JPS62209360A - 過酸化水素測定用の分析組成物，分析要素及び分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、臨床化学に有用である。本発明は、過酸化水
素又は反応して過酸化水素を生成しうる別の被分析物を
検出する新規な組成物、要素及び方法に関する。

〔従来の技術〕 過酸化水素及び化学反応又は酵素反応の結果として過酸
化水素を生成する化合物の検出及び定量的測定は、多く
の分野で重要である。例えば、これらは、種々の化学的
又は生物学的物質（本明細口では、被分析物と示す）、
例えばグルコース、コレステロール、尿酸、トリグリセ
リド、タレアチンキナーゼ又はクレアチニンの酵素分析
の際に酸素の存在で生成する過酸化水素の測定に重要で
ある。試料中に存在する被分析物の量は、生成する過酸
化水素の量から測定しうる。

過酸化水素を測定するための公知組成物及び方法は、一
般に、過酸化性活性を有する物質、例えばペルオキシダ
ーゼ、並びに過酸化水素及びペルオキシダーゼの存在で
検出可能な変化（例えば、色の変化）を受ける宵色色素
生成剤を含む。このような条件で検出可能な変化を受け
ることが知られている種々の物質は、モノアミン、ジア
ミン、フェノール及びロイコ色素を包含する。他の過酸
化水素指示薬は、発色カプラーと反応して色素を生成す
る水素供与体（本明細書では、色素生成化合物と言う）
を包含する。

米国特許第４．ｏｇ９．７４７号明細書は、ヒドラゾン
及び発色カプラーの組み合わせを使用する、過酸化水素
又は過酸化水素を生成する被分析物の分析に関する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

前記文献に記載されているヒドラゾンを全血の分析に使
用することは、不利である。ヒドラゾンを使用する場合
には、比較的長い波長、すなわち、６００ｎｍより長い
波長の電磁線を吸収する検出可能な色素を得ることは困
難である。ヒドラゾンで形成される色素は、一般に、比
較的短い波長で吸収し、その検出は、しばしば、全血試
料中に存在する種々のスペクトル妨害物質によって妨害
される。これらの妨害物質の存在は、全血及び血清を試
験する際にヒドラゾンを使用する分析の精度を低減する
。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、過酸化水素又は反応して過酸化水素を生成す
る被分析物の測定に有用な分析組成物により前記の欠点
を克服したものである。この組成物は、陽イオン性媒染
剤及び構造式： 〔式中Ｒは水素、−ＳＯ，Ｒ２又は−３ＯＮＲ”Ｒ’を
表し、Ｒ１は電子吸引性基を表叫、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４
はそれぞれ独立に水素、置換若しくは非置換アルキル基
又は置換若しくは非置換了り−ル基を表し、ｎは１〜５
の整数を表し、Ｚｌは置換若しくは非置換の５員〜１０
員芳香族炭素同素環式又はへテロ環式環を完成するため
に必要な炭素原子及び窒素原子を表す〕の色素生成化合
物を含む。

色素生成化合物は、陽イオン性媒染剤の存在でフェノー
ル系発色カプラーと反応して、６００ｒ＋ｎ＋以上の波
長で検出しうる色素を生成することができる。

本発明は、更に、陽イオン性媒染剤及び前記の色素生成
化合物を含む、過酸化水素又は反応して過酸化水素を生
成する被分析物の測定用の分析要素を提供するものであ
る。

過酸化水素又は反応して過酸化水素を生成する被分析物
の測定方法は、 Ａ、過酸化水素又は反応して過酸化水素を生成する被分
析物を含むと思われる液体試料を過酸化性化合物、陽イ
オン性媒染剤、フェノール系発色カプラー及び前記の色
素生成化合物と接触させ、そして、 Ｂ、過酸化水素又は被分析物の存在の結果として形成さ
れた色素を６００ｎｍ以上の波長で検出する工程を含む
。

