JPS62230730A

JPS62230730A - 新規な医薬組成物

Info

Publication number: JPS62230730A
Application number: JP62057859A
Authority: JP
Inventors: ドナルド　エイチ　ナム; スペクタートーマス; ヘンリー　バーガー，ジュニア; クリスト　ジェイ．フランガキス
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1986-03-13
Filing date: 1987-03-12
Publication date: 1987-10-09
Also published as: ZA871814B; JPS62230725A; JPH05368B2; GB8606283D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は組織プラスミノーゲン賦活体質（１−ＰＡ　）
およびオキシプリノールま九はその医薬として許容され
うる塩の組合せ削、これらの化合物全含有する医薬組成
物およびこれらをヒトおよび動物医療に使用することに
関する。

立坑を形成できる酵素系と凝血系と立坑を溶解できる酵
素系、フィブリン溶解性系との間には動的平衡が存在し
、これは完全開放性血管床全維持している。損傷からの
血液の損失全制限する文めに、損傷した血管に立坑が形
成される。損傷の自然の回復の後に、余分の立坑はフィ
ブリン溶解性系の作用により溶解される。場合によって
は、立坑が外傷的損傷がなくても形成され、この立坑は
主要血管内に留まシ、血液流の部分的なまたは全体的な
ことさえある閉塞をもｔらすことがある。

これが心臓、肺まｔは脳で生じると、心筋梗塞、肺塞栓
まｔは卒中を発症させることがある。これらの症状の組
合せは工業国における罹患率および死亡率の主要病因で
ある。

立坑は線維網よシなシ、この線維網はタンパク分解酵素
プラスミンにより溶解させることができる。この酵素は
不活性前酵素、プラスミノーゲン（血漿の成分）から、
プラスミノーゲン賦活体の作用に工り誘導される。２種
の免役学的に異なる哺乳動物プラスミノーゲン賦活体が
存在する。ウロキナーゼとしても知られている内在性プ
ラスミノーゲン賦活体は腎臓により生産される酵素であ
り、尿から単離できる。これはまた、多くの組織培養源
からも調製できる。血管プラスミノーゲン賦活体として
、おＬび組織ゾラスミノーデン賦活ｗＪ質（ｔ　−ＰＡ
　）としても知られている外在性プラスミノーゲン賦活
体はかなシの組織ホモジネートＣ％にヒト子宮）、血管
細胞壁および成る種の細胞培饗物から単離できる。これ
らの２種のプラスミノ−ｒン賦活体に加えて、ベーター
−溶血性ストレプトコツシから生産される細菌生成物、
ストレプトキナーゼがある。両ウロキナーゼおよびスト
レットキナーゼが有する主要欠点は、これらが循環の全
体全通して活性であり、立坑の部位だけで活性であるも
のではないことにある。たとえば、これらはフィブリノ
ーゲン、プロトロンビン、ファクターＶおよびファクタ
ー■のようなその他の血液タンパクを破壊し、血液凝固
能力全減少させ、そして出血の危険を増大させる。これ
に対して、ｔ−ＰＡの生物学的活性はｔ　−ＰＡが結合
し、活性化されるフィブリンの存在に依存している。

されるべきフィブリン網の存在する部位だけで発現され
、これに工す出血の危険性が極めて回避される。

血管内の血液流動の中断は一般に虚血状態ヲ導く。この
状態では、組織は酸素を奪われ、危険にさらされるよう
になる。この状態の組織は損傷されているが、まだ潜在
的に生きている。しかしながら、この状態が成る期間、
すなわち３時間またはそれ以上の間保持されると、組織
は壊死状態になり、この状態に一度なると、回復はでき
ない。

従って、血液流の再潅流、すなわち回復ができるだけ早
く生じて、組織が永久的損ｓｉ受ける前に組ＷＬを救う
ことが重要である。皮肉なことに、血流再潅流が組織の
壊死の前に行なわれたとしても、この再潅流それ自体が
低酸素状態の組織に対して有害な作用を有する超謔化物
基の予想される生成を含む複合しｔ現象をも上らす。従
って、再潅流は危険にさらされている組域の部分的回復
音導くことはできるが、組織の残りの部分はこれらの現
的損傷を受ける。

