JPS6222727A - 感染性気管支炎ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は家禽用感染性気管支炎ウィルス（ＩＢＶ）ワク
チン、特にデエイオールド（ｄａｙ−ｏｌｄ）　ニワト
リに予防接種する場合に極めて安全かつ有効な優れた感
染性気管支炎ウィルスに関するものである。

家禽用感染性気管支炎生ウィルスを使用することは既に
多年にわたって知られている。感染性気管支炎はコロナ
ウィルスに起因する家禽の気管支の重要な疾病である。

この疾病は家禽の飼育に大きな経済的損失をもたらす。

この理由は感染性気管支炎が特に若い家禽に極めて大き
い死亡率をもたらすからである。その上、ＩＢＶに感染
した結果として、卵を産むメントリにおいて、死亡率お
よび多少の強い呼吸現象のほかに、メントリの産卵系に
損傷が生じ、従って産卵の減少が起る。しかもＩＢＶの
感染はウィルスまたは細菌の感染の刺激となるこきがあ
り、従って特にブロイラ分野において重大な経済的損失
を招くことになる。

当初、感染性気管支炎を予防するために生ウィルスに基
づいたワクチンが使用された。例えば、変性Ｈ菌株に基
づいたＩＢＶ生ワクチンは既に長期間使用されている。

もとのＨ菌株はビイエイレンガ、ホエクストラおよびリ
スペンスＢｉｊｌｅｎｇａ。

ｔｌｏｅｋｓｔｒａ　ａｎｄ　Ｒ１５ｐｅｎｓ　（ティ
エイド’／ユリフト争フォール・ディエルゲネースクン
デ（Ｔｉｊｄｓｃｈｒｉｆｔ−ｖｏｏｒ　Ｄｉｅｒｇｅ
ｎｅｅｓｋｕｎｄｅ）、８１　（１９５６）第４３頁、
および８５　（１９６０）第２７９頁および第３９８頁
〕によって単離され、解化したメントリの卵の上に数回
移された。最後に、菌株（Ｒ１２０および■５２）が得
られ、これらの菌株は原野から単離したウィルスよりメ
ントリに対する毒性が小さいことが分った。変性菌株間
２０はデエイオールド・ニワ）　ＩＪに接種するのに使
用されているが、菌株１１５２は特に生後約８週間の動
物に使用されている。

菌株１２０および１１５２に基づいたワクチンの使用は
可成り安全かつ有効であるが、これらの２種の生ワクチ
ンはある環境において感染性気管支炎の発生を防止でき
ないことが分った。感染性気管支炎の発生は変性菌株の
産出に帰することができる。

かかる変性菌株の産出は血清型の異なる感染性気管支炎
ウィルス菌株に基づいた一層有効なワクチンの探求を必
要とした。

かかるワクチンに関する研究の結果、欧州特許第０．０
３０．０６３号明細書に記載されているワクチンおよび
欧州特許明細書０．０８６．０２５号に記載されている
ワクチンが得られ、これらのワクチンはいずれも感染性
気管支炎ウィルス（ＩＢＶ）変性菌種に基づくものであ
った。感染性気管支炎に対する有効な保護はいわゆる変
性菌株に基づいたワクチン（生ワクチンおよび不活性化
ワクチン）を使用す゛ることにより達成されることが分
った。

研究の結果、卵を産むニワ）　ＩＪは生ワクチンと不活
性化ワクチンとを併用することによって効果的に保護で
きることが分った。

従来、感染性気管支炎の予防のためにブロライラに生命
の第１日日にＨ１２０菌株に基づいたワクチンを接種し
ていた。しかし、変性菌株が産出するためかかる予防接
種はもはや有効でなくなるので、１日日に投与すること
ができる産出変性菌株の誘導体を見い出す必要がある。