以下余白 実里皿且 本発明に有用な色素生成化合物は、構造式：によって表
される、１個以上の電子吸引性基で１換されたヒドラジ
ド又はヒドラジンである。

この構造式において、Ｒは水素、−３Ｏ２Ｒ”又は〜５
ＯＮＲ’Ｒ’を表す。Ｒは、水素又は−５ＯｚＲ’　で
あｊ＋（７）が好ましく、　５ＯｚＲ３であるのが更に
好ましい。Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に水素、
置換若しくは非置換アルキル基（好ましくは炭素原子数
１〜６のもの、例えばメチル基、クロロメチル基、エチ
ル基若しくはイソプロピル基）又は置換若しくは非置換
アリール基（好ましくは炭素原子数６〜ＩＯのもの、例
えばフェニル基、ナフチル基若しくはｐ−メチルフェニ
ル基）を表す。Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素又は置換
若しくは非置換フェニル基であるのが好ましい。また、
ｎは１〜５の整数であり、ｌ又は２であるのが好ましい
。

Ｒ１は、文献に定義されているような電子吸引性基であ
る。このような基は、一般に、正のハメットシグマ値を
有する。このハメットシグマ値は、例えば、Σ堕しキー
■工藏１Ｌ」１」四し旦兵工り徂廚Ｊ勺ノー、Ｊｏｈｎ
　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　　５ｏｎｓ、　Ｉｎｃ、、１９
５６年、５７０〜５７４　真皮？Ｊ　ＰＩ四且た狙旦二
Ｉニジα互オ」」−ノＩ旦ｎ１ｃ−％、２巻＼Ｉｎｔｅ
ｒｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　５１９５６
年、３３３〜３３９頁に記載されている標準的方法によ
り計算される。代表的電子吸引性基は、ハロゲン（例え
ば、塩素、臭素又は沃素）、置換又は非置換アルコキシ
カルボニル基（例えば、メトキシカルボニル基又はエト
キシカルボニル基）、ニトロ基、シアノ基、置換又は非
置換アリールスルホニル基（好ましくは炭素原子数６〜
１２のもの、例えばフェニルスルホニル基）及びスルフ
ァモイル基を包含する。ニトロ基は好ましい電子吸引性
基である。

Ｚは、置換又は非置換の５〜ＩＯ員芳香族炭素同素環式
又はヘテロ環式環を完成するのに必要な炭素原子及び窒
素原子を表す。例えば、完成されり環ハ、フェニル環、
ピリジニル環、ピラジニル環、キノリル環又はベンゾチ
アゾリル環であってよい。環は、置換又は非置換のフェ
ニル環又はピリジニル環であるのが好ましい。環は、置
換又は非置換ピリジニル環であるのが更に好ましい。

本発明の実施に有用な代表的色素生成化合物は、２−（
ベンゼンスルホニルヒドラジノ）−５−ニトロピリジン
、２−ヒドラジノ−５−ニトロピリジン、２−ベンゼン
スルホニルヒドラジノ−（Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルス
ルファモイル）−３−クロロピリジン、２−クロロ−３
−ヒドラジノピラジン及び２−ヒドラジノ−３−クロロ
−５−スルファモイルピリジンである。最初に挙げた化
合物が好ましい。

本発明の実施に有用な色素生成ヒドラジン及びヒドラジ
ドは、公知°化合物である。これらは、公知の操作及び
一般的に入手しうる出発原料を使用して製造することが
できる。ヒドラジンは、例えば、Ｏｒ　、　Ｓ　ｎ、　
Ｃｏ１１．　、ＩＩ巻、２２８頁（１９４３）に記載さ
れている操作により製造することができる。ヒドラジド
は、例えば、紅Ｌ」旦、　、４０巻９３頁（１９６０）
に記載されている操作により製造することができる。

本明細書に記載する色素生成化合物は、好ましくは構造
式： 〔式中ｚｌ　は前記のものを表し、Ｒ５は水素又は文献
に公知の電子供与性基を表し、ｐは１〜５の整数である
〕で表されるフェノール系発色カプラーと共に使用され
る。