正常状態下に、キサンチンおよびヒポキサンチンは筋肉
細胞中に低濃度で存在し、電子受容体としてＮＡＤ　に
コチンアミドーアデニンジヌクレオチド）全使用するギ
サンチンデヒドロゲナーゼにより尿酸に酵素的に変換さ
れる。しかしながら、虚血状態では、キサンチンおよび
ヒポキサンチンの濃度は膨大またはそれ以上の程度にま
で一般に増大する。血液再潅流が生じた場合に、酵素キ
サン子ンデヒドロデナーゼがそれ自体でキサンチンオキ
シダーゼに変換されるものとする知見が提出されている
。キサンチンオキシダーゼの生成は順に、ＮＡｒ）の代
りに電子受容体として使用される酸素によりキサンチン
およびヒポキサンチンを尿酸に代謝する。この場合には
、超酸化物基が副生成物として生成されるＩ：　Ｔｈｅ
　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ　、　　１９８５年、３１２ｒ３）、１５
９〜１６６頁〕。

ここに、ｔ−ＰＡとオキシプリノールま几はその医薬と
して許容されうる塩との組合せが血液再潅流期間中の危
険にさらされている組織に対する損［１−阻止すること
が見い出された。ｔ　−ＰＡとオキシプリノールとの組
合せはｔ　−ＰＡまたはオキシプリノール各それ自体に
より付与されるものに比較して有意に強力なレベルの阻
止を生じさせることが見い出された。従って、本発明は
ｔ−ＰＡとオキシプリノールまたはその医薬として許容
されうる塩との組合せ全提供する。本発明は特に、立坑
の排除お工びそれに続く血液再潅流期間中の危険にさら
されている組織に対する損害を阻止するための両方に対
して都合が良い手段を提供する。

すなわち、ｔ−ＰＡ＄Ｐ工びオキシプリノールの投与は
先ず、ｔ−ＰＡの既知の血栓溶解作用による立坑の排除
を生じさせ、次いでｔ　−ＰＡとオキシプリノールとの
組合せ作用による組織損傷の阻止を牛じさせる。本発明
はいづれか危険にさらされている組織の防諌に使用でき
るが、特に危険にさらされている心筋組織に対する損傷
の阻止に有用である。

本発明で使用されるｔ　−ＰＡは哨乳動物、特にヒ）　
ｔ　−ＰＡに実質的に相当するいづれかの生物活性タン
パク質であることができ、グリコジル化ｋ　Ｍ　’Ｍｔ
ｉするものおよび付随していないものの両方を包含する
。ｔ　−ＰＡはＥｐ−Ａ−１１２１２２に記載されてい
る工うな一鎖状または二鎖状１−ＰＡあるいはその混合
物であることができ、約７０．０００のポリアクリルア
ミドゲルにもとづく見掛は上の分子量および７．５〜８
．０の等電点を有する。好ましくは、ｔ　−ＰＡは約５
００．０００　ＩＵ／ダの比活性音導する（工Ｕ／ｍｇ
は国際単位／ダであり、国際羊皮は可０　、　Ｎ（１１
）ｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｆｏｒ　ＢｉｏｌＯ
ｇｉｃａｌ　８ｔａｎｄａｒｄａ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒ
ｏｌ、　Ｈｏ１ｌｙＨ１ｌｌ、　Ｈａｍｐｓｔｅａｄ　
、　Ｌｏｎｄｏｎ　、　ＮＷ　３６ＲＢ　、英国により
定義されているとおりの活性の単位である）。

