JPS63100377A

JPS63100377A - 免疫測定用試薬精製法

Info

Publication number: JPS63100377A
Application number: JP24526486A
Authority: JP
Inventors: Hiroko Tsubakimoto; 椿本　裕子; Toshiyuki Sagusa; 佐草　寿幸
Original assignee: Hitachi Ltd
Current assignee: Hitachi Ltd
Priority date: 1986-10-17
Filing date: 1986-10-17
Publication date: 1988-05-02

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は免疫測定用試薬の精製法に係り、特に、免疫測
定用試薬を、予め、試薬分注機の流路弁と同一の材質の
固相が充填されたカラムクロマトグラフィで精製するこ
とを特徴とする免疫測定用試薬の精製法である。

〔従来の技術〕

免疫関連物質の検査法は一言で言うなら試料中の目的と
する抗原または抗体様物質と特異的に反応する試薬中の
抗体、または抗原様物質による抗原抗体反応（補体が関
与する場合もある）を何らかの手段で検出して目的成分
を定量するに尽きる。

その検出手段によって沈降力、ゲル内拡散法、比濁法、
比ろう法、酸素免疫測定法、蛍光免疫法。

発光免疫測定法、放射化免疫測定法など多種多様な方法
が用いられている。しかし、最近、測定手技術の簡便さ
と自動化の容易さのため、比濁法による免疫関連物質の
測定が多用化されつつある。

これは、従来生化学検査で使用されていた自動分析装置
を用いて、上述の抗原抗体反応の結果生ずる濁り（抗原
抗体複合体）を吸光度として測定する方法である。すな
わち、この方法は免疫比濁法と総称されるもので、目的
物質の濃度が比較的高く、直接に抗原と抗体を反応させ
る方法の他に目的物質の濃度が比較的低く、ラテックス
粒子などの不活性担体に、どちらか一方を固定化せしめ
た状態で反応させる方法（免疫凝集反応）も含むキので
ある。前者の例としては、Ｉ　ｇ　Ｇ、　Ｉ　ｇ　Ａｓ
ＩｇＭなどの免疫グロブリンや、ＣＢ、Ｃａなど補体や
Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、　トランスフェリン、ハプト
グロビン、α１−アンチトリプシンなどの測定がある。

後者の例として、ＩｇＥ、フェリチン、α−フェトプロ
ティン、癌胎児性抗原などの腫瘍マーカーやヒト胎盤ラ
クトーゲン、ヒト絨毛性ゴナドトロピンなどのホルモン
の測定が知られている。

前述のように、不活性担体を用いるかどうかの差はある
が、上記全ての測定は各々の目的物質を特徴とする特異
抗体を含む試薬を各目的物質を含む試料に添加混合して
、抗原抗体反応によって生ずる濁りを所定の波長で測定
して、目的物質の量を求めるものである。濁りの測定は
前者の直接的な抗原抗体反応の場合は、３４０ｎｍによ
る１波長法または３４ＱＨｍと７００ｎｍの２波長法、
後者の不活性担体を用いる場合は、６００ｎｍや７００
ｎｍのように長波長領域の１波長法が多用されている。

この測定のためには、比濁法に適した試薬の調合が必要
である。例えば、ＩｇＧの測定を例にすると、先ずでき
るだけ純度の高いヒトＩｇＧを作製する。ヒトＩｇＧす
なわち抗原の精製は種々のカラムクロマトグラフィ、塩
析法、超遠心法あるいはこれらの方法を組み合せること
によってなされることは一般に良く知られている。

このようにして、精製したヒトＩｇＧを兎、山羊。

羊、ラットなどの適当な動物に静注しく抗体価を高める
ために一般的に繰返し投与が行われる）、例えば、２〜
３週間後に採血して遠心分離するこ）ｋ　ｈ＝　＊°ｒ
ｖｃｍｆｆｉ＆ｌｌ：＆４Ｊｌ’ＪＯ６ｈ７ｕ１６′事
実である。