電子供与性基は、一般に、前記の標準的方法により測定
して負のハメットシグマ値を有する。代表的電子供与性
基は、置換又は非置換アルキル基（好ましくは炭素原子
数１〜６のもの、例えばメチル基、エチル基、アミノメ
チル基又はイソプロピル基）、置換又は非置換アルコキ
シ基（好ましくは炭素原子数１〜６のもの、例えば、メ
トキシ基、エトキシ基又はイソプロポキシ基）、置換又
は非置換ジアルキルアミノ基（好ましくはアルキル部分
に１〜６個の炭素原子を有するもの）、ヒドロキシ基、
スルホンアミド基及びアセトアミド基を包含する。好ま
しい電子供与性基は、ヒドロキシ基、前記のようなアル
コキシ基又はジアルキルアミノ基である。

代表的発色カプラーは、１，７−ナフタレンジオール、
２．６−シメトキシフエノール、ｍ−ジメチルアミノフ
ェノール、２．７−ナフタレンジオール、ｌ−ナフトー
ル−８−スルホン酸、８−アミノ−１−ナフトール、１
−ナフトール及び２゜３−ジメチルフェノールを包含す
る。好ましいカプラーは、１，７−ナフタレンジオール
、２．６−シメトキシフエノール及び１−ナフトールを
包含する。

本発明を実施する際には、６００ｎｎ＋以上の波長で検
出しうる色素を生成させるため、本明細書に記載する色
素生成化合物及び発色カプラ゛−を陽イオン性媒染剤と
組み合わせて使用する。このような媒染剤は、ポリマー
骨格に沿って直接その上に又は側鎖に１以上の正の電荷
を有するポリマー物質である。陽イオン性媒染剤は、文
献に公知であり、例えば、米国特許第３．９５８．９９
５号、同第４．０６９，０１７号、同第４，１２４．３
８６号及び同第４．２４７，６１５号明細書並びにＲｅ
５ｅａｒｃｈ　Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ　。

１２０４５（１９７４年４月）に記載されている。この
ような媒染剤の製造方法は、これら及び他の公表された
文献に記載されている。

有用な代表的媒染剤は、ポリ　（スチレンーコーＮ−ベ
ンジル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−Ｎ−ビニルベンジルアンモ
ニウムクロリドーコージビニルベンゼン）、ポリ　（Ｎ
、Ｎ、Ｎ−）ジメチル−Ｎ−ビニルベンジルアンモニウ
ムクロリド）、ポリ　（Ｎ。

Ｎ、Ｎ−）ジオクチル−Ｎ−ビニルベンジルホスホニウ
ムクロリド）及びポリ　（スチレン−ツーＮ−ビニルベ
ンジル−Ｎ、Ｎ、Ｎ−）リヘキシルアンモニウムクロリ
ド）を包含する。

本発明の分析組成物は、溶液分析及び乾式分析に使用す
ることができ、前記の色素生成化合物、フェノール系発
色カプラー及び陽イオン性媒染剤を含む。組成物は、過
酸化性活性を有する物質と一緒に使用され、好ましくは
該物質を含む。

過酸化性活性を有する物質は、過酸化性物質としても知
られており、過酸化水素及び他の過酸化物による別の物
質の酸化を触媒することができる。

このような物質は、天然及び合成ペルオキシダーゼ、チ
トクローム、ヘミン、種々の形のヘモグロビン、アルカ
リ性ヘマチン、スルホシアン酸鉄、タンニン酸鉄、クロ
ム酸塩等を包含する。ペルオキシダーゼは、特に有用な
過酸化性物質（ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｖｅ　５ｕｂｓｔ
ａｎｃｅ）である。

本発明の組成物と共に、実質的に任意の緩衝剤を使用す
ることができる。緩衝剤は、一般に、分　　折において
、色素形成を助成するｐｔｉを提供するため使用される
。一般に、ｐＨを４〜９の範囲に保持するが、特定のｐ
Ｈは、ある程度、分析する特定の被分析物に依存する。

