JPS62232568A

JPS62232568A - 免疫グロブリンａプロテア−ゼの測定および淋病を迅速に診断する方法、並びにそれに使用する試薬、および検出キツト

Info

Publication number: JPS62232568A
Application number: JP6504686A
Authority: JP
Inventors: キテイー　エイ　マーレー
Original assignee: MABUGON TESUTO CO
Current assignee: MABUGON TESUTO CO
Priority date: 1986-03-25
Filing date: 1986-03-25
Publication date: 1987-10-13

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔発明の背景〕淋病は、細菌ナイセリアゴノリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）に起因する性交によって媒介され
る病気である。

この病気は、古代から人類を苦しめてきており、ペニシ
リンやそれに関連した「驚異的に効く薬」が２淋病の蔓
延を抑制するのに役立ってはいるが、まだ流行病として
残っている。米国だけでも１年間３００万の淋病の症例
が報告されており１世界中では、６０００万を超える症
例が毎年報告されている。

淋病の猛威的蔓延の主な理由は、初期段階で病原菌を迅
速に検出する方法がないためである。

はっきりした化膿性分泌の症状が容易に見てとれるよう
になるまでの数日間、ナイセリアゴノリアは生殖器膜上
で繁殖するらしく、この期間に、非保菌者が接触をもつ
と、知らず知らずのうちに。

病気が媒介される結果になる。

さらに、この病気の多くの保菌者、特に女性は漸近的で
、病気を知らないうちに蔓延させている。

現在行なわれている淋病の診断法では、尿生殖器膜から
のダラム染色抽出物の顕微鎖による予備的観察を、熟練
した臨床医が行ない、続いて、ナイセリアゴノリアによ
る選択的培地で、抽出物を培養している。

最後の化学的試験は、研究所で行なわれ、最終的に、そ
れから治療をうけることになる患者に報告される。

この診断手順は、訓練を受けた職員や高性能な器具を必
要とする時間のかかるものである。

〔発明の要約〕

本発明の目的は、簡単で迅速な淋病の診断法を提供する
ことにある。

本発明の主な目的は、医師が自分の診察室で、病気の治
療と共に使用できる淋病の診断法を提供することにある
。

本発明の重要な目的は、可能性のある病原菌の多数の試
料をスクリーニングするのに使用できる淋病の診断法を
提供することにある。

本発明のその他の目的は、以下の記載から明瞭になろう
。

本発明は、分子生物学および遺伝子工学の分野の発展に
よって最近利用できるようになった診断に役立つ試薬と
技術を包括するものである。

より詳細には１本発明の診断技術は、免疫グロブリンＡ
プロテアーゼ（ＩｇＡＰ）　、ナイセリアゴノリアがほ
ぼ独占的に製造する酵素の検出法から成る。

この診断法は、ＩｇＡＰの抗体、好ましくはモノクロン
抗体を利用する。このモノクロン抗体は、酵素連鎖免疫
検定法（［ＬＩＺ＾）、２配位子結合（サンドイツチ法
）、放射状免疫拡散法、放射性免疫検定法（ＲＩＡ）お
よび凝集を含む免疫学の既知技術を使って、尿生殖器膜
試料中のＩｇＡＰを検出することができる。

抗体は、競合酵素が存在する生物試料から、ＩｇＡＰを
単離、精製するのにも使用でき、その後、適切に標識し
た基質と反応させることにより、ＩｇＡＰの分析を行な
うことができる。

本発明の診断法のある実施態様におけるＩｇＡＰに対す
る抗体は、不活性支持体に固定されるか、ゲルに包埋さ
れてもよく、あるいは、抗体に色、蛍光、または放射能
を与える分子に結合させてもよし）、１本発明のある実施態様では、基質、好ましくは免疫グロ
ブリンＡ、亜綱１、あるいは発色団剤か、放射性剤に結
合した合成ポリペプチドを使用することができる。

抗体によって単離されたＩｇＡＰと基質との反応は、基
質の発色あるいは放射能の損失、または生成物の発色あ
るいは放射能の生成で測定される。また、基質を不活性
表面上の発色あるいは放射能の別個の帯としてＩｌｍす
ることができる。

本発明の方法で分析できる生物試料は、女性の場合は、
スワブ、タンポン、膣洗浄によって、男性の場合は、尿
、ペナル（ｐｅｎａｌ）、直腸の塗抹標本によって得る
ことができる。

これらからの、あるいはその他の生物源からのナイセリ
アゴノリアの培養試料も使用することができる。試料は
、直接分析するか、あるいは溶解または濃縮してもよい
。

本発明の診断試薬および方法は、医師が診察室で、患者
の診察中に使用するためのキットで具現化されるか、ま
たは、軍隊徴兵センター、大学構内、あるいは性病専門
病院など中央の受入れセンターで、多数の試料分析を行
なうために採用して自動化してもよい。

本発明の好適な実施態様は、個人による淋病自己診断用
のキットである。

この実施態様のキットは、試料収集装置、ＩｇＡＰの抗
体、および試料中の抗体とＩｇＡＰどの反応を検出する
ための手段とから成る。キットには、適切な緩衝液とイ
オン性塩が含まれていてもよい。

本発明の方法および手段を、髄膜炎、ＩｇＡＰを同様に
生成するナイセリアメニンジティディスに起因する病気
の予備診断にも採用することができる。

分析に適した生物試料には、尿生殖器膜の抽出物の他、
を髄液や関節滑液がある。

〔発明の詳細な説明〕

ＩｇＡＰの免疫検定から成る、酵素ＩｇＡＰを同化する
細菌、ナイセリアゴノリア、ナイセリアメニンジティデ
ィス、ヘモフィラスインフルエンザ、ストレプトコッカ
スニューモニア、およびそのイ也の細菌の検出方法およ
び手段を以下に述べる。

ＩｇＡＰの免疫化学検定では、ＩｇＡＰの抗血清全体。

グロブリン断片、あるいは、　ＩｇＡＰ−抗体複合体の
生成を導＜ｐＨ、イオン強度、温度および濃度の条件下
でのモノクロン抗体などのＩｇＡＰに対して、特異的な
精製抗体が使用される。

ＩｇＡＰ抗血清は、うさぎや羊などの寄生動物内で製造
できる。抗体を含む血清部分は、標準的技術で単離でき
る。

この抗血清を、以下に述べる本発明のいくつかの実施態
様で使用してもよく、あるいは血清を電気泳動、高速遠
心分離等でさらに精製して、より敏感で特異的な抗体を
作ってもよい。

最後に、多量の高度に特異的なモノクロン抗体は、当業
者が周知の方法を使って、交雑骨髄腫技術によって製造
することができる。

本発明のある実施態様では、セルロース、アガロース、
セファデックス、またはガラスピーズ、あるいはその後
の反応を妨げない金属、プラスチック、セラミックなど
その他同様の不活性表面に固定した抗体を使用する。抗
体の固定には、吸着、［３ｒ−ＣＮ活性化、あるいは当
業界で知られているその他の技術を使用することができ
る。

