JPS62155299A - 犬のｃ−反応性蛋白とその抗体の製法およびその簡易迅速定量法 - Google Patents
犬のｃ−反応性蛋白とその抗体の製法およびその簡易迅速定量法Info
- Publication number
- JPS62155299A JPS62155299A JP60295925A JP29592585A JPS62155299A JP S62155299 A JPS62155299 A JP S62155299A JP 60295925 A JP60295925 A JP 60295925A JP 29592585 A JP29592585 A JP 29592585A JP S62155299 A JPS62155299 A JP S62155299A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- crp
- canine
- serum
- reactive protein
- treated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
書ではＣＲＰと略記して表わす。）とその分離、精製方
法およびそれに対する特異的な抗体の製法、さらに抗犬
ＣＲＰ抗体感作ラテックス試薬を用いた犬ＣＡＰの簡易
迅速定量法に関するものである。
法およびそれに対する特異的な抗体の製法、さらに抗犬
ＣＲＰ抗体感作ラテックス試薬を用いた犬ＣＡＰの簡易
迅速定量法に関するものである。
ＣＲＰはカルシウム イオンの存在下で肺炎双球菌の細
胞壁に含有されるＣ多糖体と特異的に沈降反応を呈する
ヒトの血清蛋白として発見されたｏＣＩＬＰはＣ多糖体
に対する抗体ではなく、急性炎症時に増加する急性期反
応性蛋白であるとされ、ヒトでは急性炎症や組織破壊に
伴ってＣＲＰが急激に正常時の５００〜１．０００倍に
まで増加し、症状の回復と共に速やかに消失することが
知られている。そのだめ０Ｉｔｌ）の濃度が疾患の活動
性経過ならびに予後判定の指標とされ、ＣＲＰが増加す
る疾患の診断に際しては必須の検査項目となっている。
胞壁に含有されるＣ多糖体と特異的に沈降反応を呈する
ヒトの血清蛋白として発見されたｏＣＩＬＰはＣ多糖体
に対する抗体ではなく、急性炎症時に増加する急性期反
応性蛋白であるとされ、ヒトでは急性炎症や組織破壊に
伴ってＣＲＰが急激に正常時の５００〜１．０００倍に
まで増加し、症状の回復と共に速やかに消失することが
知られている。そのだめ０Ｉｔｌ）の濃度が疾患の活動
性経過ならびに予後判定の指標とされ、ＣＲＰが増加す
る疾患の診断に際しては必須の検査項目となっている。
医学領域においてはヒトＣＲＰの生物学的性状、その濃
度測定の臨床的意義の解明が進められているが、獣医学
領域においてはＯＲＰの意義は勿論のこと、その存在す
ら殆んど知られておらず、その分離、精製の条件につい
ても知られていないのが現状であった。
度測定の臨床的意義の解明が進められているが、獣医学
領域においてはＯＲＰの意義は勿論のこと、その存在す
ら殆んど知られておらず、その分離、精製の条件につい
ても知られていないのが現状であった。
本発明者らは犬血清中にＣＲＰの存在を初めて確認する
と共に、これを分離することに成功し、その分離、精製
法を確立して、その物理化学的性状をも初めて明らかに
した。
と共に、これを分離することに成功し、その分離、精製
法を確立して、その物理化学的性状をも初めて明らかに
した。
すなわち、犬のＯＲＰについては１９７０年にリレイ
（Ｒ１１ｇ＞ ） らがリン酸セルロースを用いたア
フィニイテークロマトグラフィーにより実験的外科手術
後の犬の急性相血清からＯＲＰを分離し、これを用いて
ヒト、サルなどのＯＲＰとの抗原性の比較を行なってい
るが（Ｒ１１ｔｐ 、 Ｒ，Ｆ 及びＣｏｌｅｍａｎ
、 Ｍ、に、； Ｃ１１ｎ、Ｃｈｉｍ、ｈｃｔａ、 ３
０巻４８３−４９６頁、（１９７０））、分離物の純度
も不明であって物理化学的特性の記載もされていない。
（Ｒ１１ｇ＞ ） らがリン酸セルロースを用いたア
フィニイテークロマトグラフィーにより実験的外科手術
後の犬の急性相血清からＯＲＰを分離し、これを用いて
ヒト、サルなどのＯＲＰとの抗原性の比較を行なってい
るが（Ｒ１１ｔｐ 、 Ｒ，Ｆ 及びＣｏｌｅｍａｎ
、 Ｍ、に、； Ｃ１１ｎ、Ｃｈｉｍ、ｈｃｔａ、 ３