ｔ　−ＰＡのアミノ酸配列は好ましくは第１図に記載の
配列に実質的に相当する。従って、この配列は第１図の
配列と同一であるか、あるいは対立形質遺伝子起源また
はその他に由来する１個または２個以上のアミノ酸の欠
落、置き換え、挿入、転位ま九は付加上官むものであシ
、生じる配列は第１図の配列と少なくとも８０チ、好ま
しくは９０チの相同性音導し、そしてタンパク質の同一
の生物学的お工び免疫学的性質全基本的に保有するもの
である。特に、この配列は汎１図に示されている配列と
同一であるか、またはセリンＮ−末端から２４５番目の
位置に存在するアミノ酸がメチオニンの代りにバリンで
ある以外は同一の配列を令し、どちらの配列も場合によ
り、初めの３個のアミノ酸のいづれかが存在していない
か、または場合に二Ｆ）　Ｇａｙ−Ａｌａ−Ａｒｇの追
加のポリペプチドＮ−末端前配列楠することができる。

第１図に示されているアミノ酸配列は３５個のシスティ
ン残基上清し、従って、１７個のジスルフイＰ架橋を形
成する可能性を有する。その構造がさらに詳細に決定さ
れている別のタンパク質からの類推にもとづき、９０番
目の位置に存在するアミノ酸とプロリンＣ−末端との間
の配列（ジスルフィド結合形成から生じる）に係る仮定
構造を第２図に示す。このＮ−末１領域の構造は、いく
つかの提案がなさｎているが確実性に乏しい（Ｐｒｏｇ
ｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｆｉｄｒｉｎｏｌｙａｉｓ、　１９８
３年、６．２６９〜２７６頁お工びＰｒｏｃ、　Ｎ（１
１）ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、１９８４年、８１．
５５５５〜５６５９頁〕。ｔ−ＰＡの構造の最も重要な
特徴は２つの環状（Ｋｒｉｎｇｌｅ　）領域（９２番目
のアミノ酸と１７６普目のアミノ酸との問お工び１８０
番目のアミノ酸と２６１番目のアミノ酸との間）にあり
、この領域はこのタンパク質のフィブリンへの結合に関
与し、そしてもう一つの重要な特徴はセリンプロテアー
ゼ領域であり、この領域はＢ−鎖の主要部分上官み、セ
してグラスミノーゲンの賦活に１１与する。セリンプロ
テアーゼ中の特別に重要なアミノ酸は触媒的トリアド（
ｔｒｉａｄ　）　、Ｈｌｓ　／　Ａｓｐ　／　Ｓｅｒで
ある。ｔ　−ＰＡにおいては、これらは６２２８目、３
７１番目お工び４６６番目の位置に生じる。