このようにして得られるクルードな抗血清のグロブリン
画分は当然ながら目的抗原であるヒトＩｇＧに対するポ
リクロナル抗体を主成分とするが、不純物として種々の
他の抗原物質に対するポリクロナル抗体を含むことは言
うまでもない。故に、目的物質の濃度範囲に応じて適当
な精製が行われる。免疫グロブリン、補体など目的物質
の濃度が高い場合はクルードな抗血清そのまま、あるい
はせいぜいグロブリン画分を用いる程度の精製でも交差
反応による誤差はほとんど問題にならない。

腫瘍マーカーやホルモンのような微量物質を目的とする
場合は、交差反応を起こすと考えられる抗原の不溶化物
で処理したり、適当なカラムクロマトグラフィで処理し
ていわゆるモノスペシフィック抗体として用いる必要が
あることが知られている。いずれにしても、このように
調整した抗血清あるいはそのグロブリン画分の精製物の
適量を適当な緩衝液中に溶解し、必要に応じて適当量の
保進剤、例えばポリエチレングリコール等を添加するこ
とによって、免疫比濁法の試薬が得られる。

緩衝液としては、例えばＩＯＭリン酸緩衝剤十０．８　
％塩化ナトリウム（ｐＨ７，４）などが使用され、促進
剤としては３％前後のポリエチレングリコール（分子量
６０００）などが汎用されている（日本語法検査自動化
学会誌ｖｏ１．９　、３４　、　Ｐ　４　。

１９８４）。また、ラテックス凝集比濁法を用いる場合
、上記のように適当に精製された抗血清のグロブリン画
分を室温でラテックス（通常０．１〜０．３μの均一球
形粒子）粒子と反応させた抗体感作ラテックスの適量を
ＢＳＡ（牛アルブミン）加すン酸ｔ１衝液（ｐＨ８，０
）に溶解することによって上記測定用試薬が得られるこ
とも良く知られた事実である（特開昭５８−１８２５５
８号公報）、前述の他の測定項目の場合の試薬の調合法
も全く同様である。このように調合した試薬を自動分析
装置で使用して人血清試料中のＩｇＧなど目的成分を測
定する。

自動分析装置は従来生化学検査に使用されている装置を
そのまま用いられるが、そのような自動分析装置は試薬
の分注方式に注目すると２種類に大別される。その一つ
は、特開昭５９−２２９０５号公報の第１図に開示され
ているものである。これは、使用する試薬の数に対応す
る各々独立した試薬分注機構を有するもので、多数の分
注機構を有するため装置が高価になる欠点を有するが、
その反面、多検体処理に適した処理能力の高い装置が達
成される長所を有する。他の一つは、同公報の第２図に
開示されているもので、少数のピペッティング方式の試
薬分注機構によって種々の異なった試薬を分注するもの
である０分注機構の数が少ないため装置が安価になる利
点はあるが、処理能力が低いことが欠点である。

前者の改良形として、単一のシリンジ機構に１流路多接
点方式の多流路切換弁を介して、複数の試薬の吸入、吐
出流路を設ける方式も開発されているが、各試薬毎に全
く独立した３方切換弁と吸入側、吐出側の流路を形成す
るのは従来のものと原理的には同一である。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は上記のような大型の自動分析装置に対して、前
述の要領で１ｉｌｌ製された免疫比濁法の試薬を適用し
た場合に重大な欠点を有する知見に始り、その解決法を
見い出したものである。すなわち、試薬毎に独立した分
注機構の三方切換弁の材質として、最近汎用されている
セラミック、合成サファイア、合成ルビーなどのアルミ
スを主成分とす。

る材質や、グラファイトのようなカーボンを生成分とす
る材質と前述の試薬中の抗血清酸が骨接触すると意外に
も非特異的凝集が起ることが分った。

イムノグロブリン（Ｉ　ｇＧ、Ｉ　ｇＡ、Ｉ　ｇＭ）。

補体（Ｃ８，Ｃ４）、トランスフェリン、パブトグロビ
ン、α１アンチトリプシンの免疫比濁法とＡＳＬＯ，Ｒ
Ｆ、ＣＲＰ、α−ＦＰのラテックス凝集比濁法について
、種々市販されている試薬について検討したが、全ての
試薬が若干の程度差はあるが上述の非特異的凝集をする
ことが分った。