ドールン（Ｄｏｏｒｎ）所在の家禽に対する公衆衛生部
門（Ｐｕｂｌｉｃ　ＨｅａｌｔｈＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ
）によって行われた研究の結果、マサチューセッツ血清
型（旧２０．　Ｒ５２）のほかに主としてＤ２０７血清
型のウィルスが見い出されることが分った。従って、ブ
ロイラを感染性気管支炎から保護するのに有効なワクチ
ンは旧２０およびＤ２０７菌株と関連するウィルスから
構成されている必要がある。

上述の欧州特許明細書および欧州特許出願には、これら
に記載されているワクチンを若い動物にも使用できるこ
とが述べられているが、実験の結果、これらの刊行物か
ら既知であるＩＢＶ変性菌株に基づいた生ワクチンはデ
エイオールド・ブロライラに接種するには毒性が強すぎ
ろことが分った。欧州特許出願に記載されているＤ２７
４菌株〔英国、ウェイブリッジ、ニューホー（Ｗｅｙｂ
ｒｉｄｇｅ、　Ｎｅｗ　Ｈａｗ）所在のセントラル・ヴ
エタリナリイ・ラボラトリ−（Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｖｅｔ
ｅｒｉｎａｙ　Ｌａｂｏｒａｔ＋３ｒｙ）における寄記
番号：ＶＬＯ１０１１０／ＡＶ　Ｉ／３　；　インスｆ
イテユート・パスツールにおける寄記番号：　Ｎｏ、ｌ
−２１６：］は、５２個の卵を生んだ後、また１２２個
の卵を生んだ後でさえも、デエイオールド・ニワトリに
予防接種するには毒性が強すぎることが分った。

本発明においては、驚くべきことには、デエイオールド
・ニワトリを感染性気管支炎の変性菌株から保護するた
めの安全かつ有効な生ワクチンは、インスティテユート
・パスツールにおいて寄記番号Ｎｏ、Ｉ　−４７３で登
録されている菌株をウィルス菌株として使用する場合に
得られることを見い出した。

本発明において使用するウィルス菌株は原野から単離さ
れた菌株から得られ、以下にこれをウィルス菌株８４−
３と呼ぶ。

１種より多い生ウイルス菌株に基づいたワクチンを投与
する際の広く知られている問題は、併用したウィルスが
相互作用のために免疫抗原性の低下を示すことである（
アメリカン・ジャーナル・オブ・つ゛エタリナリイ・リ
サーチ（Ａｍ、Ｊ、１ｌｅｔ。

Ｒｅｓ、）　３６．　　（１９６５）、　　第４頁、第
５２４頁および第５２５頁；およびアウ゛イアン・ディ
ジージス（ＡｖｉａｎＤｉｓｅａｓｅｓ）、１２．　　
（１９６８）、　第５７７頁参照〕。

全く驚くべきことには、本発明における新規な８４−３
菌株を８１２０および他の家禽生ウィルスと併用した場
合には、かかる妨害の問題が現われない。

次に本発明を実験例について説明する。

ヌ１所１１　］　：　８４−３菌株の安全性それぞれ２
０匹のデエイオールドＳＰＰニワトリからなる三つの群
に、第１日日に、１０４・３Ｂｌｌ’１５．　（卵感染
量（ｅｇｇ　１ｎｆｅｃｔｉｖｅ　ｄｏｓｅ））／＝ニ
ワトリ用量で目に滴下することにより接種を行った（第
１群には既知のＨ１２０菌株を接種し、第２群には５２
個の卵を生ませた後に０２７４菌株を接種し、第３群に
は本発明の８４−３菌株を接種した。）２０匹の上記ニ
ワトリからなる第４の群を対照群とした。

