JPS6258157A - サリチレートの検出方法 - Google Patents
サリチレートの検出方法Info
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- JPS6258157A JPS6258157A JP61075651A JP7565186A JPS6258157A JP S6258157 A JPS6258157 A JP S6258157A JP 61075651 A JP61075651 A JP 61075651A JP 7565186 A JP7565186 A JP 7565186A JP S6258157 A JPS6258157 A JP S6258157A
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- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0073—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen 1.14.13
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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- C12Y114/13—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.13)
- C12Y114/13001—Salicylate 1-monooxygenase (1.14.13.1)
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- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Ultrasonic Waves (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はサリチレートの検出方法およびこの検出を行う
ための分析装置に関するものである。
ための分析装置に関するものである。
アスピリン（アセチルサリチレート）は一般的に使用さ
れている医薬品である。この薬剤は胃腸系から門脈循環
内に容易に吸収され、大部分が肝臓を最初に通過する間
に、肝臓の酵素により迅速に加水分解されて遊離サリチ
レートを生ずる。
れている医薬品である。この薬剤は胃腸系から門脈循環
内に容易に吸収され、大部分が肝臓を最初に通過する間
に、肝臓の酵素により迅速に加水分解されて遊離サリチ
レートを生ずる。
血液中におけるアスピリンの標準半減期は約２５分であ
り（ジェー・エヌ・バスキン等、クリニック ケミスト
リー （ＣＩｉｎ、Ｃｈｅｍ）（１９８２）、 ２８
１２００） 、更に、吸収されたアスピリンの大部分
が遊離サリチレートとして体循環するに至ることが確か
められた。このサリチレート陰イオンが、摂取されたア
スピリンの鎮痛、解熱および抗炎症特性を担うと考えら
れる（ジー・レビイ、ブリティッシュジャーナル オブ
クリニカル ファーマコル（Ｂｒｉｔ。
り（ジェー・エヌ・バスキン等、クリニック ケミスト
リー （ＣＩｉｎ、Ｃｈｅｍ）（１９８２）、 ２８
１２００） 、更に、吸収されたアスピリンの大部分
が遊離サリチレートとして体循環するに至ることが確か
められた。このサリチレート陰イオンが、摂取されたア
スピリンの鎮痛、解熱および抗炎症特性を担うと考えら
れる（ジー・レビイ、ブリティッシュジャーナル オブ
クリニカル ファーマコル（Ｂｒｉｔ。
Ｊ、Ｃｌ１ｎ、 Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、（１９８０）
、 １０．２８５５）。
、 １０．２８５５）。
アスピリンを短期間の鎮痛／解熱剤として使用すると、
血清中に比較的低いレベルのサリチレートを生ぜしめ（
３０〜１００ｍｇ／ ｆ！ ；０．２２〜０．７３ｍＭ
）、この結果かかるレベルの監視は一般に不必要である
。しかし、関節炎の治療における如く長期間の抗炎症薬
量でアスピリンを使用すると、著しく高い濃度のサリチ
レートが生じ、このためかかるレベルを定期的に監視し
て、特に２０〜３００ｍｇ／ ｆｌ （０，１５〜２．
１９ｍＭ）の治療挙上の範囲内とすることが望ましい（
エイ・ケー・トーン、ペディアトリクス（Ａ。
血清中に比較的低いレベルのサリチレートを生ぜしめ（
３０〜１００ｍｇ／ ｆ！ ；０．２２〜０．７３ｍＭ
）、この結果かかるレベルの監視は一般に不必要である
。しかし、関節炎の治療における如く長期間の抗炎症薬
量でアスピリンを使用すると、著しく高い濃度のサリチ
レートが生じ、このためかかるレベルを定期的に監視し
て、特に２０〜３００ｍｇ／ ｆｌ （０，１５〜２．
１９ｍＭ）の治療挙上の範囲内とすることが望ましい（
エイ・ケー・トーン、ペディアトリクス（Ａ。
Ｋ、 Ｄｏｎｅ、 Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ）、
（１９７０）、 ２６． ８００） 。
（１９７０）、 ２６． ８００） 。
またサリチレート レベルの監視は、血清濃度が６００
ｍｇ／ Ｒ（４，３８ｍＭ）を超え得る急性中毒（偶発
性または故意性）の場合にも必要である。急性中毒の場
合には、予後および治療中の介入は一般にサリチレート
イオンの濃度に左右される。
ｍｇ／ Ｒ（４，３８ｍＭ）を超え得る急性中毒（偶発
性または故意性）の場合にも必要である。急性中毒の場
合には、予後および治療中の介入は一般にサリチレート
イオンの濃度に左右される。
これら臨床上の必要事項は、以下に簡単に述べる如き血
清中のサリチレートのレベルを監視する種々の方法の開
発をもたらした。
清中のサリチレートのレベルを監視する種々の方法の開
発をもたらした。