有用な緩衝剤は、炭酸塩、硼酸塩、燐酸塩、グルタル酸
塩、トリス物質、例えばトリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタン及び他の、文献に公知のものを包含する。

本発明の組成物は、水又は緩衝剤中で分析組成物の成分
を混合することによって溶液分析に使用するため調製す
ることができる。色素生成化合物、フェノール系カプラ
ー及び媒染剤が、水に限られた溶解度を有する場合には
、これらを混合前に、水と混和する溶剤、例えばアルコ
ール又はＮ、　Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解する
ことができる。過酸化性物質を、同様に混合することが
できる。代表的分析組成物を製造する詳細を下記の例１
〜５に示す。

本発明の組成物を溶液分析に使用する場合には、一般に
、色素生成化合物は、最終溶液ｔｒＪあたり少なくとも
１ｇｇ、好ましくは５〜５０μｇの濃度で存在する。発
色カプラーは、−Ｍに、最終溶液１ｄあたり、少なくと
もｌｌ１ｇ、好ましくは５〜５０μｇの濃度で存在する
。カチオン性媒染剤は、一般に、最終溶液ＩＪあたり、
少なくとも０．１ｇｇ、好ましくは０．５〜１ｇｇの濃
度で存在する。過酸化性物質は、色素生成反応を触媒す
るのに充分な量で存在することができる。例えば、ペル
オキシダーゼは、一般に、少なくとも０．Ｏｌｌ、　Ｕ
、／Ｊ、好ましくはｔ　〜１ｏ　ｒ、　ｕ、／ｍｆｌの
量で存在することができる。一般に使用される他の添加
剤（例えば、緩衝剤又は界面活性剤）及び相互作用組成
物（以下に説明する）の量は、当業者の熟練の範囲内の
ことである。

本発明の組成物を使用して、過酸化水素又は過酸化水素
を生成しうる被分析物、すなわち、過酸化水素を生成す
る１種以上の反応に関与しうる被分析物を測定すること
ができる。このような被分析物を測定するには、前記の
分析組成物を相互作用組成物と混合し、被分析物をこれ
と反応させて１種以上の反応において過酸化水素を生成
させる。

この方法で測定しうる被分析物は、グルコース、トリグ
リセリド、尿酸、コレステロール、ガラクトース、アミ
ノ酸、タレアチンキナーゼ、クレアチニン、及び他の、
臨床化学における当業者に公知の物質を包含する。所定
の被分析物に対して特殊な相互作用組成物は、当業者に
は容易に決定することができる。

本発明は、溶液又は乾式分析に適用しうる。溶液分析に
おいては、一般に、分析組成物、過酸化性物質及び相互
作用組成物（含む場合）を、適当。

な容器（例えば、試験管、ペトリ皿、ビーカー又はキュ
ベツト）中で混合することによって、過酸化水素又は別
の被分析物を含むと思われる液体試験試料と接触させる
。生じる溶液を比較的短時間、４５℃までの温度で温度
する。次いで、過酸化水素の存在の結果として生成した
色素の量を測定することによって試料を評価する。色素
の量を、試料中に初めに存在した過酸化水素又は被分析
物の存在の結果として生成した過酸化水素の量と相関さ
せることができる。このような評価は、肉眼で又は適当
な比色検知装置及び６００ｎｓ以上の波長での操作を用
いて行うことができる。

また、本発明方法を乾式分析要素を用いて実施すること
ができ、このような要素は、分析組成物及び場合により
任意の他の所望の試薬、例えば、過酸化性物質を含む吸
収性担体物質、すなわち自立性吸収性シート又は圧縮物
質、例えば口紙又はストリップから成る。このような要
素は、試験ストリップ、診断要素、ディツプスティック
又は診断剤として公知である。１ 本明細書の組成物を乾式分析要素に使用する場合、これ
を適当な担体物質中に吸収、含浸、被覆又は他の適当な
技法によって混入させることができる。有用な担体物質
は不溶性であり、水又は生理学的液体、例えば尿又は血
清と接触させたときに、その構造上の一体性を維持する
ものである。