５日目に各群の１０匹のニワトリを層殺して気管（ｔｒ
ａｃｈｅａ）の組織を調査した〔アール・ダブリュ・ウ
ィンターフイールド（ＲｌＷ、　Ｗｉｎｔｅｒｆｉｅｌ
ｄ）等：「アビアン・ディジージス」、■、　　（１９
７２）、　　第２６０〜２６９頁参照〕。各群の残りの
１０匹のニワトリも５日目に層殺して繊毛の活動を調査
した〔ジェー・エッチ・ダービイシ＋　−（Ｊ、ＩＩ、
　Ｄａｒｂｙｓｈｉｒｅ）　　：［アビアン・パソロジ
イ−（Ａｖｉａｎ　Ｐａｔｈｏｌ、）　Ｊ　。

汎、　　（１９８０）、　　第１７９〜１８４頁参照〕
。この実験結果を表Ａに示す。

表Δ ａ）　各群について繊毛が活動しているニワ）　ＩＪの
数および試験したニワトリの数を記録した。

ｂ）　この試験で使用した評価尺度は０〜３である。

」−述の結果から、用量が１０”　３ＥＩＤｓｏ　／動
物、すなわち１０倍よりさらに過剰である場合には、繊
毛の活動に関しては、８４〜３菌株はＨ１２０菌株およ
び５２個の卵を生んだ後におけるＤ２７４菌株より毒性
が弱いことが分る。また、気管支の病変に関しては、８
４−３菌株はＨ１２０菌株より僅かではあるが毒性が強
いことが分る。かかる差異の説明は、８４−３菌株は病
変を多くするが繊毛の活動を破壊しないということであ
り、これは８４−３菌株およびＨ１２０菌株が僅かでは
あるが異なる病理を示すことを意味する。

一般に、繊毛の活動が行われていることは有毒なウィル
スの攻撃に対する保護を示す信頼できる表示である。

８４−３菌株を接種したニワ）１月０匹中９匹が繊毛の
活動を示したので、８４−３菌株はデエイオールド・ニ
ワ）　ＩＪに対して安全であると法論することができ、
この実験では１０倍よりさらに過剰な量を極めて敏感な
動物、すなわち母親から免疫を受けていないＳＰＦニワ
トリに投与したことを考えると、なお一層そうである。

実験例２：８４−３菌株の接種効果 それぞれ３０匹のデエイオールド・ニワトリからなる二
つの群を別個に収容した。

第１日日に、試験群に本発明の８４〜３菌株を１０３・
３Ｂｌ、Ｄｓｏ／動物の用量で目に滴下することにより
接種した。接種後２週間目に各群の５匹のニワトリを層
殺し、繊毛の活動を調べた。これを接種後４週間目に繰
返した。両方の群は共に１００％の繊毛の活動を示した
。

接種後４週間目に、各群からの１２匹の動物を１０３・
０〜３・５ＥＩＤｓｏ　／ニワトリの用量の有毒なり２
０７菌株で攻撃した。攻撃ウィルスは一部分を鼻腔内に
また一部分を眼内に投与した。６日後に動物を繊毛の活
動および気管支の病変について調べた。これらの結果を
次の表Ｂに示す。

表Ｂ Ｃ）＋：繊毛の活動が行われている。

＋／−：いくつかの場所では繊毛の活動が行われている
。

一：繊毛の活動が行われていない。

得られた結果から分るように、試験群の動物は８３％以
上が保護されていたが、接種してない対照群は１７％の
みが保護されていた。この結果は両方の群における気管
支の病変に関する評点によって確Ｓ忍された。

実験例３：デエイオールド・ニワトリに８４−３菌株と
１１１２０菌株とを同時に投与した場合それぞれ１７匹
のデエイオールド・ＳＰＦニワトリからなる二つの群に
、第１日日に、１０”・０ＥＩＤ５ｏ／ニワ）　ＩＪの
用量の８４−３菌株と１０３・５ＢＩＤｓｏ　／ニワト
リの用量のＨ１２０菌株とを接種した。各試験群に対し
て８匹のニワトリからなる対照群を使用した。