０巻４８３−４９６頁、（１９７０））、分離物の純度
も不明であって物理化学的特性の記載もされていない。
人血清より八ＣＲＰを分離する方法として知られている
Ｌ−α−レシチンと反応させる方法を犬血清より犬ＣＲ
Ｐの分離に応用したが収量が悪く、実用には向かないこ
とが確認された。そこで、本発明者らは鋭意検討の結果
、イオン交換クロマトグラフィーやブロック電気泳動法
などを組み合わせた方法により比較的収率よく、純度の
高い犬ＣＲＰの分離、精製に成功して本願に及んだ次第
である。
Ｌ−α−レシチンと反応させる方法を犬血清より犬ＣＲ
Ｐの分離に応用したが収量が悪く、実用には向かないこ
とが確認された。そこで、本発明者らは鋭意検討の結果
、イオン交換クロマトグラフィーやブロック電気泳動法
などを組み合わせた方法により比較的収率よく、純度の
高い犬ＣＲＰの分離、精製に成功して本願に及んだ次第
である。
実施し１１１ 感染犬血清よりのＣＲＰの分離、精製
（供試血清）
実験大として２才の雌ビーグル犬を選び、その腹腔内に
１，６Ｘ１０ 個／ｚｔのスタフィロコッカス オウ
レウスの２ｇｔを接種して、急性炎症を起こさせ、その
１〜２日後に全採血して血清を採る。
１，６Ｘ１０ 個／ｚｔのスタフィロコッカス オウ
レウスの２ｇｔを接種して、急性炎症を起こさせ、その
１〜２日後に全採血して血清を採る。
（ＣＲＰの精製）
ＤＥＡＥ−セフアセＡ／ （８ｔｐｈａｔｚｌ 、 ７
アル？ シア ファイン ケミカル社商品名）を用いて
急性相血清の塩濃度上昇法による連続溶出を実施した結
果、６分画を得た。各分画を濃縮し、免疫電気泳動法で
成分分析を行ない、第１峰として得られた未吸着分画に
ＣＲＰが存在することが確認された。この分画には、Ｃ
ＲＰ以外の成分としてＩｇＧ、トランスフェリンならび
にセルロブラスミンと思われる蛋白成分の混入が認めら
れた。
アル？ シア ファイン ケミカル社商品名）を用いて
急性相血清の塩濃度上昇法による連続溶出を実施した結
果、６分画を得た。各分画を濃縮し、免疫電気泳動法で
成分分析を行ない、第１峰として得られた未吸着分画に
ＣＲＰが存在することが確認された。この分画には、Ｃ
ＲＰ以外の成分としてＩｇＧ、トランスフェリンならび
にセルロブラスミンと思われる蛋白成分の混入が認めら
れた。
ＣＲＰを含む第１峰の分画から混入物を除去する目的で
、さらにＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０（ファルマ
シア ファイン ケミカル社商標名）を用いて段階溶出
によ、る分画を行なった。各成分を免疫電気泳動法で検
定しつつ０．２５Ｍ食塩加０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩衝
液（ｐＨ７，６）を用いて溶出した分画からＣＲＰを主
成分とする分画が得られた。
、さらにＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０（ファルマ
シア ファイン ケミカル社商標名）を用いて段階溶出
によ、る分画を行なった。各成分を免疫電気泳動法で検
定しつつ０．２５Ｍ食塩加０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩衝
液（ｐＨ７，６）を用いて溶出した分画からＣＲＰを主
成分とする分画が得られた。
次に■りＧを除去するために、さらにプロティンＡ−セ
ファロース０Ｌ４Ｂ（ファルマシア ファイン ケミカ
ル社商標名）カラムを用いてアフィニイテイークロマト
グラフイーを実施した。
ファロース０Ｌ４Ｂ（ファルマシア ファイン ケミカ
ル社商標名）カラムを用いてアフィニイテイークロマト
グラフイーを実施した。
これらの分画の成分分析を行なった結果、混入していた
イ／ムノグロプリン（以下Ｉ１０で表わす）はすべてプ
ロティンＡと結合した未吸着分画のＣＲＰから完全に分
離されていることが確認できた。
イ／ムノグロプリン（以下Ｉ１０で表わす）はすべてプ
ロティンＡと結合した未吸着分画のＣＲＰから完全に分
離されていることが確認できた。
得られたＣＲＰ分画に混入している他の２成分の易動度
がＣＲＰと大きく異なることから、それらを分離する目
的で分離電気泳動法を実施した結果、抗原孔から１備離
れた陰極側のスロー（Ｓ ／ ｍｕ ）−γ位にＣＲＰ
