗体を分泌し、Ｐ、アエ
ルギノサフィッシャー免疫型５から抽出されるＬＰＳと
反応する。細胞系ＦＤＤ７．７から分泌されるＭＡｂ−
ＦＤＤ７．７はＩｇＭイソタイプであって、にＬ鎖を有
し、Ｐ、アエルギノサフィッシャー免疫型４から抽出さ
れるＬＰＳと反応する。細胞系ＣＦ−９Ｈ１０はＩｇＭ
イソタイプでにＬ鎖をもつＭＡｂ−９Ｈ１０抗体を分泌
し、Ｐ、アエルギノサフィッシャー免疫型３，６及び７
かへ抽出されるＬＰＳと反応する。抗体のイソタイプは
、試験用ウェルがヒト免疫グロブリンＭ、Ｇ又はＡのＨ
（ｈｅａｖｙ）鎖に対するヤギ抗体で覆われる５ＰＩＲ
Ａ法によって決定される。ウェルはブロックされ、培養
液が加えられ、数時間インキュベートされる。大量洗浄
後、ヒトに又はλＬ免疫グロブリン鎖に対し特異的な１
ｚｓＩ−ヤギ抗体が加えられ、結合性が調べられた。

結果は、ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７．ＭＡｂ−ＲＭ５、ＭＡ
ｂ−９Ｈ１０及びＭＡｂ−１１Ｆ９はμＨ鎖を有するが
、ＭＡｂ−ＦＤＤ７Ｎ７゜ＭＡｂ−ＲＭ５及びＭＡｂ−
９Ｈ１０はにＬ（ｌｉｇｈｔ）鎖を有することを示して
いた。

細胞系ＲＭ５．ＦＤＤ７．７．　　ＣＦ−９Ｈ１０及び
１１Ｆ９は、免疫不全動物、好ましくはマウスに投与さ
れた場合に高度の受動的保護を誘導する抗体を培養液中
に分泌する。

特にＲＭ５細胞系から産生される抗体は、侵入（チャレ
ンジ）の約２時間前から侵入の約２時間以後までに約０
．０２〜約２μｇ以上／マウスの用量で投与された場合
に、生存Ｐ。

アエルギノサフイッシャー免疫型２の侵入に対して免疫
不全（Ｘｉｃｉ）マウスを保護する。

同様の条件下で、ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７はＰ。

アエルギノサフイッシャー免疫型４の侵入から特に保護
することができる。同様の量のＭＡｂ−９Ｈ１０又はＭ
Ａｂ−１１Ｆ９の投与の場合では、生存Ｐ．アエルギノ
サフィッシャー免疫型３，６及び７又は免疫型５の侵入
からＸｉｄマウスを保護する。

上記のようにして単離されるリンパ芽球細胞は、抗Ｐ、
アエルギノサモノクローナル抗体細胞系の製造並びに治
療上有効な特異的モノクローナル抗体の産生及び単離に
おいて重要な段階をなす。特異的抗体産生リンパ芽球細
胞が確認されかつ単離されたならば、これは生体外で培
養され、対応モノクローナル抗体が上記のようにして回
収される。ＥＢＶ形貿転換リンパ芽球細胞系は通常十分
量のモノクローナル抗体を産生ずるが、一部のものは限
られた寿命を有しており、通常特異的細胞系に応じて約
２〜約１４か月の期間にわたり増殖することはない。し
かしながら、はとんどの抗Ｐ、アエルギノサリンパ芽球
細胞系は単離後抗体を分泌しかつ複製し続けるが、一部
のものは１年以上の期間にわたり治療上有効量のモノク
ローナル抗体を産生ずることに注目すべきである。一部
のリンパ芽球細胞系は長期にわたって培養することがで
きず、永久増殖性細胞と融合されなければならない。

永久増殖性細胞とは、不定期間にわたって複製を継続す
ることができ、しかもリンパ芽球細胞と融合した場合に
得られるハイブリドーマと称される細胞型にかかる延命
化を付与するような細胞として定義される。許容される
永久増殖性細胞融合相手は、リンパ芽球融合相手から産
生される特異的抗体を変更させることなく、永久増殖性
を付与する。得られるハイブリドーマは一次融合によっ
て特定のリンパ芽球細胞と永久増殖細胞とが融合したも
のであって、二次融合により第二の永久増殖細胞と融合
し、二次融合相手の永久増殖性及びリンパ芽球細胞の抗
体特性をもつハイブリドーマを産生ずることができる。

−次融合又は二次融合の場合において、融合細胞は当該
技術分野で公知の方法によりリンパ芽球細胞に特有の特
異的モノクローナル抗体の産生に関してスクリーニング
される［一般的には。

コーラ−及びミルスタイン、ネーチャー、第２５６巻、
第４９５−４９７頁、１９７５年（Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎ
ｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、　Ｎａｔｕｒｅ　２５６　：４
９５−４９７　（１９７５））及び複数融合に関するカ
ブラン（Ｋａｐｌａｎ）、米国特許第４．５８２，７９
７号明細書参照］、結果的に、元々のモノクローナル抗
体産生リンパ芽球細胞に由来するすべての細胞は正確に
同一抗体を産生しており、誘導性細胞と称される。誘導
性細胞としては、世代又は核型の同一性にかかわりなく
、リンパ芽球細胞のあらゆる後代、子孫又は派生物、並
びにハイブリドーマ及びその後代、子孫又は派生物を含
む融合によるあらゆる細胞が挙げられる。永久増殖性細
胞としては、特にミエローマ性Ｂリンパ球、非抗体産生
Ｂリンパ芽球細胞、異種間融合により得られるヘテロミ
エローマ、又はヒト。

マウス、ラット及びモルモットをはじめとする様々な哺
乳動物種から単離される他の形質転換細胞があるが、ヒ
トリンパ芽球及びヒトマウスへテロミエローマが好まし
い。許容される融合相手としては、格別限定されないが
、ヒトミエローマ細胞ＧＭ４６７２［ショーンフェルド
ら、ジャーナル・カブ・クリニカル・インベステイゲー
ション、第７０Ｓ、第２０５−２０８頁、１９８２年（
Ｓ　ｈｏｎｅｆｅｌｄｅｔ　ａｌ、＋　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｇｓｔｉｇａ−ｔｉ
ｏｎ　７０　：　２０５−２０８（１９８２））］：ヒ
トリンパ芽球ＫＲ−４及びヒトハイブリッドミエローマ
ＫＲ−１２［コズバーら、ジャーナル・カブ・　イムノ
ロジカル・メソッズ。

第８１巻、第３１−４２頁、１９８５年（にｏｚｂｏｒ
　ｅｔ　ａｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｃａｌ阿ｅｔｈｏｄｓ　　８１　　：　　３１
−４２　　（１９８５）　　）　　］；ヒヒトマウスへ
テロミエローマ系ｓＨＭ　　Ｄ３３［テンプら、プロシ
ーディング・カブ・ナショナル・アカデミ−・カブ・サ
イエンスＵＳＡ、第８０巻、第７３０８−７３１２頁、
１９８３年（Ｔｅｎｇ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃｅｅ
ｄｉｎｇ　ｏｆＮａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏ
ｆ　　５ｃｉｅｎｃｅ　　ＵＳＡ。

