JPS6214791A - γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルエタノ−ルアミンの製造方法 - Google Patents
γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルエタノ−ルアミンの製造方法Info
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- JPS6214791A JPS6214791A JP15049985A JP15049985A JPS6214791A JP S6214791 A JPS6214791 A JP S6214791A JP 15049985 A JP15049985 A JP 15049985A JP 15049985 A JP15049985 A JP 15049985A JP S6214791 A JPS6214791 A JP S6214791A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明はγ−リノレン咽含量の昼いホスファチジルエタ
ノールアミンのモルテイエレラ属糸状菌による製造方法
に関するものである。
ノールアミンのモルテイエレラ属糸状菌による製造方法
に関するものである。
モルテイエレラ属に嘱するイサベリナ、ビナセア、ラマ
ニアナ、ラマニアナ・アングリスボラ、及びナナ等の糸
状菌６体を、高濃度の炭水化物乞炭素源とする培地に培
養することにより、γ−リノレン酸含有脂質含滑の高い
菌体を高密塵で生産する方法は既に提案されている。（
特願昭５９−２２３９４号）。
ニアナ、ラマニアナ・アングリスボラ、及びナナ等の糸
状菌６体を、高濃度の炭水化物乞炭素源とする培地に培
養することにより、γ−リノレン酸含有脂質含滑の高い
菌体を高密塵で生産する方法は既に提案されている。（
特願昭５９−２２３９４号）。
ところで、グリセロ型リン脂質の一種類であるホスファ
チジルエタノールアミンは次式の様な構造を持つことが
知らｎている。
チジルエタノールアミンは次式の様な構造を持つことが
知らｎている。
ＣＩ（□−０ＣＯＲ
ＣＨ−ＯＣＯＲ’
その構造脂肪酸であるＲＣ００ＨあるいはＲ’Ｃ０（Ｊ
ｌ−１にｒ−リノレン酸含量が２０％以上含むホスファ
チジルエタノールアミンが微生物から製造単離濃縮され
た従来技術は存在しない。
ｌ−１にｒ−リノレン酸含量が２０％以上含むホスファ
チジルエタノールアミンが微生物から製造単離濃縮され
た従来技術は存在しない。
本発明は、γリルン師含量の高いホスファチジルエタノ
ールアミンの製造方法を提供することを目的とする。
ールアミンの製造方法を提供することを目的とする。
即ち、本発明によれば、γ−リノレン酸含量の高いホス
ファチジルエタノールアミンの生産にあたり、モルテイ
エレラ属に属するイサベリナ、ビナセア、ナナ、ラマニ
アナ、ラマニアナ・アングリスポラ又はナナの糸状菌菌
株・を高ＭＥの炭水化物全炭素源とした培地に培養して
、培地中に高密塵に得られるγ−リノレン酸を含む脂質
の高含量菌体より抽出さｎたｒ−リノレン酸含有脂質の
アルコール抽出区分から効率よ〈γ−リノレン酸含量の
高いホスファチジルエタノールアミンを例えば吸着法で
分離、濃縮することを特徴とするｒ −リノレン酸含量
の高いホスファチジルエタノールアミンの製造方法が提
供さｎる。
ファチジルエタノールアミンの生産にあたり、モルテイ
エレラ属に属するイサベリナ、ビナセア、ナナ、ラマニ
アナ、ラマニアナ・アングリスポラ又はナナの糸状菌菌
株・を高ＭＥの炭水化物全炭素源とした培地に培養して
、培地中に高密塵に得られるγ−リノレン酸を含む脂質
の高含量菌体より抽出さｎたｒ−リノレン酸含有脂質の
アルコール抽出区分から効率よ〈γ−リノレン酸含量の
高いホスファチジルエタノールアミンを例えば吸着法で
分離、濃縮することを特徴とするｒ −リノレン酸含量
の高いホスファチジルエタノールアミンの製造方法が提
供さｎる。
本発明においては、用いる使用菌はモルテイエレラ（Ｍ
Ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属のイサヘＩ） す（１ｓａｂ
ｅｌｌ−ｉｎａ）（ＩＦ’Ｏ′７８２４，７８８４，７
８７３，８１８３゜９３０９）ビ＋セフ （Ｖｉｎａｃ
ｅａ）（ＩＦＯ６７３８）、ナナ （ｎａｎａ）（ＩＦ
Ｏ８７９４）、ラ−ｒ＝７す（ｒａｍａｎｉ−ａｎａ）
（Ｉｔ”０８２８７ ）、ラマニアナ・アングリスポ
ラ （ｒａｍａｎｉａｎａ ｖａｒ、 ａｎｇｌ
ｉｓｐｏｒａ） （Ｉ ＦＯ８１８７〕の各種菌株
である。なお、上記した菌はいずれも財団法人発酵研究
所に保存され、ＩＩ”Ｏカタログ（菌株目録）に記載さ
れている糸状菌である。
Ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属のイサヘＩ） す（１ｓａｂ
ｅｌｌ−ｉｎａ）（ＩＦ’Ｏ′７８２４，７８８４，７
８７３，８１８３゜９３０９）ビ＋セフ （Ｖｉｎａｃ
ｅａ）（ＩＦＯ６７３８）、ナナ （ｎａｎａ）（ＩＦ
Ｏ８７９４）、ラ−ｒ＝７す（ｒａｍａｎｉ−ａｎａ）
（Ｉｔ”０８２８７ ）、ラマニアナ・アングリスポ
ラ （ｒａｍａｎｉａｎａ ｖａｒ、 ａｎｇｌ
ｉｓｐｏｒａ） （Ｉ ＦＯ８１８７〕の各種菌株
である。なお、上記した菌はいずれも財団法人発酵研究
所に保存され、ＩＩ”Ｏカタログ（菌株目録）に記載さ
れている糸状菌である。
上記の糸状菌全培養する培地の炭素源である炭水化物と
しては、たと對−ばグルコース、フラクトース、サッカ
ロース、糖蜜、デン粉、木材糖仕液などが用いられる。
しては、たと對−ばグルコース、フラクトース、サッカ
ロース、糖蜜、デン粉、木材糖仕液などが用いられる。
炭水化＠け培地ｌｌ中に２０〜４００ｇ用いられるのが
好ましい。また窒素源としては、例えば硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、塩什アンモニウム、リン酸アン
モニウムなどの様な無機窒素源、または尿素、ペプトン
、酵母エキス、コーン、スチーブ・リカーなど有機窒素
源が用いら匙る。無機塩としては、例えばＫ２ＨＰＯ４
、Ｋ２ＨＰＯ４、ＮａＣ１、ＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、Ｍ
、！９８０４−７ Ｈ２Ｏ、Ｚｎ５Ｏ４Ｈ７Ｈ２Ｏなど
が用いらｎる。その他必要に応じて機敏要素、その他の
栄養源を添加する。
好ましい。また窒素源としては、例えば硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、塩什アンモニウム、リン酸アン
モニウムなどの様な無機窒素源、または尿素、ペプトン
、酵母エキス、コーン、スチーブ・リカーなど有機窒素
源が用いら匙る。無機塩としては、例えばＫ２ＨＰＯ４
、Ｋ２ＨＰＯ４、ＮａＣ１、ＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、Ｍ
、！９８０４−７ Ｈ２Ｏ、Ｚｎ５Ｏ４Ｈ７Ｈ２Ｏなど
が用いらｎる。その他必要に応じて機敏要素、その他の
栄養源を添加する。
上記糸状面の培養は通常液体培地で、娠とう培養、通気
攪拌培養などにより行わ扛る。培地のｐＨは３．０〜６
．０が良く、通常２日〜１０日間位培養が行わｎる。更
に、培養の初期すなわち初期培地に、また通気攪拌培養
の場合では前培養培地に、あるいけ培養の中間段階で酢
酸あるいは酢酸塩（ナトリウム塩、カリウム塩などのア
ルカリ金属塩）を炭素源濃度など培養条件に応じて０．
１〜２（Ｖｊ／ｌ培地の割合で加えることにより菌体の
培養が行わｎる（特願昭５９−１）５１６２）。や為く
して、培養物中にγ−リノレン酸など不飽和脂肪酸含量
が高い脂質の高含＃菌体が生産性高く生産されるので、
培養物より菌体を分離し、脂質が糸状菌菌体中に含まれ
るので、この菌体よりｒ−リノレン巖など不飽和脂肪酸
含量の高い脂質を採取するのが好適である。培養物より
菌体の分離に当っては菌糸があまりのびず極めて小単位
（１〜１０細胞）で培養されており、従って、例えば遠
心脱水器などにより極めて容易に分離さ扛、乾燥度の高