有用な要素は、紙、多孔性粒状構造体、セルロース、ガ
ラス繊維、又は織布及び不織布（合成及び非合成）から
製造することができ、る。有用な乾式分析要素は、担体
物質中に分析組成物の溶液を吸収させ、乾燥することに
よって製造される。このような要素を製造するため有用
な物質及び操作は、例えば米国特許第３．０９２．４６
５号、同第３．８０２．８４２号、同第３，９１５，６
４７号、同第３，９１７．４５３号、同第３．９３６，
３５７号、同第４，２４８．８２９号、同第４．２５５
．３８４号及び同第４，２７０．９２０号明細書並びに
英国特許第２，０５２，０５７号明細書によって周知で
ある。

本発明の乾式分析要素は、少なくとも１個の多孔性拡散
帯域を有する。この帯域は、前記の自立性担体物質であ
ってよいが、別の非多孔性支持体上に担持されているの
が好ましい。このような支持体は、任意の適当な、寸法
安定性で、２００〜９００ｎｍの波長の電磁線を透過す
る、好ましくは透明な物質である。特定の要素のため選
択される支持体は、意図する検出方法（反射、透過又は
螢光分光分析）と認容性であるべきである。有用な支持
体は、紙、金属箔、ポリスチレン、ポリエステル、ポリ
カーボネート又はセルロースエステルを包含する。

多孔性拡散帯域は、任意の適当な繊維若しくは非繊維物
質又はその一方若しくは両方の混合物から製造すること
ができる。この帯域の空隙率及び平均孔径は、適用する
液体試料の種類に応じて変動しうる。

有用な拡散帯域は、例えば米国特許第４，２９２．２７
２号、同第３．９９２．１５８号、同第４．２５８，０
０１号及び同第４，４３０，４３６号明細書及び特開昭
５７　（１９８２）　−１０１７６０号公報に記載され
ているようにして製造することができる。拡散帯域は等
方性に多孔性である、すなわち、孔度が粒子、繊維又は
ポリマーストランド等の間の連続空間又は孔によって生
じるように帯域のどの方向でも同一であるのが望ましい
。

要素は、１個より多くの帯域、例えば１個以上の試薬帯
域、拡散帯域、記録帯域、媒染帯域、輻射線遮蔽帯域又
はフィルター帯域、下塗帯域、バリヤ帯域又は緩衝帯域
を有していてよい。帯域は、一般に、相互に液体接触〔
液体、試薬及び反応生成物が隣接帯域の重なった領域の
間を通過しうろことを意味する〕している。帯域は、別
々に塗布された、重ねられた層であるのが好ましいが、
一つの層に２以上の帯域が存在してもよい。

本発明の分析組成物の成分及び過酸化性物質、相互作用
組成物又は緩衝剤を要素の任意の帯域に混入することが
できる。個々の成分の位置は、臨床化学における当業者
の熟練の範囲内である。

本発明の要素において、組成物の成分の量は、広く変動
しうる。一般に、色素生成化合物は、少なくとも１０ｍ
ｇ／ｎ？、好ましくは３０〜６００ｍｇ／ｄの被覆量で
存在する。フェノール系発色カプラーは、一般に、少な
（とも１０ｍｇ／ｎｆ、好ましくは３０〜６００ｍｇ／
ｒｒｒの被覆量で存在する。陽イオン性媒染剤は、−Ｍ
に、少なくともＩＢ／ｎ？。