ａ） フォリン・シオカルテユ試薬との反応この検出は
、強アルカリ溶液内においてフェノールとフォリン・シ
オカルテユ試薬とを反応させて分光光度法／比色法で測
定することのできる青色を生せしめることに基づくもの
である（エム・ジエー・エッチ・スミスおよびジェー・
エム・タルポット、ブリティッシュ ジャーナル オブ
エキスブ パス（Ｂｒｉｔ、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｐａｔｈ、）
、 （１９５０）。
、強アルカリ溶液内においてフェノールとフォリン・シ
オカルテユ試薬とを反応させて分光光度法／比色法で測
定することのできる青色を生せしめることに基づくもの
である（エム・ジエー・エッチ・スミスおよびジェー・
エム・タルポット、ブリティッシュ ジャーナル オブ
エキスブ パス（Ｂｒｉｔ、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｐａｔｈ、）
、 （１９５０）。
３１、６５）。しかし、この方法は血清サンプルから蛋
白質を最初に除去する必要があり、また高い「ブランク
」値を生ずることからサリチレートにはあまり特有な方
法ではない。
白質を最初に除去する必要があり、また高い「ブランク
」値を生ずることからサリチレートにはあまり特有な方
法ではない。
ｂ） 第２鉄塩との反応
種々の方法は、サリチレート イオンが稀酸中で第二鉄
塩と反応する場合に紫色に着色した錯体を形成すること
に基づく（ピー、トリンダー、バイオケム、ジエイ、
、 （１９５４）、５７．３０１； ランサーサリチ
レート ラピッド スタット ダイアグノスチック キ
ット；米国特許第３．９１５．６４３号；ジエイ、エッ
チ、エラグフェルトおよびグー。エム、ネルソン、クリ
ニカル ケミストリー、 （１９８３）。
塩と反応する場合に紫色に着色した錯体を形成すること
に基づく（ピー、トリンダー、バイオケム、ジエイ、
、 （１９５４）、５７．３０１； ランサーサリチ
レート ラピッド スタット ダイアグノスチック キ
ット；米国特許第３．９１５．６４３号；ジエイ、エッ
チ、エラグフェルトおよびグー。エム、ネルソン、クリ
ニカル ケミストリー、 （１９８３）。
２９、８３９）。
これ等の方法では、蛋白質および他の物質を沈澱させる
ために最、初のサンプ形成を必要とする。
ために最、初のサンプ形成を必要とする。
高い「ブランク」値は、通常人体に存在する種々の化合
物からの干渉により、サリチレートを含有しない対照に
おきる（イー、ニス、カング等、クリニカル ケミスト
リー、（１９８３）、 ２９． １０１２）。
物からの干渉により、サリチレートを含有しない対照に
おきる（イー、ニス、カング等、クリニカル ケミスト
リー、（１９８３）、 ２９． １０１２）。
Ｃ） 直接分光光度／螢光光度法
またサリチレートの既知評価方法には直接紫外分光光度
法（エル、ウィリアムス等、ジエイ、ラグ、クリニカル
メソッド（Ｊ、 Ｌａｂ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｍｅｄ、）。
法（エル、ウィリアムス等、ジエイ、ラグ、クリニカル
メソッド（Ｊ、 Ｌａｂ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｍｅｄ、）。
（１９５９）、 ５３．１５６）および螢光光度法（エ
イ、サルッマン、ジェイ、ハイオル、ケＡ、（Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）。
イ、サルッマン、ジェイ、ハイオル、ケＡ、（Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）。
（１９４８）、１７４．３９９）が含まれる。かかる方
法の主たる欠点は、費用がかかる大きい実験室装置が必
要であることである。
法の主たる欠点は、費用がかかる大きい実験室装置が必
要であることである。
ｄ） 液体−クロマトグラフィー法
血漿サリチレート レベルの定量化は、ガス液−クロマ
トグラフィ−（エル、ジエイ、ワルター等シェイ、７７
−４．ｔイ、（Ｊ、Ｐｈａｒｍ、 Ｓｃｉ、）（１９７
４）。
トグラフィ−（エル、ジエイ、ワルター等シェイ、７７
−４．ｔイ、（Ｊ、Ｐｈａｒｍ、 Ｓｃｉ、）（１９７
４）。
６３、１７５４）および前記方法より著しく多くの仕様
および感度を有する高性能液−クロマトグラフィー（ジ
ェイ、エヌ、バスキン等、クリニカルケミストリー（１
ｇ２）、 ２８．１２００）を用いて達成された。
および感度を有する高性能液−クロマトグラフィー（ジ
ェイ、エヌ、バスキン等、クリニカルケミストリー（１
ｇ２）、 ２８．１２００）を用いて達成された。
然し、これ等の液−クロマトグラフィ法は、高度に熟練
した実験室の技術者並びに実験室装置に多額の投資を必
要とする。
した実験室の技術者並びに実験室装置に多額の投資を必
要とする。
ｅ） 酵素法
最近、酵素法の仕様を提供し、最初のサンプル形成を必
要としないサリチレート レベルの測定方法が開発され
た（アール、ダブリュー、ロングネッカー等、クリニカ
ル ケミストリー（１９８４） 、 ３０゜ケイ、ニス
、アンドニーおよびジエイ、エイ、ピッチコツカー、ク
リニカル ケミストリー（１９８４）。
要としないサリチレート レベルの測定方法が開発され
た（アール、ダブリュー、ロングネッカー等、クリニカ
ル ケミストリー（１９８４） 、 ３０゜ケイ、ニス
、アンドニーおよびジエイ、エイ、ピッチコツカー、ク
リニカル ケミストリー（１９８４）。
３０、１５４９）。一般にかかる方法は、間接的に測光
法であり、検出酵素用サブストレートの一つの酸化によ
る３４０ｎｍにおける吸光度の減少を測定するので熟練
した技術者並びに高価な実験室装置の購入を必要とする
。
法であり、検出酵素用サブストレートの一つの酸化によ
る３４０ｎｍにおける吸光度の減少を測定するので熟練
した技術者並びに高価な実験室装置の購入を必要とする
。
然し、カナダ国特許第１．１８５１５５号において提案
された一つの方法は、反応により消費される酸素の測定
により酵素反応の進行の測定をしようとするものである
。この方法は、電気化学的方法であり、最初の酸素含量
から差引くことを行うものであり、酸素量は変化し、先
ず確実に使用し得る読みが得られることを確かめなけれ
ばならない。
された一つの方法は、反応により消費される酸素の測定
により酵素反応の進行の測定をしようとするものである
。この方法は、電気化学的方法であり、最初の酸素含量
から差引くことを行うものであり、酸素量は変化し、先
ず確実に使用し得る読みが得られることを確かめなけれ
ばならない。
さらに緩衝溶液内の限られた酸素張力により、サンプル
の稀釈が必要であり、従って尚熟練した取扱いが必要で
ある。さらに、大気中の酸素の内部拡散を封止した装置
を使用しなければならない。
の稀釈が必要であり、従って尚熟練した取扱いが必要で
ある。さらに、大気中の酸素の内部拡散を封止した装置
を使用しなければならない。
この従来の提供は酸素生成物を測定するので、検出系に
おいて他の酸素−使用種に敏感であり得る。
おいて他の酸素−使用種に敏感であり得る。
本発明の第１の目的は、前述の方法に対して、大きい高
価な実験室装置を必要とすることなく比較的に熟練して
いない人が行うことができ、全血中のサリチレートの定
量化に用いられる迅速な電気化学的方法を提供すること
にある。
価な実験室装置を必要とすることなく比較的に熟練して
いない人が行うことができ、全血中のサリチレートの定
量化に用いられる迅速な電気化学的方法を提供すること
にある。
本発明においては、
（ａ） サリチレートまたはその誘導体の検出せんと
する液体サンプルを、サリチレートまたはその誘導体の
対応するカテコールへの転換を分析する１とができる酵
素で処理し、 （５）処理したサンプル中のカテコールの濃度をカテコ
ールの直接電気化学により測定することを特徴とするサ
リチレートまたはその誘導体の検出方法を提供する。
する液体サンプルを、サリチレートまたはその誘導体の
対応するカテコールへの転換を分析する１とができる酵
素で処理し、 （５）処理したサンプル中のカテコールの濃度をカテコ
ールの直接電気化学により測定することを特徴とするサ
リチレートまたはその誘導体の検出方法を提供する。
液体サンプルを適当な電位の電極と接触させ、電極は液
体サンプルとカテコールの直接電気化学測定を行うため
接触させるのが便利である。
体サンプルとカテコールの直接電気化学測定を行うため
接触させるのが便利である。
カテコールが生成するためのサリチレートのヒドロキシ
ル化および同時に行われる脱カルボキシル反応は、イン
ターナショナル・ユニオン・オブ・バイオケミストリー
によりＥＣ１，１４，１３，１として規定され、サリチ
レート ヒドロキシラーゼと命名された（他にサリチレ
ート−１−モノオキシゲナーゼとして知られている）形
の任意適当な酵素により触媒すことができる〔エンチー
ム ノウメンクラチャー、 １９７８． アカデミツ
ク プレス、二ニーヨーク、（１９７９） ）。
ル化および同時に行われる脱カルボキシル反応は、イン
ターナショナル・ユニオン・オブ・バイオケミストリー
によりＥＣ１，１４，１３，１として規定され、サリチ
レート ヒドロキシラーゼと命名された（他にサリチレ
ート−１−モノオキシゲナーゼとして知られている）形
の任意適当な酵素により触媒すことができる〔エンチー
ム ノウメンクラチャー、 １９７８． アカデミツ
ク プレス、二ニーヨーク、（１９７９） ）。
酵素は通常パテリアから単離されるサリチレート ヒド
ロキシラーゼであり、バクテリアはブソイドモナスの種
が好ましく、特にプソイドモナスｓｐ ＲＰＰ（ＡＴＣ
Ｃ２９３５１）またはプソイドモナスｓｐ ＲＷＳ（Ａ
ＴＣＣ２９３５２）が最も好ましい。
ロキシラーゼであり、バクテリアはブソイドモナスの種
が好ましく、特にプソイドモナスｓｐ ＲＰＰ（ＡＴＣ
Ｃ２９３５１）またはプソイドモナスｓｐ ＲＷＳ（Ａ
ＴＣＣ２９３５２）が最も好ましい。
かかる酵素材料はイオン交換クロマトグラフィーにより
、例えばイオン−交換陰イオン カラムで精製するのが
好ましい。ポリアニオンＳＩ カラム（ファーマシア
）における迅速蛋白質イオン交換クロマトグラフィーが
、特別の価値を有する。
、例えばイオン−交換陰イオン カラムで精製するのが
好ましい。ポリアニオンＳＩ カラム（ファーマシア
）における迅速蛋白質イオン交換クロマトグラフィーが
、特別の価値を有する。
溶解したサリチレートの任意のサンプルを本発明により
処理することができる。
処理することができる。
然しサンプルが全血から成るのが有利である。
或いは血漿、血清または任意の他の同様の体液であって
もよい。
もよい。
本発明の方法を実施するに当たっては、液体サンプルは
、表面に少なくとも上記酵素を通常Ｎ八ＤＰ）ｌと混合
して含む層を有する電極と接触させるのが便利である。
、表面に少なくとも上記酵素を通常Ｎ八ＤＰ）ｌと混合
して含む層を有する電極と接触させるのが便利である。
一つの使用形態においては、血液サンプルをセンサーに
適用する。血液サンプルがサリチレートを含み、ヒドロ
キシラーゼ酵素（ＮＡＤＨ）の第２サブストレートが酵
素に利用できる（即ちサンプル中または電極上で）場合
には、接触電流が電極表面における生成物（カテコール
）によって発生する。電位を保持してカテコールを酸化
し、電流を測定する。
適用する。血液サンプルがサリチレートを含み、ヒドロ
キシラーゼ酵素（ＮＡＤＨ）の第２サブストレートが酵
素に利用できる（即ちサンプル中または電極上で）場合
には、接触電流が電極表面における生成物（カテコール
）によって発生する。電位を保持してカテコールを酸化
し、電流を測定する。
かかる電極自体、特に使い捨てストラツプとして構成し