接種後４週間目に一方の試験群および一方の対照群を１
０３・５Ｂ団、。の有毒なり２０７菌株で攻撃した。同
じ時点に他方の試験群および他方の対照群をＩＱ”　Ｂ
ＩＤｓｏ　／ニワトリのフォエ）　Ｑｌｏｅｔ）菌株（
すなわち、有毒な菌株）で攻撃した。これらの有毒な菌
株は共に鼻腔内および眼内の両方に投与した。

攻撃ウィルスの投与前に、接種および未接種のニワ）　
ＩＪを一緒にした。攻撃ウィルスの投与後６日目に、動
物を層殺し、繊毛の活動および気管支の病変について調
べた。これらの結果を表Ｃに示す。

表に の表から、両試験群のニワ）　ＩＪにおける繊毛の活動
には変化が認められず、これは１００％の保護を示すこ
とが分る。このことは気管支の病変の評点が二つの試験
群（０，５１および０）においては対照群（１，６３お
よび２．６３）　におけるより低いこと１ごよって確言
忍された。

デエイオールド・ＳＰＦニワトリに８４−３菌株とＨ１
２０菌株とを同時に接種すると、Ｄ２０７菌株またはフ
ォエト菌株のウィルスによる攻撃から良好に保護され、
これは両ウィルスが接種中に互に悪影響を及ぼさないこ
とを示す。このことは実験例４からも明らかである。

実験例４：小規模の野外実験 それぞれ３７５匹（第１群）、４００匹（第２群）およ
び５０匹（第３群）のデエイオールド・ブロイラからな
る三つの群、および４０匹のデエイオールド・ＳＰＦニ
ワトリからなる一つの群（第４群）を使用した。

第１群には０日目に１０４・５ＢＩＤｓｏ　／動物の用
量の８４−３菌株および１０３・３ＢＩＤｓｏ／動物の
用量の１２０菌株を接種した。第２群には０日目に１０
３・３ＥＩＤ５ｏ／動物の用量のＨ１２０菌株を投与し
た（スプレー法）。

第３群および第４群は非接種の対照群とした。

１０日目に第１群および第２群からの２０匹づつの動物
を層殺して気管支の病変を調べた。

動物の呼吸を０日目から２１日目までの間点検した。

２８日目に第１群、第２群および第３群からの２５匹づ
つの動物および第４群からの１０匹の動物を１０３・８
８ＩＤ５．の用量の有毒なフォエト菌株で口内攻撃した
。

２８日目には各群からの同数の動物を１０３・５ε１０
５゜の用量の有毒な０２７４菌株で攻撃した（鼻腔内お
よび眼内）。

攻撃ウィルスの投与後６日目に動物を層殺し、気管支の
病変および繊毛の活動について調べた。

かかる２８日口の攻撃を同一の群について４２日Ｂ１繰
返した。これらの動物を６日後に層殺し、調べた。

第１群および第２群の残りの動物を６０日日日秤量して
層殺日における平均重量を求めた。

１０日、２８日＋６日および４２日＋６日後１こおける
気管支の病変の試験の結果を次の表りに示す。

繊毛停止試験（ＣＳＴ）の結果を表Ｅに示す。表Ｅにお
いて数値は保護のパーセントを示ス。

表Ｅ　（Ｃ６Ｔ） 層殺日に第１群の動物は平均体重が２３５（ｌ　ｇ　（
ｎ　−２２１）で、第２群の動物は平均体重が２３１０
　ｇ　（ｎ　−２３３）であった。

上述の結果から、本発明の８４−３菌株とＨ１２０菌株
とを併用してもデエイオールド・ブロイラにとって安全
であると法論することができ、これは次の理由からであ
る： １〉併用ワクチンの投与後に呼吸症状の増加が起らなか
った； ２）接種後に気管支の病変は増加しなかった；３）屠殺
時の体重に有意差はなかった。

０２７４菌株の有毒なウィルスで攻撃した後の保護は、
第１群（４週後および６週後にそれぞれ９２％および１
００％）においては第２群（６４％および８３％）にお
けるより著しく良好であった。未接種動物は４週間の経
過日数で既に完全に病気になっていた。