い菌体（含水率約６０％）ＶＣなる利点を有することが
明らかになった。
攪拌培養などにより行わ扛る。培地のｐＨは３．０〜６
．０が良く、通常２日〜１０日間位培養が行わｎる。更
に、培養の初期すなわち初期培地に、また通気攪拌培養
の場合では前培養培地に、あるいけ培養の中間段階で酢
酸あるいは酢酸塩（ナトリウム塩、カリウム塩などのア
ルカリ金属塩）を炭素源濃度など培養条件に応じて０．
１〜２（Ｖｊ／ｌ培地の割合で加えることにより菌体の
培養が行わｎる（特願昭５９−１）５１６２）。や為く
して、培養物中にγ−リノレン酸など不飽和脂肪酸含量
が高い脂質の高含＃菌体が生産性高く生産されるので、
培養物より菌体を分離し、脂質が糸状菌菌体中に含まれ
るので、この菌体よりｒ−リノレン巖など不飽和脂肪酸
含量の高い脂質を採取するのが好適である。培養物より
菌体の分離に当っては菌糸があまりのびず極めて小単位
（１〜１０細胞）で培養されており、従って、例えば遠
心脱水器などにより極めて容易に分離さ扛、乾燥度の高
い菌体（含水率約６０％）ＶＣなる利点を有することが
明らかになった。
γ−リノレン酸含、量の高い脂質の採取は多段抽出方法
で行われる。すなわち、本発明においては、モルテイエ
レラ属糸状菌体を、先ず、水の存在下、アルコールを用
いる第１抽出処理工程において抽出処理する。この場合
、処理原料として用いる菌体には、培地から遠心分離法
や濾過法によって分離された含水率５０〜８０％程度の
含水菌体ケーキや、その乾燥物を用いることができるが
、経済性の点からは、含水菌体ケーキを用いるのが有＞
ｆｌＬである。また、この第１抽出処理工程では、菌体
は、水の存在下、アルコール溶媒中で、機械力を加えて
破砕させることが必要であり、この菌体破砕によって効
率的な抽出処理が達成される。このような菌体破砕を伴
う抽出装置としては、従来公知の湿式粉砕機、例えば、
ボールミル、マサツ円板ミル、ヘンセルミキサー等を用
いることができる。このような粉砕機により菌体は、圧
縮力やマサツカ等の機械力を受け、その一部が破損ない
し破砕さ扛る。この場合、菌体を余りにも微細に破砕す
ることは好ましくなく、瀘過性の点からは、その一体の
粒径は実質上変化しない程度に機械力を加えるのが好ま
しい。アルコール溶媒としては、通常、メタノール、エ
タノール、プロパツール等の低級アルコールが用いら扛
るが、人体に対する安全性の点から、エタノールの使用
が好ましい。
で行われる。すなわち、本発明においては、モルテイエ
レラ属糸状菌体を、先ず、水の存在下、アルコールを用
いる第１抽出処理工程において抽出処理する。この場合
、処理原料として用いる菌体には、培地から遠心分離法
や濾過法によって分離された含水率５０〜８０％程度の
含水菌体ケーキや、その乾燥物を用いることができるが
、経済性の点からは、含水菌体ケーキを用いるのが有＞
ｆｌＬである。また、この第１抽出処理工程では、菌体
は、水の存在下、アルコール溶媒中で、機械力を加えて
破砕させることが必要であり、この菌体破砕によって効
率的な抽出処理が達成される。このような菌体破砕を伴
う抽出装置としては、従来公知の湿式粉砕機、例えば、
ボールミル、マサツ円板ミル、ヘンセルミキサー等を用
いることができる。このような粉砕機により菌体は、圧
縮力やマサツカ等の機械力を受け、その一部が破損ない
し破砕さ扛る。この場合、菌体を余りにも微細に破砕す
ることは好ましくなく、瀘過性の点からは、その一体の
粒径は実質上変化しない程度に機械力を加えるのが好ま
しい。アルコール溶媒としては、通常、メタノール、エ
タノール、プロパツール等の低級アルコールが用いら扛
るが、人体に対する安全性の点から、エタノールの使用
が好ましい。
アルコール溶媒の使用割合は、歯体１重量部（乾燥物基
準）に対し、２〜７重粱部、好ましくは３〜６重量部の
割合である。この第１抽出処理工程では、極性脂質を溶
出させるために、水の存在下で抽出処理を行うことが必
要であり、水の存在量は、アルコール溶媒１重量に対し
、０．２〜０．７重量部、好ましくは０．３〜０．６重
量部である。この第１抽出処理系に対する水の箔加は、