これは、自動分析装置において、上記三方切換弁と各試
薬の接触する時間が異なる場合、すなわち、自動分析装
置において最も重要な機能である検体毎に任意項目選択
を行った場合、非特異的凝集による試薬ブランク値の変
動すなわち測定値の変動という致命的欠陥をもたらすも
のである。

第２図にＩｇＧとＣＲＰ測定における上述の非特許的凝
集により試薬ブランク値の変動を示した。

試薬は両方とも市販されているもので、ＩｇＧは免疫比
濁法、ＣＲＰはラテックス凝集比濁法により測定を行っ
た。第２図は、その項目の測定依頼をしない時間（試薬
と前記セラミック製三方弁の接触している時間）を変化
させて、ブランク値（サンプルとして生理食塩水を測定
した時の濃度値）の変動を確認したものである。すなわ
ち、１０分以上の接触により測定値に致命的な正誤差を
生ずることが分る。

本発明は自動分析装置による免疫関連項目の測定におけ
る上述の問題を解決するため、非特異的凝集による正誤
賛差をないように免疫測定用試薬を精製する方法を提供
す菖ことを目的とする。

、′〔問題点を解決するための手段〕本発明は、上述の非特異的凝集を防止するために試薬の
組成、特に抗血清を特殊な方法で精製した場合にのみ、
目的が達せられるという事実に基づいている。すなわち
、抗血清を溶解する緩衝剤の種類、塩類の濃度、促進剤
の種類と濃度について検討した結果、上記非特許的凝集
はこれら条件とは無関係であり、抗血清あるいはその精
製画分の性質すなわち免疫学的な純度の問題であること
が分った。さらにまた、この非特異的凝集は抗血清（抗
体）の構造上のＦＣ部分でなく、Ｆ（ａｄ）”の部分に
原因があることが分った。また、このような非特異的凝
集は抗血清が親水性の固体表面に吸着された時に起きる
ことが分った。

以上の結果を基に抗血清を飽和硫安による分画法、低イ
オン濃度、低温エタノール法（Ｃｏｈｎ法）。

Ｐｌｕｒｏｎｉｃ　　Ｆ　−３８分画法、イオン交換樹
脂による分画法、ポリエチレングリコール処理法、ゲル
濾過クロマトグラフィによる分画法、アフィニティーク
ロマトグラフィによる分画法など種々な方法で精製して
得られる抗体（免疫グロブリン画分）で試薬を調合し、
上述の非特異現象の発現を検討した結果、各抗血清（抗
体）に適した抗原を固定化したカラムによるアフィニテ
ィークロマトグラフィにより試薬を精製することが最も
有効であることが分った。

しかし、アフィニティークロマトグラフィによる精製を
行った場合、リガンドに抗原を使うため高価な試薬とな
る。そのため、ＩｇＧ３１！定を例として、切換弁と同
一組成のセラミック粉末を固相に使用した抗血清（抗体
）をカラムクロマトグラフィでＭＷｉして、前述の非特
異的凝集が改良されるかどうかを検討した。ヒトＩｇＧ
測定用試薬の抗血清をセラミック粉末を充填したカラム
に注入し、同測定試薬の緩衝液（促進剤として３％のポ
リエチレングリコール６０００を含む）溶離液として溶
出させる方法を用いた。その結果、カラムクロマトグラ
フィによる精製はアフィニティークロマトグラフィの精
製と同等以上の効果があり、上記非特異的凝集による測
定誤差を解決できることが分った。

本発明は、このような知見によりなされたものであり、
その構成は次の通りである。すなわち、試薬分注機によ
って被検物に添加され当該役物との間で生ずる抗原−抗
体反応により、被験物の測定を行う免疫測定用試薬の精
製法であって、当該免疫測定用試薬を、予め、前記分注
機の流路弁を構成する材質と同一組成の固相が充填され
たカラムク、ロマトグラフイによって、精製することを
特徴とする免疫測定用試薬精製法である。

本発明におけるカラムクロマフグラフィの同相には、試
薬分注機の流路切換弁と同一材質のものを用いる。例え
ば、セラミック、サファイア、ルビーなどのアルミナを
主材とする粉末またはカーボン粉末を用いることができ
る。

