JPS62257381A - 細胞内寄生生物の貯蔵装置および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、その後の病理学的検査または診断にそなえて
細胞内寄生生物を貯蔵または輸送する装置または方法に
関する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ヒトも含めて動物から細胞内寄生生物を含有する可能性
のある試料を採取して、その後その試料を検査や診断に
用いるのは一般的な方法である。

検査または診断設備を使用できない場所では、このよう
な試料を必要に応じて採取して、その後診断を行える場
所まで輸送するのが望ましい。また、たとえば細胞内寄
生生物が存在する結果発症を繰り返す患者の場合、特定
の病気の兆候が現れたらできるだけ早くこのような試料
を採取し、その後も頻繁に試料を採取せねばならぬこと
が多い。どのような頻度でどのくらいの期間、そしてど
の程度患者が感染しているのかを決定するために日常的
なサンプリングが望ましい疫学検査でも同じことが要求
される。このようなサンプリングを行うには、通常病院
や診療所に毎日通院せねばならず、このような通院は困
難なので、必要な試料が得られないことになる。

このような試料を貯蔵および輸送する公知の技術では、
多くの細胞内寄生生物の予想寿命は３ないし４日以内で
あり、３〜４時間しかないこともある。

本発明の目的は、上述の難題を克服し、細胞内寄生生物
を常温で４週間以上生存させておいてこれらの寄生生物
を含有する試料を遠隔地に容易に輸送することができる
装置および方法を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、適当な培地中で表面に付着した細胞は少なく
とも３週間は感染に感受性のままでおり、感染後適当な
温度で処理すると細胞内寄生生物を高い力価で増殖させ
ることができるままでいるという知見に基づいている。

本発明はさらに、こうして増殖された感染性寄生生物が
極めて安定で、通常の温度ではさらに少なくとも４週間
生存しているという知見に基づいている。

本発明は、開口端を有する容器と、この開口端を閉じる
密封可能なクロージャを備え、容器の上記開ロ端とは逆
側の内側表面に生きた細胞が付着し、この容器に抗生物
質および／または防菌剤を含有する液体を実質的に充填
した細胞内寄生生物用貯蔵装置を提供する。

特定の実施態様では、上記開口端と上記表面との間にフ
ィルタ装置が設けられ、このフィルタ装置は、上記細胞
内寄生生物より実質的に大きな粒子がフィルタ装置を通
過するのを防止する寸法の孔を有する。

本発明の別の観点では、抗生物質含有緩衝培地中で表面
に付着した細胞層を形成し、そして上記培地に細胞内寄
生生物を含有する物質を加える工程よりなる貯蔵または
輸送用の細胞内寄生生物の調製方法を提供する。

〔実施例〕

本発明の実施態様を図面に言及しつつ説明する。

この実施態様は単に例として掲げたもので本発明はこれ
に限定されない。

図示するように、本装置は２つのほぼ円錐台状の部分１
１および１２をその細い方の端部で接合して画定される
容器１０からなる。円錐台部分１■の太い方の端部は開
口しており、円錐台部分１２の太い方の端部は閉鎖して
おり内側表面１３を画定する底部となっている。容器に
は開口端に隣接して円周方向の突起Ｉ４が設けられ、こ
の突起１４は容器１０の密封クロージャとなる弾性変形
可能なキャンプ１５と係合することができる。容器１０
の全容量は約５ｍｆｆである。

容器１０は適当な弾性プラスチック材料、たとえばポリ
エチレンから成形するのが好ましい。容器１０は、開口
端と表面１３との間にフィルタ部材１６を封止装着する
手段を備え、フィルタ部材１６は開口端から挿入する。

フィルタ部材１６は市販の商品で、開口端から容器１０
に入り込む菌類または細菌の通過を制限または防止する
ような直径の貫通孔を有する。特定の実施態様では、こ
れらの孔の直径は５００ｎｍで、ウィルスの通過のみが
許容される。フィルタ部材１６は内側取付部１７上に配
置する。３つの等角度で配置された凹所１８が取付部１
７から半径方向に延在し、一体成形された弾性タブ１９
がフィルタ部材】６と係合して、フィルタ部材１６を取
付部１７に封止係合する。クブ１９は凹所１８内に押し
込むことができるので、フィルタ部材１６を適当な位置
に押し入れることができる。

容器１０を滅菌し、抗生物質および／または防菌剤を含
有する、適当な緩衝培地２０、たとえばイーグル培地を
充填する。実施例では、緩衝培地にペニシリン、ストレ
プトマイシンおよびアンフェテレシンを含有させる。１
０５個の細胞を培地２０に導入し、その後２４時間にわ
たって培地２０内を下向きに通過させ、表面１３に付着
した単層細胞２１を形成させる。使用細胞は、英国ノ＼
ムステソド（Ｈａｍｐｓ　Ｌｅａｄ）のナショナル・イ
ンステイチュート・フォー・バイオロジカル・スタンダ
ード・アンド・コントロール（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ
５ｔｉｔｕｔｅｆｏｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　５ｔａ
ｎｄａｒｄｓ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌｓ）から入手可
能な公知の標準株化細胞の一つで、ハムスター新生仔腎
細胞またはＭＲＣ５ヒト胎児肺細胞とすることができる
。単層細胞２１の形成後、フィルタ部材１６を適当な位
置に配置する。

試験の結果、単純ヘルペスウィルスをその後培地２０に
導入し、キャンプ１５を元に戻し、そして容器１０とそ
の内容物を８〜１２時間３２℃〜３７℃の温度に置くと
、単層細胞はウィルスを高い力価で増殖させることがわ
かった。試験の結果、上述の方法を使用すると、単層細
胞２１は単層細胞２１の形成後室温で少なくとも３週間
は単純ヘルペスウィルスによる感染に感受性のままであ
ることもわかった。試験の結果、単層細胞２１で増殖し
たウィルスが極めて安定で、室温で少なくとも４週間生
存することもわかった。上述の単層細胞２１の感染後、
装置を３℃〜７℃の温度に保つと、ウィルスは非常に長
い期間にわたって生存し、さきに説明した４週間の生存
期間は装置を通常の周囲温度に戻したときから始まる。

なお、装置を単純ヘルペスウィルスに使用する例を記載
したが、他の細胞内寄生生物、たとえば水痘−帯状ヘル
ペスウィルス、インフルエンザ、サイトメガロウィルス
、腸内ウィルスおよびクラミジア、そしておそらくしト
ロウィルス、たとえばエイズ因子も、本発明で開示した
方法および装置によって貯蔵できる。

また細胞層２１の感染後の培養期間は、貯蔵する寄生生
物に応じて、たとえば水痘−帯状ヘルペスウィルスの３
日以内のように、適当に調整できる。

別の実施態様では、フィルタ１６を用いず、容器部分１
１および１２の細い方の端部の間の開口を十分細くして
、上端から挿入した綿棒が細胞層２１に達して細胞層２
１を乱すのを防止する。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の貯蔵装置を現尺の約４倍で示す断面
図、 第２図は、第１図の２−２線方向に見た断面図である。 １０・・・容器、１１・・・円錐台部分、１３・・・内
側表面、１５・・・キャップ、１６・・・フィルタ、２
０・・・培地、２１・・・単層細胞。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）開口端を有する容器と、この開口端を閉じる密封
   可能なクロージャを備え、容器の上記開口端とは逆側の
   内側表面に生きた細胞が付着した細胞内寄生生物の貯蔵
   装置。
2. （２）上記容器に、抗生物質および／または防菌剤を含
   有する液体が実質的に充填されている特許請求の範囲第
   １項記載の装置。
3. （３）上記容器が、上記開口端と上記内側表面との間に
   フィルタ部材を備え、このフィルタ部材がこの装置で扱
   おうとする細胞内寄生生物より実質的に大きな粒子の通
   過を防止する寸法の孔を有する特許請求の範囲第１項記
   載の装置。
4. （４）上記容器が２つのほぼ円錐台状の部分を、その細
   い方の端部で接合してなる特許請求の範囲第３項記載の
   装置。
5. （５）上記フィルタ部材が、上記円錐台部分の細い方の
   端部の接合部に隣接して配置された特許請求の範囲第４
   項記載の装置。
6. （６）抗生物質含有緩衝培地を実質的に充填した容器の
   表面に付着した生きた細胞の層を形成し、上記培地に細
   胞内寄生生物を含有する物質を加え、そして感染した細
   胞を培養する工程よりなる細胞内寄生生物の貯蔵方法。
7. （７）上記細胞を上記培地に導入して上記表面に付着さ
   せる特許請求の範囲第６項記載の方法。
8. （８）上記物質の添加後、上記細胞を３２℃〜３７℃の
   温度に置く特許請求の範囲第６項記載の方法。
9. （９）上記細胞を上記温度に８〜１２時装置く特許請求
   の範囲第８項記載の方法。
10. （１０）上記寄生生物による感染後、上記細胞を３℃〜
    ７℃に保つ特許請求の範囲第６項記載の方法。