水を含む菌体を用いて実施し得る他、アルコール溶媒に
添加することによって行うことができる。このような抽
出処理により、菌体に含まする全極性脂質の９０％以上
を抽出分離させることができ、また中性脂質の一部が抽
出さｎる。また、この第１抽出工程では、脂質回収率は
、全脂質回収率に対し、通常、５〜３０重量係、好まし
くば８へ・２５重重チである。
準）に対し、２〜７重粱部、好ましくは３〜６重量部の
割合である。この第１抽出処理工程では、極性脂質を溶
出させるために、水の存在下で抽出処理を行うことが必
要であり、水の存在量は、アルコール溶媒１重量に対し
、０．２〜０．７重量部、好ましくは０．３〜０．６重
量部である。この第１抽出処理系に対する水の箔加は、
水を含む菌体を用いて実施し得る他、アルコール溶媒に
添加することによって行うことができる。このような抽
出処理により、菌体に含まする全極性脂質の９０％以上
を抽出分離させることができ、また中性脂質の一部が抽
出さｎる。また、この第１抽出工程では、脂質回収率は
、全脂質回収率に対し、通常、５〜３０重量係、好まし
くば８へ・２５重重チである。
次に、前記で得た第１抽出生成物は第１固液分離工程で
破砕菌体りｙ分と極性脂質を含むアルコール溶媒成分と
にそれぞれ分離される。この場合、固液分離法としては
、遠心分離法や、媚過分離法等の慣用の方法が採用され
る。脂質分は得らｎた極性脂質を含むアルコール溶媒成
分から常法に従って減圧下で溶媒を蒸留留去することに
より得られる。
破砕菌体りｙ分と極性脂質を含むアルコール溶媒成分と
にそれぞれ分離される。この場合、固液分離法としては
、遠心分離法や、媚過分離法等の慣用の方法が採用され
る。脂質分は得らｎた極性脂質を含むアルコール溶媒成
分から常法に従って減圧下で溶媒を蒸留留去することに
より得られる。
前記多段抽出方法のアルコールを溶媒とした第１段目の
抽出操作により得られた脂質成分について吸着カラムク
ロマトグラフィ法による分離操作を行うことによりγ−
リノレン酸含量の高いホスファチジルエタノールアミン
は分離、精製される。
抽出操作により得られた脂質成分について吸着カラムク
ロマトグラフィ法による分離操作を行うことによりγ−
リノレン酸含量の高いホスファチジルエタノールアミン
は分離、精製される。
すなわち、５０〜３００メツシュ好まし１−ｊｌｏｏ〜
２００メツシュのケイ酸（シリカゲル）、微粒多孔質シ
リカ、シリカゲル１−１、シリカゲルＧ、ケイ酸マグネ
シウムなどを充填剤としたカラムを用いて、ヘキサン、
ンクロヘキサン、四塩化炭素、ベンゼン、クロロホルム
、ジエチルエーテル、酢酸水を溶媒として用いて溶媒の
極性に応じて、一種類ないし２〜３種類混合した溶媒、
例えば、クロロホルムとメタノール４：１．３：２．１
：１．１：２混合溶媒などを順次流下することにより、
各極性脂質の吸着力の差により分離溶出が可能になり、
γ−リノレン酸含量の高いホスファチジルエタノールア
ミンが分離さｎて含まれる溶出液を得る。この溶出液か
ら常法により溶媒を減圧下で蒸留留去することにより、
γ−リノレン酸含肴の高いホスファチジルエタノールア
ミンが濃縮さｎることを見出した。
２００メツシュのケイ酸（シリカゲル）、微粒多孔質シ
リカ、シリカゲル１−１、シリカゲルＧ、ケイ酸マグネ
シウムなどを充填剤としたカラムを用いて、ヘキサン、
ンクロヘキサン、四塩化炭素、ベンゼン、クロロホルム
、ジエチルエーテル、酢酸水を溶媒として用いて溶媒の
極性に応じて、一種類ないし２〜３種類混合した溶媒、
例えば、クロロホルムとメタノール４：１．３：２．１
：１．１：２混合溶媒などを順次流下することにより、
各極性脂質の吸着力の差により分離溶出が可能になり、
γ−リノレン酸含量の高いホスファチジルエタノールア
ミンが分離さｎて含まれる溶出液を得る。この溶出液か
ら常法により溶媒を減圧下で蒸留留去することにより、
γ−リノレン酸含肴の高いホスファチジルエタノールア
ミンが濃縮さｎることを見出した。
かくして、本発明によれば高濃度の炭水化物を炭素源と
する培地に高密度に培養された脂質含量の高い歯体より
