JPS62278457A - 血液型判定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 〔産業上の利用分野〕 本発明は血液型の判定方法、特に血球試料を用い、免疫
反応に基いて血液型を判定する方法に関するものである
。

〔従来の技術〕

現在、病院や血液検査センタ等で行なわれている血液型
の判定は用手法および自動法共に血球凝集反応によって
いる。例えばＡＢＯ式の血液型の判定を行なう場合には
、血球試料を２本の試験管またはマイクロプレートの２
つのウェルに分注した後、Ａ型血球と特異的に反応する
抗Ａ抗体試薬と、Ｂ型血球と特異的に反応する抗Ｂ抗体
試薬とをそれぞれ分注して混合し、混合後１〜２時間静
置した後、血球の凝集の存無を肉眼若しくは顕微鏡下で
観察したり、光電装置により自動的に検出している。こ
の場合、抗Ａ抗体または抗Ｂ抗体を加えることにより血
球が凝集する試料はＡ型またはＢ型であり、抗Ａ抗体お
よび抗Ｂ抗体を加えることにより血球が共に凝集する試
料はＡＢ型であり、両者とも凝集しない試料は０型であ
ると判定する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

上゛述した従来の血液型判定方法では、血球試料と抗体
試薬とを混合した後、浮遊状態にある血球が沈澱して凝
集パターンが形成されるまで長時間静置する必要がある
ため、判定に１時間以上と云った長時間を要する欠点が
ある。また、凝集パターンが時間とともに見分けにくく
なったり、僅かな振動によって崩れたりするため、凝集
パターンから凝集であるか非凝集であるかを判断するこ
とが困難となり、判定精度が低下し、信頼性が損われる
欠点もある。特に、自動判定を行なうような場合、反応
容器やマイクロプレートを振動を抑えながら搬送する必
要があり、設計が面倒となったり、構成が複雑となった
りする欠点がある。さらに従来の判定方法では血球試料
を２つの反応容器に分け、それぞれに特定の抗体試薬を
分注する必要があるため、必要な反応容器の個数が多く
なるとともに試薬分注作業も面倒となる。このことは特
に自動血液型判定装置を実現する場合に不利となる。

本発明の目的は上述した欠点を除去し、血球試料と複数
の抗体試薬とを一つの反応容器に入れて混合して免疫反
応を行なわせ、凝集パターンを形成することなく血球に
結合した標識物質を検知して血液型の判定を行なうこと
により、判定時間を大幅に短縮することができ、しかも
必要とする反応容器の個数も少なくすることができ、さ
らに判定の精度および信頬度を向上することができる血
液型の判定方法を提供しようとするものである。

〔問題点を解決すべき手段および作用〕本発明による血
液型判定方法は、血液型を判定すべき血球試料に、それ
ぞれ異なる標識物質で標識された複数の抗体試薬を加え
て抗原−抗体反応を行なわせ、血球に結合していない抗
体試薬を除去して得られる血球浮遊液をカラムまたはフ
ローセルに導き、血球に結合した標識物質を検知するこ
とにより血液型を判定することを特徴とするものである
。

第１図は本発明による血液型判定方法の順次の工程を示
す概念図である。先ず反応容器ｌ内に血液型を判定すべ
き血球試料２を収容し、これに第１の標識物質で標識し
た抗Ａ抗体試薬３および第２の標識物質で標識した抗Ｂ
抗体試薬４を分注して混合し、抗原−抗体反応を行なわ
せる。今、血球試料２がＡ型であるとすると、その血球
表面に抗Ａ抗体が結合する。すなわち第１図に模式的に
示すようにこの抗Ａ抗体は第１の標識物質しで標識され
ているので、この第１標識物質が抗原−抗体複合体Ｃを
介して血球Ｒに選択的に結合されることになる。次にＢ
−Ｆ分離を行なって血球に結合しない抗Ｂ抗体試薬およ
び血球に結合しなかった抗Ａ抗体試薬を取り除く。この
Ｂ−Ｆ分離は、例えば遠心操作で行なうことができる。

このようにして結合していないフリーな抗体試薬を除去
して得られる血球浮遊液５を次にフローセル６に供給し
、ここで標識物質の同定を行なう。第１図では標識物質
として異なる吸収波長を有する色素をそれぞれ抗Ａ抗体
および抗Ｂ抗体に結合した場合を示し、それぞれ前記具
なる色素の吸収波長を有する２つの光源７および８から
放射される光ビームをフローセル６に投射し、その透過
光を２つの受光器９および１０でそれぞれ受光する。例
えば血球に抗Ａ抗体が結合されている場合にはその標識
色素は光源７から放射される光ビームを吸収するが、光
ｔＡ８から放射される光ビームは吸収しない。

したがって受光器９からの出力信号は小さく、受光器１
０からの出力信号は大きい。これらの出力信号を信号処
理回路ｓｐｃに供給して適当に処理することにより、血
液型を判定することができる。