〔作用〕

すなわち本発明は、アフィニティークロマトグラフィに
よる精製と同程度の効果を簡単で安価な方法で達成する
ものである。その原理は、試薬切換弁を構成しているセ
ラミック、人工サファイア。

人工ルビーなどの表面に試薬中に抗体蛋白と微量に混在
する不純物抗原が吸着することによって反応するという
事実を逆用して、これら切換弁と同一組成の粉末を同相
に用いるカラムクロマトグラフィで精製するものである
。

すなわち、カラム上端に吸着された目的の抗体成分と不
純物の抗原物質は固定相粉末への脱着を緑返しながら、
カラム中を下端に向って移動する・が、上述のようにセ
ラミック表面で結合（非特異凝集した）抗体抗原様複合
体は遊離の抗原よりもセラミック粒子への親和性が大き
くなり、移動速度が遅くなる。従って、このクロマト溶
出液を適当な時開帯で前溶出分と後溶出分に２分して、
前溶畠分を試薬に用いることによって試薬の精製を可能
とするものである。すなわち、分注機の切換弁と全く同
一の固相を用いることによって、前述した試薬使用時の
非特異的凝集をカラム中で生ぜしめ、これによって試薬
の分離精製することを可能とするものである。

〔実施例〕

次に、本発明に係る免疫測定用試薬精製法の実施例につ
いて説明する。

第１図に本発明を実施する装置の一実施例の系統図を示
す。

第１図において、ポンプ１．カラム２．検出部３は、液
流の上流側よりこの順に従い、１つのラインに接続され
ている。

ポンプ１は、ラインに測定用試薬である抗血清又は緩衝
液を流すためのものである。カラム２には、自動分析装
置の流路切換弁を構成するアルミナ粉末が充填されてい
る。

検８部３は、時間（又は流量）に対する吸光度の変化を
測定するもので、吸光度計からなる。ラインの最後は、
溶出液が排出されるようになっている。

次に、具体的な実施例について説明する。

〈実施例　１）ＩｇＧの測定（１）セラミック切換弁に使用されている９９．５％高
純度アルミナ粉末を焼結後、水び法（温潤した粒子液カ
ラム中に下方から水を流し、この水の流速によって粒子
を径毎の分別採取する方法）によって２０μｍ±５μｍ
の粒子径にし、カラム（０，９φＸ２００ｍ）に充填す
る。

（２）セラミック粒子を平衝化するためにＩｇＧ測定用
試薬（ヘキストジャパン社、ＩｇＧ測定用キット）の緩
衝液を十分に流す。

（３）ＩｇＧ２！ｌ定試薬の抗血清１０ｍＱを注入し、
カラム上部のセラミック充填剤に吸着させる。

（４）緩衝液を流量１００　ｍ　ｆ１／　ｈ　ｒで流し
、抗体と抗Ｍ様不純物を分前する。

（５）第１図に示すように、検知部３でモニタしながら
第３図で示す如く、ＩｇＧ抗血清のピークの約８０％が
溶出するまでの約１９０　ｍ　Ｑを分取する。残りの部
分は、前述の非特異的凝集を生じているので廃棄する。

実用的には、１９０ｍＡ分取後、Ｉ　Ｎ　ａ　ＯＨＩ　
ＯＯｍ　Ｑを流してカラムを再生する。

（６）上記の溶出液をＩｇＧ測定用試薬とする。

（７）第４図に示した自動分析装置に上記精製試薬を前
述した第２図の条件で適用し、前述した非特異的凝集の
有無と基礎特性を検討した。

自動分析装置の測定条件は２１倍に希釈したサンプル量
５μＱに上記精製試薬３５０μ旦を自動添加し、３７℃
１０分後の濁度を７００μｍ７３４０μｍの２波長で測
定するのである。

第４図に示す自動分析装置に上記精製試薬を適用する具
体的内容について述べる。まず、装置構成について詳説
する。

８個の三方切換弁３６の一方のニップルは、流路４１を
介して試薬瓶２２に連続し、他方のニップルは流路４２
を介して反応容器３の真上に開口している。また、各三
方切換弁３６の共通のニップルは退避管４０を介して切
換弁３２の通路Ｑ１〜Ｑδに連通している。切換弁３２
の中央通路Ｐはシリンジ３３に連通し、これに嵌入して
いるプランジャは、ラック・ピニオン機構３７によって
出入させられるが、その動作は制御装置の出力で駆動さ
れるパルスモータ３８によって実行される。

なお、シリンジ３３は給水弁３４．給水バイブ３９を介
して蒸溜水槽に接続されている。

第４図の分析装置は、１流路８接点の項目選択用切換弁
３２を用い、切換弁３２の通路Ｑ１〜Ｑ６に連通する８
個の三方切換弁６を有する８四のスイッチバック分注回
路をもっている。三方切換弁３６に連通している流路４
１，４２の配管内容積は、シリンジ３３のフルストロー
ク（本実施例では５００μＱ）に比較して、十分小さい
ように形成される０例えば、各試薬瓶２２より三方切換
弁３６までは０．５　ｍφＸ５００ｍのフッ素系樹脂製
のチューブ（内容積９８μ２）を用い、三方切換弁３６
より流路４２先端の試薬ノズル９の光端までは０．５　
ｍφＸ３００ｍｍのフッ素系樹脂製のチューブ（内容積
５９μＱ）を用いている。

また、各三方切換弁６より切換弁３２までの退避管４０
は、比較的大きな内径のフッ素系樹脂製のチューブｌｎ
ｉφＸ１０００ｍ　（内容積７８５μｆｆ１）を用いて
いる。これによって、シリンジ３３のフルストローク５
００μΩに相当する流路の部分は、保冷１１２６内に存
在するようにして試薬等の変質をできるだけ防止してい
る。すなわち、退避管４０内に試薬を出入させるスイッ
チバック方式を用いても差支えないように構成している
。

切換弁３２の共通通路Ｐからシリンジ３３までの容積お
よびシリンジ３３までの給水パイプ３９の容積は任意で
あるが、本実施例においては両方共、１−φｘ５００ｍ
ｍ（容積３９３μＱ）としている。

このように構成された自動分析装置の動作は、自動洗浄
行程、！換行程および分注測定行程に大別されるので、
これについて順次説明する。

■　自動洗浄による準備行程装置を電源に接続したのち、三方切換弁３６は吐出側（
第３図においては実線の方向）に、切換弁３２は中間点
（流路Ｑ１〜Ｑ８のいずれとも連通しない状態）に、給
水弁３４は開の状態にセットし、シリンジ３３のプラン
ジャをフルストローク下降させて蒸溜水を吸入する。次
に、切換弁３２をＱｌに給水弁３４を閉として、シリン
ジ３３のプランジャを十分上昇させて試薬ノズル９より
蒸溜水を吐出する。これを複数回実施して、反応容器３
と共に試薬流路を洗浄する。

次に、切換弁３２を順次切換えて、全流路について実施
する。例えば、各流路について３回ずつこの洗浄操作を
行うようにすると、合計して２６回の洗浄動作が行われ
、この間、約５分間を要する。

■　置換行程三方切換弁３６を破線で示す吸入側にセットし。

切換弁３２を中間点に、給水弁３４を開として３００μ
意分だけシリンジ３３のプランジャを下降させて蒸溜水
を吸入する。その後、切換弁３２を流路Ｑ１に連通させ
て、給水弁３４を閉にセットしてプランジャを２００μ
Ｑだけさらに下降させる。これによって、約１００μ２
の試薬が三方切換弁３６と０１間の退避管中に吸入され
るとともに、試薬瓶２２ａと三方切換弁３６ａとの間の
流路は新しい試薬によって完全に置換される。

次に、三方切換弁３６ａを吐出側に切換えて、シリンジ
３３のプランジャをフルストローク（５００μＱ）上昇
させ、退避管４０から試薬ノズル９ａまでの間を完全に
蒸溜水で置換する。このような操作を各三方切換弁３６
を切換えながら８回実施すると、約１．５分を要する。

上記の２つの行程で約６．５分要するが、［源投入後、
制御袋！ｔ３５のマイクロコンピュータの指令によって
、自動的に実施される。すなわち、この状態では流路４
１には各試薬が満され、流路４２および退避管４０中に
は蒸溜水が満たされた状態となっている。

■　分注と測定の行程上記の如く洗浄と置換が終了すると、測定動作を開始し
、分注系は必要に応じて分注動作を行う。

例えば、ある時期に試薬瓶２２ａの試薬を反応容器３ａ
に分注添加するときは、三方切換弁３６ａを破線で示す
吸入側に、切換弁３２を中間位置に、給水弁３４を開に
セットする１次に、シリンジ３３のプランジャを２００
μＱ分下降させて蒸溜水を吸入し、切換弁３２をＱｌに
、給水弁３４を閉にセットしてからプランジャをさらに
１００μΩ分下降させ、退避管４０に中に１００μＱの
試薬を吸入する。

このようにしてから、三方切換弁３６ａを実線で示す吐
出側にセットしてシリンジ３３のプランジャを３００μ
Ｑ　（上死点まで）上昇させて吐出すると、試薬瓶２２
ｇの中の試薬１００μＱがその両側に１００μΩの蒸溜
水を伴って吐出される。

このようにして、順次三方切換弁３６と切換弁３２、シ
リンジ３３および給水弁３４を設定操作すれば、各試薬
瓶２２ａ〜２２ｂ中の試薬を反応容器３ａ〜３ｂ中に３
倍に希釈して分注されることになる。

非特異的凝集試薬の結果を第１表（次頁）に示す。第１
表では比較例として、未処理の試薬、アフイニテイクロ
マトグラフイで処理した試薬の結果も示す。

第１表に示すように非特異的凝集は３０分依頼なしの後
の試薬ブランク値の最大上昇中（正誤差）が約１５■／
ａｌｌで未処理の前述のキットの場合（最大５００■／
ａ）の１７３０以下となり実用上関連ない程度に改善さ
れた。

同時再現性は、１０００＋ａｇ　／　ａ　、　２０００
ｍｇ　／　ｄＱ　（７）プール血清の各２０回測定で各
々ＣＶ＝２．６　　％。

１．８　％で良好であった。

直線性は約２５００■／ａはで、プロゾーン現象は１５
０００■／ｄＱまで発生しないことが確認できた。

〈実施例　２＞　　ＩｇＭ測定ヘキストジャパン社のＩｇＭｍ定用試薬用試薬例１と全
く同様の方法で処理して精製試薬を作脱し上記非特異的
凝集を検討した。

精製試薬の３０分依頼なし後のブランク値の最大上昇中
は約５■／ａで未処理の場合の約１／２５に改良された
。

〈実施例　３＞　　ＩｇＥの測定（ラテックス凝集比濁
法）（１）抗ヒトＩｇＥ血清（生化学工業）（約１０μＱ）
を実施例１の（１）〜（３）に従って、カラムに注入す
る。（但し、平衝化液は０．１　　Ｍリン酸緩衝液ＰＨ
７，２を用いる。）（２）　０．１　　Ｍ＋）ン酸緩衝液ｐＨ７，２，１０
０ｐ　ｆ２をカラム上部より流す。この溶出液を透析脱
塩する。透析脱塩は溶出成約１００μＱをイマージブル
ＣＸ−３０Ｃ日本ミリボア社）７００ｎｎＨｇ減圧下で
約１０μＱまで濃縮した後、再度、蒸溜水で４０μＱに
希釈して約４μＱまで濃縮する操作を２回繰返す。

（３）　ｍ’Ｊ５　Ｌ、　ｆ＝　Ｉ　ｇ　Ｅ抗血清（約
ｌｏμＩ２）を６μＱの０．１　Ｍグリシン緩衝液（Ｐ
Ｈ７，４）に溶解する。同溶解液に平均粒径０．１１０
μｍのラテックス粒子（種水化学工業１０％溶液）３μ
Ｑを加え室温で４時間反応させる。