これらの結果は気管支の病変の評点によって全面的に確
認された。４週および６週のそれぞれの経過日数におい
て、第１群では０．３１および０．０４、第２群では０
．６０および０．５７であった。４週の経過日数におい
て第３群では１．８３であった。

Ｈ１２０菌株と同族であるフォエト菌株による攻撃に対
する保護は第１群ふよび第２群において同等であった。

第１群：４週後および６週後１００％、第２群：４週後
９１％、６週後１００％。

これは次の気管支の病変の評点によって確認された： 第１群：４週後０．１７．６週後０．００、第２群；４
週後０．２４．６週後０．０８、第３群；４週後１．５
９゜ −Ｌ述のように、８４−３菌株およびＨ１２０菌株を組
み合わせた併用ワクチンは、全肥育期間中０２７４菌株
に対してもまたマサチューセッツ菌株に対しても優れた
保護を示した。

上述の結果に基づいて、本発明が少くとも新規な８４−
３　＋ＢＶ菌株から得られる新規なＩＢＶ生ワクチンお
よびこれをデエイオールド・ニワトリに接種するのに使
用することに関するものであることは明らかである。

ワクチンはＨ１２０ウィルス菌株からおよび８４−３菌
株のＩＢＶから得るのが好ましい。新規な８４−３ウィ
ルス菌株を標準方法によって処理して生ワクチンにする
ことができる。これらの標準方法では、ウィルスをこの
ために従来使用されている安定剤と混合し、次いで凍結
乾燥する。投与するには、凍結乾燥ワクチンをこの目的
に適した液体溶媒に溶解する必要がある。ワクチンは生
ワクチンの場合のいわゆる眼に滴注する方法、鼻腔に滴
注する方法、飲料水法またはスプレー法により投与する
ことができる。本発明の新規な生ワクチンによる接種は
デエイオールド・ニワトリに行うのが好ましい。

また、新規な８４−３菌株ノＩＢＶ、　Ｈ１２０菌株オ
ヨヒ他のタイプの家禽ウィルスの１種又は２種以−ヒ、
例エバ、ニューカッスル病ウィルスから得られる併用生
ワクチンが本発明に包含されることは明らかである。

特許出願人　　　デュファル・インチルナチオナル・レ
セールフ・べ−・ヴエー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、感染性気管支炎に対する生ワクチンにおいて、 パリ−所在のパスツール・インスティテュ ートにおいて寄記番号Ｎｏ．Ｉ−４７３で登録されてい
   る８４−３菌株ウィルスを含有することを特徴とする感
   染性気管支炎ワクチン。 ２、少くとも１０＾２＾．＾５ＥＩＤ＿５＿０／用量の
   ８４−３菌株ウィルスを含有する特許請求の範囲第１項
   記載のワクチン。 ３、さらに他のＩＢＶ菌株のウィルスを１種または２種
   以上含有する特許請求の範囲第１項または第２項記載の
   ワクチン。 ４、８４−３菌株のウィルスのほかに、さらにＨ１２０
   菌株のウィルスを含有する特許請求の範囲第３項記載の
   ワクチン。 ５、ＩＢＶの全量が少くとも１０＾６＾．＾０ＥＩＤ＿
   ５＿０／用量である特許請求の範囲第４項記載のワクチ
   ン。 ６、さらに他の家畜ウィルスを１種または２種以上含有
   する特許請求の範囲第１〜５項のいずれか一つの項に記
   載のワクチン。 ７、１種または２種以上のＩＢＶ菌株のウィルスのほか
   に、さらにニューカッスル病ウィルスを含有する特許請
   求の範囲第６項記載のワクチン。 ８、パリ−所在のパスツール・インスティテュートにお
   いて寄記番号Ｎｏ．Ｉ−４７３で登録されている８４−
   ３菌株のＩＢＶウィルス。