２６４番目と６９５番目のシスティンアミノ酸残基間の
ジスルフィド架橋はまた重要であシ、二鎖状形のｔ　−
ＰＡのＡ鎖とＢＩＪとを一体に保持する。

第１噛お工び第２図において、慣用の一字コードおよび
三字コードを下記のとおりにアミノ酸残基について使用
する：Ａｓｐ　Ｄアスパライン酸　　工１θエインロイシンＴ
ｈｒ　Ｔスレオニン　　　　ＬθｕＬロイシンＳｅｒ　
Ｓセリン　　　　　　Ｔｙｒ　ＹチロシンＧｌｕＥクル
タミン酸　　　ＰｈｅＦフェニルアラニンＰｒｏ　Ｐゾ
ロリン　　　　　Ｈｌｓ　Ｅ　　ヒスチジンＧｌｙ　Ｃ
ｋグリシン　　　　Ｌｙｓ　Ｋ　　リジンＡｌａ　Ａ　
アラニン　　　　Ａｒｇ　Ｒアルヤニンｃｙｔｓ　ｃ　
　システィン　　　　ＴｒｐＷ）リゾトファンＶａｌＶ
バリン　　　　　　Ｇｌｎ　Ｑグルタミン）Ｊｅｔ　Ｍ
　　メチオニン　　　　Ａｓｎ　Ｎ　　アスパラヤンｔ
　−ＰＡは従来技術で開示されているかまたは知られて
いる方法のいづれかにより得ることができる。−例とし
て、ｔ　−ＰＡはＢｉＱｃｈｉｍｉｃａ　ａ℃）３１ｏ
ｐｈｙｓｉＣａ　Ａｃｔａ　、　　１９７９年、５８０
．１４０〜１５６頁；　ＥＰ　−Ａ　−４１７６６ま九
はＥＰ　−Ａ−１１３３１９に記載されている種類の正
常または新生物セルラインから得ることができる。しか
しながら、ｔ　−ＰＡは、たとえば１１ｆｆｌＰ　−Ａ
　−９６６１９、ｇｐ−Ａ−１１７０５９、ＥＰ　−Ａ
　−１１７０６０、ＥＰ−Ａ−１７３５５２、ｇｐ−Ａ
−１７４８３５、ＥＰ−Ａ−１７８１０５、ＷＯ３６１
０１５３８、ＷＯ３６１０５５１４またはＷＯ３６１０
５８０７に記載されているような組換えｒｌＮＡ技法を
使用して誘導されｔ培養形質転換またはトランスフエク
ショされたセルラインを得ると好まＥ７い。チャイニー
ズ　ハムスター卵巣（ｅｇｏ　）細胞をｔ−ＰＡｏ製造
に使用し、この細胞２　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　
Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｂ１０ｌ０ｇ７　％　１９８５年、
５（７）、１７５０〜１７５９頁に記載の方法で誘導す
ると特に好ましい。この方法では、クローン化した遺伝
子を、遺伝子をコーｒするジヒドロホレートリダクター
ゼ（ｄｈｆｒ　）により、ｄｈｆ　ｒ″″ＣＥＯ細胞中
にコトランスフエクションする。

ｄｈｆｒ　を発現する形質転換体はヌクレオシド欠落メ
ディアで遇択し、増加する濃度のメトトレキセートにさ
らす。ｄｈｆｒおよびｔ　−ＰＡ遺伝子はこのようにし
て一緒に増剤され、高レベルのｔ　−ＰＡｔ示すことが
できる安定なセルラインが得られる。

ｔ　−ＰＡは好ましくは、下記の文献に記載されている
工うな従来開示されたまたは従来既知の方法のいづれか
を使用して精製する：　ＢｉＯｃｈｉｍｉｃａｅｔ　Ｂ
ｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ　、　１９７９年、５８
０．１４０〜１５３頁、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　
１９７９　Ｅ２５４（６）、１９９８〜２００３頁、回
部１９８１年、２５ｔ！５ｒ１３）、７０３５〜７０４
１頁、ｇｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１９８６年
、１６２．６８１〜６８６頁、ＥＰ−Ａ−４１７６６、
ＥＰ−Ａ−１１３３１９、または（）Ｂ　−Ａ　−２１
２２２１９゜別名アロキサンチンとして知られているオキシプリノー
ルは４．６−シヒドロオキシピラゾロ［３，４−ａ〕ピ
リミジンの名称であシ、米国特許第３．６２４．２０５
号の主題であるアロプリノールの主要代謝物質である。

これは従来開示されているま）たけ従来既知のいづれか
適当な合成方法により製造でき、またＳｉｇｍａ　Ｃｈ
ｅｍｉｃａ１社（Ｓｔ。

Ｌｏｕｉａ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ　、米国）から市販され
ている。

オキシプリノールの医薬として許容されうる塩の例には
アルカリ金属およびアルカリ土類金属塩が含まれる。ナ
トリウム塩が特に好ましい。

本発明の方法において、ｔ−ＰＡおよびオキシプリノー
ルまたはその医薬として許容されうる塩を使用するに際
しては、これらの成分を医薬組成物の形で使用すると好
ましい。これらの活性成分は別々の製剤に使用すること
ができ、あるいは単一の組合せ製剤の形で使用すること
もできるが、単一の調剤の場合には、両活性成分は使用
される特定の裂削内で安定であり、そして相互に両立で
きなければならないことは勿論のことである。従って、
本発明はｔ　−ＰＡおよびオキシプリノールまたはその
医薬として許容されうる塩並びに医薬上で許容されうる
担体を含有する医薬組成物全提供する。