本発明のその他の実施態様は、発色団（高度に着色した
）分子、酵素色素（試薬の添加で発色する酵素）分子、
蛍光色素（蛍光性）分子、あるいは発光（冷光を発する
）分子に結合したＩｇＡＰ抗体を使用する。

使用できる発色団分子は２，３−ジニトロベンゼン（Ｄ
Ｎ１３）塩、ジニトロフェノール（ＤＮＰ）　、メチル
オレンジ、およびブチルオレンジである。その他の適し
た発色団剤は、当業界で周知のものである。

抗体と結合できる酵素色素分子は、適当な試薬で発色す
る酵素である。その例としては、ニトロフェニルフォス
フェート（ＮＰＰ）で発色するアルカリフォスフェート
（ＡＬＰ）　、グルコースで発色するグルコースオキシ
ダーゼ、およびＤ−ガラクトピラノシドがある。これら
のもの、およびその他の例は、当業界で周知である。

蛍光剤の例としては、２．４−ジニトロフルオロベンゼ
ンおよび「ピプジル」誘導体がある。発光分子は、ブラ
ンチニらの方法［Ｂｉｏｃｈａｍ、ｌ３ｉｏｐｈｙｓ、
Ｒａｓ。

Ｃｏｍｌ５ｕｎ、、　９７．３３４（１９８０））で抗
体に結合させることができる。「発色団」という用語は
、以下、「酵素色素」、「蛍光色素」および「発色」分
子も含むものとする。

ある実施態様における本発明は、さらに、ＩｇＡＰに対
する基質、すなわちＩｇＡよ、あるいは、必須プロリン
−スレオニン結合を有する適切なポリペプチドから成る
。これらの基質は、同様に発色団分子に結合し、または
不活性表面に固定することができる。

基質Ｉｇ＾１は、初乳、好ましくは人ｒ１■の発乳、な
どの生物源から単離した後、モノクロン法で調製できる
。ＩｇＡｌは、モノクロン生成の間に、酵素連鎖免疫検
定法、放射線免疫検定法、沈１１ｉ！素反応、または必
要ならば、電気泳動を使った放射状免疫拡散法といった
技術を利用して、　ＩｇＡＰによって検定することがで
きる。

本発明のある実施態様では、放射性元素でｍ識したＩｇ
ＡＰも利用している。クロマリン−Ｔ手順による複合１
１２Ｓは一般例であるが、当業界で知られているその他
の方法も使用できる。

Ａ、２座配位の　位子　合一パサンドイッチ″法。

ＩｇＡＰは、２つ以上の抗原部位を持った大きな分子、
すなわち、好ましくは紙や同様の吸水性マット等の不活
性表面に固定したＩｇＡＰ抗体をＩｇＡｌ’が含まれて
いる疑いのある試料に接触させる以下に述べるＩｇＡＰ
の免疫検定に基づく２座配位である。

膣洗浄液や尿などの水性試料の場合、溶液を緩衝液で処
理し、イオン性塩を、　ＩｇＡＰ−抗体相互作用の最適
濃度で存在させてもよい。例えば、ｐ　Ｈ７、５〜９．
０．イオン強度約ｏ、ｏｉｏ〜０．５のＴＲＩＳまたは
ホウ酸塩緩衝リン酸塩が、緩衝液およびイオン性塩に適
している。

この「サンドインチ法」は、タンポン試料の表面に直接
使用することもできる。この場合、緩衝液と塩は、抗体
と共に不活性表面に包含されてもよい。

次に、抗体または抗体−抗体ＩｇＡＰが固定されている
不活性表面を、発色団分子と結合したＩｇＡＰ抗体に接
触させる。

抗体は、Ｐ１１約７．５−９．０および約０．０１Ｍ〜
約０．ＩＭ塩化ナトリウムに等しいイオン濃度の緩衝さ
れた溶液におくのが好ましい。過度の着色抗体を除くた
めに、水あるいはトウィーン２０などの適当な表面活性
剤で注意深くすすいだ後、不活性表面を１色、蛍光、あ
るいは発光について、直接または発色材を添加して、詳
しく調べる。

不活性表面の色は、溶液中の固定化ＩｇＡＰ−抗体Ｉｇ
ＡＰ複合体と複合抗体との相互作用を示すものである１
色の比較には、対照を使用する。

この「サンドインチ法」は、放射性元素で標識した抗体
を使って、溶液中の放射能が消耗されているか、あるい
は放射能の固体支持体上に摂取されているかを観察する
ことによって、臨床的に使用することができる。この実
施態様は、高感度で迅速であり、多数の試料に適してい
る。

Ｂ−［イ　検−１法−ＥＬＩＺＡ発色剤と共に色を呈する酵素に結合したＩｇＡＰと、Ｉ
　ｇ　Ａ　ｌ）およびＩｇＡＰ抗体との反応に適した緩
衝剤、およびイオン性塩から成る溶液を、好ましくは紙
テープなどの不活性表面上、またはガラスピーズ上に固
定した抗体と接触させて、反応させる。

酵素色素複合ＩｇＡＰの量は、固定抗体上の反応部位の
約５０％を飽和するのに十分な量である。

抗体−ＩｇＡＰ−酵素複合体の不活性表面を、ナイセリ
アゴノリアあるいはＩＫＡＰを同化するその他の細菌を
含んでいる疑いのある緩衝試料と接触させるが、この試
料に含まれているＩｇＡＰの量はわからない。

発色剤を添加した後のテープ上に固定された抗体−Ｉｇ
ＡＰ−酵素複合体の色を、ＩｇＡＰを含んだ試料で処理
しなかった対照テープと比較して観察する。試料で処理
した不活性表面上の色が薄くなれば、判っていない試料
中に、ＩｇＡＰが存在しているということである。

この方法は、試料と固定酵素を、好ましくは遠心分離に
かけられる管内で接触させ、光度測定で発色スペクトル
を観格することにより、′＃ｉ床的に使用することがで
きる。この実施態様は。

非常に感度がよくかつ迅速である。

Ｃ０放射状免疫拡散法−沈降度単一特異的抗体、好適には、モノクロンＩｇＡＰ抗体を
、寒天やアガロースなどの軟化ゼラチン状培地に緩衝液
や塩と共に懸濁させ、抗原−抗体相互作用の最適化のた
め、ｐＨを約６．０〜９．０゜イオン強度を約０．ＯＬ
Ｍ〜０．５にに維持する。米国特許第４　、２５９　、
２０７号明細書における懸濁培地は、適した例である。

混合液を、試験プレート上に広げて固めるか、好適には
、オフトロニープレートなどの円板型容器に注ぎ入れる
。少量の試料を、凝固したゲルの上、好適には中央の窪
みにおき、そのプレートまたは円板におおいをし、数時
間放置するのが好ましい。この間に、試料が周囲の部分
に拡散する。