採取された脂質からγ−リノレン酸含量の高いホスファ
チジルエタノールアミンの製造が可能になる。
する培地に高密度に培養された脂質含量の高い歯体より
採取された脂質からγ−リノレン酸含量の高いホスファ
チジルエタノールアミンの製造が可能になる。
ｒ−リノＬ／７俄〔１８：３ （６，９，１２））はリ
ノール酸と共に哺乳動物では食餌として要求さｎる必須
脂肪順である。、これｔｒｉｒ−ＩＪルン屡が体内でビ
スホモ−γ−リノレン師となり、さらにはアラキドン酸
となる前駆体であること、ビスホモ−γ−リノレン酸、
アラキドン酸はそれぞｎプロスタグランジン、ＥＩ ＋
Ｆｌ （Ｚ及びＢｚ 、 Ｆ２ （Ｅとなり生体中で
極めてＭ賛な生理的な役割′ｆｒ−はたしているからで
ある。従って、γ−リノレン酸含有脂質は医薬品などと
して利用できるものであることは明らかである。
ノール酸と共に哺乳動物では食餌として要求さｎる必須
脂肪順である。、これｔｒｉｒ−ＩＪルン屡が体内でビ
スホモ−γ−リノレン師となり、さらにはアラキドン酸
となる前駆体であること、ビスホモ−γ−リノレン酸、
アラキドン酸はそれぞｎプロスタグランジン、ＥＩ ＋
Ｆｌ （Ｚ及びＢｚ 、 Ｆ２ （Ｅとなり生体中で
極めてＭ賛な生理的な役割′ｆｒ−はたしているからで
ある。従って、γ−リノレン酸含有脂質は医薬品などと
して利用できるものであることは明らかである。
とくに、γ−リノレン酸は生体内ではリン脂質として蓄
線さｎていることが知らｎており、プロスタグランジン
になる際の前駆体としてはリン脂質状態の方がより有効
に作用するものと考えらｎることからこのようにｒ−リ
ノレン酸含肴が２０チ以上と高いホスファチジルエタノ
ールアミンの医薬品としての用途は十分期待できる。
線さｎていることが知らｎており、プロスタグランジン
になる際の前駆体としてはリン脂質状態の方がより有効
に作用するものと考えらｎることからこのようにｒ−リ
ノレン酸含肴が２０チ以上と高いホスファチジルエタノ
ールアミンの医薬品としての用途は十分期待できる。
なお、ホスファチジルエタノールアミンはそｎを主成分
とするリン脂質混会物（レシチン）と［７て知られてお
り、乳化剤などの食品添加物としてマーガリン、チョコ
レートなどに用いられている。
とするリン脂質混会物（レシチン）と［７て知られてお
り、乳化剤などの食品添加物としてマーガリン、チョコ
レートなどに用いられている。
次に本発明を実施例により詳細に説明する。
実施例
グルコース６０９、ＫＨ□ＰＯ４２ｇ、Ｍ、９８０４７
Ｈ２Ｏ０，３ｇ、Ｎａｃｌｏ、ｔ 、？、マルト・エ
キスＱ、：ｌ、イースト・エキ、１．０．２ｇ、ペプト
７０Ａｇ、ｌ；’ ｅ ＳＯ４・７Ｈ２０１０ｍｑ、
ｃａｃｌ、２Ｈ２（Ｊ １０ ｍｑ、ＣｕＳＯ４・５
Ｈ２００，２ｍ９、ＭｎＳＯ４＋ ４ＨｚＯｉ、ｏ ’
％’と窒素源として（ＮＨ４）２Ｓｏ４３ ｇ、（Ｃ／
Ｎ比（炭素源中の炭素原子重量／窒素源中の窒素原子重
量）は約４０〕を脱イオン水１０００ ｍｌに混合した
培地を基準として炭素源である炭水化物（グルコース、
糖など）の濃＃を増加させた場合、その濃度に応じて培
地成分を増加して、又窒素源を尿素などに変えた場合は
同じＣ／Ｎ比になるように培地を調整した。
Ｈ２Ｏ０，３ｇ、Ｎａｃｌｏ、ｔ 、？、マルト・エ
キスＱ、：ｌ、イースト・エキ、１．０．２ｇ、ペプト
７０Ａｇ、ｌ；’ ｅ ＳＯ４・７Ｈ２０１０ｍｑ、
ｃａｃｌ、２Ｈ２（Ｊ １０ ｍｑ、ＣｕＳＯ４・５
Ｈ２００，２ｍ９、ＭｎＳＯ４＋ ４ＨｚＯｉ、ｏ ’
％’と窒素源として（ＮＨ４）２Ｓｏ４３ ｇ、（Ｃ／
Ｎ比（炭素源中の炭素原子重量／窒素源中の窒素原子重
量）は約４０〕を脱イオン水１０００ ｍｌに混合した
培地を基準として炭素源である炭水化物（グルコース、
糖など）の濃＃を増加させた場合、その濃度に応じて培
地成分を増加して、又窒素源を尿素などに変えた場合は
同じＣ／Ｎ比になるように培地を調整した。
この培地を３０７の培養慴では２０１仕込み、それぞ、
ｊＬ菌株を接種し、３０℃の培養温度で所定の時間、通
気量０．５〜２．ＯＶＶｍで３００〜７００ｒｐｍで攪
