JPS62265398A - 蛋白質の汚れを除去する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、洗浄組成物を使った汚れの除去に関係する。

特に血液や食物のような、蛋白質を含んでいる汚れを除
去できる組成物を開示する。

（従来の技術） 洗濯洗浄剤へのプロテアーゼの添加が有利な効果がある
ことはよく確立されている。望ましいことに、使用され
るプロテアーゼは、−喰に使われ・　　る洗浄剤の作用
を助ける比較的高いｐＨ値（７，５〜１０．５）で機能
する。典型的な市販の洗浄剤は、自身の洗浄力をリン酸
三ナトリウムのような強い塩基性の物質、長鎖のアルキ
ルまたはアリールスルホン酸塩のような洗浄性物質、ま
たはズブチリシンその他の蛋白質分解酵素のようなプロ
テアーゼ添加物に頼っている。

洗浄剤組成物が年ごとにますます効果的になる一方で、
それらは、ある蛋白質を含む汚れ、特に血液の汚れを効
果的に除去できないことはありふれた現象である。事実
、血液の汚れは、特にしばらくの間生地に付着した後は
、悪いことに除去しにくい。

本発明の組成物は、洗浄剤調製という面で、蛋白分解に
加えジスルフィド結合の開裂を起こすことによって、蛋
白質含有の汚れのより効果的な除去を提供する。ジスル
フィド開裂試薬と蛋白質分解酵素の組み合わせは、核酸
の調製のような学術研究上の標品で蛋白質を分解するた
め、あるいはペプチドマツピングのためのクリーブラン
ドゲルの操作の時のような標的蛋白質を断片化するため
に、以前から使われていた。詰まった下水管内の髪を分
解するために、プロテアーゼとカルシウムチオグリコレ
ートのようなジスルフィド開裂還元試薬との組合せの使
用が、米国特許第４，５４０，５０６号で開示された。

洗浄剤は、この目的のために使われる組成物に１０％ま
で加えられる。米国特許第４．２９４．０８７号は、ジ
スルフィド架橋の連続的な開裂とそれに続くプロテアー
ゼ処理により動物の皮膚から毛を分離し回収する方法を
述べている。　１９８４年１１月７日公開の英国特許出
願ＧＢ　２，１３９．２６ＯＡは。

洗浄剤組成物中の過酸化漂白剤とプロテアーゼの同時使
用を開示し、ここでは、マンガンイオンの存在によりこ
の組成物は以前使用されていたものよりも低温域で効果
を残存し得ている。この開示によると、その組成物中に
金属イオン触媒不在下で、過酸化物の分解と漂白作用に
は７０℃以上の温度が必要である。（マンガン以外の）
これらのイオンの存在下でさえ６０℃以上の温度が要求
される。

英国特許に開示されているマンガンイオンを含む組成物
は、洗浄剤を５０％まで含んでいる。

出願者の知る限りでは、プロテアーゼとジスルフィド開
裂試薬の組み合わセは、生地から蛋白質性の物質を除去
するための洗浄剤組成物への添加物として、または、低
温でこの目的を実施可能にする洗浄剤組成物には使用さ
れていなかった。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明は、洗浄が即座であるがまたは数日あるいは数週
間以上遅れるかにかがわらず、生地から血液２食物、そ
の他の蛋白質を含む汚れを除去するための効果的な方法
と洗浄剤組成物を提供する。

（問題点を解決するための手段） 本発明の方法は、生地から蛋白質含有の汚れを除く方法
であって２有効量のプロテアーゼと有効量ノシスルフィ
ド結合を開裂できる試薬（ジスルフィド開裂試薬、　　
ＤＣＲ）とを含む洗浄液で、前記生地を処理することを
含有し、そのことにより上記目的が達成される。

さらに本発明の方法は、生地がら蛋白質含有の汚れを除
く方法であって、有効量のプロテアーゼと有効量のジス
ルフィド結合を開裂できる試薬（ジスルフィド開裂試薬
、　　ＤＣＲ）により前記生地を処理することを含有し
、そのことにより上記目的が達成される。

本発明の組成物は、有効量のプロテアーゼと有効量のジ
スルフィド結合を開裂できる物Ｍ（ジスルフィド開裂試
薬、　　ＤＣＲ）とを洗浄剤処方物に混合して含有し、
そのことにより上記目的が達成される。