（４）上記感作ラテツクス粒子を４℃冷却下で遠心分離
（２５０００ＲＰＭ−３０分）後、０．２　％（７）牛
アルブミンを含む０．０５Ｍリン酸塩、０．９％塩上下
ナトリウム緩衝液１０μρ分散する。

菌液を４℃冷却下遠心洗浄（２５０００ＲＰ　Ｍ　−３
０分）を２回繰返し、最終的に３０μＱの０．２％牛ア
ルブミン含有０．０５Ｍリン酸、０．９　％塩化ナトリ
ウム緩衝液（ＰＨ７，４）に溶解して自動分析装置の第
２試薬を供する。

（５）別に４％（重量％）ポリエチレングリコール６０
００を含有する０、０５　　Ｍリン酸塩、０．９　％塩
化ナトリウム緩衝液を調整して自動分析装置の第１試薬
に供する。

（６）上記の第１および第２試薬を第４図の自動分析装
置に適用して上記非特異的凝集を検討した。

すなわち、サンプル量１０μＱ、第１試薬３００μＱ、
第２試薬（感作ラテツクス）１００μＱ。

反応時間５分、′６ｔ４定波長７００ｕｍの１波長測光
の条件で測定した場合の３０分依頼なし後の試薬ブラン
ク値の最大上昇中は５ｕ／μＱ前後であった。これは、
精製されない抗ヒトＩｇＥ抗体（生化学工業）をそのま
ま使用した場合の約１／２６に改良されたものである。

以上のように、最近のアルミナを主体とする切換弁を有
する自動化学分析装置における免疫比濁法、ラテックス
凝集比濁法による各種免疫関連物質の規定を可能にする
ものである。すなわち〈実施例１〉の方法に従ってＩ　
ｇＧｔ　ｒ　ｇＡｔ　ＣＲＰ。

Ｃ４，Ｃ８，トランスフェリン、ハプトグロビン。

Ｃ１−アンチトリプシン、Ｃ２−アシドグリコプロティ
ンのような各種蛋白成分の測定が可能である。また、〈
実施例３〉に従って微量のＣＲＰ。

ＲＦ（リウマチ因子）、ＡＳＬＯ（抗ストレプトリジン
−〇）、ＣＥＡ　（癌胎児性抗原）、フェリチン、β２
−ミクログロブリン、ＨＬＡ　（ヒト胎盤ラクトーゲン
）ｓＴ４　、Ｔδ（甲状腺ホルモン）。

インシュリンｙＩｇＥなどの微量物質の測定が可能とな
る。

使用されるカラム充填剤は切換弁と同一組成のセラミッ
クの粉末を使用するため、アフィニティークロマトグラ
フィに比べて非常に安価である。

また、前述のような非特異的凝集が生ずると例えば蛍光
免疫測定や酸素免疫測定においても測定を妨害する光散
乱現象が増大するので、これらの各種免疫測定法の自動
分析装置への適用においても有効であることは言うまで
もない、また、目的物質が抗体であり試薬中の反応物質
が抗原である場合も有効である。

〔発明の効果〕

以上、説明したように本発明によれば、試薬分注機と流
路弁と同一材質の固相が充填されたカラムクロマトグラ
フィによって免疫測定用試薬を精製しているため、アフ
ィニティクロマトグラフィで試薬を精製することなく、
安価に試薬の精製が可能となり、しがもその結果、非特
異的凝集が防止でき正確な抗原−抗体反応に基づく測定
を行うことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明を実施するための装置の一実施例系統図
、第２図は非特異的凝集による試薬ブランク値の変動を
示すグラフ、第３図は第１図の装置の検呂部におけるパ
ターンを示すグラフ、第４図は多項目多検体処理用の自
動分析装置の系統図である。１・・・ポンプ、２・・・カラム、３・・・検出部。

Claims

【特許請求の範囲】

１、試薬分注機によつて被検物に添加され、当該被検物
との間で生ずる抗原−抗体反応により、被験物の測定を
行う免疫測定用試薬の精製法であつて、当該免疫測定用
試薬を、予め、前記分注機の流路弁を構成する材質と同
一組成の固相が充填されたカラムクロマトグラフイによ
つて精製することを特徴とする免疫測定用試薬精製法。