拌して培養を行った。培養後遠心分離法で菌体を集めた
。父、菌体の増殖量、脂質生成量及び培地中の炭水化ｍ
ａｒｅ、の測定を行うため、培養の中間段階において所
定の時間毎に１００１ｎｌずつ試料の採取を行い、口過
法により菌体と培地の分離を行った。分離された菌体は
その一部を含水率の定量のため、精秤し恒温槽中１２０
’Ｃで一昼夜乾燥し、含水率を求め、残りの菌体につ
いて脂質の抽出を行った。菌体からの脂質の抽出は、残
りの湿菌体にクロロホルム−メタノール（２： ｌ Ｖ
／Ｖ）混液を加え、ガラスピーズ存在下にホモジナイズ
することにより菌体の破砕と脂質の抽出を同時に行った
。
ｊＬ菌株を接種し、３０℃の培養温度で所定の時間、通
気量０．５〜２．ＯＶＶｍで３００〜７００ｒｐｍで攪
拌して培養を行った。培養後遠心分離法で菌体を集めた
。父、菌体の増殖量、脂質生成量及び培地中の炭水化ｍ
ａｒｅ、の測定を行うため、培養の中間段階において所
定の時間毎に１００１ｎｌずつ試料の採取を行い、口過
法により菌体と培地の分離を行った。分離された菌体は
その一部を含水率の定量のため、精秤し恒温槽中１２０
’Ｃで一昼夜乾燥し、含水率を求め、残りの菌体につ
いて脂質の抽出を行った。菌体からの脂質の抽出は、残
りの湿菌体にクロロホルム−メタノール（２： ｌ Ｖ
／Ｖ）混液を加え、ガラスピーズ存在下にホモジナイズ
することにより菌体の破砕と脂質の抽出を同時に行った
。
なお、抽出を完全に行うため、これを５回繰返し、全抽
出液を集めた。上記抽出液を１＋’ １ ｏ ｃ ｈの
分配洗浄法により精製した後、溶媒を減圧留去し、重量
法で全脂質量を測定した。菌体を除いた培地については
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰｆ、Ｃ）により炭水
化物（グルコース、フラクトース、サッカロース）の＃
度を測定し、＃度がＯになった時点で培養を終了した。
出液を集めた。上記抽出液を１＋’ １ ｏ ｃ ｈの
分配洗浄法により精製した後、溶媒を減圧留去し、重量
法で全脂質量を測定した。菌体を除いた培地については
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰｆ、Ｃ）により炭水
化物（グルコース、フラクトース、サッカロース）の＃
度を測定し、＃度がＯになった時点で培養を終了した。
醒株モルテイエレラ・ラマニアナ・アングリスポラＩＦ
Ｏ８１８７、モルテイエレラ・ビナセア丁ｌ！１０６７
３８、モルテイエレラ・イサベリナＩＦ’０７８２４に
ついて、グルコースを炭素源、尿素を窒素源とした３０
１培養槽により培養して得られた歯体増殖量（乾燥重量
ｇ／ｌ）、脂質生成量１／ｌ）、脂質含量（チ）、脂質
中のγ−リノレン酸含量を表−１にまとめて示した。な
お培養時間として示した時間は炭素源であるグルコース
が完全に消費され、培地中になくなった時間でありその
時間で培養を停止した。
Ｏ８１８７、モルテイエレラ・ビナセア丁ｌ！１０６７
３８、モルテイエレラ・イサベリナＩＦ’０７８２４に
ついて、グルコースを炭素源、尿素を窒素源とした３０
１培養槽により培養して得られた歯体増殖量（乾燥重量
ｇ／ｌ）、脂質生成量１／ｌ）、脂質含量（チ）、脂質
中のγ−リノレン酸含量を表−１にまとめて示した。な
お培養時間として示した時間は炭素源であるグルコース
が完全に消費され、培地中になくなった時間でありその
時間で培養を停止した。
表−１で３菌株ともγ−リノレン酸を含む脂質が生産性
高く生産されていることがわかる。
高く生産されていることがわかる。
表−１のモルテイエレラ属糸状菌の３０１培養槽による
大量培養により得られたγ−リノレン酸含有脂質の高含
量で含む菌体を遠心脱水器により、脱水分離し、含水率
５０〜７０チの菌体ブロック（ケーキ）を得る。この菌
体ブロック（以下、湿眉体と呼ぶ）をオートクレーブ中
で１２０℃、２気圧で１０分間滅菌した後、以下に示す
ようにして脂質の抽出を行った。
大量培養により得られたγ−リノレン酸含有脂質の高含
量で含む菌体を遠心脱水器により、脱水分離し、含水率