抗ＪＡＩｆＡＰが存在する場合には、それが埋め込まれ
た抗体と反応して、試料を加えた部分の周囲に放射状の
不透明部分を生じる。比較のために対照を使用するのが
よい。

所望ならば、温度、時間、試料の大きさを制限し、得ら
れた放射状部分の大きさを、既知温度のものと比較する
ことにより、試料中のＩｇＡＰの量を測定してもよい。

その他の実施態様では、未精製の抗血清、あるいはその
部分的に精製した抗体を、同様に寒天に埋め込んでもよ
い。増感細胞の溶解も、観察される。

Ｄ、放ｎ逸ｆ１灸定〜ＩｇＡＰ抗体を、分離カラム中のガラスピーズ等の不活
性表面に固定する。ＩｇＡＰの一部を放射性元素、好ま
しくはＩＬ″ｓに結合させ、結合部位を飽和させるのに
十分な量の固定化抗体と反応させる。

固定化抗体−酵素複合体を、　ＩｇＡＰを含んでいる疑
いのある試料と接触させるが、この試料は、ＩｇＡＰ−
抗体複合体の最適反応条件のためにｐ１１６〜９に緩衝
され１合計約０．０５〜０．５Ｍのイオン性塩を含むも
のとする。ＩｇＡＰを抗体から溶離し、溶離液の放射能
を測定する。

対照と比較して、活性が失われていれば、試料中にＩｇ
ＡＩ’があることになる。

Ｅ、赤血球凝集ＩｇＡＰは、増感剤として使用されるＩｇＡＰ抗血清を
使って、標準的な赤血球凝集法で測定することができる
。

Ｆ、基質とのタンパク−■−１−に基づく」刃部ね１定ＩｇＡＰは、基質の加水分解の触媒作用をして小さな断
片にするタンパク質加水分解酵素である。

従って、１．＾、は加水分解して小断片ＦａｂとＦｃに
なる。

ＩｇＡ、は、患者の初乳や血漿から、多発性骨髄腫また
はワルデンストロームズマクログロプリン血症を使って
、当業界で知られた方法で単離することができる【メス
ティツキ−等、Ｊ、Ｌａｂ。

Ｃ１１ｎ、Ｍｅｄ、、８９，９１９（１９７７）］、　
ＩｇＡ１は、ＤＥＡＥセルロース上で精製するか、ある
いはＦａｂおよびＦｅ断片に特異的な固定化抗体のカラ
ムを通すことにより、あるいは、電気泳動やその他当業
界で知られた方法により、その断片の除去処理を行なう
ことができろ。

当業者に周知の交雑骨髄腫技術の方法を使ったモノクロ
ン抗体法によって、高度に精製された特異形のＩｇＡ、
を得ることができる。

丁ｇＡ、は、　ＩｇＡＰの天然基質として唯−知られて
いるものであるが、酵素受容体部位である特徴的プロピ
ルースレオリル連鎖を持ったポリペプチドを、測定の目
的のために合成してもよい。

以下、「基質」という言葉は、ＩｇＡ、およびＩｇＡＰ
の基質として役立ち、そのような合成ポリペプチドの両
方を言うものとする。

Ｉ　ｇ　Ａ　Ｐの存在は、特徴的生成物の生成や基質自
体の損失で証拠づけられるような基質の加水分解で証明
できる。

タンパク質加水分解は、緩衝液、好ましくは０．５Ｍリ
ン酸塩緩衝液ｐＨ７，５から成る溶液（以下、「反応液
」という）中、０．８５％塩化ナトリウム（ＰＢＳ）と
共に室温で３時間以上をかけて最も好適に進行する。

ＴＲｌ５（ヒドロキシメチルアミノメタン）、０．０５
Ｍ。

ｐＨ８，１も適した緩衝液である。反応液中には。

重金属を存在させてもよい。

測定の前に、試料は、ＩｇＡＰを濃縮するための処理を
行ない、かつガラスピーズや紙テープ等の不活性表面に
固定したＩｇＡＰ抗体に、溶液を。

Ｐ１１８〜１０の緩衝液で処理した溶液中で接触させる
ことにより、妨害プロテアーゼからＩｇＡＰを分離する
処理を施してもよい。

ＩｇＡＰ−抗体複合体が固定されている不活性表面をす
すいでＩｇＡＰ基質に接触させる。または。

基質で処理する前に、ＩｇＡＰを、低ｐＨ１例えばｐＨ
約６．５の溶液でＩｇＡＰ−抗体複合体から溶離しても
よい。

以下の方法は、ＩｇＡＰのタンパク質加水分解反応に基
づく測定である。

１、色素源基質の比色検定好ましいＩｇＡＰ測定は、　ＩｇＡＰと基質との反応の
比色検出から成る。前述の方法で、基質を色素源分子に
結合させる。より小さな分裂生成物の色は、基質とＩｇ
ＡＰとの反応を示すものである。

この測定では、色転移をつきとめるために生成物を、反
応液から分離しなければならない。

この分離は、生成物と反応物との大きさの相違に基づい
て行なわれる。例えば、ＩｇＡｌは、分子量が約１２０
，０００であるのに対し、小分裂断片ＦａｂおよびＦｃ
は、３０，０００ダルトンの範囲である。

本発明の好ましい実施態様では、約５■／ｍｌの濃度の
複合基質とＩｇＡＰを含んでいる疑いのある試料を１反
応液中で３時間以上培養する。

この培養の間、複合基質と試料は、より大きな基質は通
過できないが、より小さな反応生成物が出て行くのに十
分な孔の大きさをもった透析管の一部に封じ込めておく
。

その後、透析管を、同じ反応物溶液の別の部分に吊す。

吊している反応液が発色し透析管内の色が消えるのは、
　ＩｇＡＰと基質が反応したことを示している。

もう一つの実施態様では、分子量によって生成物を反応
液から分離するために制限した直径のビーズカラムを利
用する。

臨床的使用に適した実施態様では、生成物と反応物の大
きさと、荷重分布の相違に基づいた等重点電気泳動やゾ
ーン電気泳動などの電気泳動分離技術を使って、生成物
を反応物から分離することができる。

電気泳動で分離された生成物は、標準に比較して、その
特質的な位置によって検出するか、あるいは、色によっ
て、または免疫化学的に同定することができる。荷重表
面の樹脂ビーズを使っても、生成物と反応物を分離する
ことができる。

もう１つの好適な実施態様は、紙などの不活性表面や同
様の吸水性マットの限定部分に固定した発色団ＩｇＡ１
から成る。この表面を、疑わしきＩｇＡＰを含む反応液
と接触させ、一定の時間の後、紙の色移動を調べる。

最初の位置の主な帯から色帯が離れていれば、複合基質
が、ＩｇＡＰでタンパク質加水分解されたということに
なる。適した比較対照は、ＩｇＡＰ耐性のある固定化発
色源ＩｇＡ２から成る。

反応物と生成物の分離を強化するために、電気場を適用
することができる。テープ上の生成物の移動を定めるた
めに、発色試薬を使用してもよい。または、生成物に特
異的な試薬を、それらが反応する最初の部位から上方に
配して１反応生成物を同定してもよい。