を単一成分として得ることができた。
がＣＲＰと大きく異なることから、それらを分離する目
的で分離電気泳動法を実施した結果、抗原孔から１備離
れた陰極側のスロー（Ｓ ／ ｍｕ ）−γ位にＣＲＰ
を単一成分として得ることができた。
かくして分離されたＣＲＰは免疫電気泳動法、オークタ
ローニー法ならびにディスク電気泳動法などによってい
ずれも単一成分であることが確認された。収率は原料血
清２０ｙｎｔから約１．５ ｍｙの割合でＣ１ＬＰが得
られた。
ローニー法ならびにディスク電気泳動法などによってい
ずれも単一成分であることが確認された。収率は原料血
清２０ｙｎｔから約１．５ ｍｙの割合でＣ１ＬＰが得
られた。
本発明の犬ＣＲＰを抗原として家兎およびヤギに免疫し
て得られた抗血清はいずれもＣＲＰに特異的であった。
て得られた抗血清はいずれもＣＲＰに特異的であった。
そして、これらの抗血清はＣＲＰを含有する急性相血清
との間に免疫電気泳動法で単一な沈降線を形成し、オー
クタロニー法では精製ＣＩＬＰと互いに融合し、混入物
の存在は認めなかった。
との間に免疫電気泳動法で単一な沈降線を形成し、オー
クタロニー法では精製ＣＩＬＰと互いに融合し、混入物
の存在は認めなかった。
本発明の犬ＣＲＰを六〇ＲＰとの比較においてその性状
を示せば下記の通りであって：第１表 ヒトおよびイヌＣＲＰの主な物理化学的性状※抗原性を
失う温度と時間 これらの性状の差異から、ヒトとイヌとは免疫学的には
一部共通抗原を有するとは言い得ても、市販されている
六Ｃ几Ｐの検査試薬をそのまま犬へ適用することは困難
であり、両者は別種のものとして区別し得る。換言すれ
ば、本発明の分離に係る犬Ｃ几Ｐは従来知られていない
全く新しい蛋白質であることが確言できる。
を示せば下記の通りであって：第１表 ヒトおよびイヌＣＲＰの主な物理化学的性状※抗原性を
失う温度と時間 これらの性状の差異から、ヒトとイヌとは免疫学的には
一部共通抗原を有するとは言い得ても、市販されている
六Ｃ几Ｐの検査試薬をそのまま犬へ適用することは困難
であり、両者は別種のものとして区別し得る。換言すれ
ば、本発明の分離に係る犬Ｃ几Ｐは従来知られていない
全く新しい蛋白質であることが確言できる。
本発明の精製犬ＣＲＩ’の物理化学的性状の詳細は下記
の通りである： （分子量の測定） 力２ムゲル濾過法と５ＤＳ−ポリアクリルアミ子量は１
５７．０００であった。５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法は厚さ１ＲＭの薄層ゲルを用いて常法通り
実施した。ＣＲＰは２本のバンドとして観察され、これ
らの平均分子量は易動度の速い成分が７０，０００で、
遅い成分が８５，０００であシ、その合計分子量は１５
５，０００で前記したゲル濾過法で得られた値に極めて
近似している。なお、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動法で２本のバンドが観察されたのは、前処理と
してＣＲＰに還元剤を加えて処理したため−Ｓ−８−（
ジスルフィド）結合が切断されてサブユニットに分れた
結果と考えられる。
の通りである： （分子量の測定） 力２ムゲル濾過法と５ＤＳ−ポリアクリルアミ子量は１
５７．０００であった。５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法は厚さ１ＲＭの薄層ゲルを用いて常法通り
実施した。ＣＲＰは２本のバンドとして観察され、これ
らの平均分子量は易動度の速い成分が７０，０００で、
遅い成分が８５，０００であシ、その合計分子量は１５
５，０００で前記したゲル濾過法で得られた値に極めて
近似している。なお、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動法で２本のバンドが観察されたのは、前処理と
してＣＲＰに還元剤を加えて処理したため−Ｓ−８−（
ジスルフィド）結合が切断されてサブユニットに分れた
結果と考えられる。
（ＣＲＰの等電点）
薄層ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法を実施し
た結果、ＣＲＰは単一なバンドとして確認され、また泳
動に用いたゲル内には良好なｐＨ勾配の形成が認められ
た。このｐＨ勾配から求めたＣＲＰ固有の等電点け４．