５０〜７０チの菌体ブロック（ケーキ）を得る。この菌
体ブロック（以下、湿眉体と呼ぶ）をオートクレーブ中
で１２０℃、２気圧で１０分間滅菌した後、以下に示す
ようにして脂質の抽出を行った。
前記の湿菌体１．０〜１．７ Ｋ９ ｋ、内容ｎｔ６１
のステンレス製ボールミルに入れ、さらにエタノール２
１を溶媒として加え、４時間ボールミルにより菌体を破
砕しながら抽出処理を行った。抽出液を嬬過した後、得
らｎた菌体（アルコール含量％）について再度ヘキサン
２ノを溶媒として用い、前記と同様の抽出処理を７時間
行った。
のステンレス製ボールミルに入れ、さらにエタノール２
１を溶媒として加え、４時間ボールミルにより菌体を破
砕しながら抽出処理を行った。抽出液を嬬過した後、得
らｎた菌体（アルコール含量％）について再度ヘキサン
２ノを溶媒として用い、前記と同様の抽出処理を７時間
行った。
前記２段抽出方法による３ｍ株についての第１段のエタ
ノールによる脂質の対菌体抽出率が表−２に示されてい
るう このエタノール抽出脂質について、下記の方法によるケ
イＩｎ （１００〜２００メツシユ）を充填剤とするカ
ラムクロマトグラフィーを行いホスファチジルエタノー
ルアミンの濃縮を行った。すなわち、前記抽出脂＊：１
，９に、対して３０ｇのケイ酸を充填したカラムに脂質
を吸着させた後、中性脂質をクロロホルムで糖脂質をア
セト／、クロロホルム、メタノール４：１）ｖ出液でホ
スファチジルエタノールアミン以外のリン脂質を流出し
た後、クロロホルム、メタノール１：１を溶出液として
溶出する区分を得たつ得られた区分について薄層クロマ
トグラフィーによる分析の結果ホスファチジルエタノー
ルアミンが純度はぼ９０チに濃縮さｎてい・ることを認
めた。
ノールによる脂質の対菌体抽出率が表−２に示されてい
るう このエタノール抽出脂質について、下記の方法によるケ
イＩｎ （１００〜２００メツシユ）を充填剤とするカ
ラムクロマトグラフィーを行いホスファチジルエタノー
ルアミンの濃縮を行った。すなわち、前記抽出脂＊：１
，９に、対して３０ｇのケイ酸を充填したカラムに脂質
を吸着させた後、中性脂質をクロロホルムで糖脂質をア
セト／、クロロホルム、メタノール４：１）ｖ出液でホ
スファチジルエタノールアミン以外のリン脂質を流出し
た後、クロロホルム、メタノール１：１を溶出液として
溶出する区分を得たつ得られた区分について薄層クロマ
トグラフィーによる分析の結果ホスファチジルエタノー
ルアミンが純度はぼ９０チに濃縮さｎてい・ることを認
めた。
３隋株についてエタノール抽出脂質量に対する抽出率は
表−２の如＜８，３〜１）．５％と比較的高い値であり
、乾燥菌体に対する抽出率は０．４５〜０．５６チであ
ったっ このホスファチジルエタノールアミンについて加水分解
した後、メチルエステル化を行い、その脂肪酸組成を比
べた結果ｒ −＋Ｊルア１！ｆｆ含徽が２７．９チ以上
と中性脂質区分の約７％と異なり極めて高い値が認めら
れた。脂肪酸組成を表−２の欄外に例示したがγ−リノ
レン酸以外の不飽和脂肪酸としてはリノール酸及びオレ
イン酸含量が高い特殊な脂肪澱組成を有するものである
ことが明らかになった。
表−２の如＜８，３〜１）．５％と比較的高い値であり
、乾燥菌体に対する抽出率は０．４５〜０．５６チであ
ったっ このホスファチジルエタノールアミンについて加水分解
した後、メチルエステル化を行い、その脂肪酸組成を比
べた結果ｒ −＋Ｊルア１！ｆｆ含徽が２７．９チ以上
と中性脂質区分の約７％と異なり極めて高い値が認めら
れた。脂肪酸組成を表−２の欄外に例示したがγ−リノ
レン酸以外の不飽和脂肪酸としてはリノール酸及びオレ
イン酸含量が高い特殊な脂肪澱組成を有するものである
ことが明らかになった。
手続補正書（自発ン
６０化技研第１２５醪
昭和 ６昨８月−７日
１、事件の表示 昭和６０年特許願第１５０４９９号
２、発明の名称 ｒ−リノレン酸含量の高いホスファ
チジルエ３、補、Ｅやオう者 １／−′ｖ７ｓｙす３雑
事件との関係特許出願人 住 所 東京都千代田区霞が関１丁目３番１号冨
’ｉ５ （１）４）工業技術院長 等々力 達（
発送日 昭和 年 月 日）８、補正の内