好ましくは５〜２５ｍｇ／ｎ（の被覆量で存在する。

過酸化性物質は、ペルオキシダーゼに関して、少なくと
も２５０００１．Ｕ、／ｒｒｆ、好まシ＜ハ５００００
〜１０００００　１．Ｕ、／ｎ？の被覆量で存在するこ
とができる。必須ではないが、望ましい他の種々の試薬
及び添加剤が要素中に当業者に公知の量で存在すること
ができる。

本発明により、分析方法に応じて異なる種々の要素を製
造することができる。任意の所望の幅の長いテープ、シ
ート、スライド又はチップを含めて種々の形で要素を形
成することができる。

本発明の分析は、手操作で又は自動的にすることができ
る。一般に、乾式要素を使用する場合、要素を供給口、
−ル、チップ包装物又は他の供給源から採取し、試験す
べき液体試料（例えば２００μβ以下）と、試料が要素
中の試薬と混合するように接触させることによって過酸
化水素又は被分析物を測定する。このような接触は、任
意の適当な方法で、例えば要素を試料中に漫°清するか
、又は好ましくは適当な分配手段を用いて一滴以上の試
料を手又は機械で要素に落とすことによって達成される
。

試料を施した後、要素をコンディショニング、例えば保
温、加熱等、任意の試験結果を得るのを促進又は容易に
するのに望ましい処理に付す。

過酸化水素又は被分析物の測定稈、色素生成化合物及び
フェノール系発色カプラーが反応して色素を形成する場
合に達成される。この色素は、肉眼又は６００ｎ＊以上
の波長で適当な分光手段及び操作を用いて検出すること
ができる。一般に、本発明の実施で生成した色素は、６
００ｎｍ以上の２８８Ｍ又は吸収最大を有する。

本明細書において使用する１、Ｕ、は、酵素活性に関す
る国際単位を表し、その酵素の標準ｐＨ及び温度条件下
に、毎分１マイクロモルの基質の変換を触媒するのに必
要な酵素活性の量が１　１．０．と定義される。

〔実施例〕

以下、実施例に従って本発明を更に詳しく説明するが、
本発明の技術的範囲をこれらの実施例に限定するもので
ないことはいうまでもない。

血上二工二種々のカプラーを用いた過酸化水素の溶液分
析 これらの例は、特定の色素生成化合物及び種々のフェノ
ール系カプラーを使用して溶液分析で過酸化水素を測定
するための本発明の詳細な説明するものである。

それぞれ、色素生成化合物２−（ベンゼンスルホニルヒ
ドラジノ）−５−二トロピリジン（メタノール中の０．
０２５％溶液ｏ、　１ｍｆｌ）、下記の第１表に示す発
色カプラー（メタノール中の０．０２５％溶液０．１ｍ
Ｑ、）、媒染剤ポリ　（スチレン−ヨーＮ−ベンジル−
Ｎ、Ｎ−ジメチル−Ｎ−ビニルベンジルアンモニウムク
ロリドーコージビニルベンゼン）（９９：９９：２モル
比）の１．８％ラテックス分散液０．２４及び燐酸塩緩
衝液（ｐＨ８）から４ｍ！にした本発明の分析組成物を
製造した。

媒染剤ラテックスを省いた以外は同様にして対照組成物
を製造した。

ペルオキシダーゼ（ｐＨ７の燐酸塩緩衝液中０．２％の
ものｏ、ｔｒＪ）及び過酸化水素３％を含む試験試料（
１滴）を各溶液に添加した。生成した各分析溶液を振盪
し、色素形成が完了した（０．５〜５分）後、生じた色
素の色相及び濃度（光学濃度、０、０．　）を観察した
。対照の分析は、下記の第１表に示したように６００ｎ
ｍより上の吸収をほとんど又は全（有しない色素を生じ
た。しかしながら、本発明の組成物は、下記の第１表に
示したように６００ｎｍ又はそれ以上に著しい吸収を有
する色素を生じた。色素濃度は、過酸化水素を除いてす
べての成分及び本発明の組成物を含むブランクに対して
測定した。