７５であった。
た結果、ＣＲＰは単一なバンドとして確認され、また泳
動に用いたゲル内には良好なｐＨ勾配の形成が認められ
た。このｐＨ勾配から求めたＣＲＰ固有の等電点け４．
７５であった。
（ＣＲＰの易動度）
免疫電気泳動法でスローγ位の易動度を有する蛋白であ
ることが認められ、また血清ＣＲＰと本発明の精製ＣＥ
Ｐとの間にはほとんど差異が認められなかった。
ることが認められ、また血清ＣＲＰと本発明の精製ＣＥ
Ｐとの間にはほとんど差異が認められなかった。
（Ｃ１１，Ｐの耐熱性）
本発明Ｃ几Ｐは７０°ｃ１１５分間の加熱により完全に
抗原性を失う易熱性の蛋白である。
抗原性を失う易熱性の蛋白である。
実施例２ 犬ＣＲＰ抗体の製造
家兎１羽当りの１回の免疫量が１．５Ｍｇになるように
調製したＣＲＰを滅菌蒸溜水で５倍稀釈し、これを等量
のフロイント完全アジュバント（ディフコ社製品）と混
和して免疫原とした。１〜２週間隔で合計６回の免疫を
重ね、ＣＲＰに対する抗体を含有する家兎抗犬ＣＲＰ血
清を作成した。
調製したＣＲＰを滅菌蒸溜水で５倍稀釈し、これを等量
のフロイント完全アジュバント（ディフコ社製品）と混
和して免疫原とした。１〜２週間隔で合計６回の免疫を
重ね、ＣＲＰに対する抗体を含有する家兎抗犬ＣＲＰ血
清を作成した。
このようにして得られた特異抗血清は、一般的な特異抗
体の確認法、例えば免疫電気泳動法やオークタロニー法
等、によって精製した犬ＣＲＰならびに犬の急性相血清
と特異な沈降線を生ずることによシ抗体ができたことが
確認された。
体の確認法、例えば免疫電気泳動法やオークタロニー法
等、によって精製した犬ＣＲＰならびに犬の急性相血清
と特異な沈降線を生ずることによシ抗体ができたことが
確認された。
この杭穴ＣＲＰ抗体を用い、犬の正常時と、炎症や外科
手術により組織破壊が生じた際の血清中ＣＲＰを測定し
、疾患の活動性、経過ならびに予後との関係を検討した
。
手術により組織破壊が生じた際の血清中ＣＲＰを測定し
、疾患の活動性、経過ならびに予後との関係を検討した
。
外科手術には２才のピーグル犬（雌）を用い、胃切開術
および卵巣・子宮摘出術に各２頭ずつ供試した。術前な
らびに術後の血清ＣＲＰ濃度は本抗体を用いた一元放射
免疫拡散法（Ｓ’ＩＬＩＤと称する）で測定し、それら
の成績を下記第２および６表、に示した。
および卵巣・子宮摘出術に各２頭ずつ供試した。術前な
らびに術後の血清ＣＲＰ濃度は本抗体を用いた一元放射
免疫拡散法（Ｓ’ＩＬＩＤと称する）で測定し、それら
の成績を下記第２および６表、に示した。
第２表
胃切開術例の血清Ｃ几Ｐ濃度とラテックス凝集反応
（注：数字はμ″？／ｌｔ値を表わす）第３表
卵巣・子宮摘出例の血’ＩＩｃ Ｒ，Ｐ濃度とｂテック
ス凝集反応 （注：数字はμ？１ｔｔｔｌ値を表わす）すなわち、術
前の血清ではＣＲＰを検出することができなかったが、
術後６時間から検出が可能であった。いずれの実験穴に
おいても術後１日が最も高いＣ几Ｐ濃度を示し、その後
漸次減少傾向がみられた。卵巣・子宮摘出術を施した実
験穴４膿による軽度の口に開が認められたこととペニシ
リンの再度投与によって創傷部が治癒し、ＣＲＰが再度
減少したことなどから、抜糸時に細菌の２次感染があっ
たものと考えられる。
ス凝集反応 （注：数字はμ？１ｔｔｔｌ値を表わす）すなわち、術
前の血清ではＣＲＰを検出することができなかったが、
術後６時間から検出が可能であった。いずれの実験穴に
おいても術後１日が最も高いＣ几Ｐ濃度を示し、その後
漸次減少傾向がみられた。卵巣・子宮摘出術を施した実
験穴４膿による軽度の口に開が認められたこととペニシ
リンの再度投与によって創傷部が治癒し、ＣＲＰが再度
減少したことなどから、抜糸時に細菌の２次感染があっ
たものと考えられる。
以上の成績から犬においても急性炎症や組織破壊時に血
清中ＯＲＰの濃度が急激に上昇し、治癒に伴って急減し
、ＣＲＰの測定は臨床面で有益な生体の情報を提供する
ものであることを知った。
清中ＯＲＰの濃度が急激に上昇し、治癒に伴って急減し
、ＣＲＰの測定は臨床面で有益な生体の情報を提供する
ものであることを知った。
血清中ＣＲＰ濃度の測定には免疫学的手法が手技が簡便
で値も正確で繁用されるところであるが、本発明により
ここに提供した杭穴ＣＲＰ抗体はこの測定に不可欠のも
ので臨床面での要望の多いものといえる。
で値も正確で繁用されるところであるが、本発明により
ここに提供した杭穴ＣＲＰ抗体はこの測定に不可欠のも
ので臨床面での要望の多いものといえる。
更に、本発明ＣＤ、Ｐの簡易迅速定量法について説明を
するニ 一般に、小動物の臨床では簡便で、しかも早く結果の得
られる検査方法が望ましい。
するニ 一般に、小動物の臨床では簡便で、しかも早く結果の得
られる検査方法が望ましい。
従来性なわれているヒトＣＲＰ検出法としては、ＣＩＬ
Ｐに対して抗体活性を有する■Ｌ！Ｇをラテックス粒子
に感作した試薬と被検血清とを反応させ、ラテックス粒
子の凝集によって血清中のＣＲＰを検出する逆受身ラテ
ックス凝集反応が知られていたが、この方法は迅速に結
果が得られる利点がある反面に定量性に乏しい欠点があ
った。
Ｐに対して抗体活性を有する■Ｌ！Ｇをラテックス粒子
に感作した試薬と被検血清とを反応させ、ラテックス粒
子の凝集によって血清中のＣＲＰを検出する逆受身ラテ
ックス凝集反応が知られていたが、この方法は迅速に結
果が得られる利点がある反面に定量性に乏しい欠点があ
った。
先に本発明者らはこの方法の改良して定量性をもたせる
ことを試み、前段階として抗体感作ラテックスを調製し
、平板上で逆受身ラテックス凝集反応によるイヌＣ几Ｐ
の検出することを企図し、血清Ｃ几Ｐ濃度と逆受身ラテ
ックス凝集反応の成績がよく一致することを確かめ、定
量性をもたせること・に成功した。
ことを試み、前段階として抗体感作ラテックスを調製し
、平板上で逆受身ラテックス凝集反応によるイヌＣ几Ｐ
の検出することを企図し、血清Ｃ几Ｐ濃度と逆受身ラテ
ックス凝集反応の成績がよく一致することを確かめ、定
量性をもたせること・に成功した。
しかし、この測定方法にはラテックスの一凝集所見の判
定が実施者によって異なる心配があることと定量性を欠
く欠点があることが露呈されてきたなお、ヒトのＣＲＩ
’の検査には、一般に毛細管法による沈降反応が用いら
れている。これは毛細管内に一定量の抗ＣＲＰ血清と被
検血清とをとっノ本発明者らは種々検討の結果、この両
者の方法を組み合わせて若干の工夫を加え、臨床の場で
容易に実施可能なＣＲＰの簡易迅速定量法をここに完成
し、提供するものである。
定が実施者によって異なる心配があることと定量性を欠
く欠点があることが露呈されてきたなお、ヒトのＣＲＩ
’の検査には、一般に毛細管法による沈降反応が用いら
れている。これは毛細管内に一定量の抗ＣＲＰ血清と被
検血清とをとっノ本発明者らは種々検討の結果、この両
者の方法を組み合わせて若干の工夫を加え、臨床の場で
容易に実施可能なＣＲＰの簡易迅速定量法をここに完成
し、提供するものである。
すなわち、抗体感作ラテックスと被検血清とを毛細管内
で反応させ、内容をよく混和し、毛細管の一方をパテで
蓋をする。この毛細管を軽く遠心して沈降したラテック
スの高さを測る。既知濃度の（、ＲＰで作った検量線を
用いることにより、ＣＲＰの濃度を知ることができるの
である。
で反応させ、内容をよく混和し、毛細管の一方をパテで
蓋をする。この毛細管を軽く遠心して沈降したラテック
スの高さを測る。既知濃度の（、ＲＰで作った検量線を
用いることにより、ＣＲＰの濃度を知ることができるの
である。
実施例５
校区０．３２μのラテックス粒子に抗ＣＲＰ血左右に傾
けてよく混和した。毛細管の一方の口をパテでふさいだ
。数分後８００回転／分の速度で１分間遠心し沈降した
ラテックスの高さを計測した。
けてよく混和した。毛細管の一方の口をパテでふさいだ
。数分後８００回転／分の速度で１分間遠心し沈降した
ラテックスの高さを計測した。
成績：
既知濃度のＣＩＬＰを用いた検量表
注：これらの数字を線でつなぐと緩やかへカーブを描く
。
。
前記実施例における計測値：
〔発明の効果〕
既に述べた通り、本発明に係るイヌＣＢ、Ｐは動物の炎
症性疾患と密接な相関々係があるので、その血清中濃度
が疾患の活動性経過および予後判定の指漂とされること
より、これを単離し、かつ抗体を提供することは獣医学
上火いな期待を今後に抱かせるものである。
症性疾患と密接な相関々係があるので、その血清中濃度
が疾患の活動性経過および予後判定の指漂とされること
より、これを単離し、かつ抗体を提供することは獣医学
上火いな期待を今後に抱かせるものである。
以上
手続補正書
昭和６１年８月２９日
昭和６０年 特許 願第２９５９２５号ｚｌｉ件との関
係 特許出願人 ４、代 理 人− 住 所 共庫県西宮市上甲東園５−８−１２６、 補正
ｔこより増加する発明の数 ７Ｊ’ｌ ｆｔＢ （／Ｊ Ｊ［ｌ ｖ）
、゛−明細書を下記の通り補正する。
係 特許出願人 ４、代 理 人− 住 所 共庫県西宮市上甲東園５−８−１２６、 補正
ｔこより増加する発明の数 ７Ｊ’ｌ ｆｔＢ （／Ｊ Ｊ［ｌ ｖ）
、゛−明細書を下記の通り補正する。
２、特許請求の範囲
１、 カラムゲルｐ過法で平均１５７，０００．８Ｄ８
−ポリアクリルアミドゲル寛気汰動法で平均１５５．０
００の分子量を示し、等電点４．７５、免疫電気泳動法
でスロー（８１ｏｗ） γ位の易動度を有することを
特徴とする大血清および体液中の易熱性特異蛋白質であ
る犬Ｃ凡Ｐ０ ２、大血清中の易熱性特異蛋白質二五ｉ友りぼを用いる
抗体の製造法。
−ポリアクリルアミドゲル寛気汰動法で平均１５５．０
００の分子量を示し、等電点４．７５、免疫電気泳動法
でスロー（８１ｏｗ） γ位の易動度を有することを
特徴とする大血清および体液中の易熱性特異蛋白質であ
る犬Ｃ凡Ｐ０ ２、大血清中の易熱性特異蛋白質二五ｉ友りぼを用いる
抗体の製造法。
８、 イオン又換クロマトグラフィー、ブロック電気泳
動法を組み合わせてなる犬のＣ−反応性蛋白の分離、精
製方法。
動法を組み合わせてなる犬のＣ−反応性蛋白の分離、精
製方法。
４、杭穴Ｃ−反応性蛋白抗体感作ラテックス試薬と大血
清を毛細管内で反応させることを特徴とする血清中の犬
Ｃ−反応性蛋白濃度の簡易迅速定量法。
清を毛細管内で反応させることを特徴とする血清中の犬
Ｃ−反応性蛋白濃度の簡易迅速定量法。
寸／
第６頁上から５行目「インムノグロブリ」の次にｒＧＪ
を加えて「インムノグロプリンＧ」と補正する０ 第６頁上から６行目「結合した」を「結合して」と補正
する。
を加えて「インムノグロプリンＧ」と補正する０ 第６頁上から６行目「結合した」を「結合して」と補正
する。
第７頁下から８行目「ホスホリル りロライン」を「ホ
スホリル コリン」と補正する。
スホリル コリン」と補正する。
第９頁上から４行目「処理したため」の次にｒＣ！ＲＰ
の」を加え「処理したためＣＲＰの」と補正する。
の」を加え「処理したためＣＲＰの」と補正する。
第１８頁上から２行ａｒｍ少」を「減少」と補正する。
第１８頁下から４行目「値も正確で」を「精度が高いこ
とから」と補正する。
とから」と補正する。
第１４頁下から４行目「定量性」を「半定量性」と補正
する。
する。
第１５頁最後の行「杭穴ＯＲＰ血」を「杭穴ＣＲＰ抗」
と補正する。
と補正する。
第１６頁最初の行「清を感作し」を「体を感作し」と補
正する。
正する。
第１７頁上から２行目、枠の中「計測値」とあるを「毛
細管法」と補正する。
細管法」と補正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、カラムゲルろ過法で平均１５７，０００、ＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で平均１５５，００
０の分子量を示し、等電点４．７５免疫電気泳動法でス
ロー（Ｓｌｏｗ）−γ位の易動度を有することを特徴と
する犬血清性の易熱性特異蛋白質。 ２、犬血清性の易熱性特異蛋白質を用いる抗体の製造法
。 ３、イオン交換クロマトグラフィー、ブロック電気泳動
法を組み合わせてなる犬のＣ−反応性蛋白の分離、精製
方法。 ４、抗犬Ｃ−反応性蛋白抗体感作ラテックス試薬と犬血
清を毛細管内で反応させることを特徴とする血清中の犬
Ｃ−反応性蛋白濃度の簡易迅速定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60295925A JPS62155299A (ja) | 1985-12-27 | 1985-12-27 | 犬のｃ−反応性蛋白とその抗体の製法およびその簡易迅速定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60295925A JPS62155299A (ja) | 1985-12-27 | 1985-12-27 | 犬のｃ−反応性蛋白とその抗体の製法およびその簡易迅速定量法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22188988A Division JPH01152365A (ja) | 1988-09-05 | 1988-09-05 | 犬のｃ−反応性蛋白の簡易迅速定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62155299A true JPS62155299A (ja) | 1987-07-10 |
Family
ID=17826901
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60295925A Pending JPS62155299A (ja) | 1985-12-27 | 1985-12-27 | 犬のｃ−反応性蛋白とその抗体の製法およびその簡易迅速定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62155299A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05288748A (ja) * | 1992-04-08 | 1993-11-02 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | イヌ ｃｒｐ の簡易検出試薬及びその製法 |
| EP2336158A1 (en) | 2009-12-21 | 2011-06-22 | Fujifilm Corporation | Dry analytical element for measurement of canine CRP |
| WO2019031163A1 (ja) | 2017-08-09 | 2019-02-14 | 国立大学法人山口大学 | イヌの妊娠診断方法及びその診断試薬 |
-
1985
- 1985-12-27 JP JP60295925A patent/JPS62155299A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| AM.J.VET.RES=1966 * |
| CLIN.CHIM.ACTA=1970 * |
| IMMUNOLOGY=1984 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05288748A (ja) * | 1992-04-08 | 1993-11-02 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | イヌ ｃｒｐ の簡易検出試薬及びその製法 |
| EP2336158A1 (en) | 2009-12-21 | 2011-06-22 | Fujifilm Corporation | Dry analytical element for measurement of canine CRP |
| JP2011128110A (ja) * | 2009-12-21 | 2011-06-30 | Fujifilm Corp | 犬ｃｒｐ測定用乾式分析要素 |
| WO2019031163A1 (ja) | 2017-08-09 | 2019-02-14 | 国立大学法人山口大学 | イヌの妊娠診断方法及びその診断試薬 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5567594A (en) | Methods and compositions for the detection and treatment of diseases associated with antigens of microorganisms | |
| Calvanico et al. | Immunoglobulin levels in bronchoalveolar lavage fluid from pigeon breeders | |
| AU614608B2 (en) | Process for preparation of high molecular weight cell- associated protein of campylobacter pylori and use for serological detection of campylobacter pylori infection | |
| JP2944721B2 (ja) | エンドトキシンの測定剤 | |
| JPS61500315A (ja) | 血清中の免疫複合体を検出する方法 | |
| RU2137131C1 (ru) | Гибридная клеточная линия (варианты), препарат антител (варианты), способ диагностики рассеянного склероза у человека (варианты), способ лечения человека, полипептид | |
| Kohanteb et al. | Detection of Leishmania donovani soluble antigen and antibody in the urine of visceral leishmaniasis patients | |
| JPS62501563A (ja) | リウマチ性関節炎の特徴である蛋白質 | |
| Chen | Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to Angiostrongylus cantonensis | |
| Korngold et al. | Diagnosis of multiple myeloma and macroglobulinemia by the Ouchterlony gel diffusion technique | |
| JPS62155299A (ja) | 犬のｃ−反応性蛋白とその抗体の製法およびその簡易迅速定量法 | |
| Theobald et al. | Detection of proteins in wheat flour extracts that bind human IgG, IgE, and mouse monoclonal antibodies | |
| Haldar et al. | Serological profiles in Indian post kala-azar dermal leishmaniasis | |
| JPS6340858A (ja) | 炎症の検出とその新しい抗体 | |
| Painter et al. | Stability of immune serum globulin during storage: effects of modifications in the fractionation scheme | |
| Florvaag et al. | Comparative Studies on Tree Pollen Allergens: VIII. Immunological Properties of the Alder (Alnus incana) Pollen Extract | |
| Wells et al. | Human anti-IgM iso-antibodies in subjects with selective IgA deficiency | |
| JPS62212400A (ja) | 牛のｃ―反応性蛋白 | |
| JP2003502643A (ja) | アッセイ | |
| JPS61242599A (ja) | 胃液からの腫瘍グロブリンの定量スクリ−ニング検定方法 | |
| Sato et al. | Treponema pallidum specific IgM haemagglutination test for serodiagnosis of syphilis. | |
| JP4451518B2 (ja) | ハイブリッド細胞、モノクローナル抗体、製造方法および測定方法 | |
| SU1573428A1 (ru) | Способ диагностики имунной трансформации щитовидной железы | |
| JPH07108913B2 (ja) | 犬血清由来のアミロイド性蛋白質と、これによるイヌ感染症の診断方法、およびその定量方法 | |
| US5245016A (en) | Pseudomonas maltophilia immunoglobulin binding protein and methods for its use |