JP4834771B2 - ヘモグロビン消化用試薬 - Google Patents
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Description
本発明は、バッファ、ペプシンおよび1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩を含むヘモグロビン消化用試薬に関する。また、本発明は、ヘモグロビンを消化する方法、HbA1cを検出する方法における本試薬の使用および全血試料の回収のためのヘモグロビンを消化するための該試薬を含むサンプリングチューブを開示する
。
循環血糖レベルの損なわれた調節は糖尿病の特徴である。非酵素統計プロセスにおける血糖は、ポリペプチドのリジン残基に結合して、それによって糖化ポリペプチドがもたらされ得る。糖化は長い半減期を有するタンパク質で頻度高く観察される。循環血糖レベルの長期調節を評価するために最も頻度高く使用されるタンパク質はヘモグロビンである。
本発明は、バッファ、ペプシン、および1,3-ジアルキル-イミダゾリウムカチオンおよび対イオンからなる1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩を含むヘモグロビン消化用試薬に関する。
第一態様において、本発明は、a)バッファ、b)ペプシン、およびc)1,3-ジアルキル-イミダゾリウムカチオンおよび対イオンからなる1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩を含むヘモグロビン消化用試薬に関する。
(式中、R1およびR2は独立して、アルキル残基を表し、A-は対イオンを表す。)
実施例1
ヘモグロビン(Hb)のタンパク質分解の一般的手順
0.2mg/mLのヘモグロビンおよび50mM酢酸アンモニウム(pH4.3)を含む24μlへモグロビン溶液アリコートを、20mMクエン酸pH2.4中のペプシン(300U/mL)および任意に1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩(10%重量/容積)を含む216μlの溶液と混合する。反応溶液は測定まで室温で保持される。測定は、1分、11分、21分、31分、41分、51分および61分のそれぞれの消化時間後にHPLC-MS(実施例2参照)を用いて行われる。ペプシン消化の際に放出されるHbA0およびHbA1cβ鎖に由来するN-末端ペプチド[1〜14]の量ならびにこれらのペプチドの比率(HbA0あたりのHbA1c)を報告する。
HPLC-MSを用いたHbA0およびHbA1c N-末端ペプチドの測定
実施例1で得られた10μLの消化物をHPLCに注入した。
Claims (9)
- HbA1cを測定する方法であって、
a)ヘモグロビンを含む試料と、
aa)バッファ、
ab)ペプシンおよび
ac)1,3-ジアルキル-イミダゾリウムカチオンおよび対イオンからなる1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩
を含むヘモグロビン消化用試薬とを混合する工程、
b)1〜60分間ヘモグロビンを消化して、それによってHbA1cの14個のN末端アミノ酸を含むヘモグロビン断片を得る工程、ならびに
c)該HbA1cのN末端断片を測定する工程
を含む、方法。 - ヘモグロビン消化用試薬のバッファがpH1〜pH4のpHを有する、請求項1記載の方法。
- ヘモグロビン消化用試薬のバッファが10mM〜1Mの濃度を有する、請求項1または2記載の方法。
- ヘモグロビン消化用試薬に含まれるペプシンが30〜6000U/mlの濃度で存在する、請求項1〜3いずれかに記載の方法。
- ヘモグロビン消化用試薬に含まれる1,3-ジアルキル-イミダゾリウムの2つのアルキル残基が独立してメチル、エチルまたはプロピルから選択される、請求項1〜4いずれかに記載の方法。
- ヘモグロビン消化用試薬に含まれる対イオンが、リン酸イオン、アルキルリン酸イオン、スルフェートイオンまたはアルキルスルフェートイオンから選択される、請求項1〜5いずれかに記載の方法。
- ヘモグロビンを消化する方法であって、
a)ヘモグロビンを含む試料と、
aa)バッファ、
ab)ペプシンおよび
ac)1,3-ジアルキル-イミダゾリウムカチオンおよび対イオンからなる1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩を含むヘモグロビン消化用試薬とを混合する工程、ならびに
b)1〜60分間ヘモグロビンを消化して、それによってヘモグロビンの14個のN末端アミノ酸からなるヘモグロビン断片を得る工程
を含む、方法。 - ペプシンによるヘモグロビン消化における、1,3-ジアルキル-イミダゾリウムカチオンおよび対イオンからなる1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩の使用。
- ヘモグロビン消化用試薬を含むサンプリングチューブであって、該試薬が
a)バッファ、
b)ペプシンおよび
c)1,3-ジアルキル-イミダゾリウムカチオンおよび対イオンからなる1,3-ジアルキル-イミダゾリウム塩
を含む、サンプリングチューブ。
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