この実施態様では、例えば、適切な緩衝液とイオン性塩
を含むプロリンオキシダーゼを、１′−ピロリン−５−
カルボン酸（ＰＣＡ’）　［デンジンジャーおよびプリ
ル、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１０３　。

１４５（１９７０）］、プロリンオキシダーゼとプロリ
ンとの反応生成物の存在で黄色に変わるＯ−アミノベン
ズアルデヒド等の適切な発色団試薬と共に上方に堆積さ
せてもよい。

こうして、上方に位置する紙上の色は、ｒｇＡＰが製造
した断片の末端上のプロリンを示している。対照は、色
比較のため、　ＩｇＡＰを含まない試料で行なうことが
できる。

臨床的使用のためのその他の実施態様では、プロリンオ
キシダーゼと末端プロリンとの反応は、０−アミノベン
ズアルデヒドの添加、または溶液中の関連ＮＡＤＨ結合
酵素システムの監視により、分光光度計で測定すること
ができる。

もう１つの実施態様では、反応テープを、反応生成物に
特異的な発色源抗体で処理することができる。

２、基質または生成物の免疫検定分析する試料のＩｇＡＰが製造した反応液における基質
の濃度減少や生成物の濃度増加は、標準的免疫化学技術
を使って調べることができる。

本発明の好適な実施態様は、赤血球凝集による基質の測
定である。ある量のＩｇＡＰ基質を、好ましくは溶解さ
せた分析試料と反応液中で接触させる。

一定時間、即ち約３時間後、測定量の溶液を、ｐＨ１ｌ
ｌ−１０に＊衝した牛の血清アルブミン中の基質抗血清
で被膜したラテックスビーズに加える。対照として試料
を含まない同量の溶液を、被膜したラテックスビーズの
別の部分に添加する。試料と対照のｉｇ集速度と量の相
違は、ＩｇＡＰとのタンパク奴加水分解による基質の損
失を示す。

分光光度で反応をＷＩ４ＦＮすることもできる。

この反応の感度は、ゲルマトリックスに抗体を混合し、
酵素−抗体複合体の沈澱を、単一線あるいは放射部分と
して観察することにより、改善することができる。抗体
の濃度を制限すれば、おおよその量を決定することがで
きる。

基質とＩｇＡＰとのタンパク質加水分解反応の生成物測
定では１反応生成物に対する抗体を使って、ラテックス
ビーズを増感させてもよ（１゜実際のテストは、試料を含まない対照と比較した沈澱の
凝集である。ラテックスビーズ、あるいはＩｇＡｌを基
質として使用した場合には。

ト”ａｂおよびＦｃの抗体を被膜するために、末端プロ
リンまたはスレオニンに特異的な抗体を使用してもよい
。

本発明のもう１つの実施態様では、基質を不活性表面に
固定する。基質を固定した表面を反応液中で試料と接触
させ、一定時間、即ち約３時間後、表面を取り出してす
すぎ洗いし、基質抗体を含む溶液に接触させるが、該基
質は着色分子で標識されているものとする。

すすぎ洗いの後４表面の色を調べる６色は、着色抗体と
固定基質との反応を示すものである。呈色しない場合は
、ＩｇＡＰとの反応で基質が失われたことを意味する。

色比較のため対照を使用する。

または、固定基質を反応液と接触させた後、不活性表面
に残っている断片に、特異的な色複合抗体に接触させる
。この方法において、不活性表面への着色は、ＩｇＡＰ
と基質との反応を示すものである。

同様に、反応液に接触させた後の固定化基質を、加水分
解された基質の末端プロリン。

あるいはスレオニン末端に、特異的な基質に接触させて
もよい。基質は、この末端集団に特異的な発色団抗体で
もよく、あるいは、末端プロリンの存在下で色変するプ
ロリナーゼや発色団でもよい。プロリナーゼと発色団は
、溶液中にあるか、または、別の不活性表面に固定され
ていてもよい。

前述したような放射状免疫拡散法、ＲＩＡ。

あるいはＥＬＩＺＡを含めたその他の免疫検定を。

基質と反応生成物の損失の検出に使用してもよい。

若色試薬を使ったＩｇＡＰ測定のための前述の方法は、
熟練した職員や高性能機器が使えない場合での使用のた
めに、特に提供されたものであることは容易に理解でき
る。

しかし、これらの方法は、放射性元素を発色団複合分子
に置換することによって、多数の試料を測定しなければ
ならない臨床環境での使用に適用することができる。

従って、シンチレーション計数管、ガイガー計数管、あ
るいは放射線の測定ができるその他の機器で測定するよ
うな基質から生成物への放射能移動といった反応の測定
を続いて行なうことができる。

なお、「色」という言葉は、電磁スペクトルの狭い可視
範囲に限るものと解釈すべきではなく、分光光度計や吸
収・放射比色計など標準的な分光写真機器で測定できる
ような、紫外線および赤外線範囲の波長も含むものであ
る。

本発明の方法は、生物試料自体に適用できることを意図
している。

この方法の感度および特異性は、米国特許第４，２２９
，５３０号明細書に教示されているように、試験に付す
前に、好ましくはサイヤ一マルチン、チョコレート−糖
、ＮＹＣ培地またはトランスグロ培地等のナイセリアゴ
ノリアに選択的な培地で、Ｆｅ−デキストラン錯体（イ
ンフェロン）等の鉄源と共に流体を２４時間培養するこ
とによって、改善することができる。

臨床環境での試料は、女性の場合、子宮頚に向けた１Ｏ
ｃｃのｅＢＳを収集して得られる膣洗浄液、または男性
の場合は、最初の数ａの尿についてのものである。尿は
遠心分離され、好ましくは型決定後、その沈澱物を分析
に使用する。膣、尿道または直腸のスワブも使用できる
。

また、ＩｇＡＰを細胞外環境へ放出するために。

等張液、サウンド・リゾチームなどの溶解剤で生物試料
を前処理することにより、感度を改良することができる
。

例えば、米国特許第４，１６６．７６５号明細書では、
ＩｇＡＰを同化する細菌を含む生物試料に適した溶解手
順が開示されている。その後の酵素活動を妨げないもの
であれば、どんな溶解剤も使用できる。

３、キットの形に具現化した測定本発明の診断方法および手段は、個人が人目につかない
自宅で淋病の自己診断を行なうために使用するキットの
形に具現化できる。

キットは、試料収集手段、ＩｇＡＰの抗体、および試料
と抗体との反応検出手段がら成る。また、キットは、Ｉ
ｇＡＰの基質と適した反応液のための試薬から成っても
よい。

