JPS62296894A - コレステロ−ルエステルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 （産業上の利用分野） ｌ明はコレステロールエステルの製造法に関する。

（従来の技術） コレステロールエステルは例えば化粧品の基剤、液晶等
に使用される化合物で、動物性油脂等の天然物から分離
可能であるが量が少ないという問題７αを有する。また
合成法ではコレステロールとカルボン酸クロライドの反
応（Ｇ、Ｗ、Ｇｒａｙ＋　Ｊ　。

ＣＩｔｅｍ、　Ｓ　ｏｃ、　＊　１９５６．３７３３）
も知られているが、原料の合成、反応、精製等の多段階
操作及び反応に高温加熱が必要であるという欠点を有す
る。一方、コレステロールエステラーゼ酵素を用いる合
成法もあるが、一般にこの酵素は高価であるという欠点
を有する。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明の口約は安価な触媒を用い、常温付近の低温で、
且つ１段階反応という簡単な工程によりコレステロール
エステルを高収率で得る方法を提供することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明はコレステロールと脂肪酸のエステル化反応にお
いて、微生物由来のリパーゼ活性を有する酵素を触媒と
して使用することを特徴とするコレステロールエステル
の製造法に係る。

リパーゼ活性を有する酵素はトリグリセライドを段階的
にグリセリンと脂肪酸に加水分解する反応を接触する酵
素で、本発明のようなコレステロールのエステル化反応
を接触することについてはこれまで全く知られでいなか
った。本発明ではこのリパーゼ活性を有する酵素が通常
のコレステロールエステラーゼ酵素と同様の反応に使用
でき、しかもその際のエステルの収率が同等もしくはよ
り優れることを見い出した。

本発明において脂肪酸としては例えば炭素数２〜２６の
飽和もしくは不飽和の脂肪族カルボン酸を挙げることが
でき、例えば酢酸、アクリル酸、メタクリル酸、プロピ
オン酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ラワリン酸、バル
ミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、イソステアリ
ン酸、オレイン酸等を例示できる。

脂肪酸とコレステロールの反応割合は広い範囲から選択
できるが、通常はコレステロール１モルに対して脂肪酸
を約０．５〜２モル、好ましくは約０．９〜１．１モル
使用するのが良い。

本発明において触媒である微生物由来のリパーゼ活性を
有する酵素としでは例えば糸状菌、酵母、＃ｌ薗等から
の由来のもので、市販品としてはリパーゼ０Ｆ−３６０
（名糖産業９Ｉ）、リパーゼＡＹ、Ｆ−ＡＰ、ＡＰ、Ｙ
、Ｐ、ＧＣ，ＧＴ（以上、大野製薬製）等を挙げること
ができ、微生物由来でないすい臓リパーゼ等は不適当で
ある９尚、上記酵素は精製品であっても、或いは未精製
の微生物を含んだものであっても良い。触媒の使用量は
適宜決定すれば良いが、通常はコレステロールに対して
約１〜２００時間％、好ましくは約２０〜１００重量％
用いるのが良い。

本発明の反応は有機溶媒系で行うことが好ましくｔｎ−
ヘキサン、シクロヘキサン、インオクタン等の低極性溶
媒が好適で、また相分離しない程度の少量の水を共存さ
せることも好適である。更に本発明では使用する酵素を
種々の方法で固定化して用いろこともでき、この場合は
触媒の反復使用が可能で、また目的物の分離精製も容易
である。

その方法と宣７ては、例えば担体結合法、架橋法、包括
法及び、これらを複合して用いる複合法等があり、本発
明の有機溶媒系では、特に有機溶媒不溶の合成樹脂担体
で酵素を包括する方法が好ましい。更にセライト、シリ
カゾル等の担体に酵素を結合させた後、合成樹脂担体で
包括する事も任意である。合成！３１脂としては各種の
ものを使用でき、例えばポリアクリルアミド、ポリウレ
タン、ポリビニルアルコール、光架橋性樹脂、感光性Ｕ
（脂等を例示できる。ポリウレタンを例にとると、ウレ
タンエマルジョン、ウレタンプレポリマー等ヲ用いる方
法、ウレタン７オームに付着させる方法等を挙げること
ができる。

反応温度は通常的２０〜４５℃、好適には約３０〜４０
℃であり、反応時間は固定化触媒を用いる場合は約１〜
２００時間、好ましくは約１〜２００時間程度であるが
、触媒を固定化しない場合は約１０分〜５０時間、好ま
しくは約５〜１０時間程度である。

本発明において目的のコレステロールエステルは例えば
、シ濾過、晶析、再結晶、カラムクロマトグラフィー、
抽出等の方法に上り単離、精製することができ、特に固
定化触媒を使用した場合は、シ濾過の過程が省略でき、
他は上記と同様である。

（実　施　例） 以下に実施例を挙げる。反応混合物の分析は薄層クロマ
トグラフィーによった。プレートとしてメルク社製のキ
ーゼルデル６０、展開液としてｎ　−ヘキサン／エーテ
ル／酢酸＝７０／３０／１　　（容量比）ヲ用い、ステ
アリン酸、コレステロール、コレステリルステアンート
をＦ準として展開したところ、各々のＲｒ値が０．２７
〜０．３１．０．１２〜０．１４．０．６９〜０．７５
のスポットを得た（５〜６回繰り返し）、尚、これらは
展開後、ヨウ素で発色させた。

また目的物の収率は高速液体クロマトグラフィー（ウォ
ーターズ社製）を使用して下記の条件により求めた。

使用７＞　ラムＮ０ＶＡ　ＰＡＫ　Ｃ＋ｓ　（ウォータ
ーズ社製）溶　　媒　　メタ／−ル／りａａホルム＝７
／３（Ｖ／ｖ） 流　　量　　１ｍ１／分 検出器　　示差屈折計 （昭和電工製、５Ｅ−５１型） 実施例１ コレステロール０．３８ｇ及びステアリン酸０．２８ｇ
を水飽和シクロヘキサン１５瞳１に溶かし、リパーゼＯ
Ｆ　−３６０（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅ
ａ由米）　０．１ｇを水由来２ｇに溶解し、セライト５
３５（０，５ｇ）に吸着した触媒酵素を加え、３０°Ｃ
で１６０回／分で往復振とうしｒこ。１８時間後、上記
の方法で薄層クロマトグラフィーを行ったところ、Ｒｒ
値が０．１３．０．３０゜Ｏ，フ３のスポットを得、各
々コレステロール、ステアリン酸、フレステリルステア
レートの冬ポットと判定した。目的物の収率は９４％で
あった。

実施例２ コレステロール０．１９ｇ及びステアリン酸０．１４ｇ
を水飽和イソオクタン１０曽１に溶かし、リパーゼＡＹ
（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ由゛米）　
０．１ｇを実施例１のリパーゼ０Ｆ−３８０の代りに用
い、同様の操作を行った０反応１８時間後、実施例１と
同様のＴｉ層クりマトグラフイーを行ったところ、［値
が０．１２゜０．２９．０．７３のスポットを得、各々
コレステロール、ステアリン酸、コレステリルステアレ
ートと判定した。収率は９４％であった。

実施例３ 実施例２のリパーゼＡＹの代りにリパーゼＰ（Ｐ　ｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ、由来）を用いた他は実施例２
と同様に行った。Ｒｆ値が０．１４．０．３１．０．７
４のスポットが得られ同様の判定を行った。収率は８２
％であった。

実施例４ 実施例２のリパーゼＡＹの代りにリパーゼＡＰ（ＡＳｐ
ｅｒＨｉｌｕｓ　Ｓｌｙ、由来）を用いた他は実施例２
と同様に行った。Ｒｒ値がＯ６】２．０．２８．０．６
９のスポットが得られ、同様の判定を行った。収率は７
９％であった。

実施例５ 実施例２のリパーゼＡＹの代りにリパーゼＦ−Ａ　Ｐ　
（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｊａｖａｎｉｃｕｓ由米）を用い
た他由来施例２と同様に行った。Ｒｒ値が０．１２．０
．２７．０．７０のスポットが得られ、同様の判定を行
った。

収率は３７％であった。

比較例１ 実施例２のリパーゼＡＹの代りにブタすい臓リパーゼ（
シグマ社製）を用いた他は実施例２と同様に行った。Ｒ
ｆ値が０．１４．０．３１のスポットのみが得られ、エ
ステル合成は生起していないとｆＱ定された。

実施例６ 実施例１のステアリン酸０．２８ｇの代りにマルがリン
酸０．２７．を用いた以外は同様に行った。Ｒｆ値デカ
０１３．０．２９．０．７０ノスホツ）　７５１得ラレ
、）ＬｚＸチロール、マル〃リン酸、コレステロルマル
がレートと判定された。収率は９５％であった。

実施例７ 実施例１のステアリン酸Ｏ，ＺＳｇの代りにエナント酸
０．１３ｇを用いた以外は同様に行った。［値が０．１
２．０．３０％０．６９のスポットが得られ、コレステ
ロール、エナント酸、コレステリルへブタ／エートと判
定された。収率は９３％であった。

実施例８ 実施例１の例ステアリン酸０．２８ｇ代りに酢酸Ｏ，Ｏ
Ｓｇを用いた以外は同様に行った。Ｒｆ値が０．１２．
０．５４のスポットが得られ、コレステロール、コレス
テロールアセテートと？り定された。酢酸は揮発し、ス
ポットは得られなかった。収率は８９％であった。

実施例９ リパーゼＯＦ　−３６０（０，Ｉｇ）を水０．２ｇに溶
解し、セライト５３５に吸着後、ウレタンプレポリマー
Ｐ　Ｕ　−３（東洋ゴム製）１ｇで包括固定化した触媒
酵素を泪いた池は実施例１と同様に行った。４４時間反
応させた後、実施例１と同様の薄層クロマトグラフィー
を行ツタとコロ、Ｒｒ値デカ０１３．０．３０．０．７
１のスポットが得られ、同様の判定を行った。

収率は９０９６であった。

実施例１０ 実施例９のＰ　Ｕ　−３の代りにＰＵ−６（東洋ゴム製
）を用いた以外は同様に行ったところ、Ｒｆ値が０．１
３．０．３０．０．７０のスポットが得られ、同様の判
定を行った。収率は８２％であった。

実施例１１ リパーゼＯＦ−３６０（０，１ｇ）を水０．２ｇに溶解
して反応系へ供した池は実施例１と同様に行った。４４
時間反応後、実施例１と同様の薄層クロマトグラフィー
を行ったところ、Ｒｆ値が０．１２．０．２９．０．７
０のスポットが得られ、同様の判定を行った。

収率は２７％であった。

尚、上記で使用したＰＵ−３及びＰＵ−６は次のような
ＮＣＯ末端プレポリマーである。

（ａ）ＰＵ−３ トリレンジイソシアネート（ＴＤＩ）とポリオキシエチ
レンポリオキシプロピレンボリオールから得られたＮＣ
Ｏ末端プレポリマーであり、ポリエーテルポリオールの
平均分子１１２５２９、ポリエーテルポリオール中のエ
チレングリコール含量は５７％である。

（ｂ）ＰＵ−６ ポリエーテルポリオールの平均分子量２６２７、エチレ
ングリフール含量９１％の、池はＰＵ−３と同様の親水
性のＮＣＯ末端プレポリマー。

（以　上）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）コレステロールと脂肪酸のエステル化反応におい
   て、微生物由来のリパーゼ活性を有する酵素を触媒とし
   て使用することを特徴とするコレステロールエステルの
   製造法。
2. （２）反応を有機溶媒系で行う特許請求の範囲第１項の
   製造法。
3. （３）酵素を合成樹脂担体で固定化した特許請求の範囲
   第１項記載の製造法。