本組成物は、プロテアーゼ、およびジスルフィド結合を
開裂できるのに有効な量の物質の添加を除いて１通常の
洗浄剤標品を利用できる。得られる標品は、７０℃より
低い温度また５５℃以下の温度でさえ作用可能である。

一面では１本発明は、適当な洗浄剤処方物に混合した状
態で効果的な量のプロテアーゼおよびジスルフィド結合
を開裂できる物質（ジスルフィド開裂試薬やＤＣＲ）を
含有する洗浄剤組成物を目的とする。他の面では９本発
明は、プロテアーゼとジスルフィド開裂試薬、あるいは
本発明の組成物を使って生地から蛋白質性の汚れを除去
するための方法に関係している。この方法は７０℃以下
の温度で効果的であり、そして金属イオンを必要としな
い。さらに他の面では９本発明は、洗浄剤組成物を調製
する方法に関係している。

以下に本発明の詳細な説明する。

蛋白質を含む汚れの除去に有用な組成物を目的とする本
発明の観点において１組成物の必須の成分は、プロテア
ーゼ、ジスルフィド結合を開裂できる物質あるいはその
混合物、および洗浄剤処方物の担体である。

プロテアーゼは、市販の、さもなければ、当該分野で既
知の一般的な特異性のあ、る蛋白質分解酵素のうちの１
つかあるいはその混合物である。理論的にはどのプロテ
アーゼも使用できるが、より好ましい具体例は洗浄剤組
成物に関連する弱い塩基性環境下で使用するのに適した
ｐＨ最適値をもつものである。従って１例えばペプシン
やパパインが限界近くで働くことができる一方、トリプ
シン。

キモトリプシン、ズブチリシンその他のようなより高い
ｐＨＪｉｉ適値をもつ酵素が好ましい。好ましいｐＨ９
５域は７〜１２．より好ましくは１０〜１２である。

洗浄剤中で有用な多数の市販の酵素標品も適当である。

このような酵素には、アルカラーゼ、マクサターゼ、マ
クサカル、およびエスペラーゼを商標とされるものが含
まれる。１９８５年１月９日公開のヨーロッパ特許出願
番号１３０．７５６に開示されたバチルス・アミロリク
エファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ且■虹ｍ匹ハ虹並旦
から調製されたズブチリシンが特に好ましい。本発明の
組成物は、いずれのプロテアーゼ、またはそれらの混合
物を含んでよく。

そして最も効果的な選択は、　ｐＨ，温度、洗浄時間。

対象の酵素に関する特異的な阻害剤の有無を含む。

使用条件に依存するであろう。

ジスルフィド結合を開裂できる物質は様々あるが、一般
的に、酸化剤、還元剤、およびフマル酸や亜硫酸ナトリ
ウムによって例示されるような種々の付加基質の３つの
カテゴリーにはいる。適当な酸化剤には過酸化水素、過
ギ酸、過ホウ酸ナトリウム、および酸化漂白剤が含まれ
る。効果的な還元剤にはジチオスレイトール（ＩＩＴＴ
）　、　　β−メルカプトエタノール（ＢＭＩり　、水
素化ホウ素ナトリウム、その他が含まれる。

簡単に分類できないその他の試薬に、塩化水銀。

ニトロプルシド、トリブチルホスフィン、およびホスホ
チオレートがある。特に有効な開裂試薬は。

反応：　　Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ｒ＋　５（ｈ−”→Ｒ−Ｓ−Ｓ
Ｏｉ−”　＋−ＳＲによってジスルフィドの亜硫酸分解
をおこす亜硫酸ナトリウムである。この反応の平衡は１
重金属イオンまたは酸化剤を使ってチオール陰イオンを
除去することによって移動する。その酸化力は、従来の
洗濯機内での典型的な場合のように、もし洗浄溶液が攪
拌されるならば１通気によって提供されるか、あるいは
、　ＣＬＩＳＯ４や過ホウ酸ナトリウムのような酸化剤
が加えられる。

ジスルフィドを開裂できる物質の前述のリストは包括的
であるとはいえず、また逆に、効果的であるが商品とし
ては必ずしも適当でない物質を含んでいる。商品として
成功するためには、加えられる物質は比較的安価でなけ
ればならず、そして望ましくない特徴をもっていてはい
けない。従って１例えば、塩化水銀の使用は本発明の方
法を実施する上で働きをもつであろうが、家庭での使用
向けの通常の洗浄剤産物としては不適当である。

β−メルカプトエタノールと口ＴＴは、それらが少し不
快なにおいがあり、従って商品としては香水によって隠
す必要があることを除いて、商品的に適している。それ
ゆえ、市販洗浄剤に特に適した物質は、安価で比較的安
全な、亜硫酸ナトリウム（酸化剤との組み合わせが好ま
しい）か過酸化水素である。ジスルフィド結合の開裂に
有用な物質の総説は、たとえば、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　
Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓ、　
　Ｍｅａｎｓ、　　Ｇ、Ｅ、、　　ｅｔ　　ａｌ、　　
ｅｄｓ　　（１９７１）＋　　Ｈｏ１ｄｅｎ−Ｄａｙ、
　ＩｎｃｌＳａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏｒ　ＣＡ＋　Ｃ
ｈ　８．およびＣｈｅ＋＊１ｃａｌＲｅａ　ｅｎｔｓ　
ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　
　Ｌｕｎｄｂａｌｄ。

Ｒ，Ｌ、＋　ｅｔ　ａｌ、　ｅｄｓ　（１９８４）、　
ＣＲＣＰｒｅｓｓ　Ｉｎｃ、　ＢｏｃａＲａｔｏｎ、　
ＦＬ　Ｃｈ　７にみられる。

本組成物の残り成分は従来の洗浄剤処方物のものであり
、典型的にはリン酸三ナトリウムのような塩基、直鎖ア
ルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルエトキシ化硫酸
塩、硫酸化直鎖アルコールまたはエトキシ化直鎖アルコ
ール、または石鹸のような洗浄剤、そしてビルグーおよ
びホワイトナーのような他の成分を含む。知られている
ように。

洗浄剤組成物は固体、顆粒状、または液体である。

もちろん塩基と洗浄剤の混合物も同様に使うことができ
る。典型的な洗浄剤組成物は９例えば、米国特許第３．
６２３，９５７号；第４．４０４．１２８号；第４．３
８１，２４７号；第４，４０４．１１５号；第４．３１
８，８１８号；第４．２６１．８６８号；第４．２４２
．２１９号；第４，１４２，９９９号；第４，１１１，
８５５号；第４，０１１，１６９号；第４，０９０，９
７３号；第３，９８５，６８６号；第３．７９０．４８
２号；第３，７４９．６７１号；第３，５６０，３９２
号；第３，５５８．４９８号；および第３，５５７．０
０２号で開示されている。

典型的には、プロテアーゼは本発明の洗浄剤組成物の０
．０１〜３％−ｔ　／　ｗ　ｔを構成し、ジスルフィド
開裂物質は１０〜４０％賀ｔ　／　ｗ　ｔを構成する。

もちろん。

存在量は、プロテアーゼやジスルフィド開裂試薬の性質
、洗浄液中の洗浄剤の希釈度および洗浄条件に依存する
。しかし、与えられる範囲は一般的に典型的である。

（以下余白） 本発明の方法では、蛋白性の汚れを含む織物は適当なｐ
Ｈ，温度および洗浄時間で、プロテアーゼとジスルフィ
ド開裂試薬の（同時または連続的）組み合わせで処理さ
れる。もちろん、これらの条件は簡便性に従って変更で
き、またプロテアーゼとジスルフィド開裂のための物質
の選択はある程度この選択に依存する。しかし、しばし
ば使われる便利な条件は、７〜１２の間のｐｎ値で、特
にこの範囲の高ｐｔｔ側のｐｔｎｏ〜１２である。２０
〜５５℃の温度。

特に４０〜５５℃の周辺で、５〜２０分間２分間２エ常
〜１５分間くらいが典型的で好ましい。商業上実用的で
あるためには、その方法は利用者に通常利用できる条件
下で行われる必要があるので、好ましい時間や温度は家
庭の洗濯機、近所のコインランドリーおよび専門のラン
ドリーサービスで一般に使用されるものである。ここで
使用される温度範囲（７０℃より低く、また５５℃やそ
れ以下でさえ）にもかかわらず、Ｍｎ（ＩＩ）のような
重金属イオン触媒が必要かまたは望まれることに注意さ
れたい。