容 本願明細書中において、次のとおり補正します。
２、発明の名称 ｒ−リノレン酸含量の高いホスファ
チジルエ３、補、Ｅやオう者 １／−′ｖ７ｓｙす３雑
事件との関係特許出願人 住 所 東京都千代田区霞が関１丁目３番１号冨
’ｉ５ （１）４）工業技術院長 等々力 達（
発送日 昭和 年 月 日）８、補正の内
容 本願明細書中において、次のとおり補正します。
（１） 第１４頁の表−１を別紙の通り訂正します。
（２）第１５頁Ｗ、１３行〜第１４行の［（アルコール
含量 ％）」を「（含水率３．４％）」に訂正します。
含量 ％）」を「（含水率３．４％）」に訂正します。
Claims (1)
- （１）モルテイエレラ属に属するイサベリナ、ビナセア
、ラマニアナ、ラマニアナ・アングリスポラ又はナナの
菌株による高濃度の炭水化物を炭素源とする培地に高密
度に培養された脂質含量の高い菌体より採取された脂質
からγ−リノレン酸含量の高いホスファチジルエタノー
ルアミンを分離、濃縮することを特徴とするγ−リノレ
ン酸含量の高いホスファチジルエタノールアミンの製造
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15049985A JPS6214791A (ja) | 1985-07-09 | 1985-07-09 | γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルエタノ−ルアミンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15049985A JPS6214791A (ja) | 1985-07-09 | 1985-07-09 | γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルエタノ−ルアミンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6214791A true JPS6214791A (ja) | 1987-01-23 |
| JPS6244917B2 JPS6244917B2 (ja) | 1987-09-24 |
Family
ID=15498195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15049985A Granted JPS6214791A (ja) | 1985-07-09 | 1985-07-09 | γ−リノレン酸含量の高いホスフアチジルエタノ−ルアミンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6214791A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5416281A (en) * | 1991-11-08 | 1995-05-16 | Oyo Corporation | Deadweight dropping type wave source |
-
1985
- 1985-07-09 JP JP15049985A patent/JPS6214791A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5416281A (en) * | 1991-11-08 | 1995-05-16 | Oyo Corporation | Deadweight dropping type wave source |
| US5534668A (en) * | 1991-11-08 | 1996-07-09 | Oyo Corporation | Deadweight dropping type wave source |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6244917B2 (ja) | 1987-09-24 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |