JPS6219094A - ピロロキノリンキノンの製造方法 - Google Patents
ピロロキノリンキノンの製造方法Info
- Publication number
- JPS6219094A JPS6219094A JP15923885A JP15923885A JPS6219094A JP S6219094 A JPS6219094 A JP S6219094A JP 15923885 A JP15923885 A JP 15923885A JP 15923885 A JP15923885 A JP 15923885A JP S6219094 A JPS6219094 A JP S6219094A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- methylamine
- methanol
- culture
- pyrroloquinolinequinone
- methylophaga
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ピロロキノリンキノンの製造法に関し、さら
に詳細にけ、細菌を使用したピロロキノリンキノンの製
造法に係わる。
に詳細にけ、細菌を使用したピロロキノリンキノンの製
造法に係わる。
ピロロキノリンキノン（以下ＰＱＱと記す）は、別名２
，７．９−）リカルボキシ−（Ｈ−ピロロ（２，３ｆ）
キノリン−４，５−ジオンであり、化学構造式は以下の
如くである。
，７．９−）リカルボキシ−（Ｈ−ピロロ（２，３ｆ）
キノリン−４，５−ジオンであり、化学構造式は以下の
如くである。
■■
ＰＱＱは、１９７９年に、メタノール資化性細菌のメタ
ノール脱水素酵素の補酵素として精製、結晶化され、構
造決定がなされた。（＆Ａ。
ノール脱水素酵素の補酵素として精製、結晶化され、構
造決定がなされた。（＆Ａ。
Ｓａｌ量５ｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ、、 Ｎａｔ
ｕｒｅ 、２８０巻、ｐ８４３さらに、近年、細菌に
かぎらず、真核生物のカビ、酵母、さらには、哺乳動物
にもＰＱＱ酵素が所在していることが明らかになった。
ｕｒｅ 、２８０巻、ｐ８４３さらに、近年、細菌に
かぎらず、真核生物のカビ、酵母、さらには、哺乳動物
にもＰＱＱ酵素が所在していることが明らかになった。
このように、ＰＱＱは、補酵素として酵素反応または物
質代謝系を活性化するものであり、医薬品として重要な
役割を果す物質と考えられている。
質代謝系を活性化するものであり、医薬品として重要な
役割を果す物質と考えられている。
〔従来技術１発明が解決しようとする問題点〕従来、Ｐ
ＱＱの製造法としては、有機化学合成法が知られている
（例えば、ＪＡＣ８，、第１０３巻、５５９９〜５６０
０頁（１９８１））。
ＱＱの製造法としては、有機化学合成法が知られている
（例えば、ＪＡＣ８，、第１０３巻、５５９９〜５６０
０頁（１９８１））。
異性体をはじめとする副生物が生成され、この副生物の
除去のために煩雑な操作を必要とし、またＰＱＱの収率
も低いという問題があった。
除去のために煩雑な操作を必要とし、またＰＱＱの収率
も低いという問題があった。
また、発酵法による製造法（特開５９−１１３８９６）
も知られているが、その生産量は、。
も知られているが、その生産量は、。
０．１〜０．３Ｘ１０ Ｍ／Ｊ （培養液１！当＃）
４μｇ〜１２μｇ）と非常に低く、工業的な製造法に適
しているとはいえない。
４μｇ〜１２μｇ）と非常に低く、工業的な製造法に適
しているとはいえない。
本発η者らは、ＰＱＱを多量に生産する細菌を見出すべ
く研究を重ねた結果、メチーファーガ属に属する細菌が
ＰＱＱを多量に生産することを見出して、本発明を完成
した。
く研究を重ねた結果、メチーファーガ属に属する細菌が
ＰＱＱを多量に生産することを見出して、本発明を完成
した。
すなわち、本発明は、メチロファーガ属に属し、ピロロ
キノリンキノンを生産する能力を有し、メタノールおよ
び／ｌたはメチルアミンを資化しうる細菌を、メタノー
ルあるいはメチルアミンを炭素源とする培地中に培養し
、培養液または培養上澄液から分離採取することを特徴
トスるピロロキノリンキノンの製造法である。
キノリンキノンを生産する能力を有し、メタノールおよ
び／ｌたはメチルアミンを資化しうる細菌を、メタノー
ルあるいはメチルアミンを炭素源とする培地中に培養し
、培養液または培養上澄液から分離採取することを特徴
トスるピロロキノリンキノンの製造法である。
本発明において使用される細菌は、１９８５年Ｊａｎｖ
ｉｅｒ らにより新属として提案された（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、 Ｖｏ
ｌ、 ５５． ｐ、 １３１−１３９ （１９８５）
）メチロファーガ属に属する細菌であり、たとえばメチ
ロファーガ マリーナおよびメチロファーガ サラシカ
などの菌種が知うれている。本発明で使用される細菌は
メチロファーガ属に属し、ＰＱＱを生産し、かつメタノ
ールおよび／またはメチル７ｉンを資化しうる菌株であ
ればいずれでもよく、これらの菌株の代表例としてメチ
ロファーガ マリーナ ＮＣＭＢ ２２４４、メチロ
ファーガ サラシカ ＮＣＭＢ ２１６２およびメチ
ロファーガ サラシカ ＮＣＭＢ ２１６．５などが
ある。これらの菌株は、いずれも公知菌株であり、菌学
的性質はＩｎｔｅｒｎａ目ｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｓｙｓ −ｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ、 ５５ 、ｐ、１５１−
１５９ （１９８５）に記載されている。また、これら
の菌株より得られた変異株も使用することが出来る。
ｉｅｒ らにより新属として提案された（Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、 Ｖｏ
ｌ、 ５５． ｐ、 １３１−１３９ （１９８５）
）メチロファーガ属に属する細菌であり、たとえばメチ
ロファーガ マリーナおよびメチロファーガ サラシカ
などの菌種が知うれている。本発明で使用される細菌は
メチロファーガ属に属し、ＰＱＱを生産し、かつメタノ
ールおよび／またはメチル７ｉンを資化しうる菌株であ
ればいずれでもよく、これらの菌株の代表例としてメチ
ロファーガ マリーナ ＮＣＭＢ ２２４４、メチロ
ファーガ サラシカ ＮＣＭＢ ２１６２およびメチ
ロファーガ サラシカ ＮＣＭＢ ２１６．５などが
ある。これらの菌株は、いずれも公知菌株であり、菌学
的性質はＩｎｔｅｒｎａ目ｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｓｙｓ −ｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ、 ５５ 、ｐ、１５１−
１５９ （１９８５）に記載されている。また、これら
の菌株より得られた変異株も使用することが出来る。
なお、前記における“ＮＣＭＢ″′は、その菌がＮＣＭ
Ｂ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
ｏｆＭａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ａｂｅｒｄ
ｅｅｎ、 ５ｃｈｏｔｔｌａｎｄ）に保存されている
ことを示す。
Ｂ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
ｏｆＭａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ａｂｅｒｄ
ｅｅｎ、 ５ｃｈｏｔｔｌａｎｄ）に保存されている
ことを示す。
これらのＰＱＱ生産細菌を培養するに当って用いられる
栄養培地もしくは培養液は、主炭素源としてメタノール
および／ｌたはメチルアミン（ＣＨｓＮＨｇ）を含有す
ることが必要である。
栄養培地もしくは培養液は、主炭素源としてメタノール
および／ｌたはメチルアミン（ＣＨｓＮＨｇ）を含有す
ることが必要である。
なお、メチルア曙ンとしてメチルアミン塩酸塩などの塩
を使用することができる。
を使用することができる。
メタノールおよびメチルアミンの培養液中のそれぞれの
濃度は、使用する細菌などによって異り、−概に特定し
え々いが、実用上一般にメタノールについては３ｗｔ％
以下、好ましくは１゜５ｗｔ％ 以下、またメチルアミ
ンについては１ｗｔ％ 以下、好ましくは０．５ｗｔ９
６以下とさ＋ れる。これらの菌株は、いずれも生育にＮａ と２＋ Ｍｇ を要求するので、培地または培養液にＮａ＋お
よび／ｌたはＭｇ＋＋が存在している必要がある。メチ
ロファーガ属に属する細菌は海洋細菌であることから、
Ｎａ＋の給源として海水を培地中の水として使用するこ
とが好ましいが、培養液中の濃度が２〜４９６となるよ
うに食塩を添加してもよい。
濃度は、使用する細菌などによって異り、−概に特定し
え々いが、実用上一般にメタノールについては３ｗｔ％
以下、好ましくは１゜５ｗｔ％ 以下、またメチルアミ
ンについては１ｗｔ％ 以下、好ましくは０．５ｗｔ９
６以下とさ＋ れる。これらの菌株は、いずれも生育にＮａ と２＋ Ｍｇ を要求するので、培地または培養液にＮａ＋お
よび／ｌたはＭｇ＋＋が存在している必要がある。メチ
ロファーガ属に属する細菌は海洋細菌であることから、
Ｎａ＋の給源として海水を培地中の水として使用するこ
とが好ましいが、培養液中の濃度が２〜４９６となるよ
うに食塩を添加してもよい。
さらに、培地成分として、通常の窒素源および無機物々
どの適量が使用される。窒素源としては、通常は、たと
えば硫酸アンモニウム、尿ｇ、硝１１７７モニウム、リ
ン酸アンモニウム、ペプトンおよび肉エキスなどが用い
られ、無機塩類としては、ナトリウム塩、リン酸塩、鉄
塩その他必要に応じて微量金属塩が用いられる。
どの適量が使用される。窒素源としては、通常は、たと