本発明の方法の１つの具体例においては、市販の洗浄剤
を使う従来の洗浄手順が使われ、プロテアーゼとジスル
フィド開裂物質は、多くは漂白剤が使用される方法で、
添加物として、別々にまたは一緒に提供される。従って
これらは、洗浄サイクルの始めあるいはある中間点、た
とえば洗浄サイクルの約半分が行われた後で、洗浄剤と
一緒に加えられる。もし、固形洗浄剤組成物が約１：５
００の希釈（約２■／−の固形物）と仮定して、この方
法で処理されるなら任意の量のプロテアーゼとＤＣＲが
この希釈によって課せられる上限なしに加えられる。（
もしプロテアーゼとＤＣＲが初めから洗浄剤組成物に加
えられていて、たとえば、もしＤＣＲが組成物の５０％
を占めていたならば、１■／−だけが最終洗浄液になる
。しかし、これらの物質がもし別々に加えられるならば
、特別なＤＣＲとプロテアーゼの最も効果的な量が加え
られる。）はんの少しの量が必要とされるので、プロテ
アーゼに関して量の制限は一般的に考慮されない。

典型的には、プロテアーゼは、洗浄液の約１〜５０μｇ
／艷の最終濃度で加えられる。しかし、　　ＤＣＲの場
合、洗浄剤の希釈によって許される量よりも多い世が望
ましい。たとえば、水素化ホウ素ナトリウムを使ったジ
スルフィド結合の開裂は、　０．２Ｍという高濃度の試
薬を用いてほぼ同量の緩衝液の存在下で都合よく起こる
（Ｌｕｎｄｂａｌｄ、　Ｒ，Ｌ、、　ｅｔ　ａｔ。

Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅａ　ｅｎｔｓ　ｆｏｒ　Ｐｒｏ
ｔｅｉｎ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ。

前述）。

このような高濃度は従来のものであるが、それらは必ず
しも必要ではなく、より低濃度でも作用し得る。亜硫酸
分解は通常０．１Ｍのオーダーの亜硫酸ナトリウムの濃
度でおこるが、　０．ＯＩＭまたはそれ以下の低濃度で
もまた使用できる。ＤＴＴは。

０．０２〜０．１Ｍのオーダーの濃度にすると効果的で
ある。簡単にいえば、　ＤＣＲｆＭ度は、これらのいず
れかの試薬および効果の維持に対して広い範囲で変動す
る。もちろん９個々の適用に対する最適濃度は１時間、
温度およびｐ■を含む洗浄過程の条件と同様に、汚れの
性質や試薬の性質に依存している。

他のより便利な方法では、プロテアーゼとジスルフィド
開裂物質をもとの洗浄剤組成物に加え。

そしてプロセスを、これらの修飾した洗浄剤を使って標
準の洗浄手順のように行う。これらの条件では、洗浄剤
組成物は前述のものに相当するが。

組成物の量は、洗浄液や洗浄過程の条件および洗浄剤組
成物の溶解性に依存して、約０．５〜１０■／−または
それ以上の範囲で変動し得る。どの場合も、洗浄剤中の
プロテアーゼとＤＣＲの含有は、洗浄剤の希釈にしたが
ってこれらの成分の濃度が規定される。従って、１：１
００の希釈が使用され（１０■／、ｄ）　、そしてたと
えばＤＣＲが洗浄剤組成物の５０％に制限されたとして
も、得られる洗浄液中のＤＣＲ最大濃度は５■／−が上
限である。１００■／１という仮定の分子量に対してＤ
ＣＲ最大濃度は０．０５Ｍになる。もちろん一般的に洗
浄剤中のＤＣＲ？！度は５０％より低く、より低い１）
ＣＲｔ１４度が指示される。

本発明の洗浄剤組成物は、酵素成分のコストの点から特
に望ましいように、ごく少量のプロテアーゼ、比較的少
量のＤＣＲおよび大部分を占める洗浄剤を含有する。従
って２本調製物は一般的に。

６０〜９０％の“洗浄剤”　（界面活性剤、しかしビル
ダーやホワイトナーのような添加物を含む）　、　０．
０１〜３％のプロテアーゼおよび約ｌθ〜４０％のジス
ルフィド開裂試薬を含む。

もちろん、もとの洗浄剤にこれら２つの添加物のうちの
１つだけを加えそして洗浄液に別に他方を加えることも
また可能である。特に、ジスルフィド開裂試薬を洗浄前
に加え、続いてプロテアーゼを含む洗浄剤を加えるか、
あるいはジスルフィド開裂試薬を含む洗浄剤をプロテア
ーゼ処理の前または後に加える。