１に土に種々の色素生成化合物を使用した過酸化水素の
溶液分析 これらの例は、下記の第■表に示す数種の色素生成化合
物と共に、同じ発色カプラー（１−ナフトール）を２種
の濃度で使用した以外は、例１〜８と同様である。分析
を例１〜８に記載したように行った。

分析は、下記の第■表に示したように６００ｎｎ＋又は
それ以上に顕著な吸収を有する色素を生成した。対照溶
液（媒染剤を含まない）は、若干の混濁を有しており、
これが光学濃度の大部分をなすことが観察された。媒染
剤を含む溶液では、混濁はほとんど又は全く観察されな
かった。例１２、例１３、例１５及び例１７では、色素
生成は、１〜ナフトールの濃度が低いと、低かった。

（以下余白） 第一１−表 ベルオキシダーゼの存在下におけるｐｌ（８での種々の
色素生成化合物とｌ−ナフトールの 」 ＋ ＋ 十 十 Ｃ６，２５− ＋ 十 ＋ ＋ Ｈｔ　Ｏを及び１−ナフトールとの反応下記波長での光
学濃度 ＊　　　５５０ｒｖ＋　　　６００ｎｍ　　　６２５ｎ
ｍ　　　６５０ｎｍ　　　７５０ｎｍＯ，３０１，４１
１，８８１，５５０，０１０，１８０，１５０，１４０
，０９０，０６０，４１０，４８０，０８０，０００，
０００，１？　　　０．１４　　０．１２　　０，１０
　　０．０６０．５９　　０．５２　　０．４８　　０
．４５　　０．３４Ｈ，Ｏ□を添加したとき変色なし ０．１８　　０，１５　　０．１４　　０．１３　　０
．０８０．３６　　０．２９　　０．２６　　０．２１
　　０．１６０．０２　　０．０２　　０．０１　　０
．００　　０．０００．１８　　０．１４　　０．１３
　　０．１２　　０．０？０．６９　　０．６０　　０
．４２　　０．３０　　０．２００．０８　　０．０？
　　　０．０２　　０．００　　０．０００．２１　　
０．１８　　０．１６　　０．１３　　０．０７Ｍｉｉ
：乾式分析要素を使用するグルコースの乾式分析 この例は、下記の構造及び成分を存する乾式分析要素を
使用して試験液体中のグルコースの分析を説明するもの
である。

ポリ　（ビニルトルエンーコー’ｐ　−１−プチルスチ
レンーコーメタク リル酸）（６１：　３７　：　２重量比）拡散　ビーズ
　　　　　　　　　　　９０　ｇ／ｎ（層　　ポリ　（
ビニルピロリドン）　　　　２．７ｇ／ｎ？グルコース
オキシダーゼ　３７．０００１．Ｕ、／ｎｆペルオキシ
ダーゼ　　　　３５．５００１．Ｕ、／ｎｆ燐酸カリウ
ム緩衝液（ｐＨ６，５）　２．７　ｇｌｃｄゾニル（Ｚ
ＯＮＹＬ　ＦＳＮ　　　’　　　　０．２７　　　ｃｄ
ｌ、７−シヒドロキシナフタレン０．３４　ｇ　／　ｒ
ｄ２−（ベンゼンスルホニル− ヒドラジノ）−５−二トロ 記録　ピリジン　　　　　　　　　　０．５ｇ１０ｆ層
　　ポリ　（スチレン−ツーＮ−ベンジル−Ｎ、Ｎ−ジ
メチル−Ｎ−ビニル ベンジルアンモニウムクロリド− コージビニルベンゼン）（９９：９９ ：２モル重量）　　　　　　　　　　２ｇ／ｒｒｆ種々
の量の過酸化水素又はグルコースを含む試験液体の試料
（１０μｍ）を要素の拡散層に施した。３７℃で５分間
、保温した後、市販の分光光度計を使用して要素中の生
成した色素の反射濃度（Ｄえ）を６５０ｒｖ＋で測定し
た。得られた濃度を下記の第ｍ表に記録する。色素の濃
度は試験液体中の被分析物の量に比例した。被分析物を
含まない対照液体を同様に試験した。