た電極およびかかる電極を配置したかまたは配置させる
ことができる、全血サンプルに使用し得るサリチレート
用分析装置もまた本発明の範囲に入る。
た電極およびかかる電極を配置したかまたは配置させる
ことができる、全血サンプルに使用し得るサリチレート
用分析装置もまた本発明の範囲に入る。
次式に示すようにサリチレート〔１）のカテコール（２
）への酵素転換は一方向性であり、ＮＡＤ （ｐ）Ｈと
酵素分子の存在下で行われるようである。
）への酵素転換は一方向性であり、ＮＡＤ （ｐ）Ｈと
酵素分子の存在下で行われるようである。
上記式中のカテコール（２）は、次式に示すように電極
表面において適当な酸化電位でオルトキノン（３）に転
換する。
表面において適当な酸化電位でオルトキノン（３）に転
換する。
カテコール（２）からの電子の除去は、オルトキノン（
３）またはその誘導体の形成を行い力テクールの存在、
従ってサリチレートの存在の定性的インジケーターとし
て、またカテコールに対する定量分析従って電極表面に
おけるサリチレートの濃度の間接的測定として使用する
ことができる。
３）またはその誘導体の形成を行い力テクールの存在、
従ってサリチレートの存在の定性的インジケーターとし
て、またカテコールに対する定量分析従って電極表面に
おけるサリチレートの濃度の間接的測定として使用する
ことができる。
例 １
カテコールのサイクリックポルクンメトリー燐酸二水素
カリウム（１，７７ｇ：ブリティッシュ・ドラッグ ハ
ウム（ＢＤＨ）製アナラー（Ａｎａｌａｒ） 〕および
燐酸水素二カリウム（１９，６ｇ＋ＢＤＨｍアナチー）
を蒸溜水に溶解し、ｐＨ７，６に調整し、最終容量を１
βとして緩衝溶液を調製した。
カリウム（１，７７ｇ：ブリティッシュ・ドラッグ ハ
ウム（ＢＤＨ）製アナラー（Ａｎａｌａｒ） 〕および
燐酸水素二カリウム（１９，６ｇ＋ＢＤＨｍアナチー）
を蒸溜水に溶解し、ｐＨ７，６に調整し、最終容量を１
βとして緩衝溶液を調製した。
カテコール（シグマ・ケミカル・コンパニー製）をかか
る緩衝溶液に溶解し、使用する直前減圧下で脱気した。
る緩衝溶液に溶解し、使用する直前減圧下で脱気した。
一定範囲の異なる材料、特に金およびガラス質カーボン
、特に熱分解グラファイトから電極をつくった。これ等
の電極を、０．３ μｍアルミナ（ＢＤＨ）の水スラリ
ーを用いて試験の間に研磨した。この研磨の目的は、電
極の表面から不純物および酸化生成物を除去することで
あった。アルミナを超音波処理により電極表面から除去
した。
、特に熱分解グラファイトから電極をつくった。これ等
の電極を、０．３ μｍアルミナ（ＢＤＨ）の水スラリ
ーを用いて試験の間に研磨した。この研磨の目的は、電
極の表面から不純物および酸化生成物を除去することで
あった。アルミナを超音波処理により電極表面から除去
した。
サイクリックポルタモグラムを、電位差零から＋５００
ｍＶおよび逆に一１００ｍＶ （対Ｓ、 Ｃ，Ｅ）まで
掃引して得た。印加した電位はポテンショスタット〔ヤ
イトロン インスト、エイ、ニス（Ｊａｙｔｒｏｎ Ｉ
ｎ５ｔ。
ｍＶおよび逆に一１００ｍＶ （対Ｓ、 Ｃ，Ｅ）まで
掃引して得た。印加した電位はポテンショスタット〔ヤ
イトロン インスト、エイ、ニス（Ｊａｙｔｒｏｎ Ｉ
ｎ５ｔ。
Ａ、Ｓ、 ） サイエンティフィック・アビングドン（
Ａｂｉｎｇｄｏｎ） ］により５０ｍＶ／Ｓの走査測度
を用いて制御した。
Ａｂｉｎｇｄｏｎ） ］により５０ｍＶ／Ｓの走査測度
を用いて制御した。
発生した酸化電流を、Ｘ軸は印加電位、Ｙ軸は２発生し
た電流を示すグールド（６０ｕｌｄ）シリーズ６０００
０チヤート レコーダーに記録した。カテコール（最終
濃度１０ｍＭ）のサイクリックポルタモグラムを第１図
に示す。
た電流を示すグールド（６０ｕｌｄ）シリーズ６０００
０チヤート レコーダーに記録した。カテコール（最終
濃度１０ｍＭ）のサイクリックポルタモグラムを第１図
に示す。
例 ２
サリチレート ヒドロキシラーゼを組込んだセンサー
サリチル酸ナトリウム（アルドリッヒから市場で入手し
得る、ゴールドラベル）を０．ＬＭの最終濃度となるよ
うに燐酸塩緩衝液に溶解した。
得る、ゴールドラベル）を０．ＬＭの最終濃度となるよ
うに燐酸塩緩衝液に溶解した。
ＮＡＤニナトリウム塩〔クレード■：ベーリンガーマン
ハイム製〕を緩衝液に溶解して最終濃度０゜２！４とし
た。
ハイム製〕を緩衝液に溶解して最終濃度０゜２！４とし
た。
サリチレート ヒドロキシラーゼ（シグマ・ケミカル・
コンパニー製）を蒸溜水に再懸濁して２０単位／ｍ１（
製造業者の資料および単位の定義に基づく）の原液を得
た。
コンパニー製）を蒸溜水に再懸濁して２０単位／ｍ１（
製造業者の資料および単位の定義に基づく）の原液を得
た。
使用した電極は例１について前記したものと同じもので
あった。
あった。
サリチレート ヒドロキシラーゼ（シグマ・ケミカル・
コンパ−製）の溶液を３７℃においてきまった手順で３
４０ｎｍの吸光度の減少（サブストレートの一つ、 Ｎ
ＡＤＨの酸化による）を追求することにより分析した。
コンパ−製）の溶液を３７℃においてきまった手順で３
４０ｎｍの吸光度の減少（サブストレートの一つ、 Ｎ
ＡＤＨの酸化による）を追求することにより分析した。
１ｍｌのガラス製キ二ベットに、１０μβのサリチレー
ト溶液、ｌＯμβのＮＡＤＨ（０，０２Ｍ溶液）および
９７７、５μβの燐酸塩緩衝溶液を添加した。このキュ
ベツトを３７℃に温度調節しておいたパイ ユニカム（
Ｐｙｅ Ｉｎ ｉｃａｍ） ５Ｐ８−４００分光光度計
内においた。
ト溶液、ｌＯμβのＮＡＤＨ（０，０２Ｍ溶液）および
９７７、５μβの燐酸塩緩衝溶液を添加した。このキュ
ベツトを３７℃に温度調節しておいたパイ ユニカム（
Ｐｙｅ Ｉｎ ｉｃａｍ） ５Ｐ８−４００分光光度計
内においた。
サリチレート ヒドロキシラーゼ溶液を添加した後、吸
光度の減少を３４０ｎｍで追求した。酵素一単位が７．
６のｐＨ，３７℃の作業温度で１分間当り１μモルのサ
リチレートおよびＮＡＤＨをカテコールおよびＮＡＤ＋
に転化することは知られている。
光度の減少を３４０ｎｍで追求した。酵素一単位が７．
６のｐＨ，３７℃の作業温度で１分間当り１μモルのサ
リチレートおよびＮＡＤＨをカテコールおよびＮＡＤ＋
に転化することは知られている。
サイクリックポルタモグラムにおいて、セルは５２μｌ
のＮＡ叶溶液（上述の如＜ ＜０．２Ｍ）、 ６０μｌ
のサリチレート ヒドロキシラーゼ溶液および４２８μ
βの緩衝溶液を有した。
のＮＡ叶溶液（上述の如＜ ＜０．２Ｍ）、 ６０μｌ
のサリチレート ヒドロキシラーゼ溶液および４２８μ
βの緩衝溶液を有した。
サイクリックポルタモグラムをテサブストレート（６０
μｌのサリチレート）の存在時および不存在時に記録し
た。反応が確実に進行するために、サンプルを走査開始
前３７℃で２時間温置した。かかるサイクリックボタモ
グラムを第３図に示す。
μｌのサリチレート）の存在時および不存在時に記録し
た。反応が確実に進行するために、サンプルを走査開始
前３７℃で２時間温置した。かかるサイクリックボタモ
グラムを第３図に示す。
走査開始前装置した混合物にサリチレートサブストレー
トを添加すると、得られた曲線の形状が著しく変化した
。
トを添加すると、得られた曲線の形状が著しく変化した
。
例３
定常状態測定
定常状態測定において、かきまぜた溶液に一定の電位を
印加した際発生した電流を、Ｘ軸を時間基準で使用した
チャート レコーダーのＹ軸上で評価した。２分間系を
平衡にさせた後電位を３７℃において＋２５０ｍＶ（対
５ＣＩＥ）で保持した。溶液のかきまぜにより、電極に
接近し、酸化に有効な物質の層を補給し、このようにし
て電極で発生する電流は試薬の消費により減少しないよ
うにした。
印加した際発生した電流を、Ｘ軸を時間基準で使用した
チャート レコーダーのＹ軸上で評価した。２分間系を
平衡にさせた後電位を３７℃において＋２５０ｍＶ（対
５ＣＩＥ）で保持した。溶液のかきまぜにより、電極に
接近し、酸化に有効な物質の層を補給し、このようにし
て電極で発生する電流は試薬の消費により減少しないよ
うにした。
かきまぜた溶液は、１４０μｌのＮＡ叶溶液、１００μ
ｌのサリチレート ヒドロキシラーゼ溶液および７６０
μｌの緩衝溶液から成るものであった。一連の定常状態
電気化学測定を、サリチレート溶液の増量の存在下で行
ってサリチレートに対する検量線を作成し、第２図に示
す。サンプルを添加した後電極を＋２５０ｍＶ （対５
ＣＢ）で保持した。この検量線は、サリチレート イオ
ンを測定するため、未知サンプルの直接の読みに関して
使用することができた。
ｌのサリチレート ヒドロキシラーゼ溶液および７６０
μｌの緩衝溶液から成るものであった。一連の定常状態
電気化学測定を、サリチレート溶液の増量の存在下で行
ってサリチレートに対する検量線を作成し、第２図に示
す。サンプルを添加した後電極を＋２５０ｍＶ （対５
ＣＢ）で保持した。この検量線は、サリチレート イオ
ンを測定するため、未知サンプルの直接の読みに関して
使用することができた。
例４
サリチレート ヒドロキシラーゼの精製トリス７ （Ｔ
ｒ ｉｓｍａ）塩基（２，４２ｇ： シグマ・ケミ力
・コンパニー）を蒸溜水に溶解し、ｐＨを７．５に調整
し、最終容量を１１として緩衝溶液をつくった。
ｒ ｉｓｍａ）塩基（２，４２ｇ： シグマ・ケミ力
・コンパニー）を蒸溜水に溶解し、ｐＨを７．５に調整
し、最終容量を１１として緩衝溶液をつくった。
この緩衝溶液（緩衝溶液Ａ）を用いてイオン交換カラム
に酵素サンプルを適用した。第２緩衝溶液（緩衝溶液Ｂ
）をつくった。緩衝溶液Ｂは緩衝溶液Ａと略々間じでし
ったが、更に１５０ｍＭの硫酸ナトリウム（ＢＤＨ）含
有した。この緩衝溶液を用いて酵素を陰イオンカラムか
ら溶離した。
に酵素サンプルを適用した。第２緩衝溶液（緩衝溶液Ｂ
）をつくった。緩衝溶液Ｂは緩衝溶液Ａと略々間じでし
ったが、更に１５０ｍＭの硫酸ナトリウム（ＢＤＨ）含
有した。この緩衝溶液を用いて酵素を陰イオンカラムか
ら溶離した。
サリチレート ヒドロキシラーゼ（ジ−ディーニス チ
クノロシイ社製）を緩衝溶液Ａに再懸濁して製造業者の
資料および活性と単位の定義に基づいて５０単位／ｍ
ｌ （１８ｍｇ蛋白質／ｍｆ）の原液を得た。
クノロシイ社製）を緩衝溶液Ａに再懸濁して製造業者の
資料および活性と単位の定義に基づいて５０単位／ｍ
ｌ （１８ｍｇ蛋白質／ｍｆ）の原液を得た。
蛋白質の精製を完全なファーマシアＦＰＬＣ（商標名）
系で行った。ファーマシア ポリアニオンＳＩカラム（
ＨＲ５１５）を緩衝液Ａで平衡にした。酵素溶液（１６
０μβ）ヲ１ｍβｍ１ｎ−’の流速でカラムに適用した
。予めプログラムした勾配を使用してカラムからサンプ
ルを溶離したく第４図参照）。
系で行った。ファーマシア ポリアニオンＳＩカラム（
ＨＲ５１５）を緩衝液Ａで平衡にした。酵素溶液（１６
０μβ）ヲ１ｍβｍ１ｎ−’の流速でカラムに適用した
。予めプログラムした勾配を使用してカラムからサンプ
ルを溶離したく第４図参照）。
画分（１ｍ β）をＦＲＡＣ−１００画分コレクター（
ファーマシア）に集め、例２で詳述したように酵素活性
を分析した。酵素活性は画分２０および２１に存在し、
蛋白質ピークと関連した。クロマトグラフィー分離の輪
郭を第４図に示す。
ファーマシア）に集め、例２で詳述したように酵素活性
を分析した。酵素活性は画分２０および２１に存在し、
蛋白質ピークと関連した。クロマトグラフィー分離の輪
郭を第４図に示す。
酵素の固有の活性は１０単位／ｍｇ以上、通常１４〜１
５単位／ｍｇであった。
５単位／ｍｇであった。
サリチレート ヒドロキシラーゼの精製を、ポリアニリ
ン３３１−１７ｕを大きいカラム（１，６ｃｍ ｘ ４
５ｃｍ）に充填したものを使用してスチールシップした
。
ン３３１−１７ｕを大きいカラム（１，６ｃｍ ｘ ４