（実施例） 以下のプロトコールは典型例である。

大笠開　　　　サイクル１　　　　　　　サイクル２１
　　洗浄剤（０，１％ブ■テ７−ゼ）　　洗浄剤（１０
％口ＣＲ）１０分、３７℃　　　　　　　１０分、３７
℃２　　　　３０ｍＭ　　ＤＣＲ洗浄７ＦＩＩ（０，１
％　プロテアーゼ）１５分、３０℃　　　　　　　１５
分、３０℃３　　　　洗浄剤＋（０，２％　プロテアー
ゼ、−ｍ−２０％　ＤＣＲ） ４　　　　）洗浄剤（０，１％　プロテ７−セ、　　　
　洗浄剤（０，２％　プロテア−ｆ）２５％　ＤＣＲ） １０分、３７℃　　　　　　　１０分、３７℃５　　　
　１０Ｍｇ／−プロテアーゼ　　　　　　　　洗浄剤　
（１０％　ＤＣＲ）１０分、３７℃　　　　　　　１２
分、３０℃６　　　　洗浄剤　（１０％　ＤＣＲ）　　
　　　　　　１０Ｍｇ／−プロテアーゼ１２分、３０℃
　　　　　　　１０分、３７℃７　　　　１０Ｑ＋ＩＩ
Ｍ　　ロＣ１？　　　　　　　　　　　　　　　　洗浄
剤（０，２％　ブυう７−ゼ）１５分、３７℃　　　　
　　　１０分、３０℃８　　１００ｍＭ　ＤＣＲ、？／
ｃ浄剤５　μｇ　プロテアーゼ １５分、３７℃　　　　　　　１０分、３０℃以下の実
施例は１本手順の効率を確立する実験室でのテストの結
果を示す。これらの実施例はまた１本発明を説明するも
のであるが限定することはない。

スｍ 吸光度の増加が、ジスルフィドを開裂するβ−メルカプ
トエタノール（ＢＭＢ）またはジチオスレイトール（Ｄ
ＴＴ）を含む試薬により当該分野で既知め方法を用いて
試験標品より抽出した蛋白質の規準である。結果は、下
の表１に示す。

表１ 訂−素　　ＤＣＲ＾２８〇　　　八２ＢＯＡ２８０　　
衣服上の（μｇ）　　　　　　洗浄前　洗浄後　変　化
　…立蛋頁（μｇ） −−０，１００，３２０，２２１２０ １５０，１２０，５２０，４０２４ ０１２ｍＭＢＭＥ　　Ｏ，１２０，４１０，２９８２１
５１２ｎＭＢＭＥ　　Ｏ，１３０，６９０，５６１８１
５８ｍＭＤＴＴ　　Ｏ，１３０，７１０，５８８（ＤＴ
Ｔのみの結果は、含まれていない。なぜなら。

酸化されたＤＴＴの２８０ｎｍでの吸収はデータの解釈
を妨害するからである。） 上記試験の沈澱からの上澄液を捨て、ペレットの蛋白質
含量をローリ−法（Ｌｏｗｒｙ、　−ｏ、Ｈ，ｌ　ｅｔ
　ａｌ。

Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　（１９５１）　１９３　：　
２６３−２７５）で、　ＢＳＡを標準に使い、定量した
。この検定の結果も９表１に示す。このデータは、プロ
テアーゼとジスルフィド開裂試薬の組み合わせにより、
衣服から蛋白質がほとんど完全に除去され、一方、どち
らか単独ではそれほど効果的でないことを示している。

災膳■則 同様に、汚れたサンプルを可溶化緩衝液中で。

９５℃、５分間インキエベートして、ローリ−法（前出
）に従って検定するための蛋白質を抽出した。

プロテアーゼ（ズブチリシン）単独の添加、ジスルフィ
ド開裂試薬単独の添加、および両方の添加の結果を表２
に示す。

表２ 堕　　　　１１Ｊ玉　　　　　茨祖トＬ劉ｎ１　　　　
　タイト　除去　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１２７２　　なし　　　　　　　　
　　　　　　　７８３　　　　１Ｏａｇ　ズブチリシン
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　５４　　　　　１０　　ｍｇ　　ＮａｚＳＯｓ　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６５
５　　　　　１０　　ｍｇ　　Ｎａ２５（１３＋ＬＯμ
ｇ　　ズブチリシン　　　　　　　　　　　３′″６　
　　　　　２　　ｍＭ　　Ｃｕ５Ｏａ　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１４７＋７　　
　　　　２　　ｍＭ　　Ｃｕ５Ｏａ　　＋１０ｕｇ　　
ズブチリシン　　　　　　　　　　３５＋８　　　１０
　ｍｇ　ＮａｚＳＯｔ＋　２　　ｍＭ　ＣｕＳＯ４１１
５９１０ｍｇ　Ｎａ、ＳＯ，＋　２　　ｍＭ　ＣＬＩＳ
Ｏ４＋１０μｇ　ズブチリシン　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　７１０　　　　　５ｍ
ｇ　　亜ジチオン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　
　　　　　　４３１１　　　　　５　　ｍｇ　　亜ジチ
オン酸ナトリウム　＋１０μｇ　ズブチリシン　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２１
２　　　　　１０　　ｍｇ　　ＮａｚＳＯ＝＋５ｍｇ　
　亜ジチオン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　
　　　　５１１３　　　　　１０　　ｍｇ　　ＮａｚＳ
Ｏ＝＋５ｍｇ１ジチオン酸ナトリウム　＋ １０μｇ　ズブチリシン　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　２１４　　　　　２０　　
ｍＭ　　ＤＴＴ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　６５１５　　　　　２０　　
ｍＭ　　ＤＴＴ　　＋　　１０　　、Ｉｊｇ　　ズブチ
リシン　　　　　　　　　　　２１６　　　　５Ｏａｇ
　過ホウ酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　
　　　４４１７　　　　５Ｏａｇ　過ホウ酸ナトリウム
　＋１０μｇ　ズブチリシン　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２＊ズブチリシンのみで
達成されたものより低い蛋白質含量は、−貫して得られ
なかった。

＋ＣｕＳＯ４を酸化剤として直接、または亜硫酸分解試
薬と組み合わせて添加することは、ローリ−検定を妨害
する。視覚的な証明により検定した影響は、実施例１２
を参照。

表２に示したように、洗浄剤、プロテアーゼおよびジス
ルフィド開裂試薬の組み合わせは、洗浄剤とプロテアー
ゼまたはＤＣＲのいずれかとの併用より、より効果的に
蛋白質を除去する。

１隻±旦 処理条件（水洗、インキュベーション、ゆすぎ。

蛋白質の定量）は実施例９と同じであるが、これらのサ
ンプルは蛋白質含量の初期値が高い。結果は１表３に示
した。

表３ 憔　　　　　添〕し」１友　　　　　　　戎看ｊじＬふ
ｍｌ　　　　　タイド　除去　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　２７０２　　なし　　
　　　　　　　　　　　　　　１７０３　　　　　１　
　ｍｇ　　ＮａｚＳＯ，、＋　　２　　ｍＭ　　Ｃｕ５
Ｏａ　　　　　　　　　　　　２６０４　　　　　１　
　ｍｇ　　ＮａｚＳＯ＝＋　　２　　ｍＭ　　ＣｕＳＯ
４＋１Ｏａｇ　ズブチリシン　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５５　　　　　２５
　　ｍＭ　　ＤＯＴ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　１７０５　　　　　
２５　　ｍＭ　　ＤＯＴ　　＋１０．ＩＪｇ　　ズブチ
リシン　　　　　　　　　　　　　　　　４７　　　　
５Ｏａｇ　過ネウ酸　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　２２５８　　　　　５０、ｃｒｇ　　
過ホウ酸＋１０μｇ　ズブチリシン　　　　　　　　　
　　　　２９　　　　　１　　ｍｇ　　ＮａｚＳＯｔ＋
５０＃ｇ　　過ホウ酸ナトリウム　　　　　　１７０１
０　　　　　　’１　　ｍｇ　　Ｎａ２ＳＯ３＋５０μ
ｇ　過初酸九トリウム　＋１Ｏａｇ　ズブチリシン　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２１１　　　　　タイＦ　なしで過ネウ酸ナトリウム
　５Ｏａｇ　により前処理そして、　１Ｏａｇ　ズブチ
リシン＋タイＦ３ノ【方［ ゆすいだ後、布地をペーパータオル上で乾燥させ写真を
撮ったことを除いて、プロトコールは。

実施例９と同じである。結果は第１図および下に示した
。

堕　　　　　垂皿Ｚ里去 １　　　　　タイＦ　除去 ２　　なし ３　　　　１Ｏａｇ　ズブチリシン ４　　　　２０　　ｍＭ　　ＤＴＴ ５　　　　　２０　　ｍＭ　　ＤＴＴ　　＋１０４ｇ　
　ズブチリシン６　　　１０　ｍｇ　Ｎａ、ＳＯ３＋　
２　ｍＭ　ＣｕＳ０゜７　　　１０　ｍｇ　Ｎａ２ＳＯ
３＋２　ｍＭ　Ｃｕ５Ｏａ　＋１Ｏａｇ　ズブチリシン ８　　　　５Ｏａｇ　過ホウ酸ナシリウム９　　　　５
Ｏａｇ　過ホウ酸ナトリウム　＋１Ｏａｇ　ズブチリシ
ン１０　　　　　５ｍｇ　　過ホウ酸ナトリウム１１　
　　　　５　　Ｂ　　３ｆ４ホウ酸ナトリウム　＋１Ｏ
ａｇ　ズブチリシン第１図は、タイド、プロテアーゼお
よびＤＣＲを含むサンプル５．７．９および１１は、ズ
ブチリシン単独（サンプル３）またはＤＣＲ単独（サン
プル４゜６、８．１０）を含む対照より、顕著によく抽
出されていることを示す。

４、　゛の　　′な蕾ゝ 第１図は２本発明法を使って洗った汚れた布切れの見本
と、洗浄剤だけ、プロテアーゼだけを添加した洗浄剤、
または開裂試薬だけを添加した洗浄剤で洗った同様の見
本との比較を示す。

本出願は、　１９８６年２月１２日付の米国特許出願第
８２８．７７３号の一部継続出願である。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生地から蛋白質含有の汚れを除く方法であって、有
   効量のプロテアーゼと有効量のジスルフィド結合を開裂
   できる試薬（ジスルフィド開裂試薬、ＤＣＲ）とを含む
   洗浄液で、前記生地を処理することを含有する方法。 ２、前記洗浄液がさらに洗浄剤を含む特許請求の範囲第
   １項に記載の方法。 ３、前記洗浄液が２０℃〜７０℃である特許請求の範囲
   第１項に記載の方法。 ４、前記洗浄液が２０℃〜５５℃である特許請求の範囲
   第１項に記載の方法。 ５、前記洗浄液のｐＨが７〜１２である特許請求の範囲
   第１項に記載の方法。 ６、前記プロテアーゼがズブチリシンである特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ７、前記ズブチリシンが、バチルス・アミロリクエファ
   シエンス（￥Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ
   ￥）由来のものである特許請求の範囲第１項に記載の方
   法。 ８、前記ＤＣＲが亜硫酸分解試薬を含有する特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ９、前記亜硫酸分解試薬が亜硫酸ナトリウムである特許
   請求の範囲第８項に記載の方法。 １０、前記ＤＣＲがさらに一般式ＲＳ＾−（ここでＲは
   有機ラジカルである）のチオールアニオンと反応する試
   薬を含む特許請求の範囲第８項に記載の方法。 １１、チオールアニオンと反応する前記試薬が酸化剤で
   ある特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 １２、前記酸化剤が過ホウ酸ナトリウム、亜ジチオン酸
   ナトリウムおよび硫酸銅より選択される特許請求の範囲
   第１１項に記載の方法。 １３、前記ＤＣＲが還元剤である特許請求の範囲第１項
   に記載の方法。 １４、前記還元剤がβ−メルカプトエタノールまたはジ
   チオスレイトールである特許請求の範囲第１３項に記載
   の方法。 １５、前記ＤＣＲが酸化剤である特許請求の範囲第１項
   に記載の方法。 １６、前記酸化剤が過ホウ酸ナトリウムおよび亜ジチオ
   ン酸ナトリウムより成るグループから選択される特許請
   求の範囲第１５項に記載の方法。 １７、前記生地を洗浄剤で処理することをさらに含有す
   る特許請求の範囲第１項に記載の方法。 １８、生地から蛋白質含有の汚れを除く方法であって、
   有効量のプロテアーゼと有効量のジスルフィド結合を開
   裂できる試薬（ジスルフィド開裂試薬、ＤＣＲ）により
   前記生地を処理することを含有する方法。 １９、プロテアーゼによる処理およびＤＣＲによる処理
   を工程中で順次行う特許請求の範囲第１８項に記載の方
   法。 ２０、前記生地を洗浄剤で処理することをさらに含む特
   許請求の範囲第１８項に記載の方法。 ２１、２０℃〜７０℃で行う特許請求の範囲第１８項に
   記載の方法。 ２２、２０℃〜５５℃で行う特許請求の範囲第１８項に
   記載の方法。 ２３、ｐＨ７〜１２で行う特許請求の範囲第１８項に記
   載の方法。 ２４、前記プロテアーゼがズブチリシンである特許請求
   の範囲第１８項に記載の方法。 ２５、前記ズブチリシンがバチルス・アミロリクエファ
   シエンス（￥Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ
   ￥）由来である特許請求の範囲第２４項に記載の方法。 ２６、前記ＤＣＲが亜硫酸分解試薬を含有する特許請求
   の範囲第１８項に記載の方法。 ２７、前記亜硫酸分解試薬が亜硫酸ナトリウムである特
   許請求の範囲第２６項に記載の方法。 ２８、前記ＤＣＲがさらに一般式ＲＳ＾−（Ｒは有機ラ
   ジカル）のチオールアニオンと反応する試薬を含む特許
   請求の範囲第２６項に記載の方法。 ２９、チオールアニオンと反応する前記試薬が酸化剤で
   ある特許請求の範囲第２８項に記載の方法。 ３０、前記酸化剤が、過ホウ酸ナトリウム、亜ジチオン
   酸ナトリウムおよび硫酸銅より選択される特許請求の範
   囲第２９項に記載の方法。 ３１、前記ＤＣＲが還元剤である特許請求の範囲第１８
   項に記載の方法。 ３２、前記還元剤がβ−メルカプトエタノールまたはジ
   チオスレイトールである特許請求の範囲第３１項に記載
   の方法。 ３３、前記ＤＣＲが酸化剤である特許請求の範囲第１８
   項に記載の方法。 ３４、前記酸化剤が過ホウ酸ナトリウムおよび亜ジチオ
   ン酸ナトリウムより成るグループから選択される特許請
   求の範囲第３３項に記載の方法。 ３５、有効量のプロテアーゼと有効量のジスルフィド結
   合を開裂できる物質（ジスルフィド開裂試薬、ＤＣＲ）
   とを洗浄剤処方物に混合して含有する洗浄剤組成物。 ３６、前記プロテアーゼがズブチリシンである特許請求
   の範囲第３５項に記載の組成物。 ３７、前記ズブチリシンがバチルス・アミロリクエファ
   シエンス（￥Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ
   ￥）由来である特許請求の範囲第３６項に記載の組成物
   。 ３８、前記ＤＣＲが亜硫酸分解試薬を含有する特許請求
   の範囲第３５項に記載の組成物。 ３９、前記亜硫酸分解試薬が亜硫酸ナトリウムである特
   許請求の範囲第３８項に記載の組成物。 ４０、前記ＤＣＲがさらに一般式ＲＳ＾−（Ｒは有機ラ
   ジカル）のチオールアニオンと反応する試薬を含む特許
   請求の範囲第３８項に記載の組成物。 ４１、チオールアニオンと反応する前記試薬が酸化剤で
   ある特許請求の範囲第４０項に記載の組成物。 ４２、前記酸化剤が、過ホウ酸ナトリウム、亜ジチオン
   酸ナトリウムおよび硫酸銅より選択される特許請求の範
   囲第４１項に記載の組成物。 ４３、前記ＤＣＲが還元剤である特許請求の範囲第４２
   項に記載の組成物。 ４４、前記還元剤がβ−メルカプトエタノールまたはジ
   チオスレイトールである特許請求の範囲第４３項に記載
   の組成物。 ４５、前記ＤＣＲが酸化剤である特許請求の範囲第３５
   項に記載の組成物。 ４６、前記酸化剤が過ホウ酸ナトリウムおよび亜ジチオ
   ン酸ナトリウムより成るグループから選択される特許請
   求の範囲第４５項に記載の組成物。 ４７、前記洗浄剤が前記組成物の６０〜９０％、前記プ
   ロテアーゼが前記組成物の０．０１〜３％、そして前記
   ジスルフィド開裂試薬が前記組成物の１０〜４０％であ
   る特許請求の範囲第３５項に記載の組成物。