８０　：　７３０Ｂ−７３１２（１９８３）　）及び米
国特許第４，５７４，１１６号明細書参照］及び５ＢＣ
−Ｈ２Ｏ［ファング（Ｆ　ｏｕｎｇ）ら、ジャーナル・
カブ・イムノロジカル・メソッド、第７０巻、第８３−
９０頁、１９８４年コニヒトリンパ芽球ＷＩ−Ｌ２−７
２９ＨＦ、［米国特許第４，５９４，３２５号明細書コ
；又はＮＳ、１のようなマウスミエローマ細胞［コート
（Ｃｏｔｓ）ら、プロシーディング・カブ・ナショナル
・アカデミ−・カブ・サイエンスｔＪＳＡ、第８０巻、
第２０２６−２０３０頁、１９８３年］があるが、ＫＲ
−４及びＳＨＭ−Ｄ３３が好ましく、ＳＨＭ−Ｄ３３が
最も好ましい。ＲＭ５．ＦＤＤ７．７．ＣＦ−９Ｈ１０
及び１１Ｆ９細胞は、コズバーら、プロシーディング・
カブ・ナショナル・アカデミ−・カブ・サイエンスＵＳ
Ａ、第７９巻、第６６５１−６６５５頁、１９８２年に
記載されたＫＲ−４細胞又は米国特許第４，５８２，７
９７号明細書に記載されたＳＨＭ−Ｄ３３細胞と融合せ
しめられる。約１０７個の抗体産生リンパ芽球細胞ＲＭ
５．ＦＤＤ７．７．ＣＦ−９Ｈ１０又は１１Ｆ９及び約
１０７個のＫＲ−４細胞又はＳＨＭ−Ｄ３３細胞は、−
次融合において、約４５％ポリエチレングリコール分子
量約４０００　ｍｏｌ、ｔｚｔ、の存在下で約１分間混
合される。次いで細胞懸濁液は約１０分間かけて約１＝
１０に希釈され、約３７℃で約３０分間インキュベート
される。ポリエチレングリコールは遠心分離により除去
され、細胞は培地中で、好ましくは約１５％牛脂児血清
補充ＲＰＭ１１６４０中で、約１０’細胞／ウエルの濃
度まで培養される。各ウェルには放射線照射ヒト訳帯血
すンパ球約５×１０４／ウェルが加えられる。約３７℃
で約２４時間インキュベート後、培地は取除かれ、ヒポ
キサンチン約１０−’Ｍ、アミノプテリン約４　Ｘ　１
０−’Ｍ、　チミジン約１０−５Ｍ及びウアバイン約５
Ｘ１０−’Ｍ金含有新鮮ＲＰＭＩ−１６４０と交換され
る。培地は約３〜４日毎に交換される。約３週間後、培
養液は上記のようなＰ、アエルギノサフィッシャー免疫
型特異的抗体に関して試験される。しかしながら、いか
なる上記リンパ芽球細胞もあらゆる許容される永久増殖
性細胞と融合し得ることが留意されねばならず、したが
ってスクリーニングされかつ特定のハイブリドーマが単
離される。スクリーニング及び単離の基準は、細胞が特
異的免疫型抗体又は１種以上のフィッシャー免疫型と反
応する抗体を産生ずるか否かである。前述のように、こ
れらのハイブリドーマは他の永久増殖性細胞と１回以上
にわたり融合することができる。更に融合したか否かは
、リンパ芽球及び−次融合細胞に関する融合の場合と同
様の方法でスクリーニングされる。操作の方法は本明細
書に記載されているか、又は当該技術分野において公知
である。抗Ｐ、アエルギノサ抗体産生リンパ芽球細胞と
の一次融合の結果、下記ハイブリトッド又はハイブリド
ーマが得られる：ＲＭ５ＸＫＲ−４又はＳＨＭ−Ｄ３３
　：　ＦＤＤ７．７ＸＫＲ−４又はＳＨＭ−Ｄ３３　；
ＣＦ−９Ｈ１０ＸＫＲ−４又はＳＨＭ−３３：１１Ｆ９
ＸＫＲ−４又はＳＨＭ−Ｄ３３．特徴的ハイブリドーマ
としては、格別限定されないが、ＲＫ−５２，ＲＭ５ｘ
ＫＲ−４，ＦＫ−１６−４，ＦＤｏ７．７ｘＫＲ−４；
　　ＣＫ−ＩＧｌｌ−１８，ＣＦ１２１９−９Ｈ１０Ｘ
ＫＲ−４、Ｒ８−１Ｈ７，ＲＭ５ＸＳＨＭ−Ｄ３３　；
ＲＳ−１Ｇ１１、ＲＭ５ＸＳＨＭ−Ｄ３３がある。−次
融合により産生されるハイブリドーマは、リンパ芽球細
胞が融合前にクローニングされなかったならば、コズバ
ーら、ジャーナル・カブ・イムノロジー、第１３３巻、
第３００１−３００５頁、１９８４年の限界希釈法によ
ってクローニングされる。二次融合は、コズバーの方法
によりクローニングされて得られるハイブリドーマを用
いて上記方法に従い行なわれる１個々のハイブリドーマ
から産生されるＰ、アエルギノサ特異的ＭＡｂは抗原認
識性及びマウス保護性によって規定される対応リンパ芽
球細胞系から産生される特異的モノクローナル抗体の特
性をすべて有している。ＲＭ５ハイブリドーマは、フィ
ッシャー免疫型４Ｐ、アエルギノサの侵入からマウスを
特異的に保護するモノクローナル抗体を産生ずる。ＣＦ
９Ｈ１０由来ハイブリドーマはＰ、アエルギノサフィッ
シャー免疫型２の侵入からマウスを特異的に保護するモ
ノクローナル抗体を産生じ、一方ＦＤＤ７．７ハイブリ
ドーマはＰ、アエルギノサフィッシャー免疫型３，６及
び７の侵入からマウスを特異的に保護するモノクローナ
ル抗体を産生じ、他方１１　Ｆ９由来ハイブリドーマは
フィッシャー免疫型５の侵入からマウスを特異的に保護
するモノクローナル抗体１産生する。

治療及び予防的用途をもつＰ、アエルギノサに対するモ
ノクローナル抗体としては、様々なフィッシャー免疫型
１−７又はＩ　ＡＴＳ血清型３及び１５に対する１種以
上の抗体がある。最も広範囲の治療及び予防的効力は。

７種すべてのシュードモナス免疫型及び２種の血清型と
反応するモノクローナル抗体をすべて用いることによっ
て得られる。このためには、単一の免疫型もしくは血清
型特異性をもつ７種以上の個々のモノクローナル抗体又
はそれらが複数の免疫型特異性を有する場合にはより少
数種の抗体を用いる。抗Ｐ、アエルギノサモノクローナ
ル抗体の予防及び治療用製剤は少なくとも２種の別個の
モノクローナル抗体を含有すると通常考えられる。

本発明のモノクローナル抗体は、ｅＡ準内的医薬実務従
い、医薬組成物中単独で、又は好ましくは薬学上許容さ
れる希釈剤もしくは担体と混合させて、ヒトをはじめと
する哺乳動物に投与することができる。許容される希釈
剤としては、格別限定されないが、生理食塩水、緩衝液
、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロ
ース食塩水及び乳酸リンゲル注射液、又は抗生物質のよ
うな他の治療剤もしくは治療価値のある他のモノクロー
ナル抗体を含有した希釈液がある。治療価値のある他の
モノクローナル抗体としては、他のダラム陰性もしくは
グラム陽性細菌及び抗生物質に耐性であるかもしくは耐
性を獲得するであろう他の微生物に対して反応する特異
的抗体がある。抗Ｐ、アエルギノサモノクローナル抗体
は、局所的に又は非経口的に投与することができる。局
所投与法としては、皮膚上及び肺への吸入による局所法
がある。局所用医薬担体としては、格別限定されないが
、アルブミン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、プルロニック、テトロニック又はアルギネートのよ
うな軟膏、ペースト、溶液、ゲル、固体水溶性ポリマー
がある。非経口投与法としては、静脈内、筋肉内、腹腔
内及び皮下投与がある。非経口投与の場合、モノクロー
ナル抗体の無菌溶液が通常調製され。

溶液のｐＨが適度に調整されかつ緩衝化される。溶質の
総濃度は製剤を等張化させるように調節されるべきであ
る。

Ｐ、アエルギノサに対するモノクローナル抗体がヒト患
者において治療及び予防上使用される場合、１日量は通
常担当医によって決定される。しかも、投与量は個々の
患者の年令、体重及び応答性、並びに患者の症状の程度
に応じて変動する。しかしながら、大半の場合において
、有効な１日量は１回又は分割用量で約１μｇ〜約３０
０μｇ／ｋｇ体重の範囲である。一方、ある場合にはこ
れらの制限を超えた投与量とすることが必要である。

本発明の範囲内には、抗生物質のような抗菌剤と併用さ
れる抗Ｐ、アエルギノサモノクローナル抗体の併合治療
予防的使用をも包含する。抗生物質は、様々な微生物種
によって産生され、他の微生物の増殖を抑制し、かつそ
れらを最終的には破壊するような化学物質である。　こ
の併合又は同時投与療法は、Ｐ。

アエルギノサ感染症並びにＰ、アエルギノサ及び１種以
上の細菌もしくは他の微生物に起因する複合感染症の双
方を治療する上で有利である。最初の場合には、Ｐ、ア
エルギノサに対するモノクローナル抗体の作用は、細菌
の増殖を抑制し、かつモノクローナル抗体がシュードモ
ナス属細菌を攻撃し更にその免疫学的に除去し得るよう
な抗生物質の存在下で高められる。逆の事態、即ちモノ
クローナル抗体が細菌細胞に攻撃し、かつ抗生物質の抗
菌活性を高め得る免疫的除去を開始するような事態も生
じる。いずれも場合においても、併合療法は、モノクロ
ーナル抗体又は抗生物質いずれか単独の場合よりも有効
である。併合療法の場合、各成分の量は総量が最大の抗
菌作用を発揮するように調整されねばならない。このた
めには、最適の投与量とするために、モノクローナル抗
体及び抗生物質の各成分の量を増減させることが必要で
ある。これは最も容易には担当医によって行なうことが
できる。

複合感染症は通常、熱傷患者、放射１１！療法もしくは
化学療法をうけた癌患者、腹部手術をうけた患者及び集
中治療中の患者のような様々な形の免疫不全又は低下を
きたした個体において発生する。抗Ｐ、アエルギノサモ
ノクローナル抗体はシュードモナス属細菌の免疫的除去
を誘導する一方で、抗生物質は他の細菌を破壊又は抑制
する。抗生物質は上記のようにモノクローナル抗体の活
性をも高める。

Ｐ、アエルギノサ免疫型及び血清型と反応するモノクロ
ーナル抗体は、実際の感染原因が不明である場合にも抗
生物質と一緒に投与することができる。抗Ｐ、アエルギ
ノサモノクローナル抗体と一緒に投与される広域スペク
トル抗生物質又は２種以上の抗生物質の使用は、細菌等
の感染源が確認できなかった場合に特に患者において抗
菌活性スペクトルを高めるようになるであろう。したが
って、感染性微生物を制御する上で十分に広域の活性を
有するような適当な抗生物質を選択することが有利であ
る。各成分の有効投与量は上記のようにして決定される
。抗生物質は格別限定されないが、網羅的でないものの
実例が示されている下記群から選択される： ■、アミノグリコシド系 アミカシン　　　　　リンコマイシン クリンダマイシン　　硫酸ネチルマイシンジベカシン　
　　　　トブラマイシン 硫酸ゲンタマイシン ２、セファロスポリン系 セファクロール　　　セホチアム セファドロキシル　　セホキシチン セホペラゾン　　　　セフトリアキソンナトリウム セボペラゾン　　　　セフシキシジム ナトリウム セホタキシム　　　　セフチゾキシム セフタキシム　　　　セファレキシン ナトリウム セフメタゾール　　　セフトリアキソンセフメノキシム
　　　セホペラゾン セフタジジム　　　　セフロキシム ３、マクロライド系 ４、ペニシリン系 アンピシリン　　　　ペニシリン■ ペニシリンＧ　　　　ピペラシリン ピペラシリンナトリ ラム ５、テトラサイクリン系 塩酸ミノサイクリン 塩酸テトラサイクリン ドキシサイクリン ６、ポリペプチド系 ポリミキシンＧ　　　バシトラシン ７、ポリエン系 アムホテリシンＢ　　　ニスタチン 上記物質は注射可能な局所用抗生物質である。

１種以上のモノクローナル抗体が１種以上の抗生物質と
一緒に同時投与される場合には。

抗生物質の１日量は通常、抗生物質製造者又は一般の医
療実務者から推薦されるような担当医によって決定され
る。しかも、投与量は。

個々の患者の年令、体重及び応答性、並びに患者の症状
の程度に応じて変動する。抗生物質の投与量は当該技術
分野において公知である。

下記実施例は本発明を説明するものであるが、しかしな
がらそれらと同一の実施例のみに限定されるわけではな
い。

実施例　１ 特　的抗体産生細胞の形質転換　び確認正常ボランティ
ア又は嚢胞性繊維症患者のヒト抹消血リンパ球を、２５
０Ｘｇでのハイパキュー−フィコール（Ｈｙｐａｑｕｅ
−Ｆ　１ｃｏｌ）密度勾配遠心分離によって、新鮮採取
抹消血から得た。ヘパリン処理血液１０ｍＱがら単離さ
れたリンパ球ｌＸｌ０’個をＲＰＭＩ−１６４０１ｍＡ
に懸濁し、継続的に感染性エプスタイン−バールウィル
スを産生放出するＢ９５−８細胞［ローゼンら、ジャー
ナル・カブ・イムノロジー、第１３０巻、第２８９９−
２９０２頁、１９８３年］から得られる無細胞培養液３
ｒｎＱの添加後、それらを３７℃で２時間インキュベー
トした。リンパ球を遠心分離により回収し、１５％牛賄
児血清、グルタミン及び抗生物質補充ＲＰＭＩ−１６４
０培地に再懸濁し、補充ＲＰＭＩ−１６４０培養液０．
２ｍＱの入ったウェル当たりＩ　Ｘ　１０３．　３　Ｘ
１０３又は６　Ｘ　１０’個の細胞濃度で９６ウエル培
養プレート中に分配した。形質転換細胞の増殖性を、植
物凝集素［ジフコ（Ｄ　１ｆｃｏ）］１　：　１０００
　の添加により刺激された５×１０’細胞／ウエルの濃
度でのハイパキュー−フィコール精製２５００ｒａｄ放
射線照射ヒト調帯血リンパ球の添加によって高めた［ス
テイーン及びシガル、セルニラ−・イムノロジー、第７
９巻、第３０９−３１９頁、１９８３年］、細胞を５％
ＣＯ□−９５％空気の湿潤雰囲気Ｆ３７℃でインキュベ
ートした。リンパ球培養物に最初の単離期間中において
７日毎に栄養を補給した。

Ｐ、アエルギノサに対する抗体を産生ずる細胞を確認す
るために、個々のウェルの培養液を培養後３週間口及び
４週間口に回収し、抗体の存在否に関して調べた。　Ｐ
、アエルギノサＬＰＳ免疫型又は血清型抗体の存在は、
固相放射免疫試験法（ＳＰＩＲＡ）によって調べた。５
ＰＩＲＡ法に必要な抗原は、トリプシン大豆ブイヨン中
で細菌約１０″′個／ｌ１１１２の濃度となるまでＰ、
アエルギノサ免疫型１〜７を増殖させることによって製
造した。細菌細胞を２０分間５．００Ｏｒｐｍの遠心分
離によって回収し、ｐＨ７，２の０．１５Ｍ　　ＮａＣ
Ｑ　　０．０１Ｍリン酸塩含有のリン酸緩衝液（ＰＢＳ
）で２回洗浄し、透過率１２〜１６％となる濃度でＰＢ
Ｓに再懸濁し、沸騰水浴上に　２．５時間置き、しかる
後チメロサールを０．０１％加えた。５ＰＩＲＡのため
に、各細菌免疫型をｐＨ９，０の０．０２Ｍトリスで１
０倍希釈し、０．１ｍ１２を９６ウエル丸底ポリビニル
アツセイプレートの、適当なウェルに加えた。

シュードモナス免疫型の結合を最小の１６時間にわたり
４℃で行なった。上澄液を除去し、ウェルを１％牛血清
アルブミン含有のＰＢＳ＋０．０２％アジ化ナトリウム
（Ｐ　Ｂ　Ｓ−Ａ　Ｚ）でブロックした。２５℃で１時
間のブロッキング後、ウェルをＰＢＳ−ＡＺで洗浄し、
形質転換細胞の培養上澄液２５μＱを加えた。

室温で少なくとも３時間のインキュベート後。

ウェルをＰＢＳで洗浄して遊離抗体を除去し、１％ＢＳ
Ａ　　ＰＢＳ−ＡＺで希釈されたヒトλＬ鎖及びにＬ鎖
に対し特異的な１２％　工標識アフィニティー精製ヤギ
抗体１００μＱを加えた０両抗体の濃度は、ウェル当た
り各々２５、ＯＯＯｃｐｍ　が加えられるように調整し
た。　プレートを一夜４℃でインキュベートし、ＰＢＳ
−ＡＺで洗浄し、各ウェルを放射線量測定のために取外
した。ウェストファール及びジャン、炭水化物化学にお
ける方法、第５巻、第８３−９１頁、　　１９６５年［
Ｗｅｓｔｐｈａｌ　ａｎｄ　Ｊａｎｎ、　　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｉｎ　　Ｃａｒｂｏ−ｈｙｄｒａｔｅ　Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ　Ｖ、８３−９１　、　１９６５］の方法に
より製造された無細胞リポ多糖類を５ＰＩＲＡ法におい
て全細菌細胞の代わりに用いた。水相中の核酸を３７℃
で２時間ＤＮＡアーゼ及びＲＮＡアーゼ（各々２０μｇ
／ｍΩ）での処理により除去し、残留タンパク貿を１６
時間プロナーゼ２０μｇ　／　ｍ　Ｑでの処理により除
去した。ＬＰＳを１６時間１００．０００　Ｘ　ｇ　の
遠心分離により精製した［ジョンソン及びベリー、カナ
ディアン・ジャーナル・カブ・ミクロバイオロジー、第
２２巻、第２９−３４頁、１９７６年（Ｊｏｈｎｓｏｎ
　　ａｎｄ　　Ｐｅｒｒｙｗ　　Ｃａｎａｄｉａｎ　　
Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　２
２　：　２９−３−４　（１９７６））］。

精ｆｉＬＰｓを１％トリエチルアミン含有水に１■／　
ｍ　Ｑで懸濁した。　５ＰＩＲＡの前に、それをｐ　Ｈ
９、０（７）　０　、０２　Ｍ　）−ＩＪ　Ｘ　”Ｑ　
１０倍希釈した。

培養液は２００力ウント／分（ｃ　ｐ　ｍ）以下でしか
産生されないいずれの免疫型に対する抗体をも含有して
おらず、かかる値はバックグランドと考えられた。バッ
クグランドよりも少なくとも２〜３倍高い計測数を生じ
る培養液上澄は、抗体陽性であると考えられた。

少なくとも２０種のＥＢＶ形質転換サンプル、即ち約１
６，０００個の培養液について。

１つの培養液がフィッシャー免疫型２に対し陽性の応答
を示す前に、７種すべてのＰ、アエルギノサ免疫型に対
して試験した。健常ボランティアから単離されたこれら
の細胞は免疫型２特異的モノクロ一ナル抗体を分泌し、
ＲＭ５と称され、モノクローナル抗体はＭＡｂ−ＲＭ５
と称された。

同様の実験条件下、免疫型４特異的免疫グロブリン分泌
細胞を含有する第二のウェルを確認した。健常ボランテ
ィアから得られるこの細胞系はＦＤＤ７と称され、その
モノクローナル抗体はＭＡｂ−ＦＤＤ７と称された。

ＦＤＤ７細胞をコズバーら、ジャーナル・カブ・イムノ
ロジー、第１３３巻、第３００１−３００５頁、１９８
４年の限界希釈操作に供し、抗体産生クローンを単離し
た。抗体はＭＡｂ−ＦＤＤ７と同一であり、ＭＡｂ−Ｆ
ＤＤ７．７と称され、　クローニングされたハイブリド
ーマはＦＤＤ７．７と称される。

同様の条件下で１０種の嚢胞性繊維症リンパ球形質転換
体を試験した後、免疫型３，６及び７特異的免疫グロブ
リン分泌細胞を含有するウェルを確認した。この細胞系
はＣＦ−９Ｈ１０と称され、そのモノクローナル抗体は
ＭＡｂ−９Ｈ１０と称された。リンパ芽球細胞系ＣＦ−
９Ｈ１０のサンプルは、ブタベスト条約に基づき１９８
７年７月９日に米国型培養寄託機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ
　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）　
、　１２３０１バークローン・ドライブ。

ロックビル、メリーランド２０８５２．ＵＳＡに寄託さ
れ、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９４７７が付与された。

同様の条件下、８０種の正常リンパ球形質転換体、約６
４，０００個のウェルを試験した後、免疫型５特異的モ
ノクロ一ナル抗体分泌細胞を含有する細胞を確認した。

この細胞系は１１Ｆ９と称され、そのモノクローナル抗
体はＭＡｂ−１１Ｆ９と称された。リンパ芽球細胞系１
１Ｆ９のサンプルは、ブタペスト条約に基づき１９８７
年７月１日に米国型培養寄託機関、１２３０１パークロ
ーン・ドライブ、ロックビル、メリーランド２０８５２
゜ＵＳＡに寄託され、ＡＴＣＣ番号ＨＢ９４６４が付与
された。

実施例　２ モノクローナル抗　の特徴 実施例１の抗体ＭＡｂ−ＲＭ５．ＭＡｂ　−ＦＤＤ７．
７．ＭＡｂ−９Ｈ１０及びＭＡｂ−１１Ｆ９を、様々な
免疫型のＰ、アエルギノサから抽出されたリポ多糖類（
ＬＰＳ）に対する特異性を調べるために、５ＰＩＲＡ法
によって試験した。ＭＡｂ−ＲＭ５はＰ、アエルギノサ
免疫型２のＬＰＳとだけ反応したが、ＭＡｂ−ＦＤＤ７
．７はＰ、アエルギノサ免疫型４のＬＰＳと特異的に結
合した。ＭＡｂ−９Ｈ１０はＰ、アエルギノサ免疫型３
，６及び７のＬＰＳとだけ反応したが、ＭＡｂ−１１Ｆ
９はＬＰＳ免疫型５と特異的に結合した。ＭＡｂ−９Ｈ
１０とＰ、アエルギノサ免疫型３，６及び７のＬＰＳと
の相互反応を電気泳動及び免疫化学分析によって更に調
べた。

操作法は、サドッフら、アンチバイオティクス・ケモセ
ラピー、第３６巻、第１３４−１４６頁、１９８５年　
［Ｓ　ａｄｏｆｆ　ｅ　ｔ　ａ　１．　。

Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　
３６　：　１３４−１４６　（１９８５）］に記載され
た方法と同様であった。簡単に述べると、各ＬＰＳ調製
物をポリアクリルアミドゲルでの電気泳動に供し、次い
でニトロセルロース紙ストリップに移し替えた。これら
のストリップをＭＡｂ−９Ｈ１０と一緒にインキユベー
にし、抗体結合物をヒトＩｇＭに対する１２８　工標識
ヤギ免疫°グロブリン次いでオートラジオグラフィーに
より視覚化させた。３種すべての免疫型（３，６及び７
）のＬＰＳの場合には、ＭＡｂ−９Ｈ１０はＬＰＳに典
型的がっ特徴的な電気泳動移動パターンの分子種と結合
することが判明した。これらの実験では、ＭＡｂ−９Ｈ
ＩＯがＬＰＳと反応し、ｒ＝ｐｓｍ製物中に汚物中質と
して存在する他の分子種とは反応しないことを明らかに
した。５ＰＩＲＡ法を利用して、モノクローナル抗体Ｈ
及びＬ鎖のイソタイプを決定した。ミクロアッセイ用ウ
ェルをヒト免疫グロブリンＭ、Ｇ又はＡに対するヤギ抗
体で被覆した。ブロッキング後、ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７
．ＭＡｂ−ＲＭ５．ＭＡｂ−９Ｈ１０又はＭＡｂ−１１
Ｆ９含有の組織培養上澄を数時間かけて加えた。ウェル
の大量洗浄後、ヒトにもしくはλＬ免疫グロブリン鎖に
対し七特異的な１２″ニ一ヤギ抗体及び緩衝液を加え、
前記のように結合性を調べた。

ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７．ＭＡｂ−ＲＭ５．ＭＡｂ−９Ｈ
１０及びＭＡｂ−１１Ｆ９に対する陽性反応は、ヤギ抗
ヒトＩｇＭで被覆されたウェルにおいて観察されたが、
ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７．ＭＡｂ−ＲＭ５及びＭＡｂ−９
Ｈ１０は１２−ｘ標識ヤギ抗ヒトにＬ鎖と反応した。

このことは、ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７．ＭＡｂ−ＲＭ５　
、　ＭＡｂ−９Ｈ１０及びＭＡｂ−１１Ｆ９抗体はμＨ
鎖を有し、ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７゜ＭＡｂ−ＲＭ５及び
ＭＡｂ−９Ｈ１０抗体はにＬを有することを示している
。

実施例３ 実施例１のモノクローナル抗体を、生存Ｐ。

アエルギノサの侵入からマウスを保護し得るそれらの能
力に関して調べた。雌性ＣＢＡ／１１Ｌ及び雄性（ｉ’
）ＤＢＡ／２もしくはＣ５７Ｂ１／６間の交配から得ら
れる免疫不全（ｘｉｄ）雄性マウスを細菌侵入前にシク
ロホスファミド２５０ｍｇ／ｋｇ体重での４日間の処理
により好中球減少症にさせた。特定の免疫型に対するＭ
Ａｂを細胞上澄液として腹腔内（ｉ、ｐ、）又は静脈内
（ｉ、ｖ、）投与したが、この細胞上澄液はかかる目的
のために抗生物質非存在下で細胞を増殖させて得られた
ものである。

抗体を細菌侵入の２時間前（−２）もしくは１５分前（
−０，２５）又は対応免疫型の侵入の２時間後（＋２）
に投与した。適当なＭＡｂ。

即ちＲＰ　Ｍ　１−１６４０　＋　１５％牛脂児血清０
．５ＩＩＱ中１ｇＭＬμｇを１回で投与したが、コント
ロールでは抗体産生ハイブリドーマ細胞を増殖させるた
めに使用されたものと同様の上記培地のみを投与した。

ＭＡｂの効力は、一群の実験動物のうち５０％を死亡さ
せる（ＬＤｓ、）ために必要な生存細菌数を計測するこ
とによって調べた。ＬＤ、、値はリード及び　ミュエン
チ、アメリカン・ジャーナル・カブ・ハイジーン、第２
７巻、第４９３−４９７頁、１９８５年［Ｒｅｅｄ　ａ
ｎｄ　Ｍｕｅｎｃｈ。

Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｙｇｉｅ
ｎｅ　２７　：　４９３−４９７（１９８５）］に記載
されている如く決定した。特異性は、ＭＡｂ−ＲＭ５を
投与しかつ免疫型４の毒性Ｐ、アエルギノサを侵入させ
ることによって評価した。下記結果が得られた。

コントロール　１．Ｖ、　　−２２１ ＭＡｂ−ＲＭ５　１．Ｖ、　　−２２１，４ｘｌＯ’Ｍ
Ａｂ−ＲＭ５　１．Ｖ　　　−０，２５２６，７ｘｌＯ
”コントロール　１．Ｐ、　　−２２２，Ｉ　Ｘ　１０
１ＭＡｂ−ＲＭ５　１．Ｐ、　　−２２４，７Ｘ１０”
ＭＡｂ−ＲＭ５　１．Ｐ、　　−０，２５２２，ｌＸｌ
０”コントロール　１．Ｐ、　　−２，＋２　４　４．
６ＭＡｂ−ＲＭ５　１．Ｐ、　　−２，４２４３，ｌＸ
１０これらの結果は、免疫型特異性ＭＡｂが対応Ｐ、ア
エルギノサの侵入からマウスを保護することを示してい
る。免疫型２に対するモノクローナル抗体ＭＡｂ−ＲＭ
、５は、Ｐ、アエルギノサ免疫型４の侵入から保護する
ことができなかった。

有効投与量は適当なＰ、アエルギノサ免疫型の侵入する
２時間前に様々な濃度のＭＡｂ−ＲＭ５をＸｉｄマウス
に注射することによって決定した。各動物には、望まし
い濃度のＭＡｂを含有する培養液０　、５　ｍ　Ｑ　　
を静脈内注射した。下記結果が得られた。

ＩＬ創花１１− −３．１５ ０．００２　　　　　　　　１．５０　Ｘ　１０”０．
０２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．
２０　　×　　１０２０．２　　　　　　　　　３．４
０　Ｘ　１０’２．０　　　　　　　　　６．４０　Ｘ
　１０’これらの結果は、０．０２μｇ／マウスはどの
低量のＭＡｂレベルで対応Ｐ、アエルギノサ免疫型の侵
入からマウスを保護し得ることを示している。

ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７は、細菌侵入の２時間前に１．Ｖ
、投与された場合に、Ｐ、アエルギノサ免疫型４の侵入
からＸｉｄマウスを保護する上で有効であった。下記結
果が得られた。

コントロール　　　　−１，５Ｘ　ｔｏ”ＦＤＤ７．７
　　　０．０２　　　　１．５　ｘ　１０’ＦＤＤ７．
７　　　０．２　　　　４．７　ｘ　１０５ＦＤＤ７．
７　　　２．０　　　　４．７　ｘ　１０’ＲＭ−５１
０３Ｘ１０ これらの結果は、ＭＡｂ−ＦＩ）Ｄ７．７　　がＰ、ア
エルギノサ免疫型４の侵入からマウスを保護し、ＭＡｂ
−ＦＤＤ７．７が０．０２ＫＫ：／マウスの用量で保護
し得たことを示している。Ｐ、アエルギノサに対するモ
ノクローナル抗体ＲＭ５は、免疫型４細胞の侵入から保
護することができなかった。

Ｐ、アエルギノサに対する感受性の低い動物たる第二の
マウス系ＣＦＩ　　も、ＭＡｂ−ＲＭ５の効力を評価す
るために利用された。

マウスを細菌侵入の４日前にシクロホスファミド２５０
■／ｋｇ体重で好中球減少症にさせた。一部の動物には
、フォースバーブ及びブレン、ジャーナル・カブ・クリ
ニカル・パソロジー、第２５巻、第６５−６８頁、１９
７２年［Ｆｏｒｓｂｅｒｇ　ａｎｄ　Ｂｕｌｌｅｎ、　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｐａｔｈｏｌ
ｏｇｙ　　２５　：　６５−６８（１９７２）］　　に
従いクエン酸第二鉄アンモニウムの形でＦｅ０．０２　
■／ｋｇ体重を細菌侵入と同時に投与することにより、
細菌侵入に対して更に感作させた。実験マウスを細菌侵
入の２時間前及び２時間後にＭＡｂ−ＲＭ５５０μｇ／
マウスで処理し、コントロールをＲＰＭＩ−１６４０で
処置した。下記結果が得られた。

ニウム ＋　　　　　−ＲＰＨＩ　　　２．４５ｘｌＯ’＋　　
　　　−ＲＭ５　　　＞２．６０　Ｘ　１０’＋　　　
　　＋　　　　ＲＰＭＩ　　（７，９３Ｘ　１０３＋　
　　　　＋　　　　ＲＫ５　　１．３３Ｘ１０’これら
の結果は、シクロホスファミド及びクエン酸第二鉄アン
モニウムによってシュードモナス感染に対し感作された
ＣＦＩマウスへＭＡｂ−ＲＭ５を投与した場合にＬＤ、
。値を＜７．９３　　Ｘ　　１０３から１．３　　Ｘ　
　ＩＯｓに上昇させたことを示している。ＭＡｂ−ＲＭ
５は、シクロホスファミド単独で感作されたマウスニオ
イテＬＤ５゜値を２．４５　　Ｘ　　１０’から２．６
　　Ｘ　　１０’に上昇させた。

ＭＡｂ−９Ｈ１０は、細菌侵入の２時間前に１．Ｖ、投
与された場合に、Ｐ、アエルギノサ免疫型３及び６の侵
入からＸｉｄマウスを保護する上で有効であった。下記
結果が得られた。

ＭＡｂ−９Ｈ１０による保護 コントロール　−−−−−３２，９Ｘ　１０’９Ｈ１０
２，００３１，４ｘ　１ｏ３ ９Ｈ１００，５０３２，９Ｘ　１０’ ９Ｈ１００，１０３６，３Ｘ　１０” コントロール　−−−−−６２，４Ｘ　１０゜９Ｈ１０
２，００６１，Ｉ　Ｘ　１０”９Ｈ１００，５０６４，
２Ｘ　１０” ９Ｈ１００，１０６６，２Ｘ　１０１ これらの結果は、ＭＡｂ−９Ｈ１０がＰ。

アエルギノサ免疫型５の侵入からマウスを保護し、０．
５μｇ〜２．０μｇの用量範囲で保護し得たことを示し
ている。

細胞系ＲＭ５及びＦＤＤ７．７から分泌されるモノクロ
ーナル抗体を、細菌侵入後に投与された場合にマウスを
保護するそれらの能力について試験した。免疫不全Ｘｉ
ｄマウスに細菌侵入時とは異なる時間において抗体を１
．Ｖ、投与した。

ＭＡｂ　　　侵入微生物　　ＬＤ５゜ 抗体　　時間　μｇ／マウス　の免疫型ＭＡｂ−ＲＭ５
　　−２　　　　０　　　　　２　　　１．０−２　　
　　１　　　　　　　　　１．４Ｘ１０’−２１２，５
１，４Ｘ　１０ｓ ０　　　　１６．７　Ｘ　１０’ ＋２　　　　１　　　　　　　　　３．Ｉ　Ｘ　１Ｇ”
＋２１２．５　　　　　　　　４．ＯＸ　１０３！１ｌ
Ａｂ−ＦＤＤ７．７　−１／２　　　　０　　　　　４
　　　１．ＯＸ　１０”−１／２　　　１５　　　　　
　　　　２．７　Ｘ　１０’＋２　　　　　ｉｓ　　　
　　　　　　　３．２　Ｘ　ｔｏ’＋４　　　　　　　
　１５　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．５　
　Ｘ　　１０３＋５　　　　１５　　　　　　　　　１
．ＯＸ　１０’＋ｇ　　　　　１５　　　　　　　　　
４．７　Ｘ　１０３＋１０　　　　１５　　　　　　　
　　２．２　ｘ　１０２結果は、ＭＡｂ−ＲＭ５及びＭ
　Ａｂ−ＦＤＤ　７　、７が細菌侵入後に投与された場
合にマウスを保護していることから、それらの治療有効
性を示している。

実施例　４ ハイブリドーマの産生 実施例１のエプスタイン−バールウィルス形質転換リン
パ球を永久増茄性細胞と融合させて、無期限に増殖し続
けかつＰ、アエルギノサＬＰＳ特異的モノクローナル抗
体を分泌するハイブリドーマ細胞系を産生ずる。抗体産
生ｍ胞を、コズバーら、ジャーナル・カブ・イムノロジ
ー、第１３３巻、第３００１−３００５頁に記載された
リンパ芽球ＫＲ−４細胞系又は米国特許第４，５８２，
７９７号明細書に記載された永久増殖性ＳＨＭ−Ｄ３３
細胞系と融合させる。実施例１　のＲＭ５゜ＦＤＤ７．
７，１１Ｆ９　又はＣＦ−９Ｈ１０細胞系Ｉ　Ｘ　１０
’細胞数の個々の培養物を同数のＫＲ−４又はＳＨＭ−
Ｄ３３細胞と混合させる。細胞を新鮮ＲＰＭＩ−１６４
０で数回洗浄し、ＲＰＭＩ−１６４０中の４５％ポリエ
チレングリコール（Ｐ　Ｅ　Ｇ）分子量４００゜に１分
間かけて静かに再懸濁する。ａ！ｉ濁液を１０分間かけ
て新鮮培地で１：１０に希釈し、次いで３７℃で３０分
間インキュベートする。

ＰＥＧを３回洗浄して除去し、細胞混合物を平底９６ウ
エルプレート中のＯ，１ｍ１２血清補充培地中で培養し
た。各ウェルにＩ　Ｘ　１０’細胞数及び５　Ｘ　１０
’細胞数の放射線照射ヒト渋帯血リンパ球を加える。細
胞を３７℃で培養する。２４時間後、培地をヒポキサン
チン（１０”−’Ｍ）、アミノプテリン（４Ｘ１０″″
７Ｍ）、チミン：／　（１，６Ｘ１０″″′Ｍ）及びウ
アバイン（５Ｘ　１０−’Ｍ）含有ＲＰＭＩ−１６４０
と交換する。培地を３〜４日毎に交換し、３週間後に培
養液を実施例１に記載されたＰ、アエルギノサフィッシ
ャー免疫型１゜２．３，４，５，６．７と反応する抗体
の存否に関して調べた。

ＲＭ５ＸＫＲ−４の融合産物に関して培養されたｉ、ｔ
ｏｏ個のウェル中、２つの培養物はＰ、アエルギノサ免
疫型２と反応するＭＡｂを産生ずることが確認された。

最も活性なハイブリドーマはＲＫ−５２と称され、モノ
クローナル抗体はＭＡｂ−ＲＫ−５２と称された。培養
物は４か月にわたり培養され、Ｐ。

アエルギノサ免疫型２特異的抗体を分泌し続けた。ハイ
ブリドーマＲＫ−５２のサンプルは、ブタベスト条約に
基づき１９８６年７月２４日に米国型培養寄託機関、１
２３０１バークローン・ドライブ、ロックビル、メリー
ランド２０８５２．ＵＳＡに寄託され、ＡＴＣＣ番号Ｈ
Ｂ９１４９と付与された。

ＦＤＤ７．７　　Ｘ　　ＫＲ−４融合細胞含有の１．２
００個のウェルの評価によると、Ｐ、アエルギノサフィ
ッシャー免疫型４と反応するモノクローナル抗体を産生
ずるのは３つの培養物であった。最も活性な培養物は５
か月以上にわたり特異的モノクローナル抗体を分泌し続
けた。ハイブリドーマはＦＫ−１６−４と称され、モノ
クローナル抗体はＭＡ　ｂ　−ＦＫ−１６−４と称され
た。ハイブリドーマＦＫ−１６−４のサンプルは、ブタ
ベスト条約に基づき１９８６年７月２４日に米国型培養
寄託機関、１２３０１バークローン・ドライブ、ロック
ビル、メリーランド　２０８５２゜Ｕ　Ｓ　Ａ　ニ寄託
され、ＡＴＣＣ番号ＨＢ９１５０が付与された。

ＨＭ５　Ｘ　Ｓ　ＨＭ−Ｄ　３３融合細胞含有の同数の
ウェルの評価によると、Ｐ、アエルギノサフィッシャー
免疫型２と反応するモノクローナル抗体を産生するのは
少なくとも４つの培養物であった。最も活性な培養物は
、親ＲＭ５培養物よりも少なくとも１０倍多く抗体を分
泌する。最大量のモノクローナル抗体を産生ずる２つの
最大のハイブリドーマはＲ８−１Ｈ７及びＲＳ−１Ｇ１
１と称され、モノクローナル抗体はそれぞれＭＡｂ−Ｒ
Ｓ−１Ｈ７−ＨＭ５及びＭＡｂ−ＲＳ−ＩＧＩ　１−Ｈ
Ｍ５と称された。ハイブリドーマＲＳ−１Ｈ７のサンプ
ルは、ブタベスト条約に基づき１９８６年７月２４日に
米国型培養寄託機関、１２３０１　ハークローン・ドラ
イブ、ロックビル、メリーランド　２０８５２．ＵＳＡ
　に寄託され、ＡＴＣＣ番号ＨＢ９１５１が付与された
。ハイブリドーマＲ５−１Ｇ１１のサンプルもブタベス
ト条約に基づき１９８７年７月１日に米国型培養寄託機
関に寄託され、Ａ”ｒ　ｃ　ｃ番号ＨＢ９４６５が付与
された。

ｃＦ−９Ｈ１０ｘＫＲ４融合細胞含有（７）５００個以
上のウェルの評価によると、コズバーら、ジャーナル・
カブ・イムノロジー、第１３３巻、第３００１−３００
５頁、１９８４年の限界希釈法によるクローニング後に
モノクローナル抗体を産生ずるのは少なくとも２つの培
養物であった。ｉも活性な培養物は、Ｐ。

アエルギノサフィッシャー免疫型３，６及び７と反応す
るＭＡｂを分泌する。ハイブリドーマはＣＫ−１Ｇ１１
−１８と称され、モノクローナル抗体はＭＡｂ−ＣＫ−
ＩＧＩ　１−１８と称された。ハイブリドーマＣＫ−Ｉ
Ｇ１１−１８のサンプルは、ブタペスト条約に基づき１
９８６年７月３１日に米国型培養寄託機関、１２３０１
パークローン・ドライブ。

ロックビル、メリーランド２０８５２．ＵＳＡに寄託さ
れ、ＡＴＣＣ番号ＨＢ９１６１が付与された。

個々のハイブリドーマから産生されるモノクローナル抗
体のイソタイプは、融合前の元来のリンパ芽球細胞のも
のと同一であった。

これらの細胞系から分泌される免疫グロブリンをコズバ
ーら、ジャーナル・カブ・イムノロジー、第１３３巻、
第３００１−３００５頁、１９８４年に記載されている
如く試験した。細胞を［”　Ｓ　］−メチオニンの存在
下でインキュベートし、上澄をμＨｆｉ及びに及びλＬ
鎖に対する抗体並びにプロティンＡ含有スタフィロコッ
カス・アウレウス（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏ−ｃｏｃｃｕｓ
　ａｕｒｅｕｓ）を用いた免疫沈降、次いでポリアクリ
ルアミドゲル上での沈降物質の分析によって分析した。

これらの実験では、ＫＲ−４系の細胞が免疫グロブリン
を分泌し、これら細胞由来のハイブリドーマＲＦ−５２
及びＦＫ−１６−４もまたＰ、アエルギノサに対して特
異的なモノクローナル抗体の他にこの免疫グロブリンを
分泌することを明らかにした。ＳＨＭ−Ｄ３３融合相手
から得られたＲ８−１Ｈ７細胞の上澄液は、検出可能量
のみのＰ、アエルギノサ特異的抗体を含有していた。

リンパ芽球細胞系又はハイブリドーマから得られるモノ
クローナル抗体は、細胞培養環境中で産生されかつ培養
液中に分泌される。

例えばハイブリドーマＲ８−１Ｇ１１は５゜１．１及び
１個細胞／ウェルでクローニングされ、１５か月にわた
り継続培養され、１×１０＠細胞／　ｍ　Ｑの飽和細胞
密度で抗体４０μｇ以上／　ｍ　Ｑを分泌した。２倍量
に複製される系は無血清培地（ＨＢ１０４）中での増殖
に適しており、しかる後中空ファイバー系［エンドトロ
ニクス社（Ｅｎｄｏｔｒｏｎｉｃｓ、　Ｉｎｃ）　］中
で増殖させた。アキュシストーＰ　（Ａｃｕｓｙｓｔ−
ｐ）系（エンドトロニクス）の２つのカートリッジに細
胞を加え、１４日後培地中に放出された細胞物質を流速
８　ｍ　Ｑ　／　ｈ　ｒで回収した。６０日の回収期間
をかけて、ＭＡｂ−Ｒ８−ＩＧＩ　１−ＲＭ５総量３ｇ
以上含有する上澄成約１０Ｑを回収した。

実施例　５ 実施例４のモノクローナル抗体を、生存Ｐ。

アエルギノサの侵入からマウスを保護するそれらの能力
に関して調べた。実施例３に記載された免疫不全Ｘｉｄ
マウスに細菌侵入の２時間前に静脈経路から抗体を投与
した。

ハイブリドーマ産生モノクローナル抗体による保護 処　置　　　用量μｇ　　侵入免疫型　　　ＬＤ５１１
コントロール　　　−−−−−２３，２Ｘ　１０”ＲＫ
−５２２，００２３，４Ｘ　１０’コントロール　　　
−−−−−２３，Ｉ　Ｘ　１０１ＲＳ−ＩＯ２１，２０
２４，２Ｘ　１０’ＲＭ５　　　　　１．２０　　　　
　　２　　　　３．１　ｘ　１０’コントロール　　　
−−−−−４１，５Ｘ　１０”ＦＫ−１６−４２，００
４３，Ｉ　Ｘ　１０ｓＦＫ−１６−４０，２０４２，７
Ｘ　１０’ＦＫ−１６−４０，０２４５，５ｘ　１０’
ＦＤＤ　７．７　　　　２．００　　　　　４　　　　
４．７　Ｘ　１０’ＦＤＤ　７．７　　　　０．２０　
　　　　　４　　　　４．７　Ｘ　１０’これらの結果
は、ハイブリドーマ産生モノクローナル抗体がＰ、アエ
ルギノサ侵入からマウスを保護することを示している。

ＲＫ−５２、ＲＳ−１Ｈ７及びＦＫ：１６−４細胞系か
ら産生される抗体はそれらの対応免疫型に対して特異的
である。

ハイブリドーマＲＳ−１Ｇ１１から産生されるモノクロ
ーナル抗体は、５００の生存１）。

アエルギノサ免疫型２細菌で侵入されたＸｉｄマウスの
生存率を高めた。ＭＡｂ−Ｒ５−ＩＧｌｌが投与されな
いコントロールマウスは生存率１０％であった０ＭＡｂ
−Ｒ５−ＩＧｌｌＯ，００１μｇで処理されたマウスは
生存率７０％であって、抗体　ｏ、ｏｔ　ＩＬｇで処理
されたすべてのマウスは生存していた。これらの結果は
、ＭＡｂ−ＲＳ−ＩＧＩ　１がシュードモナス感染から
マウスを保護する上で非常に有効であることを証明して
いる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｐ．アエルギノサリポ多糖類免疫型 及び血清型と反応するヒトモノクローナル抗体。 ２、抗体がＰ．アエルギノサフィッシャ ー免疫型２〜７と反応する、特許請求の範囲第１項記載
   のヒトモノクローナル抗体。 ３、抗体がＰ．アエルギノサフィッシャ ー国際抗原分類系血清型３及び１５と反応する、特許請
   求の範囲第１項記載のヒトモノクローナル抗体。 ４、ヒトＢリンパ芽球細胞系ＲＭ−５及 びその誘導体。 ５、ヒトＢリンパ芽球細胞系ＦＤＤ７．７ 及びその誘導体。 ６、ヒトＢリンパ芽球細胞系ＣＦ−９Ｈ １０及びその誘導体。 ７、ＡＴＣＣ番号がＣＲＬ９４７７であ る、特許請求の範囲第６項記載のヒトＢリンパ芽球細胞
   系。 ８、ヒトＢリンパ芽球細胞系１１Ｆ９及 びその誘導体。 ９、ＡＴＣＣ番号がＨＢ９４６４である、 特許請求の範囲第７項記載のヒトＢリンパ芽球細胞系。 １０、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫 型２と反応しかつＩｇＭイソタイプを有する、特許請求
   の範囲第４項記載の細胞系により産生されるヒトモノク
   ローナル抗体。 １１、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫 型４と反応しかつＩｇＭイソタイプを有する、特許請求
   の範囲第５項記載の細胞系により産生されるヒトモノク
   ローナル抗体。 １２、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫 型３、６及び７と反応しかつＩｇＭイソタイプを有する
   、特許請求の範囲第６項記載の細胞系により産生される
   ヒトモノクローナル抗体。 １３、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫 型５と反応しかつＩｇＭイソタイプを有する、特許請求
   の範囲第８項記載の細胞系により産生されるヒトモノク
   ローナル抗体。 １４、ＭＡｂ−ＲＭ５と称されるヒトモノ クローナル抗体。 １５、ＭＡｂ−ＦＤＤ７．７と称されるヒトモノクロー
   ナル抗体。 １６、ＭＡｂ−９Ｈ１０と称されるヒトモ ノクローナル抗体。 １７、ＭＡｂ−１１Ｆ９と称されるヒトモ ノクローナル抗体。 １８、特許請求の範囲第４項記載のリンパ 芽球細胞系と永久増殖性細胞及びその誘導体との融合か
   ら産生されるハイブリドーマ。 １９、ＲＫ−５２と称されかつＡＴＣＣ番 号ＨＢ９１４９である、特許請求の範囲第１８項記載の
   ハイブリドーマ。 ２０、ＲＳ−１Ｈ７と称されかつＡＴＣＣ 番号ＨＢ９１５１である、特許請求の範囲第１８項記載
   のハイブリドーマ。 ２１、ＲＳ−１Ｇ１１と称されかつＡＴＣ Ｃ番号ＨＢ９４６５である、特許請求の範囲第１８項記
   載のハイブリドーマ。 ２２、特許請求の範囲第５項記載のリンパ 芽球細胞系と永久増殖性細胞及びその誘導体との融合か
   ら産生されるハイブリドーマ。 ２３、ＦＫ−１６−４と称されかつＡＴＣ Ｃ番号ＨＢ９１５０である、特許請求の範囲第２２項記
   載のハイブリドーマ。 ２４、特許請求の範囲第６項記載のリンパ 芽球細胞系と永久増殖性細胞及びその誘導体との融合か
   ら産生されるハイブリドーマ。 ２５、ＣＫ−１Ｇ１１−１８と称されかつ ＡＴＣＣ番号ＨＢ９１６１である、特許請求の範囲第２
   ４項記載のハイブリドーマ。 ２６、特許請求の範囲第８項記載のリンパ 芽球細胞系と永久増殖性細胞及びその誘導体との融合か
   ら産生されるハイブリドーマ。 ２７、特許請求の範囲第１８項記載のハイ ブリドーマにより産生されるヒトモノクローナル抗体。 ２８、特許請求の範囲第２２項記載のハイ ブリドーマにより産生されるヒトモノクローナル抗体。 ２９、特許請求の範囲第２４項記載のハイ ブリドーマにより産生されるヒトモノクローナル抗体。 ３０、特許請求の範囲第２６項記載のハイ ブリドーマにより産生されるヒトモノクローナル抗体。 ３１、薬学上許容される担体中にＰ．アエ ルギノサフィッシャー免疫型と反応する有効量のモノク
   ローナル抗体を含有する、Ｐ．アエルギノサ感染症治療
   又は予防用の医薬組成物。 ３２、特許請求の範囲第３１項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症治療又は予防方法。 ３３、Ｐ．アエルギノサと反応するモノク ローナル抗体が１種以上のフィッシャー免疫型と反応す
   るモノクローナル抗体類からなる、特許請求の範囲第３
   １項記載の医薬組成物。 ３４、Ｐ．アエルギノサと反応するモノク ローナル抗体がフィッシャー免疫型２〜７の各々と反応
   するモノクローナル抗体類からなる、特許請求の範囲第
   ３１項記載の医薬組成物。 ３５、薬学上許容される担体中にＰ．アエ ルギノサ国際抗原分類系血清型と反応する有効量のモノ
   クローナル抗体を含有する、Ｐ．アエルギノサ感染症治
   療又は予防用医薬組成物。 ３６、特許請求の範囲第３５項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症治療又は予防方法。 ３７、薬学上許容される担体中にフィッシ ャー免疫型２〜７並びに国際抗原分類系血清型３及び１
   ５の各々と反応する有効量のモノクローナル抗体を含有
   する、Ｐ．アエルギノサ感染症治療又は予防用医薬組成
   物。 ３８、特許請求の範囲第３７項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症治療又は予防方法。 ３９、Ｐ．アエルギノサ細胞又は無細胞リ ポ多糖類を免疫型２〜７並び血清型３及び １５と特異的に反応するヒトモノクローナル抗体と接触
   させ、かつ結合する抗体を決定することからなる、Ｐ．
   アエルギノサフィッシャー免疫型２〜７並びに国際抗原
   分類系血清型３及び１５の確認方法。 ４０、薬学上許容される担体中に、アミノ グリコシド、セファロスポリン、マクロライド、ペニシ
   リン、テトラサイクリン、ポリペプチド及びポリエンか
   らなる抗生物質群より選択される有効量の抗生物質と一
   緒に投与される、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫型
   と反応する有効量のモノクローナル抗体を含有する、Ｐ
   ．アエルギノサ感染症治療又は予防用医薬組成物。 ４１、Ｐ．アエルギノサと反応するモノク ローナル抗体がフィッシャー免疫型２〜７の各々と反応
   するモノクローナル抗体類からなる、特許請求の範囲第
   ４０項記載の医薬組成物。 ４２、特許請求の範囲第４０項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症治療又は予防方法。 ４３、薬学上許容される担体中に、アミノ グリコシド、セファロスポリン、マクロライド、ペニシ
   リン、テトラサイクリン、ポリペプチド及びポリエンか
   らなる抗生物質群より選択される有効量の抗生物質と一
   緒に投与される、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫型
   と反応する有効量のモノクローナル抗体を含有する、Ｐ
   ．アエルギノサ感染症並びにＰ．アエルギノサ及び他の
   微生物に起因する複合感染症の治療又は予防用医薬組成
   物。 ４４、Ｐ．アエルギノサと反応するモノク ローナル抗体がフィッシャー免疫型２〜７と反応するモ
   ノクローナル抗体類からな る、特許請求の範囲第４３項記載の医薬組成物。 ４５、特許請求の範囲第４３項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症並びにＰ．アエルギノサ及び他の微生物に起因
   する複合感染症の治療又は予防方法。 ４６、薬学上許容される担体中に、アミノ グリコシド、セファロスポリン、マクロライド、ペニシ
   リン、テトラサイクリン、ポリペプチド及びポリエンか
   らなる抗生物質群より選択される有効量の抗生物質と一
   緒に投与される、Ｐ．アエルギノサ国際抗原分類系血清
   型と反応する有効量のモノクローナル抗体を含有する、
   Ｐ．アエルギノサ感染症並びにＰ．アエルギノサ及び他
   の微生物に起因する複合感染症の治療又は予防用医薬組
   成物。 ４７、Ｐ．アエルギノサと反応するモノク ローナル抗体が国際抗原分類系血清型３及び１５と反応
   するモノクローナル抗体類からなる、特許請求の範囲第
   ４６項記載の医薬組成物。 ４８、特許請求の範囲第４６項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症並びにＰ．アエルギノサ及び他の微生物に起因
   する複合感染症の治療又は予防方法。 ４９、薬学上許容される担体中に、アミノ グリコシド、セファロスポリン、マクロライド、ペニシ
   リン、テトラサイクリン、ポリペプチド及びポリエンか
   らなる抗生物質群より選択される有効量の抗生物質と一
   緒に投与される、Ｐ．アエルギノサフィッシャー免疫型
   ２〜７並びに国際抗原分類系血清型３及び １５と反応する有効量のモノクローナル抗体を含有する
   、Ｐ．アエルギノサ感染症並びにＰ．アエルギノサ及び
   他の微生物に起因する複合感染症の治療又は予防用医薬
   組成物。 ５０、特許請求の範囲第４９項記載の医薬 組成物の有効量を投与することからなるＰ．アエルギノ
   サ感染症並びにＰ．アエルギノサ及び他の微生物に起因
   する複合感染症の治療又は予防方法。