５ｃｍ）に充填したものを使用してスチールシップした
。
同様の活性は文献に報告されており、こ場合数段階の精
製工程が用いられている（ニー、ケイ−ニスおよびレオ
、シー、アール、アナール バイオケム（１９８１，１
１４，１７７、カミン、エッチ等、メソッズ イン エ
ンチモノロジイ（１９７８）、５３．５２７）。
製工程が用いられている（ニー、ケイ−ニスおよびレオ
、シー、アール、アナール バイオケム（１９８１，１
１４，１７７、カミン、エッチ等、メソッズ イン エ
ンチモノロジイ（１９７８）、５３．５２７）。
本発明者等はこの方法が存在する精製報告書に勝多くの
利点を有すると考える。
利点を有すると考える。
例５
サリチレートに対する乾燥ストリップ・センササリチル
酸すｌ−ＩＪクラムよびＮＡＤＨを例２に詳述したと同
じ給源から得、これ等を０．９％の塩水に溶解して最終
濃度を２０ｍＭにした。これ等の２種の溶液を種々の割
合で混合して１０ｍＭ ＮＡＤＨに対し一定範囲のサリ
チレート濃度を得た。
酸すｌ−ＩＪクラムよびＮＡＤＨを例２に詳述したと同
じ給源から得、これ等を０．９％の塩水に溶解して最終
濃度を２０ｍＭにした。これ等の２種の溶液を種々の割
合で混合して１０ｍＭ ＮＡＤＨに対し一定範囲のサリ
チレート濃度を得た。
ＢＥＳ （ＮＮ ’−ビス（２−ヒドロキシエチル−２
−アミノエタン スルホン酸： ３２．Ｏｇ、 ＢＤＨ
製） アジ化ナトリウＡ（０，５ｇ、 ＢＤｆ（製）
およびＦＡＤニナトリウム塩（８５ｍｇ、 ＢＯＧ製）
を蒸溜水に溶解し、ｐＨを７に調整し、最終容量を１β
にした。
−アミノエタン スルホン酸： ３２．Ｏｇ、 ＢＤＨ
製） アジ化ナトリウＡ（０，５ｇ、 ＢＤｆ（製）
およびＦＡＤニナトリウム塩（８５ｍｇ、 ＢＯＧ製）
を蒸溜水に溶解し、ｐＨを７に調整し、最終容量を１β
にした。
精製したサリチレート ヒドロキシラーゼを、分子１１
０．０００カツト オフ フィルターを有するアミコン
限外濾過セルを使用して限外濾過し、緩衝液を５２０単
位／ｍｌに濃縮した。
０．０００カツト オフ フィルターを有するアミコン
限外濾過セルを使用して限外濾過し、緩衝液を５２０単
位／ｍｌに濃縮した。
乾燥ス） ＩＪツブ電極を、英国特許出願第８５１５８
８４号に従ってつくった。
８４号に従ってつくった。
例２に記載した如く、室温で固定電位の研究を行った。
但しこの場合サンプルを適用した後直ちに電位を保持し
た。サリチレートに対する検量曲線を第５図に示す。
た。サリチレートに対する検量曲線を第５図に示す。
第１図はｌＱｍＭの最終濃度におけるカテコールのサイ
クリック ポルタモグラム線図、 第２図は一連の定常状態電気化学測定により得られたサ
リチレー）１度と発生電流の関係を示す線図、 第３図はサリチレートの不存在下および存在下における
ＮＡＤＨ溶液、サリチレート ヒドロキシラーゼ溶液お
よび緩衝溶液のサイクリックポルタモクラム線図、 第４図は純粋なサリチレート ヒドロキシラーゼを得る
ためイオン交換クロマトグラフィー用いＦＰＬＣにより
プソイドモナス蛋白質を分離した場合の分離経過を示す
曲線図、 第５図はサリチレートに対する乾燥ストリップ電極の応
答を示す曲線図である。 特許出願人 ジェネテックス・インターナショナル・
インコーポレーテッド ！！！百の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、４゜ ＣｊＯｍＭ ＮＡＤＨ’Ｐ４’ｌリナレト）ｔｎトイＦ
ＩＧ、５゜ 手 続 補 正 書（方式） 昭和６１年ｑ月 ３０日 特許庁長官 宇 賀 道 部 殿１、事件の表
示 昭和６１年特許願第７５６５１号 ２、発明の名称 サリチレートの検出方法および検出用分析装置３、補正
をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代 理 人 ６、補正の対象
クリック ポルタモグラム線図、 第２図は一連の定常状態電気化学測定により得られたサ
リチレー）１度と発生電流の関係を示す線図、 第３図はサリチレートの不存在下および存在下における
ＮＡＤＨ溶液、サリチレート ヒドロキシラーゼ溶液お
よび緩衝溶液のサイクリックポルタモクラム線図、 第４図は純粋なサリチレート ヒドロキシラーゼを得る
ためイオン交換クロマトグラフィー用いＦＰＬＣにより
プソイドモナス蛋白質を分離した場合の分離経過を示す
曲線図、 第５図はサリチレートに対する乾燥ストリップ電極の応
答を示す曲線図である。 特許出願人 ジェネテックス・インターナショナル・
インコーポレーテッド ！！！百の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、４゜ ＣｊＯｍＭ ＮＡＤＨ’Ｐ４’ｌリナレト）ｔｎトイＦ
ＩＧ、５゜ 手 続 補 正 書（方式） 昭和６１年ｑ月 ３０日 特許庁長官 宇 賀 道 部 殿１、事件の表
示 昭和６１年特許願第７５６５１号 ２、発明の名称 サリチレートの検出方法および検出用分析装置３、補正
をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代 理 人 ６、補正の対象
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、サリチレートまたはその誘導体を検出するに当り、 （ａ）サリチレートまたはその誘導体の検出せんとする
液体サンプルを、サリチレートまたはその誘導体の対応
するカテコールへの転換を分析することができる酵素で
処理し、 （ｂ）処理したサンプル中のカテコールの濃度をカテコ
ールの直接電気化学により測定することを特徴とするサ
リチレートまたはその誘導体の検出方法。 ２、適当な電位に設定した電極を、カテコールの直接電
気化学測定する液体サンプルと接触させる特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ３、酵素がバクテリアから単離したサリチレートヒドロ