一般に、ｔ−ＰＡおよびオキシプリノールま九はその医
薬として許容されうる塩は注入によるか、ｔｚは全量全
一度に注射することによるかのどちらかで、静脈経路で
投与する。従って、非経口用組成物が必要である。有意
の輸送および貯蔵上の利益が得られることから、医師ま
たは獣医師に、凍結乾燥した組成物として提供すると好
ましい。

医師または獣医師は必要に応じて、通量の溶剤中でこの
凍結乾燥組成物を再構成できる。

ｔ　−ＰＡ　’５含有する非経口用の凍結乾燥した医薬
組成物は当技術で知られている。この工５な従来技術の
例には、ＥＰ−Ａ−４１７６６、ＥＰ　−Ａ−９３６１
９、ＥＰ−Ａ−１１２１２２、ｇｐ−Ａ−１１３３１９
、ＥＰ−Ａ−１２３３０４、ＥＰ−Ａ−１４３０８１、
ＥＰ−Ａ−１５６１６９、ＷＯ３６１０１１０４、日本
国特公昭５７−１２０５２６号（特願昭５＜５−６９３
６）および日本国特公昭５８−６５２１８号（特願昭５
６−１６３１４５）が含まれる。追加の例にはＣ）Ｂ　
−Ａ　−２１７６７０２およびＧＢ　−Ａ　−２１７６
７０３が含まれる。

オキシプリノールを含有する非経口用医薬組成物は水性
および非水性溶液お工び懸濁液を包含しこれらはま皮酸
化防止剤、緩衝剤、静菌剤、等張剤または生体内利用性
を増進させるその他の成分を含有できる。オキシプリノ
ールの凍結乾燥医薬組成物は慣用の方法で凍結乾燥させ
ることにより殺菌溶液から調製できる。

単一の組合せ製剤中にｔ　−ＰＡお工びオキシプリノー
ル全−緒に含有する非経口用の凍結乾燥した組成物はｔ
　−ＰＡまたはオキシプリノールそれ自体に適する組成
物の調製と類似の方法で調製できる。しかしながら、繭
記しｔように、特定の組成物中の活性成分の安定性およ
び相互適合性を考慮して、組成物全適合させる必要があ
る。

静脈注入は正常、注入用袋または♂器内、あるいは電気
的に作動する注入用器内に含有されている非経口投与用
溶液上用いて行なわれる。溶液は重力供給により、また
は注入ポンプを使用して、注入用袋またはピンから患者
に与えることができる。重力供給注入システムの使用は
非経口投与用溶液の投与速度全全体にわたって充分に調
節できない。従って、注入ポンプの使用が、特に比較的
高濃度で活性成分を含有する溶液の場合に好適である。

しかしながら、投与速度を全体にわたってさらに調節す
ることができる電気的に作動する注入用器を使用すると
、特に好ましい。

本発明はま友、哺乳動物における再潅流期間中の危険に
さらされている組織に対する損Ｉｎ阻止する方法を提供
し、この方法はｔ　−ＰＡおＬびオキシプリノールまた
はその医薬として許容されうる塩の１効量を哺乳′Ｎｈ
物に投与すること全包含する。別様には、本発明はヒト
および動物医療に使用するための、特に哺乳動物におけ
る再潅流期間中の危険にさらされている組織に対する損
傷の阻止に使用するための、ｔ−ＰＡとオキシプリノー
ルまたはその医薬として許容されうる塩との組合せを提
供する。

本発明は立坑の発生から生じる危険にさらされている組
織に対する損傷の阻止において特に有利であシ、前記し
友ように、立坑の排除および危険にさらされている組織
の防論の両方が達成できる。