男性の場合、試料収集装置は、放出する尿の最初の数ミ
リリットルのみを入れるために印をつけた容器である。

これら最初の数ミリリットルは、最も高濃度のＩｇＡＰ
を含むナイセリアゴノリアが起因する化膿分泌物を尿道
から洗い出す。

早朝の試料が好ましい。

女性の場合、試料収集は、子宮頚に近い膣内に、好まし
くはナイセリアゴノリアとの接触の疑いがあった直後の
数時間入れておいたタンポンであり、その後、それを取
り出して、受容容器に入れ、そこでＩｇＡＰの抗体と直
接接触させるか、または栓のついた管内で溶解剤と反応
液で抽出する。

ＩｇＡＰ抗体は、固定し、または発色団と結合させるこ
とができる。　ＩｇＡＰは、酵素直鎖免疫検定で使用す
るために抗体とキレートを作ってもよＬＸ。

Ｉ　Ｆｓ　Ａ　Ｐのタンパク質加水分解作用を使う実施
態様では、任意に発色団分子と結合したＩｇＡｌを含む
のが好ましい。基質は、紙などの不活性表面、あるいは
同様の吸水性マット、またはセファロース、ガラス等の
不活性ビーズ上に固定してもよい。

これらタンパク質性試薬は、市場に出ている間の貯蔵寿
命を延ばすために、殺菌密閉した箱につめてもよい。

緩衝液とイオン性塩から成る試薬は、栓のついた容器に
入れた粉末としてキットに含まれろ。

試薬濃度を反応に適したものとするために、水を入れる
容量を示す印を容器につける。反応液の希釈のために、
キットの中に蒸留水を任意に加えてもよい。

本発明の好適な実施態様における免疫検定の場合の反応
検出手段は、　ＩｇＡＰの抗体を懸濁させたゼラチン状
培地である。ゼラチン状培地は、透明なガラスまたはプ
ラスチックの容器に入っており、ＩｇＡＰ−抗体複合体
の形成の最適条件のための緩衝液とイオン性塩から成る
０反応は、試料を塗布した中央点から放射状にのびる透
明部分として示される。

免疫検定から成るもう１つの好適な実施態様における反
応検出手段は、緩衝液とイオン性塩と一緒に密閉殺菌し
た箱に入れた発色団に結合したＩｇＡＰ抗体である。測
定に際して、箱の内容物をキットに備えである印のつい
た管の中で水で希釈する。この実施態様には、不活性表
面に固定したＩｇＡＰ抗体も含まれる。

測定では、　ＩｇＡＰを固定させた不活性表面を試料と
接触させ１次に発色団複合ＩｇＡＰ溶液と接触させる。

淋病を示す色について、その不活性表面を調べる。

酵素連鎖免疫検定（ＥＬＩＺＡ）から成るもう１つの好
適な実施態様におけるＩｇＡＰの検出手段は、使用前に
指示された容量まで水で希釈される管に入った緩衝液と
イオン性塩である。反応部位の約５０％をおおうように
固定化ＩｇＡＰ抗体を、呈色酵素に結合させたＩＫＡＰ
で被膜する。

試料を、好ましくは溶解して、固定化抗体−酵素複合体
のついた不活性表面に接触させた後。

緩衝液に入れる。発色剤を、固定化抗体−酵素複合体を
含む不活性表面に添加する。対照と比較した不活性表面
上の減色は、試料中のＩｇＡＰを示すものである。

本発明のキットのもう１つの実施態様は、不活性表面、
好ましくは紙上にばらばらに固定して発色団分子に結合
させたＩｇＡＰの基質から成る。

この実施態様では、固定化ＩｇＡＰ抗体を試料と接触さ
せ、好ましくはすすぎ洗いし、その後、固定化基質と接
触させる。

別々の帯における紙上の色の移動は、試料中のＩｇＡＰ
による固定化基質のタンパク質加水分解を示すものであ
る。または、基質固定の最初の位置から離れたところに
、プロリナーゼと０−アミノベンズアルデヒドを配して
もよい。この別の帯へ移動するタンパク質加水分解の断
片は、末端プロリンに特有の黄色を呈する。

本発明のキットのもう１つの実施態様では、固定化Ｉｇ
ＡＰ抗体を試料と接触させ、次いで、一定の長さの両端
が閉じた透析管内の発色団分子に結合した基質を含む反
応液に添加し、基質や試料を含んでいない別の容量の反
応液に吊るす。

透析管には、より小さな反応生成物は通すが。

基質は通さない孔がおいている。吊るしている反応液の
発色は、ＩｇＡＰによる反応を示すものである。

また、固定化抗体−ＩｇＡＰと着色基質を反応液の入っ
た管の中で反応させ、少しずつ大きさの異なった不活性
ビーズ、あるいは、より小さな断片は通すが大きな基質
は通さない荷重表面の樹脂ビーズのカラムに通す。溶離
液の色は、試料とＩｇＡＰとの反応を示すものである。

本発明のキットは、　ＩｇＡＰと抗体との反応条件を保
つために、適当な緩衝液とイオン性塩と一緒に、ゼラチ
ン状培地に懸濁したＩｇＡＰの抗体から成ってもよい。

試料をゼラチン−抗体部分に適用し、試料をおいた点か
ら放射状にのびる不透明な部分として反応を＆ｌｌ察す
る。

以下、本発明を、実施例によって説明する。

しかし、本発明は、これら実施例が特定する詳細に限定
されるものではない。

〔実施例　１〕２産品位　位　結へ　「サンドイッチ」」−人Ａ、試薬
の調製　。

１　、　ＩｇＡＰの抗体の調製ナイセリアゴノリアの成長培養から収穫した３０■のＩ
ｇＡＰを、３〜４週間かけてうさぎに注射する。酵素の
抗体を含有する抗血清を、うさぎから取り出し、グロブ
リン断片を、標準的硫酸アンモニア沈澱法で調製する。

２、固定化ＩｇＡＰ抗体の調製０、ＯＩＭホウ酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液中で、　
０．１％の牛の血清グロブリンと０．２％のトリトン−
Ｘ−１００、ｐＨ７，５で１０ｍ１に希釈したグロブリ
ン断片２５０ＩＩＩｇを、標準的アゾ連鎖カップリング
技術で、不活性吸水性マットの表面に固定する。

３、ＩｇＡＰの発色源抗体の調製０．０１Ｍホウ酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液（Ｂ１３
５）で１０＋＋＋１に希釈したグロブリン断片２５０■
を、１０ｍ１の２．４−ジニトロベンゼン（，０５Ｍ）
に加え、溶液を遠心分離して、沈澱物を洗浄した後、１
（１ｍｌの０．０１Ｎ８１３ｓに再び懸濁した。

Ｂ、試料の調製尿道口外側のペニスに蓄積したＮ、ゴノリアの成長に起
因する滲出物を、綿をつけた木製副木の上に集める。

Ｃ０診断テスト尿道滲出物のついた木製副木を、固定化抗体がついた不
活性表面に触れさせる。不活性表面を、ＩｇＡＰの発色
源抗体を含有する溶液にひたし、試薬溶液中へ滴下する
ことにより、すすぎ、色を調べる。

不活性表面に色がつけば、滲出物中にＩｇＡＰ、すなわ
ち、Ｎ、ゴノリアがあるということになる。

〔実施例　２〕 ■ＡＰのモノクロン　体：　雑法実施例１に記載の如く得られたグロブリン断片を、さら
に電気泳動で精製する。未精製の抗体を、電気泳動ゲル
から溶離し、安定した骨髄腫細胞培養からの細胞を、ポ
リエチレングリコールの存在下、腫瘍のできたネズミか
らのＩｇＡＰ抗体生成細胞で溶解する骨髄腫交雑法によ
って、モノクロン抗体の製造に使用する。

溶解細胞を標準細胞培養技術で成育させ、そこからＩｇ
ＡＰの抗体を収穫する。

このモノクロン抗体を、　ＩｇＡＰ抗体と反応させるた
めに、　ｐｌ＋７．５，０．０５ＨのＴＲｌ５緩衝液に
懸濁させる。

ここに示した様々な診断法では、実施例１．３゜および
４で述べられている方法で、モノクロン抗体を固定した
り、あるいは発色源分子か放射性元素で標識してもよい
。

〔実施例　３〕Ａ、試薬の調製実施例１と同様に、　ＩｇＡＰの抗体を調製し、固定す
る。別のＩｇＡＰ部分を、アルカリホスファターゼと結
合させ、５ｍｌ、０．０５ＨのＴＲＩＳ緩衝液、ＰＨ８
，５に懸濁させる。抗体を固定した不活性吸水性マット
を１反応部位の約５０％を飽和するのに十分な量の複合
ＩｇＡＰで処理する。

Ｂ、試料の調製１０ｍ１のリン酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液（Ｐ［Ｉ
Ｓ）を、膣壁に向けてから収集する。

Ｃ０診断テスト酵素発色ＩｇＡＰを固定した最初の不活性テープを。

膣洗浄試料に入れて取り出し、１ｍＭの塩化マグネシウ
ムを含んだ１０％ジェタノールアミン緩衝液。

ＰＩ＋８．８中のＰ−ニトロフェニルホスフェート（Ｎ
ＰＰ）（１■／ｍｌ）溶液に添加する。もう１つのテー
プは。

対照の不活性ＮＰＰのものである。２つのテープの色を
比較する。対照テープと比較して、試料テープ上の色の
希薄はＩｇＡＰの存在を示す。

〔実施例　４〕Ａ、試薬の調製実施例１と同様にして、　ＩｇＡＰの抗血清を調製し、
固定する。０．０５ｍ１，０．５Ｍのリン酸ナトリウム
緩衝液、ｐ１１７．５中の０．０２ｍｇＩｇＡＰを１．
０ミリキユーリーの工１２５および０．０１ｍ１のクロ
ラミンＴ溶液（０，５Ｍリン酸すトリウム緩衝液ρ１１
７．５中１．２５■／ｍ１）に加えるクロラミンＴ法に
よって、ＩｇＡＰを工１２５で標識する。

溶液を１５分間攪拌した後、０．０１ｍ１のメタビス亜
硫酸ナトリウム溶液（０，５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
、ｐＨ７，５中１．２５■／ａｌｌ）を加えて抑制する
。

セファデックスＧ−・２５　（ファーマシア社）で作っ
たカラムを０．０５Ｍリン酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶
液、ＰＨ７，５と５％の牛の血清アルブミンで洗浄した
後、リン酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液で平衡にする。

ヨウ素処理した反応液をカラムに加え、次いで、　ＰＢ
Ｓを加える。標識タンパク質を収集し、牛の血清アルブ
ミンで５％に希釈する。

Ｂ、試料の調製男性：淋病と接触した疑いのある男性の尿試料を、尿道から出
た尿の最初の数ミリリットルを遠心分離して調製する。

上澄みをあけ、残った沈澱物を。

１ｍｌのリン酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液１．０５Ｍ
。

ｐＨ８，５に懸濁させる。

女性：実施例３と同様にして、膣洗浄液を得る６Ｃ０診断テス
ト放射性ＩｇＡＰ（約１５，０００ｃｐｍを含む０．１ｍ
１）を、０．３ｍ１ＴＲＩｓ緩衝液、０．０５Ｍ、ｐ１
１８．０中の０．０５ｍ１試料に加える。この溶液を、
ＩｇＡＰ抗血清を固定させた不活性表面に室温で１時間
接触させる。溶液を遠心分離し、上澄みの放射能を監視
する。＠準曲線を比較して、試料中のＩｇＡＰの量を決
定する。

〔実施例　５〕ナイセリアゴノリアの検出二　　Ｉ　　疫（股因Ａ、試
薬の調製実施例１と同様にして、ＩｇＡＰ抗血清を調製する。

０．０５Ｍ酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液、ｐＨ８，０
を含む１％軟化寒天中の０．５．抗血清を、オフトロ二
−円板プレートにあけて硬化させる。

Ｂ、試料の調製−女性子宮頚に向けて４〜８時間挿入したタンポンを取り出し
て、１０１１等張塩化ナトリウム水溶液が入った受容容
器に入れる。容器に栓をし、よく振って、タンポン上の
細菌を抽出、溶解させる。

Ｃ９診断テスト０．１ｍｌの試料を点滴用ピペットでとり出し、オフト
ロ二−円板の中央の窪みにおく。円板におおいをして、
室温で２時間貯蔵し、その後、不透明度を観察する。中
央の窪みから放射状に不透明となった円板は、試料中の
ＩｇＡＰの存在を示すものである。

〔実施例　６〕花ＪｌすＬ友洩Ｊユ０シ生肌遇」らＩＦ盪１−Ａ、試料
の調製実施例１と同様にしてＩｇＡＰの抗体を調製する。

Ｂ、試料の調製膣洗浄液、尿、タンポンあるいはスワブの抽出物、を髄
液、関節髄液、あるいは細菌培養などの液体生物試料が
適している。

ＩｇＡＰを抽出する前に、高張塩を加えて試料を溶解し
、次いで、試料を抗体で処理する前の最適条件のために
、２１１を７．５、イオン強度を約０．０５Ｍに調製す
る。

Ｃ，ＩｇＡＰの抽出２＋＊ｌの生物試料に、２ｍｌのリン酸塩緩衝塩化ナト
リウム水溶液（ｐＨ７，５，０，０５Ｍ）を加える。抗
血清を固定させた不活性表面を試料に挿入してから取り
だし、Ｐ［ｌＳですすぐ。

Ｄ、ＩｇＡＰの濃縮抗血清−ＩｇＡＰ複合体が固定された湿った表面を取り
出して、ｐＨ６未満、好ましくは約５．０のＰＢＣが１
耐以下入った管に入れ、徹底的に振って抗原−抗体複合
体を分解させる。それにより、ＩｇＡＰは溶液中に分離
される。