えば硫酸アンモニウム、尿ｇ、硝１１７７モニウム、リ
ン酸アンモニウム、ペプトンおよび肉エキスなどが用い
られ、無機塩類としては、ナトリウム塩、リン酸塩、鉄
塩その他必要に応じて微量金属塩が用いられる。
さらに、アミノ酸、核酸、ビタミン、酵母エキスおよび
麦芽エキスなどの生育促進物質も使用される。また、使
用菌株が栄養要求性を示す場合には、その要求性物質を
培地に添加する必要がある。
麦芽エキスなどの生育促進物質も使用される。また、使
用菌株が栄養要求性を示す場合には、その要求性物質を
培地に添加する必要がある。
培養条件は使用菌株によって異り一概に特定しえないが
、実用上は、培＠温度は、通常２５〜４５℃程度の範囲
とされ、培養ｐＨは、通常６〜８程度の範囲とされる。
、実用上は、培＠温度は、通常２５〜４５℃程度の範囲
とされ、培養ｐＨは、通常６〜８程度の範囲とされる。
培養方式は、回分培養あるいは連続培養のいずれでもよ
い。窒素源として、アンモニウム塩を使用した場合は菌
株が増殖するに伴って培養液のｐＨが低下するので、培
養期間中の培地のｐＨを一定に保つために、アンモニア
、苛性カリ、もしくは苛性ソーダなどを添加して、培養
液のｐＨを調節する必要がある。これらの中で７ンモエ
アが特に好−＆ Ｌｌ、ｑ。
い。窒素源として、アンモニウム塩を使用した場合は菌
株が増殖するに伴って培養液のｐＨが低下するので、培
養期間中の培地のｐＨを一定に保つために、アンモニア
、苛性カリ、もしくは苛性ソーダなどを添加して、培養
液のｐＨを調節する必要がある。これらの中で７ンモエ
アが特に好−＆ Ｌｌ、ｑ。
このようにして培養して得られた培養液からたとえばろ
過もしくは遠心分離などの通常の固液分離手段によって
、菌体を除去し、培養上澄液を得る。得られ九培養上澄
液あるいは場合によっては菌体を含有する培養液そのま
まからＰＱＱを分離する。
過もしくは遠心分離などの通常の固液分離手段によって
、菌体を除去し、培養上澄液を得る。得られ九培養上澄
液あるいは場合によっては菌体を含有する培養液そのま
まからＰＱＱを分離する。
培養上澄液および培養液からのＰＱＱの分離、採取方法
は、それ自体公知の方法によって行なうことか出来る。
は、それ自体公知の方法によって行なうことか出来る。
すなわち、たとえばイオン交換クロマトグラフィー、濃
縮物のゲル口過法。
縮物のゲル口過法。
凍結乾燥物の溶媒抽出量あるいはアフィニイテイ クロ
マトグラフィーなどが利用できる。
マトグラフィーなどが利用できる。
このようにして分離、採取されたＰＱＱの同定ニは、ペ
ーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、
元素分析、核磁気共鳴スペクトルおよび質址分析などの
手段が用いられる。
ーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、
元素分析、核磁気共鳴スペクトルおよび質址分析などの
手段が用いられる。
また、定量は、たとえば飴山らの［シュートス
モナス エルギノーザのＤ−グルコ−ｓ−脱水素酵素活
性欠損変異株を用いる方法（ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ
、 １３０巻、１７９−１８３頁、（１９８１年）」あ
るいは高速液体クロマトグラフィーなどの定量法によっ
て行なうことが出来る。
性欠損変異株を用いる方法（ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ
、 １３０巻、１７９−１８３頁、（１９８１年）」あ
るいは高速液体クロマトグラフィーなどの定量法によっ
て行なうことが出来る。
以下の実施例によって本発明をさらに具体的に説明する
。
。
実施例 １
海水１１あたり（ＮＨ４）２Ｓ０４ ５ｇ、ＫＨ２ＰＯ
４１，４ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４２，１ｇ、ＭｇＳＯ４・７
Ｈｇ００、２ｇ、ＣａＣｌ２−２Ｈ２０３０１ｍ？、Ｆ
ｅＣ６Ｈ６０ｒ−ＸＨ２０３０１１１９、ＭｎＣＡ！ｇ
・４Ｈ２０５＃、Ｚｎ５Ｏ＊−７Ｈ２０５１１１＆、Ｃ
ｕ５Ｏｔ−５Ｈ２００，５ｑ 、酵母工＋７．０，２
９、ビタ１７ Ｂ、２１０１１９オよびメタノール
８ｍｌを溶解し、ｐＨが７．１に調整された液 ２０口
ｄを１１容三角フラスコに入れ１２０℃で２０分間殺菌
し、これを培地とした。
４１，４ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４２，１ｇ、ＭｇＳＯ４・７
Ｈｇ００、２ｇ、ＣａＣｌ２−２Ｈ２０３０１ｍ？、Ｆ
ｅＣ６Ｈ６０ｒ−ＸＨ２０３０１１１９、ＭｎＣＡ！ｇ
・４Ｈ２０５＃、Ｚｎ５Ｏ＊−７Ｈ２０５１１１＆、Ｃ
ｕ５Ｏｔ−５Ｈ２００，５ｑ 、酵母工＋７．０，２
９、ビタ１７ Ｂ、２１０１１９オよびメタノール
８ｍｌを溶解し、ｐＨが７．１に調整された液 ２０口
ｄを１１容三角フラスコに入れ１２０℃で２０分間殺菌
し、これを培地とした。
とれに前記と同様な培地を用いて、３０℃で２４時間前
培養した各菌株の培養液を１容量％接種し、３０℃で回
転振とう培養を行なった。
培養した各菌株の培養液を１容量％接種し、３０℃で回
転振とう培養を行なった。
培養開始後３６時間で培養液のメタノール濃度は０．０
０１％以下となった。この培養液を遠心分離し、上澄液
を得、上澄液のＰＱＱ含量を定量した。結果を第１表に
示す。
０１％以下となった。この培養液を遠心分離し、上澄液
を得、上澄液のＰＱＱ含量を定量した。結果を第１表に
示す。
＝９−
第 １ 表
実施例 ２
海水のかわりに純水と、純水１！あたり３０ｇのＮａＣ
４とを使用した培地を使用したほかは実施例１と同様に
して行なった。培養開始後３６時間で培養液中のメタノ
ール濃度ｈｏ、Ｏ。
４とを使用した培地を使用したほかは実施例１と同様に
して行なった。培養開始後３６時間で培養液中のメタノ
ール濃度ｈｏ、Ｏ。
１９６以下と々つだ。結果を第２表に示す。
Ｍ２表
実施例 ３
メタノールのかわりに、海水１１あたり５ｇのメチルア
ミン塩酸塩を含有した培地を使用したほかは実施例１と
同様にして行なった。培養終期における培養液のメチル
アミン濃度は０．（１７％であった。結果を第３表に示
す。
ミン塩酸塩を含有した培地を使用したほかは実施例１と
同様にして行なった。培養終期における培養液のメチル
アミン濃度は０．（１７％であった。結果を第３表に示
す。
第３表
実施例 ４
メタノールのかわ詐に、純水１１あたり５ｇのメチルア
ミン塩酸塩を含有した培地を使用したほかは実施例１と
同様に行々つた。培養終期における培養液のメチルアミ
ン濃度は０．す％であった。結果を第４表に示す。
ミン塩酸塩を含有した培地を使用したほかは実施例１と
同様に行々つた。培養終期における培養液のメチルアミ
ン濃度は０．す％であった。結果を第４表に示す。
第 ４ 表
〔発明の効果〕
本発明によれば、細菌を使用してピロロキノリンキノン
を安価にかつ安定的に得ることが可能である。
を安価にかつ安定的に得ることが可能である。
特許出願人 三菱瓦斯化学株式会社
代表者長野和吉
Claims (1)
- メチロフアーガ属に属し、ピロロキノリンキノンを生産
する能力を有し、メタノールおよび／またはメチルアミ
ンを資化しうる細菌を、メタノールあるいはメチルアミ
ンを炭素源とする培地中に培養し、培養液または培養上
澄液からピロロキノリンキノンを分離採取することを特
徴とするピロロキノリンキノンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15923885A JPS6219094A (ja) | 1985-07-18 | 1985-07-18 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
| EP19860303110 EP0206471B1 (en) | 1985-04-24 | 1986-04-24 | Process for preparation of pyrrolo-quinoline quinone |
| DE19863686960 DE3686960T2 (de) | 1985-04-24 | 1986-04-24 | Verfahren zur herstellung von pyrrolochinolinchinon. |
| US08/091,884 US5344768A (en) | 1985-04-24 | 1993-07-14 | Process for the preparation of pyrrolo-quinoline quinone |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15923885A JPS6219094A (ja) | 1985-07-18 | 1985-07-18 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6219094A true JPS6219094A (ja) | 1987-01-27 |
| JPH0449398B2 JPH0449398B2 (ja) | 1992-08-11 |
Family
ID=15689361
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15923885A Granted JPS6219094A (ja) | 1985-04-24 | 1985-07-18 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6219094A (ja) |
-
1985
- 1985-07-18 JP JP15923885A patent/JPS6219094A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0449398B2 (ja) | 1992-08-11 |
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