本発明の方法において、ｔ−ＰＡおよびオキシプリノー
ルまたはその医薬とし゛Ｃ許容されうる塩を使用する場
合に、これらの活性成分は別々の組成物としてまたは単
一の組合せ一組成物として、同時的にまたは順次的に投
与できる。順次的に投与する場合には、先ずオキシプリ
ノールをまたとえば静脈注射により投与し、次いでｔ　
−ＰＡを連続静脈内注入により投与すると好ましい。い
づれにしても、ｔ−ＰＡの投与が遅れると、組織損傷阻
止におけるインビボでのこれら２種の成分の組合せによ
る増強効果の利益が損なわれるので、遅れてはならない
。

再潅流期間中の危険にさらされている組織に対する損傷
を阻止するｔめのｔ　−ＰＡおよびオキシプリノールの
有効量は、たとえば哺乳動物の年令および体重、処置を
必要とする正確な状態およびその重篤度、投与経路を包
含する多くの因子にニジ変わることは勿論のことであり
、最終的には担当医師ま几は獣医師の裁量にまかせられ
る。しかしながら、有効投与量は、ｔ−ＰＡの場合に、
１５０．０００〜１，０００．０００　ＩＵ／患者の体
重ｋｇ／日、好ましくは３００．０００〜５００．００
０ＩＵ／患者の体重ｋｇ／日の範囲が適当であシ、そし
てオキシプリノールの場合は、０．５〜１０ダ／患者の
体重ｋｇ／日、好ましくは２．５〜５ｍ９／ｋｇ／日の
範囲が適当である。

次側は本発明を説明するものであり、本発明上いづれか
の点で制限するものと考えられるべきではない。

例　　１オキシプリノールの製゛ぎう・ｌ−ルー３．４−ジカルボン酸（７，５、ｌｉ’
　）（コノ化合物はｅｈｅｍ、　Ｂｅｒ、、１８９９年
、旦、２２９２以降に記載されている）に、塩化チオニ
ルｒ１５０ｍＡ）ｋ加える。混合物を１０時間還流させ
る。塩化チオニルを減圧で除去し、生成する粉末状残留
物上、予め０℃でアンモニアを飽和させたｔ−ブタノー
ルの冷い、攪拌溶液に、１時間にわたシ少しづつ加える
。混合物を５時間放置する。沈殿全停離し、濃水酸化ア
ンモニウム溶液（１００１Ｍｔ）と１時間沸とうさせる
。溶液を水蒸気浴上で蒸発乾燥させ、残留物を沸とう水
から結晶化させる。このようにして生成された化合物（
ぎう・ｌ−ルー６．４−ジカルボギシアミド）は無色枝
状物であり、３２７℃で分解全件ない溶融する。

０．４Ｍ次亜塩素酸ナトリウム溶液ｒ１６．６ＴＩＬｔ
）の冷い溶液に、ピラゾール−３，４−ジカルポ中ジア
ミド（５００１９）ｔ−加える。反応混合物はピンク色
に変り、次いで淡い黄色に変わる。０℃で１時間放置し
た後に、混合物上２Ｎ塩酸でＰＨ３に酸性にし、綿状沈
殿を分離する。生成物を沸とう水から再結晶させ、オキ
７プリノールのバラ花様の無色針状物を得る。

例　　２オキシプリノールの注射製剤の調製成　　　分　　　　　　　　　　　　〜／バイアルオギ
シプリノール　　　　　　　１５０．０水酸化ナトリウ
ム、ＩＮ　　　　　　ｐＨｅ１２．５にする適量注射用
水　　　　　　　　　　　全量を１５−にする適量オキ
シプリノールを水１〇−中の水酸化ナトリウム溶液に加
える。溶液の−を水酸化ナトＩＪウム（ＩＮ　）　’に
用いて１２．５に調製する。追加の水を加えた後に、溶
液を濾過し、殺菌し、次いで無菌バイアルに分配する。

溶液全凍結乾燥させて無菌の無水ケーキ状物を生成し、
バイアルを無菌条件下に密封する。溶液は注射のすぐ前
に水で再構成する。

例　　６ｔ　−ＰＡの注射製剤の調製ｔ　−ＰＡの凍結乾燥し７に注射製剤’ｉ　ＧＢ　−Ａ
　−２１７６７０２に実質的に記載のとおりにして調製
する。

例　　４（ａ）　　方法雄のピーグル犬Ｃ１０〜１２ｋｉ９）ｔ−ベントパル−
タールナトリウムで麻酔させ、挿管し、Ｈａｒｕａｒｄ
叶吸器ｔ−経て室内空気で呼吸させる。注入用および動
脈血圧測定用カテーテル全圧頚静脈お工び左頚動脈に植
え込む。開胸術を第４肋骨内面間隙の部位で行ない、心
臓金心膜離被架に吊−左下行動脈（ＬＡＤ　）　ｔ’第
−主要対角枝（ｄｉａｇｏｎａｌｂｒａｎｃｈ　）のす
ぐ下の位置で単離する。ＬＡＤ上にｔ出流動探触子をつ
ける。流動探触子から遠い位置に１１０絹糸係蹄會はど
こして、ＬＡｒ）の９０分閉塞を生じさせる。処置はこ
の係蹄による閉塞の開放前の１５分に静脈投与に１勺開
始し、開放後の４５分間継続する。開胸を閉め、動物全
手術状態から回復させる。動物は係蹄後の２４時間に再
び麻酔し、ＬＡＤにおける血流を再評価する。次いで、
心臓全梗塞サイズの死後定量用に分離する。

５群の大全評価する。第１群は塩類溶液対照用にする。

第２群にはｔ　−ＰＡ　１．５■／に９’に投与する。

第３群にはｔ　−ＰＡ　３■／ｍｔ−投与する。第４群
にはオキシプリノールのナトリウム塩１０■／ｋ１９ｔ
−投与する。第５群にはｔ　−ＰＡ　１．５１ｍｇ／ｋ
ｌｌ’！びオキシプリノールのナトリウム塩１０ｒｎ９
／ｋｇの両方を投与する。ｔ　−ＰＡは例３の凍結乾燥
製剤から水で再構成して得られ友非経口投与用製剤とし
て投与する。同様に、オキシプリノールは例２の凍結乾
燥製剤から水で再構成し、塩酸とすシまぜることにより
９．６の−に戻して得られ九非経口投与用製剤を投与す
る。ｔ　−ＰＡは４４０，０００ＩＵ／ダの比活性音導
した。

心筋梗塞のサイズは生体外二重再濯流技法により定量す
る。カテーテルを係蹄部位からすぐ離れテ５Ｌｒ）Ａ中
に挿入し、冠状動脈口上の大動脈中に挿入する。ＬＡＤ
冠状動脈床は０．０２　Ｍ　Ｕン酸カリウム緩衝液（−
７，４＞中の１．５チドリフエニルテトラゾリウム塩酸
塩（ＴＴＣ）　ｔ−潅流させる。大動脈には１００ｎ水
銀の一定圧力で、それらの各スティン全５分間潅流させ
る。心臓音その先端−底部軸に対して垂直に８匙の厚さ
に切る。血液流がＬＡｒ）に依存する解剖学的依存性に
よる梗塞の危険がある左心室領域はこの領域にｇｖａｎ
θ青が欠落していることにより同定される。危険域内の
梗塞心筋の領域はデヒドロデナーゼ酵素の損失にょシ、
ＴＴＣを血流させた場合に組織が染色されないことによ
り証明される。

心室横断面を透明なアクリル製被覆板金通して注意深く
検査し、梗塞形態の永久的記録を作シそして梗塞サイズ
’ｔ　１１１１面法で確認する。次いで心室面の右心室
筋肉、弁および脂肪組織を切シ取る。