〔実施例　７〕ＩｇＡ［’の　　検　：発色団基質とのｒ応Ａ、ＩｇＡ
Ｐの抽出実施例６に記載の固定化ＩｇＡＰ抗体によって、生物試
料からＩｇＡＰを抽出する。

Ｂ、基質の調製人間の初乳からのＩｇＡｆ’を、モノクロン交雑骨髄腫
技術によって調製する。ＩｇＡＰを使って、細胞培養系
を選択的に測定し、確実に純粋な基質が生成されるよう
にする。カスドナーおよびエイセンの方法［Ｊ、Ａ、Ｃ
，Ｓ、、互、　４４５４（１！３５３）］によってＴｇ
Ａ１をジニトロフェニルヒドラジン（ＤＮＰ）で標識す
る。

Ｃ０試料の調製実施例１〜６で得られる試料が適している。

Ｄ０診断テスト５ｓｌの試料を、ＩｇＡＰ抗体を固定させた不活性紙テ
ープに接触させる。抗体−酵素複合体の固定したテープ
を、次に、リン酸塩緩衝塩化ナトリウム水溶液（ＰＢＳ
）　（ｐＨ８，０，，０５Ｍ）が入った透析管に入れ、
同じｐｌ＋およびイオン強度のＰＢＳに吊るす。

２時間後、管の外側の溶液の色を調べる６着色していれ
ば、ＩｇＡＰが存在しているどういうことになる。

〔実施例　８〕 ■組玖免互腹定：発色団固定化ペプチドとの反応実施例７の操作を行なうが、発色源固定化基質として、
プロリルートレオニル結合を有するポリプペチドを使用
する。

〔実施例　９〜１５〕モノクロン抗体での免疫検− 実施例１，３．４．５，６．７および８を、これらの実
施例の抗血清の代わりのモノクロン抗体、あるいはグロ
ブリン断片を使って実施することができる。

〔実施例　１６〜２９〕実施例１．３，４．５．７．８および９〜１５に記載の
方法で、生物試料中の細菌へモフイラスインフルエンザ
、ナイセリアメニンギテイデイス、およびストレプトコ
ッカスニューモニアを検出することができる。

〔実施例　３０〕淋病の診断：尿生殖器膜抽出物におけるＩｇＡＰの免疫
検定Ａ、試料の調製試料は、女性の場合、スワブのタンポンからの洗浄また
は抽出によって得る。男性の場合の試料は、排泄制限を
した後排泄される尿の最初の数ミリリットルである。尿
道滲出物も使用できる。

試料を、ナイセリアゴノリアに選択的な培地で培養し、
測定前に収穫する。細胞外環境へ酵素を放出するために
、試料を溶解してもよい。例えば。

０．０３ＭＴＲｌ５緩衝液、ｐＨ９，０中で調製した卵
白からのリソチーム（バイオシム研究所）を、　５＋ｍ
ｌの試料で培養し、その後、溶解酵素を上澄み液中に放
出するために遠心分離する。

Ｂ、ＩＫＡＰの免疫検定実施例１〜２９で開示した技術によって、ＩｇＡＰを抗
体と反応させることにより、ＩｇＡＰを測定する。

尿生殖管でのＩｇＡＰの存在は、淋病の推定証拠となる
。さらに、化学的なテストを行なうことにより、診断が
明確になる。

〔実施例　３１〕遵度盈瓶■ヱ呈上淋病の診断のための装置および試薬のキラ１〜は、次の
ものから成る。

Ａ、試料収朶装置男性の場合は、１晩排泄制限をした後尿道から洗い出さ
れる尿の最初の数ミリリットルを捕集するための小ガラ
スびん；女性の場合は、子宮頚に向けて膣に挿入し、就寝時間中
、そこに置いておくタンポンである。使用したタンポン
を入れ、かつその滲出物を洗浄するためのガラスビンが
含まれる。

Ｂ　、ＩｇＡＰの抗体容器１　：　ＩｇＡＰの抗体を、紙テープに固定して密
閉する。

容器２：抗体の別の部分を、２．４−ジニトロ−ベンゼ
ンで標識し、緩衝塩およびイオン性塩と一緒に殺菌した
箱に密閉する。

Ｃ０試料と抗体との反応の検出手段印の容置まで水を入れた管に容器１の内容物を入れろ。

容器２からの紙テープを試料に浸し、緩衝液ですすいで
から、容器１の内容物が入った管に浸す。

テープを取り出し、緩衝溶液に浸して静かにすすぎ１色
を調べる。

テープへの着色は、試料中のＩ　Ｆｓ　Ａ　Ｐの存在を
示すものであり、淋病の診断に役立つ。

このキットは、個人が淋病の自己診断に使用することが
でき、または医師が自分の診療室や診察室で使用するこ
とができる。

〔実施例　３２〕亙皇ｌ！朋ヱ呈上Ａ、実施例３２に記載したような試料収集Ｂ、ＩｇＡＰ
の抗体をオフトロ二−型円板プレートのゼラチンに、実
施例５に記載したような緩衝液とイオン性塩と一緒に埋
め込む。

Ｃ０抗体と基質との反応の検出手段および方法。

試料１１をオフトロ二−円板の中央の窪みに入れる。円
板におおいをして室温で４時間放置し、その後不透明度
を調べる。中央の窪みから放射状にのびる白濁は、試料
中のＩｇＡＰの存在、従って淋病の存在を示すものであ
る。

このキットは１個人による自己診断や、専門的診断に、
あるいは多数の試料をスクリーニングテストする専門病
院で使用できる。

〔実施例　３３〕淋病診断用キットＡ、実施例２９に記載したような試料収集。

Ｂ、密閉した箱に入れた不活性テープに固定したＩｇＡ
Ｐ抗体。

Ｃ，ＩｇＡＰおよび抗体の検出手段等張緩衝液および塩と一緒に密閉した箱に入れた２、４
−ジニトロベンゼンで標識したＩｇＡＰ。

Ｄ、方法ＩｇＡＰの抗体を固定させた不活性テープを試料に挿入
し、緩衝液ですすぐ。

基質ＩｇＡ工を、緩衝剤および塩と共に管に入れ。

指示された容量に希釈する。管の内容物と試料を、実施
例７に記載したような一端を閉じた一定の長さの透析管
に注入する。管のもう一方の端を閉じた後、等張緩衝液
および塩の溶液中に吊るす。管の外側の吊り下げている
反応液の発色は試料中のＩｇＡＰの存在を示すものであ
り、淋病を示している。

このキットは、淋病の自己診断、あるいは専門的診断に
使用できる。

端許鱒煉本膚■灯人払二パ′；

Claims

【特許請求の範囲】

（１）（ａ）酵素の抗原部位と特異的に結合する抗体に
生物試料を接触させること、および（ｂ）その結果生じる抗体＝酵素複合体を検出することにより、生物試料中の酵素免疫グロブリンＡプロテアー
ゼを同化するナイセリア属（Ｎｅｉ−ｓｓｅｒｉａ）、
ヘモフィラス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、またはス
トレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の
細菌を検出することを特徴とする免疫グロブリンＡプロ
テアーゼの測定および淋病を迅速に診断する方法。
（２）検出細菌が、ナイセリアゴノリア（Ｎｅｉｓｓｅ
ｒｉａＧｏｎｏｒｒｈｅａ）であることを特徴とする特
許請求の範囲第（１）項に記載の免疫グロブリンＡプロ
テアーゼの測定および淋病を迅速に診断する方法。
（３）検出細菌が、ヘモフィラスインフルエンザ（Ｈａ
ｅ−ｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセ
リアメニンジティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎ
ｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、およびストレプトコッカスニュ
ーモニア（Ｓｔｒｅｐｔｕｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎ
ｉａｅ）より成る群から選択されることを特徴とする特
許請求の範囲第（１）項に記載の免疫グロブリンＡプロ
テアーゼの測定および淋病を迅速に診断する方法。
（４）試料が、生物体液あるいは膜抽出物であることを
特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の免疫グロ
ブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅速に診断す
る方法。
（５）抗体と接触させる前に、検出すべき細菌の成育に
適した条件下に生物体液または膜抽出物を維持させるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の免疫
グロブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅速に診
断する方法。
（６）抗体と接触させる前に、生物体液または抽出物を
、適当な溶解剤で処理することを特徴とする特許請求の
範囲第（４）項に記載の免疫グロブリンＡプロテアーゼ
の測定および淋病を迅速に診断する方法。
（７）抗体を、不活性支持体上に固定することを特徴と
する特許請求の範囲第（１）項に記載の免疫グロブリン
Ａプロテアーゼの測定および淋病を迅速に診断する方法
。
（８）固定した複合体を試料から分離し、固定化抗体−
ＩｇＡｐ−抗体複合体を形成するのに適した条件下で、
酵素ＩｇＡＰの抗原部位に特異的に結合する第２の抗体
と接触させ、その際、前記第２の抗体を、発色団標識ま
たは放射性集団で標識することを特徴とする特許請求の
範囲第（７）項に記載の免疫グロブリンＡプロテアーゼ
の測定および淋病を迅速に診断する方法。
（９）抗体を、抗体−酵素複合体の形成を助けるのに適
した緩衝液およびイオン性塩を含むゼラチン状培地に懸
濁させ、かつ試料を、前記ゼラチン状倍地の一部に加え
ることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の
免疫グロブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅速
に診断する方法。
（１０）抗原−酵素複合体を、放射線免疫検定法で検出
することを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載
の免疫グロブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅
速に診断する方法。
（１１）ＩｇＡＰを放射性元素と結合させ、酵素ＩｇＡ
Ｐの抗原部位に特異的に結合する抗体を、不活性支持体
に固定させることを特徴とする特許請求の範囲第（１０
）項に記載の免疫グロブリンＡプロテアーゼの測定およ
び淋病を迅速に診断する方法。
（１２）測定が、酸素連鎖免疫検定であることを特徴と
する特許請求の範囲第（１）項に記載の免疫グロブリン
Ａプロテアーゼの測定および淋病を迅速に診断する方法
。
（１３）試料を、ＩｇＡＰの抗血清で被膜したラテック
スビーズに接触させ、前記ビーズは、アルブミンに懸濁
させておくものとし、さらにその凝集を決定することを
特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の免疫グロ
ブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅速に診断す
る方法。
（１４）抗体−酸素複合体測定を、酵素連鎖免疫検定法
、放射線免疫検定法、および赤血球凝集より成る群から
選択した放射状免疫拡散法２位配位配位子結合によって
検出することを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に
記載の免疫グロブリンＡプロテアーゼの測定および淋病
を迅速に診断する方法。
（１５）ＩｇＡＰの固定化抗体によって試料から分離し
たＩｇＡＰに、ＩｇＡＰの基質を接触させる段階を含む
ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の免
疫グロブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅速に
診断する方法。
（１６）基質が、プロピル＝トレオニル結合対を含有す
るポリペプチドのＩｇＡ＿１であることを特徴とする特
許請求の範囲第（１５）項に記載の免疫グロブリンＡプ
ロテアーゼの測定および淋病を迅速に診断する方法。
（１７）生物試料を、ナイセリアゴノリアで同化された
酵素ＩｇＡＰの抗原部位に特異的に結合する抗体と接触
させ、その結果生じる複合体形成を検出する段階から成
る免疫グロブリンＡプロテアーゼの測定および淋病を迅
速に診断する方法。
（１８）酵素ＩｇＡＰの抗原部位と特異的に結合する抗
体から成る酸素ＩｇＡＰの免疫検定に有用な試薬。
（１９）ＩｇＡＰと抗体との免疫複合体の形成に適した
ｐＨとイオン強度をもつ反応培地中の酵素ＩｇＡＰの抗
原部位と特異的に結合する抗体から成ることを特徴とす
る特許請求の範囲第（１８）項に記載の試薬。
（２０）酵素ＩｇＡＰの抗原部位と特異的に結合する抗
体であって、前記抗体が、不活性支持体に固定されるよ
うになっていることを特徴とする特許請求の範囲第（１
９）項に記載の試薬。
（２１）抗体が、発色団分子と結合しているか、あるい
は放射性元素で標識されていることを特徴とする特許請
求の範囲第（２０）項に記載の試薬。
（２２）（ａ）酵素ＩｇＡＰの抗原部位と特異的に結合
する抗体を入れた第１容器と、（ｂ）生物学的試料と抗体との反応を検出するための試
薬を入れた第２容器とがひとまとめになっていることを特徴とするナイセリ
アゴノリア用の検出キット。
（２３）抗体を、不活性支持体に固定することを特徴と
する特許請求の範囲第（２２）項に記載の検出キット。
（２４）抗体を、発色団、酵素発色団、蛍光団、発光団
、または放射性元素と結合させることを特徴とする特許
請求の範囲第（２２）項に記載の検出キット。
（２５）緩衝液とイオン性塩から成る反応溶液のための
試薬をさらに含むことを特徴とする特許請求の範囲第（
２２）項に記載の検出キット。
（２６）反応の検出のための試薬が、酵素の抗原部位に
特異的に結合するＩｇＡＰの抗体を懸濁させたゼラチン
状培地から成ることを特徴とする特許請求の範囲第（２
２）項に記載の検出キット。
（２７）反応を検出するための試薬が、酵素ＩｇＡＰの
基質から成ることを特徴とする特許請求の範囲第（２２
）項に記載の検出キット。
（２８）基質が、発色団または放射性元素で標識されて
いることを特徴とする特許請求の範囲第（２２）項に記
載の検出キット。
（２９）試料中の細胞を溶解するための試薬を含むこと
を特徴とする特許請求の範囲第（２２）項に記載の検出
キット。
（３０）試料収集装置を含むことを特徴とする特許請求
の範囲第（２２）項に記載の検出キット。
（３１）試料収集装置が、尿収集器、タンポン、または
綿棒、あるいはそれらの組合せから成ることを特徴とす
る特許請求の範囲第（２２）項に記載の検出キット。