キシラーゼである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、バクテリアがプソイドモナス種である特許請求の範
囲第３項記載の方法。 ５、プソイドモナスの種がプソイトモナスｓｐＲＰＰ（
ＡＴＣＣ２９３５１）またはプソイドモナスｓｐＲＷＳ
（ＡＴＣＣ２９３５２）である特許請求の範囲第４項記
載の方法。 ６、サリチレート ヒドロキシラーゼを液体クロマトグ
ラフィーにより精製する特許請求の範囲第３項記載の方
法。 ７、サリチレートを陰イオンカラムで迅速蛋白質イオン
交換クロマトグラフィーにより精製する特許請求の範囲
第６項記載の方法。 ８、サンプルが全血、血清、血漿または同様の体液であ
る特許請求の範囲第１〜７項のいずれか一つの項に記載
の方法。 ９、液体サンプルを、表面に少なくとも上記酵素を含む
層を有する電極と接触させる特許請求の範囲第１〜７項
のいずれか一つの項に記載の方法。 １０、液体サンプルを、表面に酵素およびＮＡＤＨを含
む少なくとも１層を有する電極と接触させる特許請求の
範囲第１〜７項のいずれか一つの項に記載の方法。 １１、表面にサリチレート ヒドロキシラーゼ酵素を固
定化した電極。 １２、上記表面に配置したＮＡＤＨを有する特許請求の
範囲第１１項記載の電極。 １３、酵素がプソイドモナスｓｐ ＲＰＰ（ＡＴＣＣ２
９３５１）またはｓｐ ＲＷＳ（ＡＴＣＣ２９３５２）
から抽出し、陰イオン カラムでクロマトグラフィーに
より精製したサリチレート ヒドロキシラーゼである特
許請求の範囲第１１項記載の電極。 １４、液体サンプルと接触させるために有効な任意のＮ
ＡＤＨ物質および酵素の乾燥付着した支持体ストリップ
の形態である特許請求の範囲第１１、１２または１３項
記載の電極。 １５、特許請求の範囲第１１、１２または１３項記載の
電極を配置したかまたは配置することができる、全血の
検出に有用なサリチレートの検出用分析装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB858508677A GB8508677D0 (en) | 1985-04-03 | 1985-04-03 | Assay for salicylate |
| GB8508677 | 1985-04-03 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6258157A true JPS6258157A (ja) | 1987-03-13 |
| JPH0650299B2 JPH0650299B2 (ja) | 1994-06-29 |
Family
ID=10577124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61075651A Expired - Fee Related JPH0650299B2 (ja) | 1985-04-03 | 1986-04-03 | サリチレートの検出方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4777132A (ja) |
| EP (1) | EP0202743B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0650299B2 (ja) |
| AT (1) | ATE51415T1 (ja) |
| AU (1) | AU586235B2 (ja) |
| CA (1) | CA1253568A (ja) |
| DE (1) | DE3669888D1 (ja) |
| GB (1) | GB8508677D0 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5362630A (en) * | 1981-07-28 | 1994-11-08 | Duke University | Isolation of pseudomonas salicylate hydroxlase and its use for the identification and quantitation of salicylate in body fluids |
| US5320946A (en) * | 1990-07-05 | 1994-06-14 | Eastman Kodak Company | Method and element for assay of catechol and catechol generating substances |
| US5460970A (en) * | 1993-05-18 | 1995-10-24 | Summa Health System | Separation of acetaldehyde-induced hemoglobin (Hb A1-AcH) |
| GB9416002D0 (en) * | 1994-08-08 | 1994-09-28 | Univ Cranfield | Fluid transport device |
| DE19619056C2 (de) * | 1996-03-04 | 2002-01-17 | Frieder Scheller | Verfahren und Sensor zur enzymatisch-elektrochemischen Bestimmung von Substraten NAD·+·- und NAD(P)·+·-abhängiger Dehydrogenasen |