左心室の危険領域および梗塞領域の全てを注意深く切除
して分離し、重量を測定する。梗塞サイズは危険状態の
解剖学的領域のパーセントとして表わす。薬物処置群の
対照群に対する統計学的比較は多重比較に係るＢｏｎｆ
ｅｒｒｏｎｉの方法（ｅｉｒａｕｌａ−ｔｉｎｎ　Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ　、　　１９８０年、１１１１〜９頁）を
便用すワン　ウェイ分散分析法（ｏｎｅ　ｗａｙａｎａ
ｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　）　（ＡＮＯＶ
Ａ　）　？＋−用いて行なう。０．０５より小さいｐ値
を有意の規準とする。

（１：１）結果ＬＡＩ’）の機械的係蹄にニジ虚血状態にされた左心室
の割合は処は群のいづれかと対照群との間にＡＮＯＶＡ
による有意Ｏ差違はなかった。

（Ｃ）　　結論ｔ　−ＰＡとオキシプリノールとの組合せは血流再潅流
期間中の危険にさらされている組織における損傷全阻止
する作用において相乗的効果を達成した。

【図面の簡単な説明】

第１図はｔ　−ＰＡのアミノ融配列を示すものであシ、
そして第２図は二鎖状形ｔ　−ＰＡの構造特徴を示すも
のであシ、臀部位は二鎖状形ｔ　−ＰＡを生じさせる一
鎖状形ｔ　−ＰＡの分裂部位を示し、Ａ鎖は２個の環状
域を有し、ぞしてＢ＠はセリンゾロテアーゼ域を有する
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ｔ−ＰＡおよびオキシプリノールまたはその医薬
として許容されうる塩の組合せ剤。
（２）ｔ−ＰＡが一鎖状形である、特許請求の範囲第１
項に記載の組合せ剤。
（３）ｔ−ＰＡが二鎖状形である、特許請求の範囲第１
項に記載の組合せ剤。
（４）ｔ−ＰＡが第１図に記載のアミノ酸配列を有する
か、またはセリンＮ−末端から２４５番目の位置に存在
するアミノ酸がメチオニンの代りにバリンである以外は
第１図に記載のアミノ酸配列を有し、これら両配列は場
合により、初めの三個のアミノ酸が存在していなくても
よく、またはＧｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇの追加のポリペプ
チドＮ−末端部分配列を有していてもよい、特許請求の
範囲第１項〜第３項のいづれか一項に記載の組合せ剤。
（５）オキシプリノールの医薬として許容されうる塩が
ナトリウム塩である、特許請求の範囲第１項〜第４項の
いづれか一項に記載の組合せ剤。
（６）特許請求の範囲第１項〜第５項のいづれか一項に
記載の組合せ製剤および医薬上で許容されうる担体を含
有する医薬組成物。
（７）特許請求の範囲第１項〜第５項のいづれか一項に
記載の組合せ製剤の有効量を哺乳動物に投与することを
特徴とする哺乳動物における血液再潅流期間中に危険に
さらされる組織に対する損傷を阻止する方法。
（８）ｔ−ＰＡの量が１５０，０００〜１，０００，０
００ＩＵ／患者の体重ｋｇ／日であり、そしてオキシプ
リノールの量が０．５〜１０ｍｇ／患者の体重ｋｇ／日
である、特許請求の範囲第５項に記載の方法。
（９）ｔ−ＰＡの量が３００，０００〜５００，０００
ＩＵ／患者の体重ｋｇ／日である、特許請求の範囲第８
項に記載の方法。
（１０）オキシプリノールの量が２．５〜５ｍｇ／患者
の体重ｋｇ／日である、特許請求の範囲第８項に記載の
方法。
（１１）オキシプリノールまたはその医薬として許容さ
れうる塩とｔ−ＰＡとを同時的に投与する、特許請求の
範囲第７項〜第１０項のいづれか一項に記載の方法。
（１２）オキシプリノールまたはその医薬として許容さ
れうる塩とｔ−ＰＡとを順次的に投与する、特許請求の
範囲第７項〜第１０項のいづれか一項に記載の方法。
（１３）オキシプリノールまたはその医薬として許容さ
れうる塩を静脈注射により投与し、そしてｔ−ＰＡを次
いで静脈内注入により投与する、特許請求の範囲第１２
項に記載の方法。