JPS63106564A - ２，４−ジニトロフエニルセレノシアンによるチオル基のｓ−シアノ化法 - Google Patents
２，４−ジニトロフエニルセレノシアンによるチオル基のｓ−シアノ化法Info
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- JPS63106564A JPS63106564A JP25107186A JP25107186A JPS63106564A JP S63106564 A JPS63106564 A JP S63106564A JP 25107186 A JP25107186 A JP 25107186A JP 25107186 A JP25107186 A JP 25107186A JP S63106564 A JPS63106564 A JP S63106564A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、天然物化学、特に蛋白質化学において、最も
重要な官能基の一つであるチオル基のＳ−シアノ化反応
による化学修飾法及び定量法に関するものである。
重要な官能基の一つであるチオル基のＳ−シアノ化反応
による化学修飾法及び定量法に関するものである。
本発明は、チオル基のＳ−シアノ化法において、チオル
基と２．４−ジニトロフェニルセレノシアンの反応によ
り、特異的にＳ−シアノ誘導体を生成し、同時に放出さ
れた２、４−ジニトロセレノフェノールを定量するもの
である。
基と２．４−ジニトロフェニルセレノシアンの反応によ
り、特異的にＳ−シアノ誘導体を生成し、同時に放出さ
れた２、４−ジニトロセレノフェノールを定量するもの
である。
従来、蛋白質など天然物に含まれるチオル基のＳ−シア
ノ化反応には、２−ニトロ−５−チオシアノ安息香酸が
用いられていた。（参考文献１）〔発明が解決しようと
する問題点〕 上記のような２−ニトロ−５−チオシアノ安息香酸によ
るチオル基のＳ−シアノ化法では、ｆｉｌ〜（３）に示
される問題点がある。
ノ化反応には、２−ニトロ−５−チオシアノ安息香酸が
用いられていた。（参考文献１）〔発明が解決しようと
する問題点〕 上記のような２−ニトロ−５−チオシアノ安息香酸によ
るチオル基のＳ−シアノ化法では、ｆｉｌ〜（３）に示
される問題点がある。
ｉｌ＋試薬がアニオニツタなためにチオル基の存在環境
によって反応が制約される。
によって反応が制約される。
（２）Ｓ−シアノ化反応により放出される３−カルボキ
シ−４−ニトロチオフェノールは、不安定であるのでチ
オル基の定量法として信頼度が低い。
シ−４−ニトロチオフェノールは、不安定であるのでチ
オル基の定量法として信頼度が低い。
（３）水溶液中において不安定なチオル基をＳ−シアノ
化するのには、試薬の反応性が低い。
化するのには、試薬の反応性が低い。
上記問題点を解決するために、本発明においては、ｆｌ
＋分子内に解な基を有さない、（２）Ｓ−シアン化反応
により放出される発色団をより安定化する。
＋分子内に解な基を有さない、（２）Ｓ−シアン化反応
により放出される発色団をより安定化する。
（３）分子の活性を高める、ことによってチオル基との
反応性および定量性の高いＳ−シアノ化法を考案した。
反応性および定量性の高いＳ−シアノ化法を考案した。
上記の様な構成によれば、従来法よりも短時間でチオル
基をＳ−シアノ化することができ、この反応を分光光学
的に追究することにより、チオル基を精度よ（定量する
ことができる。
基をＳ−シアノ化することができ、この反応を分光光学
的に追究することにより、チオル基を精度よ（定量する
ことができる。
以下、実施例に基づいて本発明の詳細な説明する。
〔実施例１〕
本実施例においては、反応式（ＩＩ）の従来法と反応式
（１）の本性をグルタチオン（ＧＳＩ（：γ−Ｇｌｕ−
Ｃｙｓ−Ｇｌｙ）に対して適用し、チオル基との反応性
およびチオル基の定量性に関して比較した。
（１）の本性をグルタチオン（ＧＳＩ（：γ−Ｇｌｕ−
Ｃｙｓ−Ｇｌｙ）に対して適用し、チオル基との反応性
およびチオル基の定量性に関して比較した。
０Ｊ−Ｑ−５ｅＣＮ＋ＧＳＨ−ＧＳ−ＣＮ＋０Ｊ−ｑ−
５ｅＨ（Ｉ ）ＮＯ□
Ｎｏｚ（未確認物質） 〔■〕 図１に示したように、従来法ではＳ−シアノ化反応にと
もなって放出される３−カルボキシ−４−ニトロチオフ
ェノールの増加により吸光度が上昇する。
５ｅＨ（Ｉ ）ＮＯ□
Ｎｏｚ（未確認物質） 〔■〕 図１に示したように、従来法ではＳ−シアノ化反応にと
もなって放出される３−カルボキシ−４−ニトロチオフ
ェノールの増加により吸光度が上昇する。
その後、このチオフェノールの酸化による消失にともな
い吸光度は減少し続ける。従って、グルタチオン中のチ
オル基の定量はできなかった。
い吸光度は減少し続ける。従って、グルタチオン中のチ
オル基の定量はできなかった。
一方、本性によれば、３分以内にグルタチオン中のチオ
ル基のＳ−シアノ化反応は完了し、チオル基も精度よく
定量された。従って、本発明はグルタチオンの定量法と
しても有用である。
ル基のＳ−シアノ化反応は完了し、チオル基も精度よく
定量された。従って、本発明はグルタチオンの定量法と
しても有用である。
〔実施例２〕
本実施例においては、実施例１と同様の方法をニワトリ
卵白アルブミンに適用し、デガニらの方法（参考文献２
）によりＳ−シアノシステニル残基のアミノ側でのペプ
チド結合の切断反応を行い、Ｓ−シアノ化反応の蛋白質
構造解析における有用性を示す。
卵白アルブミンに適用し、デガニらの方法（参考文献２
）によりＳ−シアノシステニル残基のアミノ側でのペプ
チド結合の切断反応を行い、Ｓ−シアノ化反応の蛋白質
構造解析における有用性を示す。
方法は、実施例１と同様な方法により行った。
埋もれているチオル基を蛋白質表面に露出させるために
１％Ｓ［）Ｓで蛋白質を変性させた。図２に示すように
、卵白アルブミンに存在する４つのチオル基は、従来法
では実施例１と同様に定量されないが、本性では速やか
に精度よく定量される。さらに本性によってＳ−シアノ
化された卵白アルブミンをアルカリ処理によりペプチド
断片化し、得られたカラムクロマトグラムを図３に示す
。明らかに、５つのペプチドに画分されており、これを
試料として一次構造の解析が行えることを示唆している
。
１％Ｓ［）Ｓで蛋白質を変性させた。図２に示すように
、卵白アルブミンに存在する４つのチオル基は、従来法
では実施例１と同様に定量されないが、本性では速やか
に精度よく定量される。さらに本性によってＳ−シアノ
化された卵白アルブミンをアルカリ処理によりペプチド
断片化し、得られたカラムクロマトグラムを図３に示す
。明らかに、５つのペプチドに画分されており、これを
試料として一次構造の解析が行えることを示唆している
。
■文献１ ヤコブソン他、ジャーナル オブバイオロジ
カルケミストリ、２４８巻。
カルケミストリ、２４８巻。
６５８３頁、 （１９７３年）
文献２ デガニ他、バイオケミストリ、１３巻１頁、
（１９７４年） 〔発明の効果〕 本発明によって、蛋白質など天然物中に存在するチオル
基のＳ−シアノ化反応と定量を同時にかつ速やかに行う
ことができる。従って、ペプチド断片化処理を連続的に
行うことが可能となった。
（１９７４年） 〔発明の効果〕 本発明によって、蛋白質など天然物中に存在するチオル
基のＳ−シアノ化反応と定量を同時にかつ速やかに行う
ことができる。従って、ペプチド断片化処理を連続的に
行うことが可能となった。
第１図：グルタチオン中ＳＨ基との反応。
第２図：オボアルプミン中ＳＲ基との反応。
第３図：チオシアノ化オボアルブミンを切断処理後、そ
の試料のセファデックスＧ− ７５によるクロマトグラフ。 以上
の試料のセファデックスＧ− ７５によるクロマトグラフ。 以上
Claims (2)
- （１）２，４−ジニトロフェニルセレノシアン（ａ）と
チオル化合物（ｂ）を反応させ、Ｓ−シアノ誘導体（ｃ
）と２，４−ジニトロセレノフェノール（ｄ）を定量的
に生成させることを特徴とするＳ−シアノ化法。 - （２）前記チオル化合物が蛋白質及びペプチドである特
許請求の範囲第（１）項に記載のＳ−シアノ化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25107186A JPS63106564A (ja) | 1986-10-22 | 1986-10-22 | ２，４−ジニトロフエニルセレノシアンによるチオル基のｓ−シアノ化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25107186A JPS63106564A (ja) | 1986-10-22 | 1986-10-22 | ２，４−ジニトロフエニルセレノシアンによるチオル基のｓ−シアノ化法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63106564A true JPS63106564A (ja) | 1988-05-11 |
Family
ID=17217193
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25107186A Pending JPS63106564A (ja) | 1986-10-22 | 1986-10-22 | ２，４−ジニトロフエニルセレノシアンによるチオル基のｓ−シアノ化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63106564A (ja) |
-
1986
- 1986-10-22 JP JP25107186A patent/JPS63106564A/ja active Pending
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