（以下余白） 第■表 ρ　　　−グルコース 濃度　　　　　　　　　　濃度 」１１至ルと　一旦Ｌ　　」返ｌ旦ム　一旦り−００，
５６００，７２ ２，５１，１５１２，５１，１？ ５　　　　　１．６１　　　２５　　　１．４１１０　
　　　　２．０２　　　５０　　　１．７２０　　　　
　２．２２　　１００　　　２．０５〔発明の効果〕 本発明の分析は、多数の利点を有する。これは、過酸化
水素に応答して、６００ｎｍ以上の波長で検出されうる
色素を生成する。これにより本発明における色素の分光
光度計による検出は、ヘモグロビン及びビリルビンのよ
うな、一般に生物学的液体中に見られる潜在的分光妨害
物質を回避する。

これらの利点は、陽イオン性媒染剤の存在でフェノール
系発色カプラーと反応して、６００ｎｍ以上の波長で検
出されうる色素を生成しうる一定の色素生成化合物を使
用することによって達成される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、陽イオン性媒染剤及び構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒは水素、−ＳＯ＿２Ｒ＾３又は−ＳＯＮＲ＾３
   Ｒ＾４を表し、Ｒ＾１は電子吸引性基を表し、Ｒ＾２、
   Ｒ＾３及びＲ＾４はそれぞれ独立に水素、置換若しくは
   非置換アルキル基又は置換若しくは非置換アリール基を
   表し、ｎは１〜５の整数を表し、Ｚ＾１は置換若しくは
   非置換の５員〜１０員芳香族炭素同素環式又はヘテロ環
   式環を完成するために必要な炭素原子及び窒素原子を表
   す〕の色素生成化合物を含む、過酸化水素又は反応して
   過酸化水素を生成する被分析物測定用の分析組成物。 ２、陽イオン性媒染剤及び構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒは水素、−ＳＯ＿２Ｒ＾３又は−ＳＯＮＲ＾３
   Ｒ＾４を表し、Ｒ＾１は電子吸引性基を表し、Ｒ＾２、
   Ｒ＾３及びＲ＾４はそれぞれ独立に水素、置換若しくは
   非置換アルキル基又は置換若しくは非置換アリール基を
   表し、ｎは１〜５の整数を表し、Ｚ＾１は置換若しくは
   非置換の５員〜１０員芳香族炭素同素環式又はヘテロ環
   式環を完成するために必要な炭素原子及び窒素原子を表
   す〕の色素生成化合物を含む、過酸化水素又は反応して
   過酸化水素を生成する被分析物測定用の乾式分析要素。 ３、過酸化水素又は反応して過酸化水素を生成する被分
   析物を測定するにあたり、 Ａ、過酸化水素又は反応して過酸化水素を生成する被分
   析物を含むと思われる液体試料を 過酸化性活性を有する物質、 陽イオン性媒染剤、 フェノール系発色カプラー、及び 構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒは水素、−ＳＯ＿２Ｒ＾３又は−ＳＯＮＲ＾３
   Ｒ＾４を表し、Ｒ＾１は電子吸引性基を表し、Ｒ＾２、
   Ｒ＾３及びＲ＾４はそれぞれ独立に水素、置換若しくは
   非置換アルキル基又は置換若しくは非置換アリール基を
   表し、ｎは１〜５の整数を表し、Ｚ＾１は置換若しくは
   非置換の５員〜１０員芳香族炭素同素環式又はヘテロ環
   式環を完成するために必要な炭素原子及び窒素原子を表
   す〕の色素生成化合物と接触させ、そして Ｂ、過酸化水素又は被分析物の存在の結果として生成し
   た色素を６００ｎｍ以上の波長で検出する工程より成る
   、過酸化水素又は反応して過酸化水素を生成する被分析
   物の測定方法。