この判定のアルゴリズムを次表に示す。

Ｈ：受光器出力レベル高 Ｌ：受光器出力レベル低 以上のように本発明によれば、沈降した血球粒子によっ
て凝集パターンを作り、これを検出して血液型を判定す
るものではないので、判定時間を大幅に短縮することが
できるとともに判定精度を向上することができる。

〔実施例〕

第２図は本発明の血液型判定方法の一実施例の構成を示
すものである。本例ではＡＢＯ式の血液型判定を行なう
ものとし、血球試料１２を収容する反応容器１１に、Ａ
型の抗原を有する血球と特異的に抗原−抗体反応を起こ
す抗Ａ抗体に標１に物質として４８８ｎｍの光を吸収し
て緑色の螢光を発するＦ　Ｉ　Ｔ　Ｃ（ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｉｎ　１ｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）色素（螢光
物質）を結合した第１の試薬１３を分注器１４により所
定量分注するとともにＢ型血球と特異的に反応する抗Ｂ
抗体に標ｉ物質として５８２ｎｍの光を吸収して赤色螢
光を発するＴ　Ｒ（ｔｅｘａｓ　ｒｅｄ）色素（螢光物
質）を結合した第２試薬１５を分注器１６により所定量
分注し、攪拌混合して抗原−抗体反応を行なわせる。こ
の反応時間は例えば３０分とすることができる。次に反
応容器１２を遠心装置１７に導き遠心を行なって、血球
に結合した標識抗体と血球に結合していない標識抗体と
を分離して、Ｂ−Ｆ分離を行なう。このようにしてフリ
ーな標識抗体を除去した血球浮遊液１８を作成し、これ
を次にポンプ１９によりフローサイトメータ２０に供給
する。

このフローサイトメータ２０そのものは既知のものであ
るので単にブロックとして示すが、上述したように標識
物質としてＦＩＴＣとＴＲを用いる場合には光源として
波長４８８ｎｍのレーザビームを放射するレーザと、５
Ｂ２ｎｍのレーザビームを放射するレーザとを用い、緑
色螢光および赤色螢光をそれぞれ別々の螢光検出器で検
出するものである。

このようにしてフローサイトメータ２０の２つの螢光検
出器から得られる出力信号を信号処理回路２１に供給し
て血液型の判定を行ない、判定結果をプリンタ２２で出
力したりモニタ２３上に映出したりする。この場合の血
液型判定のアルゴリズムを次表に示す。

Ｈ：検出器出力レベル高 Ｌ：検出器出力レベル低 上述した実施例では標識物質としてＦＩＴＣとＴＲを用
いたが、２種類の色素としてＦＩＴＣとＰ　Ｅ　（ｐｈ
ｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）を用い、シングルレーザで分
析することもできる。この場合のフローサイトメータの
構成を第３図に線図的に示す。

カラム３１を垂直に配置し、Ｂ−Ｆ分離した血球浮遊液
をこのカラムを経て流下させる（第３図では紙面の上方
から下方）。このカラム３１にはアルゴンレーザ３２か
ら放射される４８８ｎｍの励起用レーザビームを集光レ
ンズ３３を介して投射する。

ＦＩＴＣは４８８ｎｒａのレーザビームで励起されて緑
色の螢光を発し、ＰＥは４８８ｎａ＋のレーザビームで
励起されて５６８ｒｖを中心波長とする橙色の螢光を発
する。これらの螢光を各別に検出するために、カラム３
１からの螢光を５２０ｎａ＋以上の波長の光を通すフィ
ルタ３４を経てグイクロイックミラー３５に入射させる
。このグイクロイックミラーは５６０ｎａ以上の波長の
螢光を反射し、それ以下の波長の螢光を透過するものと
する。ＦＩＴＣによる螢光の波長は５２０〜５５０ｎｍ
であるので、このダイクロインクミラー３５を透過し、
５２０〜５５０ｎｎ＋の波長の光を選択的に通すフィル
タ３６を透過してＦＩＴＣ検出器３７に入射する。一方
、ＰＥによる螢光の中心波長は５６８ｎｍであるので、
グイクロイックミラー３５で反射され、５６０ｎｍ以上
の波長を有する光を透過するフィルタ３８を経てＰＥ検
出器３９に入射する。

したがって、血球試料がＡ型であり、ＦＩＴＣで標識し
た抗Ａ抗体が血球試料と結合している場合にはＦ　ＩＴ
Ｃ検出器３７からの出力信号は高レベルとなるが、ＰＥ
で標識した抗Ｂ抗体は血球に結合されていないとともに
血球浮遊液中にも存在していないのでＰＥ検出器３９の
出力信号は低レベルとなる。したがって上述した実施例
と同様のアルゴリズムにしたがって血液型の判定を行な
うことができる。

本発明は上述した実施例にのみ限定されるものではなく
、幾多の変形が可能である。例えば上述した実施例では
標識物質として特定の波長を吸収して特定の波長の螢光
を発する螢光物質を用いたが、特定の波長の光を吸収す
る色素、放射性物質または酵素反応に関係する物質を使
用することもできる。

次に標識物質として酵素反応と関連する基質を用いる本
発明の血液型判定方法の一例を説明する。

この場合には、抗Ａ抗体にＯＰＤ （ｏｒｔｈｏｐｈｅｎｉｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）基質
を結合し、抗Ｂ抗体にＡＢＴＳ　（ＰＯＤに構造の類似
した基質）を結合した試薬をそれぞれ用いる。これらの
試薬を血球試料とともに反応容器に分注し、混合して抗
原−抗体反応を行なわせる。次にＢ−Ｆ分離して得られ
る血球浮遊液を、内壁にｐ　Ｑ　Ｄ　（ｐｅｒｏｘｉｄ
ａｓｅ）酵素を固相化したカラムまたはフローセルに供
給する。この場合、血球にＯＰＤが結合されていると１
１□０□の存在下でＰＯＤと酵素反応し、４９２ｎｍの
吸収波長を有する発色反応が行なわれる。また、血球に
ＡＢＴＳが結合している場合には４１０ｎｍの吸収波長
を有する発色反応が行なわれる。さらに血球にＯＰＤお
よびＡＢＴＳの双方が結合されている場合には、４１０
ｎｒａおよび４９２ｎｍの２つの吸収ピークを有する発
色反応が行なわれ、いずれの酵素も結合していない場合
には発色反応は起らない。

したがってカラムまたはフローセル内での発色反応を比
色測定することにより血液型の判定を行なうことができ
る。この場合の判定アルゴリズムを次表に示す。

ｏ　　−・　発色反応有り ×　−・・　発色反応無し 酵素反応を利用する血液型判定においては上述したよう
に吸収波長の異なる発色反応を行なう酵素で標識した試
薬を用いるが、上述したＯＰＤおよびＡＢＴＳの他に４
３６ｎｍの吸収波長を呈するグアイアコール（ｇｕａｉ
ａｃｏｌ）酵素を用いることもできる。

また、標識物質として酵素を用いる代りに基質を用いる
こともでき、この場合には酵素を加えて酵素反応を行わ
せた後、比色測定を行なえばよい。

さらに上述した例では抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体とを試薬とし
て用いたが、抗体として同種の血液型に対するものを複
数種混合して用いることで感度が上がることが知られて
おり、凝集反応では不安定であった亜型も高い精度で判
定することができる。

〔発明の効果〕

上述したように本発明によれば、それぞれ異なる標識物
質で標識した複数種の抗体試薬を血球試料と混合して抗
原−抗体反応を行なわせ、Ｂ−Ｆ分離後の血球浮遊液を
カラムまたはフローセルに供給し、血球に結合された標
識物質を検出することによって血液型の判定を行なうも
のであるから、不安定な凝集パターンを形成し、これを
検出する従来の方法に比べ反応時間は大幅に短縮される
とともに判定誤差が減少し、判定精度および信頼性が向
上することになる。また、１つの反応容器に血球試料と
全試薬とを分注するため反応容器の個数は少なくて足り
るとともに判定装置を構成する場合に反応系の構成を節
潔とすることができる。

さらに同一の血液型に対して複数種の抗体試薬を用いる
場合には感度の増強が図れる利点もある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による血液型判定方法の基本的構成を示
す概念図、 第２図は本発明による血液型判定方法の一実施例の構成
を示す線図、 第３図は同じくそのフローサイトメータの構成を示す線
図である。 １−反応容器　　　　　２−血球試料 ３−抗Ａ抗体試薬　　　４−・・抗Ｂ抗体試薬５・−・
血球浮遊液　　　　６・−フローセルフ、８−・・光源
　　　　　９．１０−受光器５ｐｃ−ｍ−信号処理回路
　１　ｔ−・反応容器１２−血球試料　　　　　１３−
・抗Ａ抗体試薬１４−・−・分注器　　　　　　１５−
・−抗Ｂ抗体試薬１６−・−分注器　　　　　　１７−
遠心機１８・−血球浮遊液　　　　１９・・−ポンプ２
０−・フローサイトメータ ２１−・−信号処理回路　　　２２−・・プリンタ２３
・・・モニタ　　　　　　３１・−カラム３２−　　レ
ーザ光＊　　　　　３３−・−集光レンズ３４．３６．
３８・−フィルタ ３５・−ダイクロイックミラー

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、血液型を判定すべき血球試料に、それぞれ異なる標
   識物質で標識された複数の抗体試薬を加えて抗原−抗体
   反応を行なわせ、血球に結合していない抗体試薬を除去
   して得られる血球浮遊液をカラムまたはフローセルに導
   き、血球に結合した標識物質を検知することにより血液
   型を判定することを特徴とする血液型判定方法。