| WO2000042421A1 (en) * | 1999-01-15 | 2000-07-20 | Competitive Technologies, Inc. | Method for screening for type b trichothecene mycotoxins |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5643358A (en) * | 1979-09-18 | 1981-04-22 | Tokuyama Soda Co Ltd | Pigment |
| JPS57197458A (en) * | 1981-05-20 | 1982-12-03 | Yanagimoto Seisakusho:Kk | Catechol amine analysing apparatus |
| JPS5926048A (ja) * | 1982-08-03 | 1984-02-10 | Toshiba Corp | 検体検査ユニツト |
| JPS5982082A (ja) * | 1982-10-29 | 1984-05-11 | Matsushita Electric Works Ltd | グルコ−ス濃度検出装置 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3046741A1 (de) * | 1980-12-11 | 1982-07-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Nachweis von nad(p)h oder salicylat |
| CA1185155A (en) * | 1981-07-28 | 1985-04-09 | Kwan-Sa You | Isolation of pseudomonas salicylate hydroxylase and its use for the identification and quantitation of salicylate in body fluids |
| AU564495B2 (en) * | 1983-05-05 | 1987-08-13 | Medisense Inc. | Nadp-nadph energy linked enzyme cascade assay |
| AU564494B2 (en) * | 1983-05-05 | 1987-08-13 | Medisense Inc. | Enzyme cascade energy coupling assay |
| GB8326696D0 (en) * | 1983-10-05 | 1983-11-09 | Health Lab Service Board | Estimation of salicylates |
-
1985
- 1985-04-03 GB GB858508677A patent/GB8508677D0/en active Pending
-
1986
- 1986-04-02 CA CA000505648A patent/CA1253568A/en not_active Expired
- 1986-04-03 EP EP86302476A patent/EP0202743B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-03 DE DE8686302476T patent/DE3669888D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-03 US US06/847,955 patent/US4777132A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-03 AT AT86302476T patent/ATE51415T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-04-03 AU AU55638/86A patent/AU586235B2/en not_active Ceased
- 1986-04-03 JP JP61075651A patent/JPH0650299B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5643358A (en) * | 1979-09-18 | 1981-04-22 | Tokuyama Soda Co Ltd | Pigment |
| JPS57197458A (en) * | 1981-05-20 | 1982-12-03 | Yanagimoto Seisakusho:Kk | Catechol amine analysing apparatus |
| JPS5926048A (ja) * | 1982-08-03 | 1984-02-10 | Toshiba Corp | 検体検査ユニツト |
| JPS5982082A (ja) * | 1982-10-29 | 1984-05-11 | Matsushita Electric Works Ltd | グルコ−ス濃度検出装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1253568A (en) | 1989-05-02 |
| US4777132A (en) | 1988-10-11 |
| AU586235B2 (en) | 1989-07-06 |
| GB8508677D0 (en) | 1985-05-09 |
| EP0202743A1 (en) | 1986-11-26 |
| AU5563886A (en) | 1986-10-09 |
| EP0202743B1 (en) | 1990-03-28 |
| ATE51415T1 (de) | 1990-04-15 |
| DE3669888D1 (de) | 1990-05-03 |
| JPH0650299B2 (ja) | 1994-06-29 |
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |